细胞存活曲线的测定与结果分析
第五章 细胞存活曲线2018
凋亡的不同分子事件
DNA梯子 质膜崩裂 其他
放射生物学
电离辐射引起细胞凋亡的启动途径
放射生物学
线粒体失活是细胞凋亡的中心环节 细胞凋亡的最终杀手是caspase3
放射生物学
放射生物学
放射生物学
细胞凋亡的检测方法
TUNEL assay
放射生物学
5、细胞存活曲线制作的实验方法概述
Cell survival curve in vitro（体外培养，数克隆数） Clones re-growing in situ（原位）
• Skin colonies（浅表组织，数克隆数） • Crypt cells of the mouse jejunum（深部组织，数克隆数）
放射生物学 2、细胞克隆存活曲线的制备
From: Hall Radiobiology for the Radiologist
Colony = >50 cells Small colonies?
放射生物学
已知数目、充分分散的独立细胞群，接受 电离辐射均匀照射后，一些细胞因凋亡、坏死或 自噬等原因立即死亡，另一些细胞在经历几次传 代由于分裂障碍而后出现的绝育性死亡。因此经 一段时间培养，培养皿上会形成一定数目由残存 细胞而来 显然比传统的细胞死亡更为宽泛，因 此“细胞集落形成”法检测照射后细 胞的存活状况就成为放射生物学专有 的细胞死亡研究方法。
为使集落计数概念基本一致，通常把 含50个或以上细胞组成的集落性克隆 计为一个集落，这个集落代表着该集 落最初是由一个原始存活的、且具有 增殖能力的细胞繁殖而来。
放射生物学
1、靶打击模型
1924年由Crowther提出, 40 年代中期Lea等对靶概念进一步加 以完善，包括以下俩个模型。
实习二电离辐射细胞存活克隆实验结果分析-北京大学医学部课程中心
放射生物学实习二细胞克隆（集落）形成法评估电离辐射细胞增殖性死亡一、目的要求目的：了解细胞克隆（集落）形成法检测细胞存活能力的方法，熟悉细胞存活分数（SF, survival fraction, in unit of %）与受照剂量（D, dose, in unit of Gy）之间剂量－效应的关系，熟悉与细胞存活剂量效应模型曲线结果处理有关的软件及使用方法，掌握细胞存活模型曲线的绘制及重要参数的计算。
要求：1，计算细胞接种效率(PE, planting efficiency)；2，应用SPSS 软件测算单击多靶模型下细胞存活曲线的n、k估计值，评价模型曲线的拟合优度；3，根据n、k估计值进一步计算D0、Dq和D37等参数，以及某一化学增敏剂或处理因素的增敏比(SER, sensitive enhancing ratio)；4，利用EXCEL软件绘制细胞存活剂量效应的模型曲线。
二、实验原理放射生物学中细胞受电离辐射照射后，受照细胞既可以呈现即刻死亡，也可能延迟一段时间后才表现出死亡，即增殖环节出现的细胞死亡。
这是因为有些受照细胞形态上仍然保持细胞结构的完整，同时细胞还具有制造蛋白质、合成DNA，甚至再经历一次或数次细胞的有丝分裂，但最终还是发生了细胞的变性死亡,这种并不立即表现出死亡的部分就称为细胞增殖性死亡。
细胞增殖性死亡是放射生物学研究中最具特色的一类细胞死亡。
细胞增殖性死亡与细胞凋亡是两个不同的概念，有关细胞增殖性死亡的分子生物学机制目前尚未完全清楚。
一般而言, 细胞增殖性死亡是不能经MTT实验、LDH漏出实验、或台盼蓝拒染法等加以检测。
放射生物学上，人们通常采用细胞克隆（集落）形成试验来检测经电离辐射照射后，细胞在克隆性细胞增殖能力上的变化。
一个存活的细胞克隆（集落）代表的是电离辐射细胞经一段时间（大约10天）培养后，由独立分散的单个健在细胞直接分裂、增殖，尔后形成具一定细胞数量的群体（通常含50个以上细胞）。
细胞生长曲线实验
细胞生长曲线实验细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。
在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。
以存活细胞数(万/mL)对培养时间(h或d)作图，即得生长曲线。
实验方法原理细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，是判定细胞活力的重要指标。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，是判定细胞活力的重要指标。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。
细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。
实验材料细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板实验步骤1. 取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液。
分。
细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。
实验材料细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板实验材料细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板实验步骤1. 取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液。
生长曲线
• 5. 酶联免疫检测仪检测各孔OD值，检测波长570 nm, 以时间为横坐标， 平均OD值为纵坐标，记录并绘制细胞生长曲线。 • 备注： A.选择适当的细胞接种浓度。因此，在进行MTT试验前，对每 一种细胞都应测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲 线，然后确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止时不 致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成的量与细胞数呈良好的线性关 系。 B.细胞生长曲线方法96孔板太小,接种细胞多时,用不了几天就长满,因 一般要做5-7天);接种细胞少时,不易养活.
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三瓶细胞均 铺满瓶底， 冻存两瓶， 剩下一瓶一 传三
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（A)细胞 仍有悬浮 细胞，背 景脏，拟 丢弃。
换液，细 细胞片状浮起，(A)仍有较 胞生长约 弃掉旧培养液，多单个细 胞漂浮， 瓶底70% pbs清洗后见 背景很脏 瓶底仍有少量 （小黑 细胞贴附，遂 点）,反复 将三瓶消化转 冲洗，换 液，见少 移至新瓶(A) 量细胞贴 继续培养。 附瓶底 预计周日 冻存两支， 再一传三 下午复苏 一支细胞 (B)
细胞生长曲线的绘制及注意事项
，
用PBS配制5mg/ml的MTT溶液，0.22微膜过滤除菌，4度保存。 (MTT溶剂需避光4度保存，配好的溶剂有效期两周，过期的不能再用 于实验，须重配)
•
从第24 h开始，每隔24 h随机取1块96孔板，96孔板每孔加入20µl 5mg/mL MTT液，继续培养4 h后，吸出孔内培养液；向每孔加入 150µl DMSO。将培养板置于微孔板振荡器上振荡10 min，使结晶物 溶解。
实验方法
• 细胞悬液制备：取生长良好接近汇合的细胞，胰酶消化， 再加新鲜培养基制成细胞悬液后计数。 • 接种：根据细胞计数结果，按每瓶5×104个接种细胞，作 传代培养（接种七组，每组三孔）。 • 计数：24h后开始作细胞计数，以后每隔24h计数一次， 连续计数7天。 • 绘图：根据计数结果，绘制细胞生长曲线。（横轴时间天 数，纵轴细胞数，万/mL）
MTT法检测细胞活力讲解
评估细胞因子对免疫细胞活性的影响
实验中遇到的问题与解决方案
问题一
细胞培养污染导致实验结果异常
解决方案
严格控制细胞培养环境，定期进 行细胞污染检测
问题二
不同批次细胞生长状态不一致
解决方案
加强实验操作培训，提高实验员 操作水平
问题三
MTT法操作过程中出现误差
解决方案
标准化细胞培养条件，确保细胞 生长状态一致
可见光下稳定
MTT结晶在可见光下稳定，不易分解，因此可以长 时间保存和测量。
细胞代谢与颜色变化
细胞代谢
活细胞通过代谢将MTT染料还原成蓝紫色结晶，结晶的数量与细 胞活性成正比。
颜色变化
随着结晶的形成，培养液的颜色逐渐由黄色变为蓝紫色，颜色的 深浅与细胞活力成正比。
细胞活力的判定标准
80%
细胞存活率
荧光染色法
利用荧光染料对活细胞进行染色，通 过荧光显微镜观察荧光信号判断细胞 活力。
mtt法与其他方法的优缺点比较
染色法
操作简单，但主观性强，误差 较大。
代谢活性检测
客观准确，但试剂成本较高。
荧光染色法
灵敏度高，但操作复杂，需要 荧光显微镜。
MTT法
操作简便，成本低，结果准确 可靠。
选择合适的细胞活力检测方法的原则
经验总结与未来展望
经验总结
MTT法是一种简单、可靠的检测细胞 活力的方法，但在实验过程中需要注 意避免污染、误差等问题。
未来展望
随着细胞生物学研究的深入，MTT法 将会有更多的应用场景，如药物筛选、 免疫疗法评估等。同时，需要不断优 化实验条件和方法，提高实验结果的 准确性和可靠性。
THANK YOU
MTT比色法测定细胞生长曲线_郝新保
MTT比色法测定细胞生长曲线郝新保 张利朝 殷 缨 韩秀珍 陶秦渝 郝晓柯 张盈华(第四军医大学唐都医院中心实验室 西安710038)关键词 细胞生长曲线 M T T比色法中图号 Q28 在有关肿瘤细胞生物学的研究中,我们常常要测定细胞的生长状态,制作细胞生长曲线,以往的方法是取少量细胞在镜下或计数仪中计数,然后标注在坐标纸上,制作出细胞生长曲线.这种方法对同一样品要求计数几次取平均值,不但操作繁琐、费时,更主要的是误差较大,可达到20%～30%[1],包括取样误差、计数误差等.为了能简便、准确地测定细胞数,我们建立了基于M T T比色法的细胞生长曲线制作方法.1 材料和方法1.1 试剂 R PM I1640培养基为GIBCO公司产品,小牛血清为杭州四季青产品,M T T为SERV E产品,其它试剂均为国产.1.2 仪器 HL-2029P型酶标自动分析仪为国营二六二厂产品,Pr ofileⅡ,Elite型流式细胞仪为美国CO U L T ER 公司产品.1.3 细胞培养 选用人乳腺癌细胞系SK-BR-3.细胞培养在含10%小牛血清的RPM I1640培养基中,37℃,5% CO2.1.4 镜下计数测定细胞数 细胞消化后悬浮在一定量的培养基中,用计数板按常规方法在倒置显微镜下计数,每个样品测三次,取平均值.1.5 流式细胞仪计数 细胞消化后悬浮在一定量的培养基中,取0.2ml细胞过滤后用流式细胞仪自动计数.1.6 M T T比色法计数 M T T比色法计数为间接计数,先要做出细胞的标准曲线,然后根据欲测样品的A值计算出相应的细胞数.1.6.1 制作标准曲线 准备细胞悬液,从1×107细胞/200μl/孔开始在96孔板中倍比稀释至1×102细胞/孔,每个稀释度三孔细胞,培养板置37℃培养4h后细胞贴壁,每孔中加入20μg M T T继续培养4h,然后吸出150μl培养液,加入等量DM SO,37℃20min,570nm处测定吸光度[2],用二六二厂酶标自动分析仪程序绘出细胞标准浓度曲线.1.6.2 制作生长曲线 调整细胞的浓度,按2×103/孔接种在96孔板中,置37℃培养,每天用M T T比色法测定3孔细胞的A值,在标准曲线上计算出相应的细胞数,即可绘出细胞的生长曲线.郝新保,男,32岁,讲师,主治医师2 结果2.1 细胞数与A值的标准曲线 根据各稀释度的A值制作细胞浓度的标准曲线,如图1.图1 SK-BR-3细胞浓度的标准曲线2.2 肿瘤细胞的M T T比色法生长曲线 根据每天测定的三孔细胞的A值在标准曲线上求得其对应的细胞数,7～10d后即可绘制细胞生长曲线,如图2.图2 SK-BR-3细胞的生长曲线2×;--0.2×;…20×.2.3 细胞接种密度对生长曲线的影响 当细胞接种密度较低(2×102/孔)和较高(2×104/孔)时,对细胞生长曲线的形状有一定的影响,如图2.2.4 M T T比色法与镜下计数法及流式细胞仪计数法的比较 为了比较M T T比色法和镜下计数法制作的细胞生长曲线,用流式细胞仪的计数结果作为参照,结果表明M T T 比色法与流式细胞仪计数结果更接近,明显优于镜下计数法的结果.3 讨论 从结果可以看出,用M T T比色法制作细胞生长曲线完全可行.因其减少了取样和计数误差,免除了贴壁细胞的消化等,使其具有简便、快速的特点.对几种不同方法制作的生长曲线进行比较发现,M T T比色法在客观性上也比镜下计数法有了很大的提高.要掌握好这个方法首要的一点是标准曲线的制作,稀释一定要准确,在保证标准曲线如实反映细胞数的基础上,才能制作出好的生长曲线.在测定时,接种细胞的密度对生长曲线的影响较大.从图2可以看出,接种密度过高或过低都不利于生长曲线的制作,这与细胞的生长能力有关,可进行简单的预实验确定,一般在(1～5)×103细胞/孔为好.尽管M T T比色法测定细胞生长曲线具有很多优点,但因其需要使用自动酶标仪而受到了一定的限制,如果能开发出细胞生长曲线专用软件,就能摆脱自动酶标仪的限制,利用普通酶标仪就可以开展工作了.参考文献1鄂 征.组织培养技术.第2版.北京:人民卫生出版社,1993: 1542候 健,孔宪涛.四甲基偶氮唑蓝比色法检测人血清白细胞介素6.中华医学检验杂志,1993;16(4):208～210(收稿1996-09-17 修回1997-02-04)编辑 王小仲化云宁滴眼液的质控标准王 颖 雷其云 蒋永培 樊亚萱 (第四军医大学西京医院药局 西安710033)关键词 化云宁 钾离子 耐缺氧 质量控制 刺激性中图号 R289 我院研制的新药化云宁滴眼液为一复方中药制剂,具有活血化瘀、退翳明目的功效,是治疗角膜瘢痕(角膜云翳,角膜斑翳)的理想药物.在化云宁研制和生产的质量控制上,我们采用了钾离子(K+)含量测定、刺激性实验及生物检定方法作为质控标准,保证了化云宁滴眼液在临床上安全和有效地使用.1 材料和方法1.1 药物与试剂 化云宁滴眼液由丹参、黄芩和金银花等生药的提取液按眼药常规要求制备而成;心得安注射液(1mg/ml,批号830706,北京制药厂);丹参素注射液(10 mg/ml,批号820401,上海医科大学附属中山医院制);生理盐水(2ml/支,批号8303023,自制).1.2 实验动物 BA L B/c小鼠,雄性,6～8周龄,体重18～21g;新西兰白兔2只,雄性,编号分别为543,554,体重分别为2.05kg和2.45kg(以上动物均由本校实验动物研究中心提供).1.3 K+含量测定[1] 用System E4A型火焰光度计(美国BECKM AN公司制造)分别测定化云宁滴眼液成品及其组方中各味药的提取液(丹参,黄芩,金银花等)中K+浓度.样品在测定前均用N aO H调p H值至6.8～7.0.1.4 刺激性实验 采用家兔滴眼法.选取健康新西兰白兔2只,编号分别为543,554,用药前,检察兔眼结膜血管、角膜透明度等均属正常,如①结膜无血丝及发红;②王 颖,女,42岁,主管药师角膜不浑浊,呈透明状;③眼角无分泌物.左眼点化云宁滴眼液2滴(批号850619),右眼点生理盐水2滴作为对照,用药后开始记录时间,并观察眼部反应情况.结果判定以上述用药前检察的①～③项指标无异常为无刺激症状表现(-),否则为被检眼药有刺激性(+).1.5 常压耐缺氧实验 按表2中的剂量,小鼠腹腔(注射)给药(批号830509,自制)后30min,放入容量为250ml的磨口玻璃瓶中,瓶内放钠石灰5g,每瓶放小鼠一只,放入后用凡士林密封盖紧,并开始记录其存活时间[2].以生理盐水组为对照,比较各组间统计学上的差异,统计学处理采用t检验.2 结果2.1 药液中K+浓度的测定 在中药滴眼液与中药注射液中常含有来源于植物药材本身的K+,其浓度过高可引起局部疼痛.我们采用中草药注射液的K+浓度限定范围[40%～60%(mg/ml)以下][3]做为化云宁滴眼液的质控标准之一.六个批号的化云宁滴眼液中K+浓度测定的结果见表1,均符合限定标准.此外,对化云宁滴眼液中丹参,黄芩和金银花三种主药提取液的K+浓度也分别进行了检测,结果(三次测定的平均值)分别为47.6%,0.8%和1.2%(mg/ml),由此可见,该滴眼液中的K+主要来源于丹参.2.2 刺激性实验 经2只新西兰白兔左、右眼对照实验观察,除1只兔左眼在用药液后15min时观察有轻度流泪外,其余均无任何刺激性反应.因此,该眼药符合有关规定.。
细胞存活曲线的测定与结果分析
书面回答以下思考题
1、本实验在证明衣霉素抵抗电离辐射性能设计上尚存哪些 不足，为什么？你认为在实验设计上应当补充哪些实验内 容才能进一步支持你的实验结论，为什么？ 2、放射生物学中单击多靶模型与线性二次方模型推导过程 各自所依据的主要理论是什么？本实验结果如果改用线性 二次方数学模型进行结果处理，将会出现什么样新的实验 结论，怎么看待？ 3、什么叫电离辐射的亚致死性细胞损伤修复？详细讨论亚 致死性细胞损伤修复与细胞增殖性死亡之间的关系。
2
1000 253 278 273 344 317 296 201 242 166
4
4000 244 206 252 328 408 320 152 217 210
6
8000 143 157 159 285 291 306 113 87 82
8 10000 65 85 87 278 242 269 17 75 49
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实验二 细胞存活曲线的测定与结果分析
实验目的
▪ 了解克隆形成法建立细胞存活曲线的
实验方法原理和基本操作步骤
▪ 熟悉细胞存活分数与受照剂量间的剂
量-效应关系及与结果分析处理相关 软件的使用方法 ▪ 掌握细胞存活曲线的拟合、绘制与结果的
正确分析方法
实验原理
▪ 电离辐射引起细胞死亡是评价辐射整体效应的重要基础。 ▪ 在放射医学领域中将细胞死亡分为间期死亡和增殖死亡两种类型。
▪ n称外推数，代表理论上的靶数目。
实验基本步骤
实验细胞准备、分组与照射 细胞培养、克隆计数与存活分数计算 根据单击多靶细胞存活模型，利用 SPSS软件拟合细胞存活曲线 EXCEL软件对细胞存活曲线的绘制
细胞准备与照射
▪ 取处于对数生长期人宫颈癌HeLa
细胞活性测定方法
细胞活性测定方法细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆（集落）形成法、3H放射性同位素掺入法、MTT法等。
其中MTT法以其快速简便，不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。
但MTT法形成的Formazan 为水不溶性的，需要加有机溶剂溶解，由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Formazan，故有时重复性略差。
为了解决这个问题，研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类：如XTT、CCK-8（WST-8）等。
现就这三种四氮唑盐类方法作一个简单介绍：1.MTT法MTT：化学名： 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
2.XTT法XTT：化学名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5- sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide，作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色甲产物。
当XTT与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的甲产物的吸光度与活细胞的数量成正比。
优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT。
实习二细胞存活曲线测试与结果分析
实习二细胞存活曲线测试与结果分析一、目的要求实习目的是了解克隆形成法检测细胞存活曲线实验方法的原理与基本步骤，熟悉细胞存活分数与受照剂量（Gy）之间的剂量－效应关系，以及与存活曲线结果分析处理有关的软件使用，掌握细胞存活曲线的测试、绘制与结果分析的正确方法。
具体要求：1，计算细胞接种效率PE；2，应用SPSS软件计算单击多靶模型下不同的n和k值，正确阅读运算结果；3，根据实际获得的n和k值，进一步计算出D0、Dq和D37值，以及增敏比SER；4，利用EXCEL软件计算出不同剂量照射下细胞的理论存活分数预测值，绘制存活分数预测值与照射剂量间的剂量效应曲线。
二、实验原理放射生物学中细胞死亡是指细胞丧失完整增殖能力的一种死亡。
当细胞受到电离辐射照射后，受照细胞可呈现“间期死亡” ，或曰即刻死亡，也可能呈现为“增殖性死亡”，即受照细胞形态上仍然保持完整，而且有能力制造蛋白质、合成DNA，甚至还能再经过一次或n次有丝分裂后，才突然变性死亡。
鉴于上述细胞死亡定义和照射后细胞死亡的实际情况，细胞放射生物学通常采用细胞克隆（集落）形成试验来检测照射后细胞的存活状况。
细胞克隆是在体外培养时由一独立的单个健康存活细胞直接分裂增殖而形成的细胞群体。
在计数克隆数目时，通常把含50个以上细胞的克隆计为一个细胞集落，代表一个存活细胞。
在描述细胞存活分数（SF, survival fraction）与电离辐射吸收剂量（Dose, Gy）间的定量关系时，通常有单击单靶和单击多靶两种模型。
而哺乳类细胞受照后存活曲线多近似地符合单击多靶模型。
根据模型对原始数据进行拟合分析可以获得细胞存活曲线的数学表达式及其具有生物学意义的一些参数。
例如在单击多靶细胞克隆存活模型中，Dq值的大小反映细胞抵抗电离辐射修复亚致死损伤的能力。
因此电离辐射细胞存活实验就是要通过检测与拟合细胞存活曲线，获得诸如D、Dq、k和n等一系列参数，从而根据这些参数对细胞的放射敏感性作出定量的评价。
例析种群的存活曲线
例析种群的存活曲线一. 曲线分析反映种群个体在各种年龄段的存活数量动态变化的曲线，称为存活曲线。
它能反映生物个体发育阶段对种群数量的调节状况。
存活曲线可分为三种，反映内容如下：a型：存活曲线呈凸型。
它们表示种群的大多数个体均能实现其平均的生理寿命（种群生理寿命是指种群处于最适生活环境下的平均年龄，而不是某个特殊个体可能具有的最长寿命），在到达平均寿命时，几乎同时死亡。
也就是说，在接近生理寿命前只有少数个体死亡。
人类和许多高等动物（大型兽类）以及许多一年生的植物常属此类。
b型：存活曲线呈对角线。
它们表示各年龄段具有相同的死亡率。
多年生�次结实植物和水螅、许多鸟类以及小型哺乳动物的存活曲线接近此类。
c型：存活曲线呈凹型。
它们表示幼小个体的死亡率极高，一旦过了危险期死亡率就变得很低而且稳定。
许多海产鱼类、海产无脊椎动物、许多低等脊椎动物和寄生虫以及多次结实的多年生植物属此类。
存活曲线以环境条件和对有限资源的竞争为转移。
例如，人类的存活曲线因营养、卫生医药条件而有很大的变化。
如果环境变得合适，死亡率能够变得很低，种群就会突然爆发。
不少农业害虫的爆发就是这种情况。
研究存活曲线可以判断各种动物种群最容易受伤害的年龄而人为地有效地控制这一种群的数量，以达到造福人类的目的，如可以选择最有利时间打猎或进行害虫防治。
二. 例题分析例. 下图为种群的两种存活曲线，请回答：（1）如果I是养牛场的牛群，则表示牧场经营很正常，它属于________型，其特点是_________个体很多，而_______个体很少，则种群的________会越来越大。
（2）如果II是养鸡场的鸡群，则表示这个鸡场已陷入危机，经营者必须采取的措施是：①留下________鸡，处理________鸡；②要保持________多，________少的性别比例；③购入或孵化出大量________加以良好的________，使它有很高的________，让衰退型转化为________。
MTT
·吸光度测定 死细胞中珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原 为蓝紫色结晶。因此，结晶生成量与活细胞 数成正比。用DMSO溶解结晶，利用酶标仪 测定出在490nm处的光吸收值以反映出活细 胞相对数目。
原理
• 一般来讲，活细胞数越多，生成的蓝紫色结晶越多，检测 的OD就越大；活细胞数越少，生成的紫色结晶越少，OD 值越小。来自结果分析结果分析
100
细胞存活率（%）
80 60 40 20 0 0 0.78 1.56 3.12 6.25 12.5 浓度
生存率曲线（量效曲线）
结果分析
100
细胞死亡率(%)
80 60 40 20 0 0 0.78 1.56 3.12 6.25 12.5 浓度
生存率曲线（量效曲线）
结果分析
MTT实验技术介绍
内容
• MTT实验原理
• MTT法应用 • 所需材料和试剂 • 实验步骤 • 结果分析
• 注意事项
原理
MTT法是一种检测细胞存活及增殖的试 验方法。
原理
·活细胞还原 MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的荧 光染料，可被活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢 酶还原为不溶于水的蓝紫色甲瓒 （Formazan）结晶
二甲基亚砜（DMSO）、酶标仪、培养液、胰酶、 二氧化碳培养箱
实验步骤
胰酶消化制成细胞悬液 酶标仪震荡5min，测490nm处OD值
每孔5000个细胞接种于96孔板内
加100μl DMSO溶解颜色结晶
贴壁后加100μl药物溶液孵育24h
每孔加10μl MTT溶液,孵育3h
点板的设计排版
0 1 1 1 1 2 3 3 3 3 4 4 4 4 5 5 5 5 6 6 6 6
• 结论：活细胞数与OD值成正相关。
实习二细胞存活曲线测试与结果分析
实习二细胞存活曲线测试与结果分析一、目的要求实习目的是了解克隆形成法检测细胞存活曲线实验方法的原理与基本步骤，熟悉细胞存活分数与受照剂量（Gy）之间的剂量－效应关系，以及与存活曲线结果分析处理有关的软件使用，掌握细胞存活曲线的测试、绘制与结果分析的正确方法。
具体要求：1，计算细胞接种效率PE；2，应用SPSS软件计算单击多靶模型下不同的n和k值，正确阅读运算结果；3，根据实际获得的n和k值，进一步计算出D0、Dq和D37值，以及增敏比SER；4，利用EXCEL软件计算出不同剂量照射下细胞的理论存活分数预测值，绘制存活分数预测值与照射剂量间的剂量效应曲线。
二、实验原理放射生物学中细胞死亡是指细胞丧失完整增殖能力的一种死亡。
当细胞受到电离辐射照射后，受照细胞可呈现“间期死亡”，或曰即刻死亡，也可能呈现为“增殖性死亡”，即受照细胞形态上仍然保持完整，而且有能力制造蛋白质、合成DNA，甚至还能再经过一次或n次有丝分裂后，才突然变性死亡。
鉴于上述细胞死亡定义和照射后细胞死亡的实际情况，细胞放射生物学通常采用细胞克隆（集落）形成试验来检测照射后细胞的存活状况。
细胞克隆是在体外培养时由一独立的单个健康存活细胞直接分裂增殖而形成的细胞群体。
在计数克隆数目时，通常把含50个以上细胞的克隆计为一个细胞集落，代表一个存活细胞。
在描述细胞存活分数（SF, survival fraction）与电离辐射吸收剂量（Dose, Gy）间的定量关系时，通常有单击单靶和单击多靶两种模型。
而哺乳类细胞受照后存活曲线多近似地符合单击多靶模型。
根据模型对原始数据进行拟合分析可以获得细胞存活曲线的数学表达式及其具有生物学意义的一些参数。
例如在单击多靶细胞克隆存活模型中，Dq值的大小反映细胞抵抗电离辐射修复亚致死损伤的能力。
因此电离辐射细胞存活实验就是要通过检测与拟合细胞存活曲线，获得诸如D0、Dq、k和n等一系列参数，从而根据这些参数对细胞的放射敏感性作出定量的评价。
MTT法检测细胞活力讲解
MTT法检测细胞活力
甘肃中医药大学
MTT法目的和意义
检测细胞存活和生长情况 用于评价药物产生的细胞毒作用
原理
• 四唑盐（噻唑蓝）是一种能接受氢原子的染料，简称MTT • 活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难 溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。 二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的紫蓝色结晶物，用酶 联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映 活细胞数量，从而反映细胞的增殖情况。 • 在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与活细胞数成正 比。
药物的配制
• 浓度 • 体积 • 过滤
MTT的配制
• MTT一般最好现用现配，过滤后4º C避光保存两周内有效，或配制成 5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用 避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。尤其当MTT变为灰绿 色时就绝对不能再用了。 • MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配 成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有 关系，因为时间较短。
4.培养时间。100ul的培养液对于10的4～5次方的增
殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话， 细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结果， 我们是在48h换液的。
5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不 能测定细胞绝对数。做MTT时，尽量无菌操作，因
曲线测试实验流程
IC50曲线的测定IC50即半抑制率，标准曲线是一个 S型曲线。
IC50为50%抑制浓度即细胞存活量为对照样本一半时所对应的浓度，半数抑制越低，说明药物对细胞的毒性越高。
实验操作步骤如下：1.细胞准备：A.细胞状态检测：从培养箱中取岀细胞，显微镜下观察。
状态描述：观察结果，细胞汇合度：B.细胞处理：将细胞培养基吸岀后，加入 2ml PBS缓冲液洗一次，加入 1ml % Trypsin-EDTA，放入培养箱中静置数分钟，直至细胞完全离壁悬浮，加入5ml含10%FBS的培养基（无抗生素）终止酶活，混匀后液体转移至 15ml离心管，1000rpm离心3min，弃去液体。
C.细胞计数：于15ml离心管中加入1ml含10%FBS的培养基（无抗生素），充分混匀。
取 40ul计数，公式如下：细胞浓度（数/ml ） = （4大方格细胞数之和/4 ）x 102 3 4 5X稀释倍数最终得到的细胞密度填入下表，根据最终需要细胞浓度及体积进行稀释。
D.2 将稀释好的细胞用排枪加至96 / 384 孔板：置于培养箱37C 5%CO2条件下培养24小时，待细胞贴壁后加药。
3 药物稀释：将药物进行3倍倍比稀释。
4 将稀释好的药物加入前一天铺好细胞的细胞板上，37 C 5%CO2培养箱培养72h。
5 荧光素酶检测：将 Celltiter-Glo 与 ddH20 以 1:1 混合，加入细胞板（96 板：20ul/well; 384 板：10ul/well ），静置10min后，TECAN infinite F200 酶标仪读值。
6.分析数据，绘制IC50曲线，寻找IC30,IC 50等值。
7.验证 IC5o：根据IC50曲线找岀IC50理论值，分别取 1/2倍、1倍及2倍的理论值进行药物浓度验证附录：Materials for Experime ntName Corporati on96-well plate Corni ng384-well plate Grei nerCe ntrifugeTube (15ml) BD Falco nPipets(10ml) Grei nerT-25 Flask Corni ngTips,EP Tube Axyge n. MatrixReage nts for Experime ntName Corporati onFBS ExcellDPBS Hyclone%Trypsi n-EDTA GIBCOMedium HycloneCell-Titer Gio? PromegaIn strume nts for Experime ntName Model Corporati onIn verted Microscope TS100 Niko nCOI ncubator BB16UV HeraeusBechtop ZHJH-1109 ZHCHENGCen trifuge 5200 KUBOTAMicroplate Reader infinite F200 TECANDispe nser 卩Fill Bio-Tek。
MTT原理步骤结果分析方法及注意事项
MTT原理步骤结果分析方法及注意事项MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）是一种常用于细胞增殖和细胞存活率测定的试剂。
MTT会被细胞还原成紫色的 MTT 衍生物，进而被细胞摄入和积蓄。
然后，MTT 衍生物可以通过去酸化和水解得到溶于有机溶剂的紫色形成物，可以用分光光度计检测。
MTT法常用于评估细胞毒性、细胞增殖、细胞存活率以及细胞治疗试验中药物、化合物和生物活性物质的毒性和活性。
1.细胞处理：将待测样品的细胞接种于孔板或培养皿中，使细胞附着在底部。
2.细胞培养：将细胞培养在适宜的培养条件下，使其稳定生长。
3.MTT染色：加入MTT溶液到细胞培养中，使其与细胞接触。
4.MTT还原：细胞将MTT还原为紫色产品，该产物由于不能从细胞中扩散出来，只会在细胞内积累。
5.细胞裂解：加入溶解MTT的溶剂，破坏细胞壁，并使其紫色产物完全溶解。
6. 分光光度计测定：使用分光光度计在570nm波长下测量吸光度。
7.数据分析：将吸光度的读数与对照组比较，计算细胞生长或存活率。
MTT法的结果分析方法如下：1.计算细胞生长或存活率：将待测组（实验组）细胞的吸光度读数减去空白对照组的吸光度读数，以消除背景干扰。
然后，将差值与对照组的吸光度读数进行比较，计算细胞的增殖或存活率。
2.绘制生长曲线：将不同时间点的吸光度读数绘制成图表，以观察细胞的增殖情况。
3.IC50测定：通过绘制浓度-响应曲线，确定50%细胞抑制浓度（IC50），即需要的试剂浓度来抑制细胞增殖或杀死50%的细胞。
注意事项如下：1.细胞密度：细胞密度应保持在适宜的范围，以确保实验结果的准确度。
过高的细胞密度可能导致细胞受限和死亡，而过低的细胞密度可能导致结果不可靠。
2.MTT浓度：MTT浓度的选择应根据具体实验目的和细胞类型进行优化。
浓度太高可能会导致染色不均匀，浓度太低可能影响实验结果的敏感性。
最新MTT法检测细胞活力
7.实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。调零孔加
培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、 培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物 的介质，而加药组加入不同浓度的药物。
8.避免血清干扰。用含15％胎牛血清培养液培养细胞时，
高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增 加，会试验敏感性。因此，一般选小于10％胎牛血清的培 养液进行。在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。
的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴 壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预 实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下 的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间， 以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形 成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降 低，太少观察不到差异。
谢谢观看
MTT本身就是比较粗的实验，增殖率10%左右的波动都不算 奇怪。特别是新手，20％的波动也是常见的，所以很可能 是技术原因引起的，特别是种板技术一定要过关。
注意细胞悬液一定要混匀，已避免细胞沉淀下来，导致每孔 中的细胞数量不等，可以每接几个就要再混匀一下。加样 器操作要熟练，尽量避免人为误差。另外，吹散次数过多 也会影响细胞活力。所以要熟练鞋、快些上板。
实验结果统计学处理
所有数值以x±s表示，应用SPSS软件进行方差分析， p<0.05时为相差显著，p<0.01时为相差非常显著。 可以以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生线 曲线，专门公式求IC50（半数抑制浓度 ）。或计算 抑制率。 OD对照组-OD实验组 ×100 % 抑制率 % = OD对照组
翻转倒扣法：可以直接将板翻转倒扣（垫几层滤纸）2－3次，比用“
MTT比色法测定细胞生长曲线、细胞生长曲线拟合、细胞群体倍增时间的简化计算解析
• 1.标准曲线的测定:
• 例如：用培养液将待检细胞重悬，得到 细胞悬液，按照4x10^4/ml细胞密度梯度 ,分 别接种于 96孔板 ,每孔 100μl,重复 3孔;采用 MTT法测量吸光值A值,同一浓度下测得的A值 为该浓度下3孔的平均值。 依检测结果 ,得到吸光值 A值与细胞浓度 的对应关系，绘出标准曲线。
以存活细胞数(万/mL)对培养时间 (h或d)作图，即得生长曲线。 一般而言，我们主要研究的是对 2018/10/31 数生长期的生长曲线。
测定细胞生长曲线的方法
1.细胞计数法（简单、最常用、有误差）
• • （1）传代后把细胞重悬，得到细胞悬液，把悬液均匀加到24孔板中 （2）24 h后开始进行细胞计数，以后每隔24 h计数一次，每次取4孔细胞， 分别进行计数，计数结果取4孔的平均值。连续计数6天。 • （3）根据细胞计数结果，以单位细胞数(细胞数/mL)为纵坐标，以时间为 横坐标绘制生长曲线。 • 24孔板 细胞计数板
24h / b
2018/10/31
• 结果 • 曲线一. • b=0.855
Td 24h / b 28.070h
• 曲线二. • b=0.921
2018/10/31
Td 24h / b 26.059h
THANK YOU
2018/10/31
m=（t-2） ln2
Ya e
b m
• 依据以上变量进行曲线拟合 ,记录相应的a,b值。 2018/10/31
2018/10/31
2018/10/31
2.2 细胞群体倍增时间的简化计算方法
2018/10/31
• 细胞群体倍增时间的计算方法有2种。 • 1.做图法:在细胞生长曲线的对数生长期找 出细胞增加一倍所需的时间,即倍增时间, • 2.公式法,按细胞倍增时间计算细胞群体倍 培时间,其为公式为：
细胞生物学实验实验报告
细胞生物学实验实验报告nThis XXX。
cytochemistry。
XXX。
cell culture and analysis。
cell cycle analysis。
cell n and analysis。
XXX to study the structure。
n。
and us laws of life of animal and plant cells.Chapter 1 Overview1.1 XXXXXX and structure of cells。
study cell logical processes。
conduct cell culture and analysis。
and study cell XXX.Chapter 2 Experimental PrinciplesIn this experiment。
XXX cells。
XXX。
cytochemistry。
XXX。
cell culture and analysis。
cell cycle analysis。
cell n and analysis。
XXX processes。
cell culture and analysis。
and cell XXX.2.1 实验流程和应用实验方法在本研究中，我们使用了多种实验方法来研究细胞的生理和遗传学特性。
其中，细胞器活体染色和显微观察是我们最常用的方法之一。
我们使用荧光染料来标记不同的细胞器，如线粒体、内质网和高尔基体，并使用显微镜观察它们在细胞中的位置和分布。
此外，我们还观察了细胞骨架的形态和组成，并使用冷冻保存技术来保存细胞的样本。
2.2 细胞器活体染色与显微观察为了观察细胞器在活体细胞中的分布和位置，我们使用了多种荧光染料。
例如，我们使用MitoTracker Red来标记线粒体，使用ER-Tracker Green来标记内质网，使用BODIPY FL C5-ceramide来标记高尔基体。
存活曲线例子
存活曲线例子
存活曲线是一种用于描述生存数据的图形方法，其中横轴表示时间，纵轴表示生存率或存活概率。
在生物学、医学和工程领域中，存活曲线被广泛用于描述和预测生物体或系统的生存能力。
以下是一个简单的存活曲线例子：
假设我们有一组年龄在10-90岁之间的人，我们想要了解他们的存活概率。
我们可以通过绘制存活曲线来展示不同年龄段的存活概率。
具体步骤如下：
1. 将年龄分成不同的组，例如10-20岁、20-30岁、30-40岁等等。
2. 对于每个年龄组，计算在该年龄组的死亡人数和总人数。
3. 使用死亡人数除以总人数，得到每个年龄组的存活概率。
4. 将存活概率作为纵轴，年龄作为横轴，绘制存活曲线。
通过这个例子，我们可以看到随着年龄的增加，存活概率逐渐降低。
这表明随着年龄的增长，人们面临越来越多的健康风险和死亡风险。
因此，对于年龄较大的人群，我们需要更加关注他们的健康状况和提供更多的医疗保健服务。
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实验二 细胞存活曲线的测定与结果分析
实验目的
▪ 了解克隆形成法建立细胞存活曲线的
实验方法原理和基本操作步骤
▪ 熟悉细胞存活分数与受照剂量间的剂
量-效应关系及与结果分析处理相关 软件的使用方法 ▪ 掌握细胞存活曲线的拟合、绘制与结果的
正确分析方法
实验原理
▪ 电离辐射引起细胞死亡是评价辐射整体效应的重要基础。 ▪ 在放射医学领域中将细胞死亡分为间期死亡和增殖死亡两种类型。
实验基本步骤
细胞培养、克隆计数与存活分数计算
▪ 将接受照射后的细胞
放回细胞培养箱继续 培养，每三天更换新 鲜培养液一次。待培 养至9天后弃去培养 基，0.5%结晶紫染色， 统一确定存活的克隆 细胞计入标准。
▪ 计数并记录不同照射
剂量下各组培养瓶中 存活细胞克隆个数， 计数结果如下表示。
实验基本步骤
2
1000 253 278 273 344 317 296 201 242 166
4
4000 244 206 252 328 408 320 152 217 210
6
8000 143 157 159 285 291 306 113 87 82
8 10000 65 85 87 278 242 269 17 75 49
▪ n称外推数，代表理论上的靶数目。
实验基本步骤
实验细胞准备、分组与照射 细胞培养、克隆计数与存活分数计算 根据单击多靶细胞存活模型，利用 SPSS软件拟合细胞存活曲线 EXCEL软件对细胞存活曲线的绘制
细胞准备与照射
▪ 取处于对数生长期人宫颈癌HeLa
细胞，0.25%胰蛋白酶消化制成单 细胞悬液，计数细胞浓度。
克隆计数结果
克隆计数与存活分数计算
接种数
IR
Tun(1.25µg/ml) +IR
GMNa(500µg/ml) +IR
假照组 600 439 408 425 392 401 416 418 387 443
0.5
600 308 325 339 317 388 351 282 308 316
1
600 278 303 301 301 296 399 249 316 209
细胞存活分数计算
实验基本步骤
▪ 根据假照射处理组细胞克隆形成数目，计
算细胞接种效率（PE）；
▪ 各照射处理组细胞存活分数（SF）为各
组细胞克隆形成的平均数除以相应细胞接 种数与接种效率的乘积。
细胞存活分数计算结果
Dose(Gy)
CTR
0
1
0.5
0.76
1
0.69
2
0.38
4
0.08
6
0.03
8
0.01
1. 间期死亡（interphase death）是指受照射细胞未经细胞分裂 即在间期发生死亡。
2. 增殖死亡（reproductive death）是指受照射的细胞丧失了继 续增殖的能力，在经过一个或几个有丝分裂周期后丧失代谢活 动和细胞功能而死亡。
▪ 从辐射致死效应的角度，把细胞“增殖能力”的完整性作为存活与
细胞存活曲线
▪ 细胞辐射剂量存活分数曲线（clonogenic
survival fraction curve）反映了电离辐射照 射剂量与细胞存活率之间的关系。
▪ 在培养皿上培养有增殖能力的细胞，观察细胞集
落形成率，以每一集落代表1个存活细胞。以集 落形成率代表细胞存活率与照射剂量在半对数座 标纸上作图即构成细胞的剂量存活曲线。
实验基本步骤
Tun
CMNa
1
1
0.87
0.73
0.82
0.62
0.47
0.29
0.13
0.07
0.05
0.02
0.04
0.01
利用SPSS拟合获得参数k,n
实验基本步骤
▪ 通过实验获得细胞克隆数计算，得到不同剂量下各组
细胞存活率，根据单击多靶细胞存活模型和SPSS软件 拟合求出参数k，n值。
▪ 根据获得的参数k，n，计算不同处理组Do、Dq、 D37
▪ 组别设置及接种细胞数如右图所示，
接种细胞于25cm2培养瓶中，每组 设3个平行实验瓶。
▪ 37℃，5% CO2下正常培养4 小时
待接种细胞贴壁生长。衣霉素Tun 给药组贴壁后给药，放射增敏剂甘 氨酸单钠GMNa照射前给药。接种 细胞12小时后，将培养细胞转移至 钴源室接受相应剂量伽马射线的照 射处理，其中假照射组细胞不接受 照射处理。
细胞存活曲线模型
▪ 细胞存活曲线常用模型
▪ 单击多靶模型 SF= 1–(1–e-kD)N
▪ 线性平方模型 SF= e–D(α+βD)
细胞存活曲线模型的选择
细胞存活曲线模型
▪ 单击多靶模型
1、常用于放射生物学基础研究； 2、适于评价不同组织类型，或不同因素影响下细胞电离辐射敏感性
的差异，此模型中D0，n和Dq等参数可定量描述敏感性和损伤细 胞的修复能力差异。
死亡的判断标准。
▪ 鉴别“细胞存活”的唯一标准：照射后细胞是否保持再繁殖的完整
性，即所分析的是克隆源细胞的增殖活性而不是受照射群体中任意 细胞的功能活性。
克隆形成
▪ 细胞克隆：在体外培
养的单个细胞把含有>50以上 的细胞克隆计为一个 细胞集落，代表一个 存活的细胞。
▪ 要求计算单击多靶模型细胞存活曲
线Do、Dq和n等特征参数值。
▪ 根据D0， Dq 和n等参数，比较不
同实验条件下细胞辐射敏感性的变 化。
▪ 剂量存活曲线不但可反映不同细胞
辐射敏感性与剂量间依赖关系，对 临床放疗和放射医学基础研究也都 有重要的指导意义。
特征性参数涵义
单击多靶细胞存活模型
▪ D0为平均致死剂量，理论上是使每个细胞平均被击中一
▪ 线性平方模型
90%放射肿瘤学家选择此模型，多用于临床研究。 1、此模型简单； 2、适于分割剂量1-6Gy（临床治疗常用剂量范围），分割剂量>2Gy
此模型对存活率估计偏高； 3、模型中参数比值α/β可反应正常或肿瘤组织的辐射反应性。
单击多靶细胞存活模型
▪ 本实验要求掌握单击多靶模型对实
验数据的模拟方法：SF= 1–(1–ekD)N；同学也可自行按线性平方模 型拟合方法求出a和b值。
次所需要的辐射剂量，数值上D0＝1/k。
▪ Dq为准阈剂量，表征修复亚致死损伤的能力，即克服
单击多靶曲线中“肩宽”所需的剂量，数值上Dq＝ln n × D0。
▪ D37是指当细胞存活分数为37%时相应的辐射剂量，在
单击多靶模型中 D37＝D0 + Dq。
▪ k为细胞钝化常数，其值可由拟合曲线方程直接给出。