枯草芽孢杆菌的介绍
枯草芽孢杆菌的生物特性及应用现状
枯草芽孢杆菌的生物特性及应用现状枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阳性细菌，被广泛应用于农业、医药和环境等领域。
本文将着重介绍该菌的生物特性以及其在不同领域中的应用现状。
枯草芽孢杆菌的生物特性表现出以下几个方面：1. 形态特征：枯草芽孢杆菌呈直杆状，通常单个细胞长度为2-3微米，宽度为0.4-0.8微米。
菌落表面光滑，呈乳白色或淡黄色。
2. 生长条件：枯草芽孢杆菌是一种好氧菌，但也能在缺氧条件下生长。
它能够在温度范围为10-50摄氏度下生长，最适宜生长温度为37摄氏度。
菌落形成速度较快，通常在24-48小时内能够形成较大的菌落。
3. 营养需求：枯草芽孢杆菌是一种营养需求较低的细菌，能够利用多种有机物和无机盐进行生长。
它能够利用谷氨酰胺、酪氨酸等氨基酸作为碳源和能源。
4. 生防特性：枯草芽孢杆菌具有广谱的抗病原菌能力，能够分泌多种抗微生物物质，如抗生素、酶和胞外多糖等。
它还能够竞争性附着在植物表面，并通过产生抗生素等物质来抑制植物病原微生物的生长。
5. 益生菌作用：枯草芽孢杆菌被广泛应用于多种生物制剂中，作为益生菌用于改善人和动物的健康。
它具有调节肠道菌群平衡、增强免疫功能和改善食物消化吸收等益生作用。
接下来，我们将介绍枯草芽孢杆菌在不同领域中的应用现状：1. 农业领域：枯草芽孢杆菌在农业领域中被广泛应用于生物农药的制备。
它可以通过产生抗生素和酶等物质来抑制植物病原微生物的生长，减少农药的使用。
此外，枯草芽孢杆菌还可以提高植物的抗逆性，促进植物生长和发育。
2. 医药领域：枯草芽孢杆菌作为益生菌被广泛应用于医药领域。
它可以通过调节肠道菌群平衡来改善人体健康，对调节肠道功能、防治腹泻和便秘等疾病具有明显的效果。
此外，枯草芽孢杆菌还可以产生抗生素和抗氧化物质，对抗病原微生物的感染。
3. 环境领域：枯草芽孢杆菌在环境领域中被应用于废水处理、土壤修复和生物除臭等方面。
枯草芽孢杆菌的生物特性与环境适应能力分析
枯草芽孢杆菌的生物特性与环境适应能力分析枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的革兰氏阳性细菌，属于芽孢杆菌属（Bacillus）的一种。
它具有许多独特的生物特性和强大的环境适应能力，在各个领域中得到了广泛的研究和应用。
首先，枯草芽孢杆菌具有较广的生态分布范围。
它可以在土壤、水体、空气等各种环境中发现。
它的广泛分布是由于它的孢子具有抗逆性强、携带有助于环境适应的基因以及良好的生长适应性等特性。
其次，枯草芽孢杆菌具有较强的耐受性。
它能够耐受高温、酸碱、干旱等极端环境条件下存活并繁殖。
这得益于它能够产生多种耐受逆境的酶和蛋白质，如耐热蛋白等，以提供对抗外界压力的能力。
此外，枯草芽孢杆菌具有多样的代谢途径和生物学功能。
它可以利用多种碳源和氮源进行生长，并且能够产生多种有益的代谢产物。
其中包括抗生素、酶、激素等，这些物质在农业、医药、环境等领域中具有广泛的应用前景。
此外，枯草芽孢杆菌还有着很强的降解能力，可以分解有机物质并将其转化为无机物质，起到环境净化和资源循环利用的作用。
枯草芽孢杆菌还具有一些特殊的生物特性。
首先，它能够分泌大量的孢子。
这些孢子具有良好的耐受性，可以长时间存活，并且在适合的条件下迅速萌发生长。
其次，枯草芽孢杆菌具有自蠕运动的能力，能够在半固体环境中表现出类似于单细胞生物的运动方式。
除了以上的生物特性外，枯草芽孢杆菌还具有与其他微生物相互作用的能力。
它可以与其他细菌、真菌和植物等建立共生关系，并通过互利共赢的方式促进彼此的生长和发展。
这种相互作用不仅有助于维持生态系统的稳定，也为枯草芽孢杆菌的应用提供了更多的机会和潜力。
总而言之，枯草芽孢杆菌具有广泛的生态分布范围、耐受性强、多样的代谢途径和生物学功能、特殊的生物特性以及与其他微生物的相互作用等生物特性和环境适应能力。
这些特点使得枯草芽孢杆菌在农业、医药、环境等领域中具有广泛的应用前景。
随着对其研究的深入，相信我们对枯草芽孢杆菌的了解也将更加全面，为其应用和开发提供更多的可能性和机会。
枯草芽孢杆菌
枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌拉丁学名Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn 芽孢杆菌属的一种。
单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。
中文名：枯草芽孢杆菌其他外文名：Bacillus subtilis类型：是芽孢杆菌属的一种即“枯草杆菌”，芽孢杆菌属的一种。
单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。
有的菌株是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系，故常作选育核苷生产菌的亲株或制取5'-核苷酸酶的菌种。
在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
长沙泰莱生物科技有限公司专业分离提纯枯草芽孢杆菌菌种。
成份含量枯草芽孢杆菌及生物酶、维生素、微量元素等辅助剂功效特点1、本品对特殊菌体进行促芽孢和微胶囊包被处理，在孢子状态下稳定性好，能耐氧化；耐挤压；耐高温，能长期耐60°C高温，在120°C温度下能存活20分钟；耐酸碱，在酸性胃环境中能保持活性，可以耐唾液和胆汁的攻击，是饲料微生物中可100%直达大小肠的活菌。
2、枯草芽孢杆菌以孢子状态进入消化道后，迅速由休眠状态复活，在短期内繁殖成高含菌量的优势种群，消耗掉肠道内大量氧气，并能产生过氧化氢、细菌素，建立微生态平衡，促进有益厌氧微生物的繁殖，抑制有害细菌（大肠杆菌、沙门氏杆菌）的生长，从而预防腹泻、下痢等肠胃道疾病。
枯草芽孢杆菌简介及应用
枯草芽孢杆菌简介及应用枯草芽孢杆菌简介枯草芽孢杆菌（Bacillaceae）编号为Strain Number ACCC 11060，是芽孢杆菌属的一种。
单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭，需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚[1]。
早在1835 年，Ehrenberg 所描述的“Vibrio subtilis”即是现在大家熟悉的“枯草芽孢杆菌”，它是由Cohn 于1872 年正式命名的，现作为芽孢杆菌科(Bacillaceae) 的模式菌株，芽孢杆菌是人类发现最早的细菌之一。
枯草芽孢杆菌应用枯草杆菌(B acillus Subtilis) 是一种重要的α-淀粉酶生产菌。
同时枯草芽孢杆菌作为一种安全、高效、多功能和极具开发潜力的微生物菌种已广泛应用于工业、农业、医药、卫生、食品、畜牧业、水产及科研诸领域。
随着经济的发展、科研水平的提高，枯草芽孢杆菌与人们的日常生活将更为密切，它也必将作为一种十分重要的工业微生物菌种越来越引起人们的普遍关注和青睐。
①枯草芽孢杆菌在工业酶生产中的应用工业酶的生产是工业微生物发酵的重要组成部分。
枯草芽孢杆菌是当今工业酶生应用最广泛的菌种之一，据不完全统计，枯草芽孢杆菌所产的酶占整个酶市场的50 %。
由于其产酶量高、种类多、安全性好和环保等优点，在现代工业生产中被广泛用作生产菌种，其发酵生产的酶已在食品、饲料、洗涤、纺织、皮革、造纸和医药等领域均发挥着十分重要的作用。
②枯草芽孢杆菌在生物防治领域中的应用枯草芽孢杆菌作为植物病害生防细菌之一，具有较强的防病作用美国迄今已有4 株枯草芽孢杆菌生防菌株获得环保局商品化或有限商品化生产应用许可，如美国AgraQuest公司用枯草芽孢杆菌QST713 菌株开发出活菌制剂杀菌剂SerenadeTM，并于2000 年通过美国环保局(EPA) 的登记，用于防治多种作物的白粉病、霜露病、疫病、灰霉病等病害。
枯草芽孢杆菌激活方法
枯草芽孢杆菌激活方法1. 简介枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的细菌，广泛存在于土壤和水体中。
它具有许多重要的应用价值，包括农业、食品工业和生物技术等领域。
为了充分发挥其作用，需要对枯草芽孢杆菌进行激活处理。
本文将介绍枯草芽孢杆菌激活的方法及相关注意事项。
2. 枯草芽孢杆菌激活方法2.1 培养基选择选择适合枯草芽孢杆菌生长的培养基非常重要。
常用的培养基包括LB培养基、TSA 培养基等。
这些培养基提供了适当的营养物质，促进细菌生长和繁殖。
2.2 培养条件调节为了达到最佳激活效果，需要调节培养条件。
以下是一些常见的调节方法：•温度：枯草芽孢杆菌在适宜温度下生长较快，通常在30-37摄氏度之间。
•pH值：枯草芽孢杆菌对pH值较为敏感，一般在6.5-7.5之间的中性环境下生长最佳。
•氧气供应：枯草芽孢杆菌是一种需氧生物，需要充足的氧气供应。
可以使用摇床培养或静态培养，并提供充足的通气。
2.3 接种方法接种方法对于枯草芽孢杆菌的激活非常重要。
以下是一些常见的接种方法：•平板接种：将枯草芽孢杆菌悬液均匀涂布在固体培养基表面，利用温度和营养物质促进其生长。
•液体培养接种：将枯草芽孢杆菌悬液加入含有适宜营养物质的液体培养基中，并在适宜条件下进行摇床培养。
2.4 培养时间枯草芽孢杆菌激活所需的培养时间因实验目的而异。
一般来说，可以根据需要选择合适的培养时间。
通常在24-48小时内，可以得到较好的激活效果。
3. 注意事项在进行枯草芽孢杆菌激活实验时，需要注意以下几个方面：•实验操作应符合相关实验室操作规范，确保安全。
•选择合适的培养基和培养条件，以提供适当的生长环境。
•注意消毒操作，避免外源性污染。
•定期观察和检测菌液的生长情况，及时调整培养条件。
•实验结束后，进行废弃物处理和器材清洗消毒。
4. 结论通过选择合适的培养基、调节适宜的培养条件以及采用适当的接种方法，可以有效激活枯草芽孢杆菌。
枯草芽孢杆菌
枯草芽孢杆菌的简介和在各领域的作用一、枯草芽孢杆菌简介枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。
单个细胞0.7~0.8×2~3微米，着色均匀。
无夹馍，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽孢0.6~0.9×1.0~1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色。
枯草芽抱杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。
枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑制其他致病菌生长。
枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用，能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动物体内干扰素和巨噬细胞的活性，在饲料中应用广泛。
它还可以用来改善水质，应用在污水处理和环境保护中。
和其他微生物混合使用，还可以用于生物肥料和土地改良等。
二、枯草芽孢杆菌的应用领域枯草芽孢杆菌是一种很好的菌种，应用领域很广，可以运用在饲料公司。
用作饲料添加剂。
可以用在生物有机肥公司，用作生物肥料的发酵剂，可以应用在养殖场，直接添加给动物吃，可以应用在鱼塘净化水质。
或者一些城市环境监测部门或环保公司，他们勇于污水或污染物的处理。
以及一些糖厂或公司用于治理污染等.三、枯草芽孢杆菌在农业中的作用1、提高作物抗病、抗寒、抗旱能力2、增加土壤养分、改良土壤结构、提高化肥利用率；3、促进土壤中的有机质分解成腐殖质，刺激作物生长。
4、促进作物生长、成熟、降低成本、增加产量、提高收入；5、有一定的固氮、解磷、解钾作用。
四、枯草芽孢杆菌在水产种的作用1、枯草芽孢杆菌有肥水的作用枯草芽孢杆菌制剂种的活菌，可以在水中产生多种分解酶，将有机肥中的大分子分解成为小分子，但这一过程发生在芽孢杆菌激活扩繁殖之后。
枯草芽孢杆菌
枯草芽孢杆菌如何从土壤中分离产生淀粉酶的芽孢杆菌提取土壤，然后稀释后接种，做成单菌落，从每个菌落里的菌拿去分别培养，一段时间后把各菌进行细胞破碎，常温离心后加入常温条件下的淀粉溶液中，保温一段时间，加入碘液检测，工作量有点大。
但是初步的实验路径还是比较对头的枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌2008-01-10 13:42:22| 分类：水产养殖专题| 标签：|字号大中小订阅枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌主要作用原理在于孢子裂殖过程中耗氧，并产生相应的酶，但产酶的能力目前没有明确的描述，但一个明显的效果却发现可以合成色氨酸，并使蛋白质的分解能力得以加强；在黄鸡的试验中发现，鸡粪中氮含量减少了30%，在低能（2850kcal/kg)高蛋白(21%)饲料中反而没有达到以上效果，但减少了下痢和球虫的发病率。
各成分的用途主要为：芽孢杆菌对水产养殖环境的净化作用南京农业大学动物科学学院刘波刘文斌近年来,随着水产养殖业的蓬勃发展,养殖品种的老化和退化,水产动物疾病的频繁发生,养殖水体环境的日益恶化,这三大问题已成为阻碍我国水产养殖业发展的瓶颈。
尤其是以投饵为主的养殖模式,残饵、粪便、死亡生物的残体、养殖池塘底物的沉积物、氮(N)、磷(P)等富营养因子排入水体,养殖水体中的化学需要量(COD)、生物需要量(BOD)严重超标,使水体日益严重恶化,水产动物疾病频繁发生。
据报道,人工投饵输入虾池的氮占总输入的氮的90%左右,其中仅有19%转化为虾体内的氮,其余的62%~68%的氮积累于虾池底部淤泥中,此外有8%~12%以悬浮颗粒氮溶解有机氮、溶解无机氮等形式存于池水中,这造成池塘水质的严重恶化。
改善水生养殖环境,实行生物修复势在必行。
而芽孢杆菌作为一种简易的细菌(真细菌),是土壤中的优势种群,能强烈地分解碳系、氮系、磷系、硫系污染物,分解蛋白质和复杂多糖,对水溶性有机物分解也有重要的作用,同时可以与养殖环境中的有害藻类及水产致病菌竞争,形成优势种群,抑制有害藻类及水产致病菌。
枯草芽孢杆菌菌株形态
枯草芽孢杆菌菌株形态
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的芽孢杆菌菌株，属于革兰氏阳性菌。
它的形态特征包括细胞形态、培养基特征和芽孢形态。
从细胞形态来看，枯草芽孢杆菌的细胞形态呈杆状，通常为0.5-4.0微米宽，2-5微米长。
细胞通常单个或成对排列，也可呈链状排列。
细胞表面光滑，呈灰白色，有时会呈淡黄色。
细胞壁结构完整，对环境的适应能力强，能够在各种温度和pH条件下生长。
从培养基特征来看，枯草芽孢杆菌在一般培养基上能够生长繁殖。
在营养丰富的富尔顿培养基上，枯草芽孢杆菌菌落呈乳白色，呈圆形或不规则形状。
在营养缺乏的琼脂培养基上，菌落呈黄色或棕色。
枯草芽孢杆菌具有很强的生长能力和忍受力，能够在温度范围为10-55摄氏度生长，pH范围为5-9。
从芽孢形态来看，枯草芽孢杆菌能够形成椭圆形的孢子。
芽孢通常位于菌丝的末端或侧面，形成菌丝状或链状结构。
芽孢具有耐热、耐干燥和耐化学物质的特性，能够在恶劣环境下存活并传播。
芽孢形成是枯草芽孢杆菌的重要特征之一，也是其在工业生产中被广泛应用的原因之一。
总结起来，枯草芽孢杆菌菌株的形态特征包括细胞形态、培养基特征和芽孢形态。
它的细胞呈杆状，表面光滑，菌落呈乳白色或黄棕
色。
枯草芽孢杆菌具有很强的生长能力和适应能力，能够在各种温度和pH条件下生长。
芽孢形成是其重要特征之一，使其具有在恶劣环境下存活和传播的能力。
枯草芽孢杆菌在农业、工业和医药等领域有着广泛的应用前景。
枯草芽孢杆菌功能简介
枯草芽孢杆菌功能简介
1.【适用范围】生物肥料、生物农药、饲料添加剂、水产养殖的应用。
2.【产品特点】
2.1活化土壤、增加肥效。
枯草芽孢杆菌能加速土壤中有机物质分解，活化土壤营养成分，释放土壤难溶性的磷和钾，有效提高耕地肥力、改善土壤供肥环境。
枯草芽孢杆菌在土壤中快速的生长代谢过程中产生了一系列的代谢产物是土壤团粒结构的粘合剂，增强土壤团粒结构，提高保水保肥能力，提高化肥利用率。
增加土壤有机质，协助释放土壤中的潜在养分。
2.2抑制土传病害。
枯草芽孢杆菌作为一种植物根际、体表和体内的有益微生物，可改善作物周围的生态环境，明显地降低土传病害的侵染，降低重茬作物的病情指数，连年施用可大大缓解连作障碍。
2.3提高作物抗病、抗旱、抗寒能力。
2.4降低有害积累、提高农产品品质。
枯草芽孢杆菌可减少农产品中硝酸盐的积累。
产品口味好、保鲜时间长、耐储存和运输。
3【主要成分】枯草芽孢杆菌活芽孢、发酵代谢产物、固态发酵基质。
枯草芽孢杆菌
枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌来源：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）：是被研究最多的⼟壤基益⽣菌。
⼜称⼲草芽孢杆菌（hay bacillus）或草芽孢杆菌（grass bacillus），是⼀种⾰兰⽒阳性、过氧化氢酶阳性的细菌，存在于⼟壤、反刍动物和⼈类的胃肠道中。
枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的⼀个成员，呈杆状，能形成坚韧的保护性内⽣孢⼦，使其能够耐受极端的环境条件。
它历来被归类为专性需氧菌，尽管有证据表明它是兼性厌氧菌。
它通过增加IgA和丁酸盐⽀持肠道修复,并能产⽣超过12种抗⽣素，特别是肠粘膜上⽪细胞⽣长和修复所需要的的维⽣素K。
对炎症和⾃⾝免疫有积极影响。
在抗⽣素作为免疫刺激剂⽤于治疗胃肠道和泌尿道疾病之前，枯草杆菌的培养在世界范围内很流⾏。
在整个20世纪50年代，它被⽤作⼀种替代药物，在消化后被发现能显著刺激⼴谱免疫活性，包括激活特异性抗体IgM的分泌，IgG和IgA和CpG⼆核苷酸的释放，诱导⽩细胞和细胞因⼦产⽣INF A/Y活性，对肿瘤细胞的细胞毒性发展很重要。
1946年起，它作为免疫刺激剂在治疗肠道和泌尿道疾病，如轮状病毒和志贺⽒菌病。
⾃20世纪60年代以来，枯草杆菌⼀直是航天实验中的试验物种。
它的内⽣孢⼦如果被保护它免受太阳紫外线伤害的尘埃粒⼦包裹，在太空中可以存活6年。
它被⽤作外层空间极端微⽣物⽣存的指⽰器，如外⽣物辐射组件，外堆栈，和暴露轨道任务。
枯草芽孢杆菌野⽣型⾃然分离株与经过驯化诱变和筛选的实验室菌株相⽐，难以进⾏⼯作。
这些菌株通常具有更好的转化（吸收和整合环境DNA）、⽣长和丧失“野外”所需能⼒的能⼒。
⽽且，尽管存在⼏⼗种不同的菌株符合这⼀描述，但被命名为“168”的菌株是最⼴泛使⽤的。
菌株168是枯草芽孢杆菌Marburg菌株经X射线诱变后分离得到的⾊氨酸营养缺陷型菌株，因其转化效率⾼⽽被⼴泛应⽤于研究。
分⼦⽣物学实验室培养⽫中枯草芽孢杆菌的菌落B、 globigii是⼀种亲缘关系密切但系统发育不同的物种，现称为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）在SHAD项⽬（⼜名112项⽬）期间被⽤作⽣物战模拟物。
枯草芽孢杆菌的生物学特性和应用领域
枯草芽孢杆菌的生物学特性和应用领域枯草芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）是一种广泛存在于自然界中的孢子形细菌。
它具有独特的生物学特性和广泛的应用领域，被广泛研究和利用。
首先，枯草芽孢杆菌的生物学特性主要包括以下几个方面：1. 菌株多样性：枯草芽孢杆菌在自然界中存在着大量的不同菌株，这些菌株之间在基因组结构和特性上存在较大差异，导致其对不同害虫的毒力和范围也有所差异。
2. 毒力蛋白：枯草芽孢杆菌主要通过产生范围广泛的毒力蛋白来发挥对害虫的杀伤作用。
这些毒力蛋白主要存在于孢子晶体中，通过进食孢子晶体或溶解的毒素来引起害虫死亡。
不同菌株所产生的毒力蛋白具有不同的作用对象和毒力，可以对抗多种害虫。
3. 遗传基因：枯草芽孢杆菌的基因组中含有多个决定其毒力的基因，这些基因编码了毒力蛋白的合成和调控。
通过基因工程技术可以将不同菌株的毒力基因进行组合，进一步提高对害虫的杀伤作用。
4. 环境适应性：枯草芽孢杆菌在自然界中广泛分布，可以在不同的环境条件下生存和繁殖。
它对温度、湿度和营养物质的要求相对较低，适应性强，可以在不同的环境中迅速增殖。
接下来，让我们来了解一下枯草芽孢杆菌的应用领域：1.农业害虫防治：枯草芽孢杆菌被广泛应用于农业害虫防治领域。
通过开发和利用不同菌株的毒力蛋白，可以针对不同的害虫进行有效控制，减少对化学农药的依赖，降低农业生产成本，提高农产品质量和安全性。
2.环境保护：枯草芽孢杆菌作为一种环境友好型生物农药，不会对环境和非靶标生物造成长期的污染和危害。
因此，在生物农药的替代品开发中，枯草芽孢杆菌被广泛应用于病虫害的防治，保护生态系统的平衡和生物多样性。
3.抗虫转基因作物：枯草芽孢杆菌的毒力基因也被广泛应用于转基因作物的研发和生产中。
将其毒力基因导入经过基因工程改良的作物中，可以使作物获得对特定害虫的抗性，减少对农药的使用，提高作物的产量和质量。
4.医学应用：除了农业领域，枯草芽孢杆菌在医学领域也有一定的应用。
枯草芽孢杆菌的生命周期及应用研究
枯草芽孢杆菌的生命周期及应用研究枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛存在于自然环境中的细菌，常被用于许多领域的研究和应用。
本文将介绍枯草芽孢杆菌的生命周期以及它在农业、食品加工、环境修复和生物制品生产中的应用研究。
生命周期：枯草芽孢杆菌是一种革兰氏阳性细菌，可以以两种形式存在：孢子形式和活菌形式。
在适宜的环境条件下，枯草芽孢杆菌能够形成孢子，以适应极端条件下的存活。
孢子具有较强的抵抗力，可以在干燥、高温、低温等恶劣条件下存活多年。
当环境条件改善时，孢子可以萌发成为活菌。
枯草芽孢杆菌的生命周期通常包括以下几个阶段：孢子萌发、细胞生长、细菌分裂和孢子形成。
孢子在适宜的环境条件下，吸收水分后开始萌发，萌发过程中细胞会经历生长和分裂，形成成熟的活菌。
活菌会继续增殖，增加菌群数量。
当环境条件恶化时，活菌会开始分化并形成孢子，孢子会通过自由分生或悬浮在空气中传播。
应用研究：1. 农业应用：枯草芽孢杆菌在农业领域有广泛应用。
它可以作为一种生物农药，有效防治作物病害。
研究表明，枯草芽孢杆菌能够产生抗生素、挥发性物质和酶，对多种植物病原菌具有抑制作用。
此外，枯草芽孢杆菌还可以促进作物生长、提高植物的抗病性和逆境适应能力。
2. 食品加工：枯草芽孢杆菌在食品加工领域具有重要意义。
它可以产生多种酶，如蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶，用于加工食品和饲料。
枯草芽孢杆菌的酶可以帮助分解食物中的复杂分子，提高食品品质和食品消化吸收率。
此外，枯草芽孢杆菌也可以作为食品添加剂，用于生产乳制品、发酵食品和调味品等。
3. 环境修复：枯草芽孢杆菌在环境修复方面具有重要潜力。
它可以分解和降解多种有机物和污染物，如石油烃、重金属和农药残留等。
研究表明，枯草芽孢杆菌能够在土壤和水体中修复污染物，对环境污染的治理具有潜在的应用价值。
4. 生物制品生产：枯草芽孢杆菌在生物制品生产领域广泛应用。
它可以产生多种生物活性物质，如抗生素、酶和激素等。
枯草芽孢杆菌
枯草芽孢杆菌简介枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的芽孢杆菌，是革兰氏阳性细菌，广泛存在于自然环境中，尤其是土壤中。
它具有较强的耐受性和适应能力，能够在各种恶劣的环境条件下存活并繁殖。
枯草芽孢杆菌在工业生产中被广泛应用，例如食品工业、制药工业和生物农药生产等。
特征枯草芽孢杆菌是一种革兰氏阳性细菌，细胞形态为短杆状，大小约为0.5-1.0微米宽，2-3微米长。
它具有产孢能力，在适宜的环境条件下能够形成内生芽孢。
芽孢对于外界的环境压力具有很强的抵抗能力，可以存活数十年。
此外，枯草芽孢杆菌还具有摄取多种有机物的能力，可以利用一些废弃物和残渣进行代谢生长。
应用食品工业枯草芽孢杆菌是一种被广泛应用于食品工业的菌种。
它可以用于制作酸奶、乳酸菌饮品等发酵食品。
枯草芽孢杆菌能够在发酵中产生酸，调节食品的酸碱度，同时还能产生一些有益的代谢产物，提高食品的品质和口感。
制药工业枯草芽孢杆菌在制药工业中有着重要的应用。
作为一种优质的表达宿主，它可以被用于生产多种药物和蛋白质。
枯草芽孢杆菌拥有较高的生物合成能力和分泌能力，可以在其细胞外表达大量的目标蛋白，从而满足制药工业对于大规模生产的需求。
生物农药生产枯草芽孢杆菌的显著优点是能够产生一系列的抗菌代谢产物，可以用作生物农药来防治一些农作物病害。
这些抗菌代谢产物可以抑制多种植物病原菌的生长繁殖，起到保护作物的作用。
此外，枯草芽孢杆菌还可以与一些其他微生物联合应用，形成生物复合制剂，提高农作物抗病能力。
研究进展近年来，针对枯草芽孢杆菌的研究不断深入。
研究人员通过基因工程方法，对枯草芽孢杆菌进行了基因组测序和功能分析。
这些研究为我们理解枯草芽孢杆菌的生理特性和代谢途径提供了重要的信息。
此外，还有研究人员致力于改造枯草芽孢杆菌，使其能够更好地发挥在不同领域中的应用潜力。
结论枯草芽孢杆菌是一种常见而重要的细菌，具有广泛的应用前景和研究价值。
通过深入研究其生理特性和代谢途径，我们可以更好地理解枯草芽孢杆菌的应用机制，并进一步开发其在食品工业、制药工业和生物农药生产等领域的应用。
《枯草芽孢杆菌》课件
未来发展方向与挑战
未来研究需要深入挖掘枯草芽孢杆菌 的生物活性物质及其作用机制，为其 在医药、农业和环保等领域的应用提 供理论支持。
枯草芽孢杆菌在食品和饲料添加剂领 域的应用前景广阔，但需要加强对其 安全性评价和质量控制的研究。
针对枯草芽孢杆菌的发酵工艺和大规 模生产技术需要进行优化，以提高其 产量和生物活性物质的稳定性。
总结词
枯草芽孢杆菌的培养方法与条 件对其生长和代谢具有重要影
响。
温度
枯草芽孢杆菌的最适生长温度为 30-37℃，过高或过低的温度均 会影响其生长。
湿度
保持培养环境的相对湿度在适 宜范围内，以防止培养基干燥 或过度湿润。
氧气
根据需要选择有氧或厌氧培养 ，枯草芽孢杆菌既能在有氧环 境下生长，也能在厌氧条件下
06 枯草芽孢杆菌的研究进展 与展望
研究现状与趋势
枯草芽孢杆菌是土壤和植物微生态中的重要成员，具有多种生物活性，如抗菌、抗 肿瘤、免疫调节等。
目前，枯草芽孢杆菌的研究主要集中在基因组学、蛋白质组学和代谢组学等方面， 旨在揭示其生物活性机制和潜在应用价值。
随着测序技术和生物信息学的不断发展，枯草芽孢杆菌的全基因组测序已经完成， 为其功能基因组学研究奠定了基础。
培养基的选择与制备
01
02
03
总结词
培养基是枯草芽孢杆菌生 长的必要条件，选择合适 的培养基对于其分离和培 养至关重要。
成分
培养基通常包含碳源、氮 源、无机盐、维生素等， 根据枯草芽孢杆菌的生长 需求进行选择和配比。
制备方法
按照配方比例称取各成分， 溶解、调节pH值后进行灭 菌处理，备用。
培养方法与条件控制
应用
枯草芽孢杆菌在农业、工业和医学等 领域有广泛应用，如生物肥料、生物 防治、生物降解等。
枯草芽孢杆菌使用说明
枯草芽孢杆菌(活菌数200亿/400亿)一、枯草杆菌概述：枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种。
单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。
在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
二、枯草芽孢杆菌的作用机理：枯草芽孢杆菌大量应用于生物肥料。
当作用于作物或土壤时．能够在作物根际或体内定殖，并起到特定肥料效应。
目前，微生物肥料在培肥地力，提高化肥利用率，抑制农作物对硝态氮、重金属、农药的吸收，净化和修复土壤，降低农作物病害发生，促进农作物秸秆和城市垃圾的腐熟利用．保护环境。
以及提高农作物产品品质和食品安全等方面表现出了不可替代的作用。
三、枯草芽孢杆菌的使用说明：特点：1.肠道定殖能力强。
2.耐氧化、耐高温、耐酸碱、耐挤压和耐温度变化，满足不同的肥料生产需求。
3.绿色、安全、高效、较少抗生素药物的使用。
成分含量：枯草芽胞杆菌有效活菌数大于200亿/克用法用量：贮藏：阴凉、干燥处密封保存。
保质期：密封保存不少于18个月。
四、枯草芽孢杆菌的应用范围：枯草芽孢杆菌不仅在肥料中应用比较广泛，在污水处理及生物肥发酵或发酵床制作中应用也相当广泛，是一种多功能的微生物。
1、市政和工业污水处理，工业循环水处理，腐化槽、化粪池等处理，畜牧养殖动物废料、臭味处理，粪便处理系统，垃圾、粪坑、粪池等处理；2、畜牧、家禽、特种动物及宠物养殖，水产养殖；3、可以与多种菌种混配，在农业生产中具有重要作用。
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。
枯草芽孢杆菌
培养特性
在营养琼脂培养基上，37℃培养24h ，可形成圆形、隆起、表面光滑、湿 润、边缘整齐的菌落，菌落呈灰白色 或略带黄色。
生态环境与分布
生态环境
枯草芽孢杆菌广泛存在于土壤、空气 、尘埃以及人和动物的肠道中。
分布
作为一种常见的环境微生物，枯草芽 孢杆菌在全球范围内的各种生态环境 中都有分布，包括土壤、水体、空气 以及动植物体表和体内。
枯草芽孢杆菌
汇报人：XX
目录
• 枯草芽孢杆菌基本概念 • 枯草芽孢杆菌生理功能 • 枯草芽孢杆菌应用领域 • 枯草芽孢杆菌培养技术 • 枯草芽孢杆菌安全性评价 • 枯草芽孢杆菌市场前景展望
01
枯草芽孢杆菌基本概念
定义与分类
定义
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）是一种革兰氏阳性、好氧或兼 性厌氧的杆状细菌，属于芽孢杆 菌属。
终止发酵。
05
枯草芽孢杆菌安全性评价
毒性试验
1 2
急性毒性试验
通过对实验动物进行单次或短时间内的高剂量暴 露，观察枯草芽孢杆菌对实验动物的急性毒性作 用。
亚急性毒性试验
在实验动物上进行较长时间的连续或反复暴露， 以评估枯草芽孢杆菌对机体的亚急性毒性作用。
3
慢性毒性试验
通过长期低剂量暴露，观察枯草芽孢杆菌对实验 动物的慢性毒性作用，包括致癌性、生殖毒性等 。
医药领域应用拓展
枯草芽孢杆菌在医药领域具有潜在应用价值，如生产抗生 素、酶制剂等，随着医药技术的不断发展，其市场需求将 进一步扩大。
工业领域应用前景广阔
枯草芽孢杆菌在工业领域可用于生产多种酶类、有机酸等 化工产品，随着工业生物技术的不断发展，其市场需求将 进一步增加。
枯草芽孢杆菌的形态特征
枯草芽孢杆菌的形态特征1. 枯草芽孢杆菌的基本介绍枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的好氧、革兰阳性的杆菌，属于芽孢杆菌属。
它广泛存在于土壤、水体等自然环境中，也被广泛应用于工业和生物技术领域。
枯草芽孢杆菌的形态特征是其区分于其他细菌的显著特征之一。
2. 枯草芽孢杆菌的形态特征枯草芽孢杆菌是一种杆状细菌，通常长度在2-4微米，宽度在0.5-1微米。
其细胞形态通常呈直线状，呈一定的弯曲或弧形。
菌体在静态条件下通常呈直珠链状排列，而在搅拌条件下则自由移动且呈碎片状。
在显微镜下观察，枯草芽孢杆菌的细胞壁呈现出一定的痕迹，通常为明显的横向划痕。
这些划痕是由于细胞壁的结构不同造成的，与其他杆菌的细胞壁结构呈现明显的差异。
枯草芽孢杆菌的芽孢形态也是其显著的特征之一。
芽孢是一种能够在适宜条件下形成的菌体结构，通常可以在微观镜下观察到。
枯草芽孢杆菌芽孢形态呈椭圆形或长圆柱形，平均直径在0.6-1微米之间。
芽孢具有很强的耐热性和耐干燥性，可以在恶劣的环境下存活数十年，并且可以在合适的条件下迅速转化为生活菌。
3. 枯草芽孢杆菌的应用价值枯草芽孢杆菌在工业和生物技术领域被广泛应用。
它可以用来生产许多有用的化学物质，例如消化酶、抗生素、维生素等。
枯草芽孢杆菌还可以用于生产饲料添加剂、保健品、医药等产品，具有很高的营养价值和生物活性。
此外，枯草芽孢杆菌具有很强的生态环境适应性，在土壤、水体等自然环境中的广泛存在，也成为了生态保护和生物修复领域的重要研究对象。
枯草芽孢杆菌在生物农业、生物肥料、生态环境修复等领域具有广阔的应用前景。
4. 总结综上所述，枯草芽孢杆菌是一种常见的革兰阳性杆菌，其独特的芽孢特征和细胞壁结构是区分于其他细菌的显著特征之一。
此外，枯草芽孢杆菌在工业和生物技术、生态环境修复等领域具有广泛应用价值，成为了研究广泛的微生物生物学对象。
枯草芽孢杆菌
表面色暗，有皱褶状，不透明
(
革 兰 染 色
枯 草 芽 孢 杆
枯 草
)
菌 在
芽
纯 培
孢
养 的 镜
杆
下 形
菌
态
菌落圆形或不规则形 菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色， • 在枯草液芽体孢培杆养菌菌基落中生长时，常形成皱醭
*放入100ml三角瓶中，加入30ml水，常压加热至 水沸腾后维持20min，取出，置28-37摄氏度培养 24-48h，液面则产生黄白色皮膜。 用接种环取皮膜适量于无菌水中分散，稀释涂布于 蔗糖豆芽汁琼脂平皿，置28-37摄氏度培养24-48h， 挑取典型菌落。
枯草芽孢杆菌作用机理
枯草芽孢杆菌作用机理：
制造纳豆（大豆制品之一 种）
*还是重要的工业生产菌种和遗 传工程中的受体菌。
生物学特性
1，好氧性，厌氧不生长，代谢中产生多种 消化酶
2，菌体 具有运动性，最适宜生长温度37度
3，在PH值5——7 环境生长良好
4，革兰氏反应阳性
如何从土壤中分离枯草芽孢杆菌？
*取土样时最好选取如花坛等地方的土样，去掉表 层5~10cm的土壤后取样。
首次使用（200-300）克/亩，水质差时 可使用400克/亩；连续使用100克/亩，新换 水可酌情减少用量；（7-10）天使用一次， 持续使用
无增氧设备的用户使用时，要严格控制使用 量，切不可多用。
不能和抗生素、杀虫剂、化学药品同时使用， 最好是间隔3天以后再用。已发病鱼塘在治 疗停药（4-7）天以后，再重新投放一次初 始剂量菌剂，以确保枯草芽孢杆菌在水中的 绝对优势。
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目录第一章芽孢杆菌的简要介绍 (1)第一节芽孢杆菌种类 (1)第二节芽孢杆菌表达系统发展简史 (2)第二章枯草芽孢杆菌的转化系统 (3)第一种方法：电转化 (3)第二种方法：Spizizen转化 (3)第三种方法：原生质体法(Takashi) (4)第四种方法：原生质体转化之二 (4)第五种转化方法：质粒混合法（BGSC推荐） (5)第三章芽孢杆菌表达系统发展简史 (6)第一节芽孢杆菌表达系统的优点（相对于大肠杆菌） (7)第二节芽孢杆菌的缺点 (7)第三节助表达系统 (7)第四节芽孢杆菌基因表达的主要特点 (7)第四章枯草芽孢杆菌转录翻译系统 (8)第一节：转录系统 (9)第二节：翻译系统 (9)第五章芽孢杆菌常用的宿主和载体 (10)第六章芽孢杆菌表达系统应用实例 (11)1 中国 (11)2 日本 (12)3 加拿大 (12)第七章芽孢杆菌其他产品 (13)第一节核苷类产品 (13)第二节核黄素 (13)第三节微生物制剂/益生菌 (13)第八章结语 (14)附录一. 芽孢杆菌的相关经典文章 (14)附录二. 枯草芽孢杆菌相关数据库 (15)致谢及参考文献 (15)第一章芽孢杆菌的简要介绍芽孢杆菌作为一个属，于1872年被首次提出，至今已有一百多年。
目前人们对芽孢杆菌的研究几乎涉及到了革兰氏阳性可生孢细菌的各个领域。
尤其是在感受态、芽孢形成及其调控、遗传操作、菌种改良、生物技术等领域进行了大量的工作。
芽孢杆菌是一个泛泛的概念，而科学研究中应用最多的当属枯草芽孢杆菌，例如168菌株及其大量的衍生菌株。
枯草杆菌的研究之所以领先于其他芽孢杆菌的种，主要是由于他的转化、转导方法较完善，以及大量的衍生菌株。
目前应用最多的芽孢杆菌属菌种有枯草芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和耐碱的芽孢杆菌以及病原菌炭疽芽孢杆菌等12种。
第一节芽孢杆菌种类目前，芽孢杆菌属很多菌株的全基因组序列已经报道，截至2011年10月，在KEGG 上公布全基因组序列的芽孢杆菌属菌种有：简称菌种名称测序时间测序链接bsu Bacillus subtilis1997RefSeqbss Bacillus subtilis subsp. spizizenii W232010RefSeqbst Bacillus subtilis subsp. spizizenii TU-B-102011 RefSeqbsn Bacillus subtilis BSn52011RefSeqbha Bacillus halodurans2000RefSeqban Bacillus anthracis Ames2003RefSeqbar Bacillus anthracis Ames 05812004RefSeqbat Bacillus anthracis Sterne2004 RefSeqbah Bacillus anthracis CDC 6842009 RefSeqbai Bacillus anthracis A02482009 RefSeqbal Bacillus cereus biovar anthracis CI2010RefSeqbce Bacillus cereus ATCC 145792003RefSeqbca Bacillus cereus ATCC 109872004RefSeqbcz Bacillus cereus ZK2004RefSeqbcr Bacillus cereus AH1872008 RefSeqbcb Bacillus cereus B42642008 RefSeqbcu Bacillus cereus AH8202009 RefSeqbcg Bacillus cereus G9******* RefSeqbcq Bacillus cereus Q12009RefSeqbcx Bacillus cereus 03BB1022009 RefSeqbcy Bacillus cytotoxis NVH 391-982007RefSeqbtk Bacillus thuringiensis 97-272004RefSeqbtl Bacillus thuringiensis Al Hakam2006RefSeqbtb Bacillus thuringiensis BMB1712010RefSeqbwe Bacillus weihenstephanensis2008 RefSeqbli Bacillus licheniformis ATCC 145802004RefSeqbld Bacillus licheniformis DSM132004RefSeqbay Bacillus amyloliquefaciens FZB422007RefSeqbao Bacillus amyloliquefaciens DSM 72010RefSeqbae Bacillus atrophaeus2010 RefSeqbcl Bacillus clausii2005 RefSeqbpu Bacillus pumilus2007RefSeqbpf Bacillus pseudofirmus2010 RefSeqbmq Bacillus megaterium QM B15512010 RefSeqbmd Bacillus megaterium DSM 3192010 RefSeqbse Bacillus selenitireducens2010 RefSeqbco Bacillus cellulosilyticus2011 RefSeqbck Bacillus coagulans2011 RefSeqbag Bacillus coagulans 36D12011 RefSeq第二节芽孢杆菌表达系统发展简史芽孢杆菌表达系统是在70年代从枯草芽孢杆菌，又称枯草杆菌（Bacillus subtilis）开始，逐步扩展至其它种的。
枯草杆菌能发展成为芽孢杆菌中的第一个基因工程表达系统是与其早期的遗传学工作密切相关的。
Spizizen于1958年发现枯草杆菌168菌株为可转化菌株以来，枯草杆菌的遗传学工作不断深入和发展。
美国俄亥俄州立大学Bacillus遗传保藏中心（BGSC，/）至1999年保藏的168菌株的遗传突变株就有890个。
它牵涉到了诸多营养要求、各种酶、芽孢形成和发芽、感受态、Sigma因子、DNA重组与修复以及正负调控等各方面基因的突变体。
70年代发明了DNA重组技术以后，特别是发现金黄色葡萄球菌的带有抗性标志的质粒可作为枯草杆菌的载体以后，克服了枯草杆菌只有隐秘性质粒的困难，枯草杆菌基因工程的工作更是加速发展。
迄今，已经在枯草杆菌及其近缘种中克隆和表达了大量的原核和真核基因，其中有的已应用于工业化生产，取得了不少成绩。
将携有外源基因载体导入宿主细菌中是细菌基因工程表达系统的必要条件。
大肠杆菌（G-）的氯化钙转化法对枯草杆菌无效，所以枯草杆菌基因工程表达系统中的宿主菌株用的最广泛的就是在DNA重组技术发明之前就可以进行感受态转化（Spizizen 1958）的168菌株及其突变体。
Spizizen感受态转化的基本原理：是细胞在Spizizen最低盐培养基中形成一段饥饿、易于摄取外源DNA片段的时期。
一般步骤是先将其在较为丰富的培养基中培养，然后转接到贫瘠的培养基中，使其形成感受态（一般非常短暂）。
有关感受态时期参与摄取外源DNA的几种蛋白及其摄取机制已有初步的研究。
第二章枯草芽孢杆菌的转化系统第一种方法：电转化实验试剂：GM:LB+0.5M 山梨醇ETM:0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%甘油RM：LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇电转仪：eppendorf方法（本人亲自验证，使用的菌株为WB600）：1）新鲜平板挑单菌落（小一点为好）接种于5ml LB培养基中，过夜培养.。
2）测量摇管内OD，控制好接种量，使接种完毕后培养基的OD在0.19-0.2之间。
培养基为50ml GM。
37℃，200rpm培养至OD600=1.0（大约3-4小时）左右。
3）取全部菌液冰水浴10 min，然后5000rpm，8min，4℃离心收集菌体。
4）用40ml预冷的电转缓冲液ETM洗涤菌体，5000rpm，8min，4℃离心去上清，如此漂洗3次。
5）将洗涤后的菌体重悬于等500μl的ETM中，每管分装60μl.6）将60μl感受态细胞中加入1-6 μl质粒，冰浴孵育5min，加入预冷的电转杯（1mm）中，电击一次。
电转仪设置：2.0kv（另外我还尝试过0.8kv，1.2kv），25μF200Ω，1mm，电击1次. （持续时间4.5ms-5ms之间）7）电击完毕立即加入1ml 复苏培养基RM，37℃，200rpm，复苏3h后，涂板。
37℃，过夜培养第二种方法：Spizizen转化取新鲜活化菌种一环接入装有5mLGM1培养基的试管中，37℃、200rpm培养过夜，取500μL菌液转接入相同的GM1培养基中，37℃、200rpm培养4-5小时使菌体生长达到对数期末期，然后取0.75mL GM1菌液接入装有5mLGM2培养基的试管中，37℃、200rpm培养1.5小时，制得感受态细胞，将待转化质粒DNA与1mL感受态细胞混匀后在37℃静置1小时，然后37℃，200rpm震荡培养1-1.5小时，取适量菌悬液涂布选择培养基，37℃培养24-48h后，挑选转化子。
10×Spizizen基本盐培养基(g/L)：(NH4)2SO4 2，K2HPO4 8.3，KH2PO4 6，柠檬酸钠1.2，无离子水配制。
0.1Mpa压力下灭菌20min。
Spizizen基本培养基：10×Spizzen基本盐培养基100ml/L，50%(w/v)葡萄糖10ml/L，色氨酸母液（5mg/ml）10ml/L，琼脂1.5%（w/v）。
0.06Mpa压力下灭菌20min。
GM1培养基和GM2培养基：母液0.1Mpa压力下灭菌20min后按下表混合。
母液GM1培养基GM2培养基40%葡萄糖100μL 100μL20mg/mL酸水解酪素100μL 50μL50mg/mL酵母抽提物100μL 0μL20%(w/w)MgSO4.7H2O 5μL 40μL10×Spizzen基本培养基500μL 500μLH2O 3195μL3310μL总体积5000μL 5000μL第三种方法：原生质体法(Takashi)1、活化：从活化24小时新鲜的CM平板上挑取单个菌落，接种于30ml CM液体培养基中，37℃过夜培养。