DPPH抗氧化能力测定
采用DPPH法测定26种植物的抗氧化活性
148 2010 Vo1l 36 No1 3 ( To ta l 267)
分析与检测
11212 DPPH 法测定抗氧化活性 DPPH 溶液的配制: 准确称取 11972 m g DPPH,
用甲醇溶解并定容于 10 mL 容量瓶中, DPPH 浓度为 015 mm oL /mL, 避光保存 ( 0- 4 e )。 11213 提取物清除 DPPH 活性的测定
2 结果与讨论
211 植物抗氧化活性的初筛 对地瑜、五味子、百合、甘草、钩藤、赤勺、菟丝子、
鸡血藤、白芍、巴戟天、丹参、川芎、桑葚、虎杖、草 豆 蔻、麦冬、石斛、知母、玉竹、锁阳、山茱萸、女贞子、何 首乌、仙茅、黄精、决明子 26种植物进行初筛, 测定其 抗氧化活性, 并将水提物和醇提物抗氧化活性进行比 较, 结果见表 1。
表 1 26种植物的抗氧化活性
植物 水提物平均 醇提物平均 植物 水提物平均 醇提物平均
名称 抑制率 /% 抑制率 /% 名称 抑制率 /% 抑制率 /%
地瑜
511 96
94128 草豆蔻 431 17
951 36
五味子 501 85
82128 麦冬
371 53
161 91
百合 甘草
441 21 511 70
95156 94142 93102 91105 75151 33125
植物
甘草 何首乌 仙茅 山茱萸 女贞子 草豆蔻
醇提物平均抑 制率 /% 821 12 321 74 731 98 711 83 341 39 111 68
从表 2 可以看出, 当提取物浓度为 1 m g /mL 时
地瑜、鸡血藤、虎杖、赤芍 4种植物的醇提物对 DPPH 的抑制率达 90% 以上, 具有较高的抗氧化活性, 而其
DPPH抗氧化能力测定
DPPH.法测定绿原酸清除自由基能力2.1 待测液的制备将绿原酸(纯度56%)、维生素C 和没食子酸分别配制成体积分数为0.1mg/mL 的无水乙醇溶液。
2.1.1 绿原酸母液的配制 称取 9.0 mg 绿原酸，定容到50ml ，即可得到绿原酸的母液0.1mg/mL 。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。
2.1.2 Vc 母液的配制 称取 mg VC ，定容到100ml ，即可得到VC 的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。
2.1.3 没食子酸母液的配制 称取 mg 没食子酸，定容到100ml ，即可得到没食子酸的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。
2.1.4 DPPH 母液的配制 称取 mg DPPH ，用无水乙醇定容到100ml ，即可得到DPPH 的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成至一定浓度的溶液。
C DPPH = mg/ml 。
（建议用0.025mg/mL ）2.2 DPPH.溶液的可见光谱以无水乙醇为对照，在分光光度计上对DPPH.溶液进行在440～600nm 下扫描。
A max = nm2.3 抗氧化活性测定DPPH.是一种稳定的自由基，它的乙醇溶液呈紫色，在可见光区最大吸收峰为 nm 。
当DPPH.溶液中加入自由基清除剂时，溶液颜色变浅，517nm 处的吸光度变小，而吸光度变小的程度与自由基被清除的程度呈线性关系。
因此，可用来检测自由基的清除情况，从而评价某物质的抗氧化能力，其能力用清除率(Scavenging Rate,SR)来表示，清除率越大，抗氧化能力越强[4.5]。
抗氧化活性测定方法
抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定方法在食品、药物、化妆品以及生物学研究中具有重要的应用价值。
抗氧化活性是指物质对自由基的清除能力，其测定方法可以评估物质的抗氧化性能和保护细胞免受氧化损伤的能力。
本文将介绍一些常用的抗氧化活性测定方法。
一、DPPH自由基清除法DPPH自由基清除法是目前应用最广泛的抗氧化活性测定方法之一、该方法基于DPPH自由基的紫色溶液，在受到氧化损伤时会褪色。
通过测定样品对DPPH自由基的清除能力，可以评估其抗氧化活性。
实验步骤：1.准备0.1mM的DPPH溶液。
2.取一定量的样品，加入适量的溶剂溶解。
3.取不同浓度的样品溶液，加入相同量的DPPH溶液。
4.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出样品的抗氧化活性。
二、还原能力测定法还原能力测定法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
该方法基于物质对氧化剂的还原能力，通过测定还原剂浓度与吸光度之间的关系，评估样品的抗氧化活性。
实验步骤：1.准备一系列不同浓度的还原剂溶液。
2.取一定量的还原剂溶液，加入适量的氧化剂溶液。
3.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出还原剂的浓度与吸光度之间的关系。
4.根据吸光度与还原剂浓度的关系，评估样品的抗氧化活性。
三、总抗氧化能力测定法总抗氧化能力测定法是一种综合评估样品抗氧化活性的方法。
该方法基于样品的抗氧化剂含量和抗氧化活性，通过测定样品对氧自由基的清除能力，评估其总抗氧化能力。
实验步骤：1.准备一定浓度的氧自由基溶液。
2.取一定量的样品，加入适量的溶剂溶解。
3.取不同浓度的样品溶液，加入相同量的氧自由基溶液。
4.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出样品的抗氧化活性。
以上是常用的抗氧化活性测定方法，还有其他一些方法如ORAC法、TEAC法等也被广泛应用。
不同的方法适用于不同的样品和测定目的，选择适合的方法进行测定可以更准确地评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性实验方法
抗氧化活性实验方法（体外实验）之巴公井开创作1、清除DPPH自由基能力的测定称取一定量的DPPH，用无水乙醇配制成0.04mg/mL的DPPH 溶液。
分别取2mL分歧浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液，加入2mL DPPH溶液，混合均匀，室温放置30min后，5000r/min离心10min。
取上清液于517nm处测吸光值。
用Vc作为阳性对照。
样品对DPPH自由基的清除率用以下公式计算：DPPH()121100%A AA-=-⨯清除率A0—2mL无水乙醇+ 2mL DPPH溶液的吸光值；A1—2mL样品溶液+ 2mL DPPH溶液的吸光值；A2—2mL样品溶液+ 2mL无水乙醇的吸光值。
2、总还原能力的测定在10mL离心管中分别加入0.2mol/L pH 6.6的磷酸缓冲液2.5mL和分歧浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液1mL，加入2.5 mL 1%铁氰化钾，混合均匀后于50℃ FeCl3，混匀后静置10min，在700nm处检测吸光值。
Vc作为阳性对照。
3、对Fe2+离子螯合能力的测定分别取1mL分歧浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液和3.7mL蒸馏水，加入2mmol/L的FeCl2溶液0.1mL和5mmol/L的菲洛嗪溶液0.2mL，25℃水浴10min，于562nm处测吸光值。
EDTA为阳性对照。
样品对Fe2+的螯合率计算公式如下：Fe 2+()1201100%A A A -=-⨯螯合率 A 0—1mL 蒸馏水代替反应体系中样品溶液后的吸光值； A 1—样品溶液反应后的吸光值；A 2FeCl 2溶液后的吸光值。
4、超氧自由基（O 2-）清除率的测定采取邻苯三酚自氧化法测定。
取50mmol/L Tris-HCl 缓冲液（pH8.2）4.5mL ，置25℃水浴中保温20min ，分别加入1mL 样品溶液和0.4mL 25mmol/L 邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min ，加入1mL 8mmol/L HCl 终止反应，于299nm 处测定吸光度（A x ），空白对照组以相同体积蒸馏水代替样品。
3种抗氧化活性测定方法
3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定方法是评估化合物或材料抗氧化性能的一种重要手段。
随着抗氧化活性的研究日益深入，目前已经发展出很多种测定方法。
以下将介绍三种常用的抗氧化活性测定方法：DPPH自由基清除法、Fe2+/Fe3+还原能力法和ABTS自由基清除法。
1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色的自由基，常用于评估化合物或材料的抗氧化活性。
该方法基于DPPH自由基与抗氧化物质发生反应后，颜色由紫色变为淡黄色或无色。
测定方法简单，操作方便。
其原理是待测样品与DPPH混合后，通过电子或氢的转移反应，DPPH自由基将被清除，溶液颜色由紫色转变为淡黄色。
根据吸光度变化可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。
2.Fe2+/Fe3+还原能力法：该方法基于还原能力测定抗氧化物质对Fe3+离子的还原能力。
常用的试剂是FeCl3溶液和TPTZ（2,4,6-三聚吡啶甲酸）、酸性pH缓冲液。
其原理是待测样品能够还原Fe3+离子为Fe2+离子，Fe2+离子与TPTZ反应生成有颜色的络合物，通过分光光度计测定络合物的吸光度变化，进而计算出还原能力。
较高的吸光度变化表示较高的抗氧化活性。
3.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6磺酸)）自由基是一种蓝绿色自由基，其浓度在紫外可见光区域有最大吸收。
该方法基于ABTS自由基清除率来评估抗氧化物质的抗氧化活性。
该方法较DPPH法和还原能力法更为灵敏。
其原理是待测样品与ABTS自由基反应后，ABTS自由基将被清除，溶液颜色由蓝绿色变为无色或浅黄色。
通过测定吸光度的变化，可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。
除了上述常用的抗氧化活性测定方法外，还有很多其它方法也被广泛应用于抗氧化活性的评估，如氧化还原测定法、Fenton反应法、还原剂抑制能力法等。
每一种测定方法都有其独特的原理和适用范围，研究人员可以根据具体的研究目的和样品性质选择合适的测定方法。
3种抗氧化活性测定方法
3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性是指物质对氧化过程的抑制作用，能够减缓或阻断自由基对细胞和组织的损害。
目前，常用的抗氧化活性测定方法主要包括DPPH 自由基清除法、ABTS自由基清除法和铁还原能力测定法。
以下将对这三种方法进行详细介绍。
1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-若氧基-苯基-π-苦味噁唑）自由基清除法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
该方法是通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。
DPPH自由基是一种紫色稳定的自由基，在接触到氢供体（抗氧化剂）后，会发生颜色变化从紫色转变为黄色。
可以通过测定样品溶液的吸光度来评估其抗氧化能力。
吸光度的降低表明样品对DPPH自由基的清除能力较强。
2.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双（3-乙基苯并噻唑））自由基清除法也是一种常用的抗氧化活性测定方法。
ABTS自由基是一种无色可溶性自由基，其生成主要通过氧化剂与ABTS反应而产生。
测定方法是将ABTS与过氧化氢反应，生成蓝色自由基溶液，然后将样品加入到溶液中，通过测定吸光度的变化来评估样品的抗氧化活性。
吸光度的降低表明样品对ABTS自由基的清除能力较强。
3.铁还原能力测定法：铁还原能力测定法是一种评估抗氧化活性的常用方法，通过测定样品对Fe3+还原为Fe2+的能力来评估其抗氧化能力。
在这个方法中，还原剂（如抗氧化剂）会与Fe3+反应，生成Fe2+，并且Fe2+的浓度可以通过测量其吸光度来确定。
浓度越高，吸光度越高，表明样品的抗氧化能力越强。
这三种抗氧化活性测定方法各有其优势和适用范围。
DPPH自由基清除法适用于评估样品对自由基的清除能力，但其结果受其他化合物的影响较大；ABTS自由基清除法对于水溶性和脂溶性样品均适用，但其结果也受其他化合物的影响；铁还原能力测定法适用于样品中还原型物质的测定，可评估样品对金属离子的还原能力。
因此，在实际应用中，可以根据需要选择适合的方法来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化测定方法流程
一DPPH自由基清除能力仪器及药品：酶标仪、紫外-可见分光光度计、甲醇、DPPH等DPPH 即1，1-二苯基-2-苦肼基自由基，是一种稳定的自由基，其甲醇溶液呈紫色，并在517 nm处有强吸收。
参考Braca et al. (2001)的方法进行测量。
取0.1 ml样品，加入3 ml 0.004％DPPH 甲醇溶液（质量分数）。
（0.02g溶于500ml甲醇溶液。
）混合均匀后，静置30 min后在517 nm处测定吸光值。
抑制率采用公式[(A0－A1)/A0] · 100计算，其中A0（加0.1ml甲醇和3mlDPPH甲醇溶液）为加入样品前的吸光值，A1 为加入样品后的吸光值。
（空白样采用甲醇。
用甲醇溶液调零。
）配置各个级分不同浓度的甲醇溶液，浓度范围可以先做预实验，大致在1mg-1000mg/l 之间：测定吸光值计算DPPH自由基清除率，绘制吸收曲线，找出其IC50二FRAP法测定抗氧化能力药品：醋酸纳、醋酸、三吡啶基均三嗪（2,4,6-Tripyridyl-s-triazine，TPTZ）、盐酸、FeCl3·6H2O、维生素C（L-Ascorbic Acid）（1）300mmol/L的醋酸盐缓冲液（pH=3.6）：3.1g C2H3NaO2·3H2O ＋16mL C2H4O2 溶于1L容量瓶中定容。
（或着是1.869g醋酸钠）（2）10mmol/L三吡啶基均三嗪（2,4,6-Tripyridyl-s-triazine，TPTZ，分子量312.33）溶于40mmol/L HCl中：称取0.312g三吡啶基均三嗪溶于50ml小烧杯中，加入0.34ml浓HCl（约11.7mol/l）搅拌均匀，然后定容到100ml容量瓶中。
（3）20mmol/L FeCl3·6H2O溶液，称取2.703gFeCl3·6H2O溶解于200ml蒸馏水中，然后定容到500ml容量瓶中FRAP试剂：25mL 醋酸盐缓冲液＋ 2.5mL TPTZ溶液＋ 2.5mL FeCl3·6H2O溶液（10:1:1）标准样：0.1-1mmol/L的维生素C（L-Ascorbic Acid）溶液FRAP分析步骤：取0.1 ml 样品放入10ml试管中，加入新鲜的FRAP试剂3.0 ml，然后置于25℃恒温水浴中，5 min后用紫外分光光度计在波长为593 nm处测吸光值，（空白样采用去离子水。
抗氧化活性测定方法
一、抗氧化测定1．DPPH:a)样品溶液浓度初测定，（0~4℃）储藏。
b)称4mg，加无水甲醇溶解于烧杯，转移至100mL容量瓶定容。
浓度为0.04mg/mL。
避光（0~4℃）储藏。
i.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml无水甲醇）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。
以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。
平行测定2次。
A1ii.5ml离心管（2ml待测样+2mL无水甲醇）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。
以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。
A2iii.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml待测样）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。
以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。
A3清除率（Y）=[1-（A3-A2）/A1]∙100%。
平行测定3次，取平均值。
分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。
自由基清除能力，AE=1/IC50。
根据AE大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE越大清除能力越强。
2．·OHa)PBS制配：磷酸二氢钠31.2g 1000ml蒸馏水定容，磷酸氢二钠71.6g1000ml蒸馏水定容。
移液管移液磷酸二氢钠190ml、磷酸氢二钠810ml 于1000ml 烧杯，pH 计调7.4。
b) 邻二氮菲：148mg 蒸馏水定容100ml 。
c) 硫酸亚铁：208.5mg 蒸馏水定容100ml 。
d) 100ml30%双蒸馏水定容300ml 。
封口。
i. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 硫酸亚铁混匀后+0.5ml 22O H +双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm 。
A1ii. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 硫酸亚铁混匀后+双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm.A2 iii. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 待测样+0.5ml 硫酸亚铁混匀后+0.5ml 22O H +双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm.A3iv. 10ml 离心管（1mlPBS+双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm.A 空。
DPPH抗氧化
DPPH法测定黄芩黄酮的抗氧化活性抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质,其作用机理可以是直接作用在自由基,或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。
目前对自由基清除剂的研究方法主要有类，一类是体外模型，另一类是体内模型,其中DPPH 法是体外模型中最常用的方法。
DPPH又称1，1-二苯基—2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基,他的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。
它的无水乙醇溶液呈紫色,在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。
向其中加入自由基清除剂时,可以结合或替代DPPH·，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。
即通过在517nm波长处检测样品清除DPPH·的效果，来计算抗氧化能力。
实验研究表明，黄芩黄酮中清除DPPH 自由基活性的主要成分是黄芩苷[1]，黄芩苷中含有羧羟基和酚羟基能与DPPH反应，反应式如下：NN+O2NO2NNO2H+NNHO2NO2NNO2 DPPH 与抗氧化剂反应原理材料：DPPH（1，1-二苯基—2-三硝基苯肼)；无水乙醇；仪器:分光光度计1.DPPH贮备液的制备准确称取DPPH试剂3．5mg,用无水乙醇溶解，并定量转入10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，取2mL至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0。
0178mmol／L D PP H贮备液，置于冰箱中冷藏备用。
2.试液的制备准确称取5。
2mg干燥的黄酮提取物（32。
75%），用无水乙醇溶解,并定量转入50ml容量瓶中，用无水乙醇定量至刻度，取10ml至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0233mmol／L试液.3.DPPH·清除率的测定在10mL比色管中依次加入4.0mLDPPH溶液和黄酮提取液,再加入无水乙醇至刻度，混匀立即用1cm比色皿在517nm波长处测吸光值(A），吸光值记为Ai,再在温室避光保存30min后测吸光值，记为Aj，对照试验为只加DPPH的乙醇溶液，其吸光值记为Ac。
DPPH在抗氧化活性评价中的应用
DPPH在抗氧化活性评价中的应用DPPH（2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl）是一种广泛用于评价抗氧化活性的自由基。
DPPH自由基是一种稳定的紫色自由基，其吸收峰位于波长517 nm。
其吸光度随着还原剂的加入而减小，可用于测定抗氧化剂的能力。
1.抗氧化剂的选择和筛选：DPPH法是一个简单且经济的方法，可以有效地评价天然产物、食品添加剂、药物、化妆品和其他化合物的抗氧化活性。
通过与DPPH自由基的反应，可以量化评价抗氧化剂的能力，通常以IC50（抑制50%的浓度）作为评价指标。
IC50越小，表明抗氧化剂的抗氧化活性越强，推荐进一步的研究。
2.抗氧化剂的相关性研究：DPPH法可用于评价抗氧化剂与其他营养物质或化学物质之间的相互作用。
通过与DPPH自由基的反应，可以评估不同化合物之间的相互作用，从而了解它们对抗氧化过程的贡献程度。
这有助于揭示一些抗氧化剂的混合物或复杂多组分体系中的相互作用机制。
3.抗氧化剂的稳定性评价：DPPH法可以用来评估不同条件下抗氧化剂的稳定性，如光照、温度和pH值等。
通过检测其吸光度的变化，可以了解抗氧化剂在不同条件下的稳定性，并选择合适的条件来保护抗氧化剂的稳定性。
4.抗氧化剂的动力学研究：DPPH法还可用于研究抗氧化剂与DPPH自由基之间的反应动力学。
通过测定DPPH与抗氧化剂反应的速率常数，可以了解化合物与DPPH自由基的反应速率，并推测其机制和反应类型。
5.新型抗氧化剂的发现：DPPH法可以广泛应用于天然产物的抗氧化活性筛选，有助于发现新型的抗氧化剂。
通过检测化合物与DPPH自由基的反应，可以评估它们的抗氧化能力，并筛选出具有潜力的新型抗氧化剂。
总之，DPPH法是一种简单、快速且有效的方法，已在抗氧化活性评价中得到广泛应用。
它可以用于抗氧化剂的筛选和选择、抗氧化剂与其他物质的相关性研究、抗氧化剂的稳定性评价、抗氧化剂的动力学研究和新型抗氧化剂的发现。
抗氧化活性实验方法
抗氧化活性实验方法（体外实验）1、清除DPPH自由基能力的测定称取一定量的DPPH，用无水乙醇配制成0.04mg/mL的DPPH溶液。
分别取2mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液，加入2mL DPPH溶液，混合均匀，室温放置30min后，5000r/min离心10min。
取上清液于517nm处测吸光值。
用Vc作为阳性对照。
样品对DPPH 自由基的清除率用以下公式计算：DPPH()121100%A AA-=-⨯清除率A0—2mL无水乙醇+ 2mL DPPH溶液的吸光值；A1—2mL样品溶液+ 2mL DPPH溶液的吸光值；A2—2mL样品溶液+ 2mL无水乙醇的吸光值。
2、总还原能力的测定在10mL离心管中分别加入0.2mol/L pH 6.6的磷酸缓冲液2.5mL和不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液1mL，加入2.5 mL 1%铁氰化钾，混合均匀后于50℃反应20min。
取出后加入2.5mL 10%三氯乙酸终止反应，5000r/min离心10min。
取上清液2.5mL，加入2.5mL 蒸馏水和0.5mL FeCl3，混匀后静置10min，在700nm处检测吸光值。
Vc作为阳性对照。
3、对Fe2+离子螯合能力的测定分别取1mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液和3.7mL蒸馏水，加入2mmol/L的FeCl2溶液0.1mL和5mmol/L的菲洛嗪溶液0.2mL，25℃水浴10min，于562nm处测吸光值。
EDTA为阳性对照。
样品对Fe2+的螯合率计算公式如下：Fe2+()121100%A AA-=-⨯螯合率A0—1mL蒸馏水代替反应体系中样品溶液后的吸光值；A1—样品溶液反应后的吸光值；A2—0.1mL的蒸馏水代替反应体系中FeCl2溶液后的吸光值。
4、超氧自由基（O2-）清除率的测定采用邻苯三酚自氧化法测定。
取50mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH8.2）4.5mL，置25℃水浴中保温20min，分别加入1mL样品溶液和0.4mL 25mmol/L邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min，加入1mL 8mmol/L HCl终止反应，于299nm处测定吸光度（A x），空白对照组以相同体积蒸馏水代替样品。
抗氧化性测定方法
抗氧化性测定方法1.1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）法这是一种广泛应用的测定方法。
DPPH是一种深紫色的自由基，在接触到具有抗氧化能力的物质后会发生漂白反应。
在测定中，样品与DPPH 一起加入观察和记录，在吸收强度的变化可以反映出物质的抗氧化能力。
2.金属还原力抗氧化活性法（FRAP法）FRAP法基于物质的还原能力，测定物质对铁（Fe3+）的还原能力。
在该方法中，加入已知浓度的Fe3+溶液，并随着物质还原能力的增强，Fe3+逐渐被还原成可溶性Fe2+。
通过检测Fe2+的浓度变化，可以评估样品的抗氧化能力。
3.缩合亚硝酸盐法（NBT法）NBT法利用物质对亚硝酸盐的还原能力来测定其抗氧化能力。
NBT是一种黄色水溶性化合物，在接触到自由基后会转变为蓝色NBT还原物。
通过测定蓝色NBT还原物的吸光度，可以评估样品的抗氧化能力。
4.过氧化物过氧化物是一类非常有活性且具有氧化性的分子，在测定中被用作产生自由基的刺激源。
通过观察或测定样品与过氧化物产生的氧化反应，可以评估样品的抗氧化能力。
5.水溶性抗氧化能力（ORAC）法ORAC法是一种相对来说较复杂但更接近生物体内抗氧化能力的测定方法。
通过测定物质与自由基的竞争反应，以及维持反应平衡的时间，可以评估样品的抗氧化能力。
6.单线态氧发射（SOS）法SOS法是一种测定样品对单线态氧（1O2）的能力的方法。
在该方法中，通过检测样品对单线态氧的发射能力，评估其对自由基氧化损伤的能力。
在实际应用中，可以根据需要选择适当的抗氧化性测定方法，或者使用多种方法综合评估样品的抗氧化能力。
除了上述几种方法，还有其他一些方法如总抗氧化能力（TAC）法和细胞抗氧化测试（CAT）等方法也可以用于抗氧化性测定。
DPPH法评价抗氧化活性研究进展
DPPH法评价抗氧化活性研究进展一、本文概述随着人们对健康生活的追求和对疾病预防的重视，抗氧化剂的研究和应用逐渐成为科学研究的热点。
DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）法作为一种简便、快速、高效的抗氧化活性评价方法，在抗氧化剂筛选、食品营养评价、药物研发等领域得到了广泛应用。
本文旨在综述DPPH法在评价抗氧化活性方面的研究进展，包括其基本原理、实验操作、影响因素以及应用实例等方面，以期为该领域的研究者提供全面的参考和借鉴。
通过本文的阐述，读者可以深入了解DPPH法的优势与局限性，进一步推动抗氧化活性评价方法的优化与创新。
二、DPPH法的基本原理DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）法是一种常用的体外抗氧化活性评价方法，其基本原理基于DPPH自由基的稳定性和颜色变化。
DPPH 自由基是一种紫色的有机自由基，其溶液在517nm处具有强吸收峰。
当抗氧化物质存在时，它们可以通过提供氢原子或电子来与DPPH自由基发生反应，从而使其颜色由紫色变为黄色，最大吸收峰也随之降低。
这种颜色变化与DPPH自由基被清除的程度成正比，因此可以通过测定反应前后溶液吸光度的变化来评价抗氧化物质的活性。
DPPH法具有操作简便、快速、灵敏度高和重现性好等优点，因此在抗氧化活性评价中被广泛应用。
DPPH自由基是一种脂溶性的自由基，可以模拟生物体内多种自由基的反应，因此DPPH法也具有一定的生理意义。
然而，需要注意的是，DPPH法仅是一种体外评价方法，其结果并不能完全代表抗氧化物质在生物体内的实际抗氧化效果。
因此，在评价抗氧化物质的活性时，还需要结合其他方法进行综合分析。
以上内容仅为简要介绍，如需更深入了解DPPH法的基本原理和应用，建议查阅相关文献或咨询专业人士。
三、DPPH法在抗氧化活性评价中的应用DPPH法作为一种简便、快速、灵敏且可重复性强的方法，已被广泛应用于抗氧化活性的评价中。
该方法基于DPPH自由基的稳定性和其在可见光区具有的特征吸收峰，通过测定待测物与DPPH自由基反应后吸光度的变化，可以推算出待测物的抗氧化活性。
dpph法
dpph法
DPPH法是一种测定抗氧化能力的方法，它可以用来测定物质的抗氧化能力，也可以用来测定植物提取物的抗氧化能力。
DPPH法的原理是：DPPH是一种自由基，它具有一个自由基反应中特有的结构，它的分子中含有一个芳基环，这个芳基环上有一个自由基，这个自由基可以与抗氧化剂发生反应，从而使DPPH的自由基变成非自由基，从而使DPPH的色素发生变化，从而可以用来测定抗氧化能力。
DPPH法的实验步骤如下：
1.准备实验材料：准备DPPH溶液、待测物质溶液、标准抗氧化剂溶液；
2.测定：将DPPH溶液和待测物质溶液按照一定的比例混合，然后将混合液放入光度计中，测定其吸光度；
3.计算：将待测物质溶液和标准抗氧化剂溶液按照一定的比例混合，然后将混合液放入光度计中，测定其吸光度，然后计算待测物质抗氧化能力的折算值，即DPPH法的结果。
DPPH法是一种简单、快速、准确的测定抗氧化能力的方法，它可以用来测定物质的抗氧化能力，也可以用来测定植物提取物的抗氧化能力，是一种重要的抗氧化检测方法。
抗氧化活性测定方法
抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定是指评估化合物或物质对抗自由基或其他氧化物种的能力。
氧化反应是生物体代谢过程中不可避免的一环，会产生各种有害氧化物，如自由基。
自由基对人体细胞和分子造成损害，导致各种疾病的发生。
因此，评估物质的抗氧化活性具有重要的生物学和医学意义。
目前有许多方法可用于测定抗氧化活性，常用的方法有自由基清除法、还原能力测定法和氧化物抑制法。
下面将对它们进行详细介绍。
1.自由基清除法：自由基清除法主要是通过测定物质对自由基的清除速率来评估其抗氧化能力。
常用的方法有DPPH自由基法、ABTS自由基法和超氧阴离子自由基法。
其中，DPPH自由基法是最常用的一种方法。
该法是将DPPH自由基与物质反应，通过测定DPPH自由基消失的程度来反映物质的抗氧化活性。
2.还原能力测定法：还原能力是物质抗氧化活性的重要指标之一、通常是通过测定物质还原过程中电子释放的程度来评估其抗氧化活性。
常用的方法有Fe3+/Fe2+离子还原法和Cu2+/Cu+离子还原法。
其中，Fe3+/Fe2+离子还原法是最常用的一种方法。
该法是将Fe3+还原为Fe2+的过程中，测定还原剂的浓度变化或颜色的变化。
3.氧化物抑制法：氧化物抑制法是通过测定物质对氧化物的生产和活性的抑制能力来评估其抗氧化活性。
常用的方法有脂质过氧化抑制能力法和DNA损伤抑制法。
其中，脂质过氧化抑制能力法是最常用的一种方法。
该法是通过测定物质对脂质过氧化的抑制作用来评估其抗氧化活性。
此外，还有其他一些辅助方法可用于评估物质的抗氧化活性，包括电子顺磁共振(EPR)、化学发光法和细胞抗氧化活性测定等。
这些方法可以提供更加准确和全面的抗氧化活性评估。
总之，抗氧化活性测定是评估物质对自由基和其他氧化物的抗氧化能力的重要手段。
不同的测定方法各有特点，可根据需要选择合适的方法进行评估。
抗氧化活性测定方法的发展将为药物研发、食品安全和环境保护等领域提供有力的支持。
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![dpph法[001]](https://img.taocdn.com/s3/m/2a25a45211a6f524ccbff121dd36a32d7275c74b.png)
DPPH法引言DPPH（2,2-二苯基-1-苦味胍）是一种常用于测定自由基抗氧化活性的方法。
DPPH法是一种简便快速的可见光分析方法，广泛应用于评估食品、药物和天然产物中的抗氧化活性。
本文将介绍DPPH法的原理、实验步骤和数据分析方法。
原理DPPH法是基于DPPH自由基溶液的颜色变化来评估样品的抗氧化活性。
DPPH 自由基溶液呈紫色，但在受到抗氧化物质的作用下，DPPH自由基被还原为无色的DPPH-H，颜色逐渐变浅。
通过测量溶液的吸光度变化，可以计算出样品的抗氧化能力。
实验步骤1. 准备DPPH溶液称取适量的DPPH粉末加入溶剂中（通常为乙醇），摇晃均匀，直到DPPH完全溶解。
2. 预备样品溶液根据需要测试的样品，制备相应浓度的样品溶液。
如果需要，可以通过稀释样品来得到不同浓度的溶液。
3. 准备空白试剂准备一个空白试剂，在其中加入适量的溶剂，以保持实验条件的一致性。
4. 测量吸光度将DPPH溶液、样品溶液和空白试剂分别放入分光光度计中，并设置波长为517 nm。
先测量空白试剂的吸光度作为基准值，然后分别测量DPPH溶液和样品溶液的吸光度。
5. 数据分析计算DPPH溶液的吸光度与样品溶液的吸光度之差，代表了DPPH被样品抗氧化的能力。
可以使用以下公式计算抗氧化能力：抗氧化能力（%）=（A₀ - A₁）/ A₀ × 100其中，A₀为空白试剂的吸光度，A₁为样品溶液的吸光度。
结论DPPH法是一种简便有效的评估抗氧化活性的方法。
通过测量DPPH自由基溶液的吸光度变化，可以得到样品的抗氧化能力。
该方法广泛应用于食品、药物和天然产物的抗氧化活性研究中。
参考文献1.Blois MS. Antioxidant determinations by the use of a stable freeradical. Nature, 1958, 181: 1199-1200.2.Mensor LL, Menezes FS, Leitao GG, et al. Screening of Brazilian plant extracts for antioxidant activity by the use of DPPH free radical method. Phytotherapy Research, 2001, 15(2): 127-130.。
抗氧化能力的体外测定方法研究进展
抗氧化能力的体外测定方法研究进展一、本文概述随着现代生活节奏的加快和环境污染的日益严重，人体面临的氧化应激压力不断增大，抗氧化能力的重要性日益凸显。
因此，抗氧化能力的体外测定方法研究进展成为了生物医学、营养学、食品科学等领域的研究热点。
本文旨在综述近年来抗氧化能力体外测定方法的研究进展，以期为相关领域的研究人员提供全面的信息参考和技术指导。
本文将首先对抗氧化能力的概念进行界定，明确其生理意义和重要性。
随后，将重点介绍几种常用的抗氧化能力体外测定方法，包括总抗氧化能力（TAC）测定、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定、过氧化氢酶（CAT）活性测定、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性测定等。
还将探讨这些方法的优缺点、适用范围以及在实际研究中的应用情况。
通过本文的综述，我们希望能够为相关领域的研究人员提供全面的抗氧化能力体外测定方法的知识体系和技术指导，为推动抗氧化能力研究的发展和应用提供有益的参考。
二、抗氧化能力的概念和机制抗氧化能力是指生物体系在面临氧化压力时，通过一系列复杂的生化反应来消除或抵抗活性氧（ROS）和活性氮（RNS）的能力。
这些活性物质是由正常细胞代谢或环境应激产生的，它们具有高度反应性，能够破坏细胞内的关键分子，如DNA、蛋白质和脂质，从而引发各种疾病，如癌症、心血管疾病和神经退行性疾病等。
抗氧化机制主要包括酶促和非酶促两大类。
酶促抗氧化系统包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）等，它们能够催化ROS和RNS的分解，从而防止其对细胞的损害。
非酶促抗氧化系统则主要包括各种抗氧化剂，如维生素C、维生素E、谷胱甘肽、尿酸、胆红素等，它们可以直接与ROS和RNS反应，从而消除其活性。
近年来，对抗氧化能力的研究已经从简单的抗氧化剂筛选发展到了对抗氧化机制的深入研究。
研究者们开始关注抗氧化剂之间的协同作用，以及抗氧化剂与细胞信号通路之间的关系。
对抗氧化能力的评估方法也从单一的化学测定发展到了细胞模型和动物模型的评估，使得对抗氧化能力的理解更加全面和深入。
抗氧化性测定方法
抗氧化性测定方法抗氧化性是指抗氧化物质对有害氧自由基的清除能力。
现代研究表明，氧自由基与许多疾病的发生和发展密切相关，如心血管疾病、癌症、阿尔茨海默病等。
因此，研究抗氧化性成为了一个重要的领域。
目前，常用于测定抗氧化性的方法有多种，包括化学方法、体外细胞试验、动物模型试验以及临床试验等。
以下将介绍其中一些常用的抗氧化性测定方法。
1.单位面积清除DPPH自由基法该方法利用DPPH自由基（2,2-二苯基-1-苦基肼）的紫色消退来测定样品的抗氧化能力。
实验中，将待测样品与DPPH自由基溶液混合，反应一段时间后，通过测量反应液的吸光度来评估样品的抗氧化能力。
抗氧化能力越强，吸光度下降越大。
该方法简单快速，常用于蔬菜、水果、茶叶等样品的抗氧化性测定。
2.生化物质抗氧化方法该方法通过测定待测样品对生化物质抗氧化能力的影响来评估其抗氧化性。
常用的生化物质包括DNA、脂质、蛋白质等。
例如，可以通过测定DNA的损伤程度来评估样品对DNA的保护能力。
DNA损伤越小，样品的抗氧化能力越强。
3.氧化还原能力测定方法该方法通过测定待测样品的氧化还原能力来评估其抗氧化性。
常用的氧化还原指标包括总抗氧化能力（TAC）、还原力（FRAP）以及氧化标志物（如谷胱甘肽、超氧化物歧化酶等）。
根据测得的氧化还原能力数值，可以评估样品的抗氧化性能。
4.活细胞抗氧化能力测定方法该方法通过使用活细胞进行体外试验，评估待测样品对细胞的保护能力。
常用的细胞包括人类乳腺癌细胞（MCF-7）、人类肝癌细胞（HepG2）等。
实验中，将细胞暴露在氧化应激条件下，并添加不同浓度的待测样品，通过测定细胞的存活率、DNA损伤程度、抗氧化酶活性等指标，来评估样品的抗氧化能力。
综上所述，抗氧化性测定方法具有一定的操作性、精确性、重现性以及规范性，在研究和评价抗氧化性方面发挥了重要的作用。
然而，不同的测定方法适用于不同的样品和需要，需根据具体情况选择合适的方法。
范围广泛的研究表明，物质的抗氧化能力与其健康益处或营养效应之间有着密切的关联，抗氧化性测定方法的研究也将进一步推动抗氧化物质的开发和应用。
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DPPH.法测定绿原酸清除自由基能力
2.1 待测液的制备
将绿原酸(纯度56%)、维生素C 和没食子酸分别配制成体积分数为0.1mg/mL 的无水乙醇溶液。
2.1.1 绿原酸母液的配制 称取 9.0 mg 绿原酸，定容到50ml ，即可得到绿原酸的母液0.1mg/mL 。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。
2.1.2 Vc 母液的配制 称取 mg VC ，定容到100ml ，即可得到VC 的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。
2.1.3 没食子酸母液的配制 称取 mg 没食子酸，定容到100ml ，即可得到没食子酸的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。
2.1.4 DPPH 母液的配制 称取 mg DPPH ，用无水乙醇定容到100ml ，即可得到DPPH 的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成至一定浓度的溶液。
C DPPH = mg/ml 。
（建议用0.025mg/mL ）
2.2 DPPH.溶液的可见光谱
以无水乙醇为对照，在分光光度计上对DPPH.溶液进行在440～600nm 下扫描。
A max = nm
2.3 抗氧化活性测定
DPPH.是一种稳定的自由基，它的乙醇溶液呈紫色，在可见光区最大吸收峰为 nm 。
当DPPH.溶液中加入自由基清除剂时，溶液颜色变浅，517nm 处的吸光度变小，而吸光度变小的程度与自由基被清除的程度呈线性关系。
因此，可用来检测自由基的清除情况，从而评价某物质的抗氧化能力，其能力用清除率(Scavenging Rate,SR)来表示，清除率越大，抗氧化能力越强
[4.5]。
具体实验步骤及方法：
精确吸取的DPPH.溶液2mL 与2ml 无水乙醇混合均匀后，以相对应的溶剂(4mL 无水乙醇)为对照，用分光光度计测定上述溶液在 nm 处的吸光度值(A 0)。
A 0=
2.3.1 绿原酸样品溶液的抗氧化能力测定
精确吸取上述不同浓度的绿原酸溶液2mL ，分别与浓度 mg/ml 的DPPH.溶液2mL 混合，摇匀后放置30min 。
以相对应的溶剂(无水乙醇)为对照调零，用分光光度计分别测定上述溶液在 nm 处的吸光度值(A i )，分别测得A i 值。
A 1 ；A 2 ；A 3 ；A 4 ；A 5 ；A 6 ；A 7 。
精确吸取上述不同浓度的绿原酸溶液2mL ，分别与2mL 无水乙醇混合均匀后，以无水乙醇为对照，用分光光度计分别测定各混合液在波长 nm 处的吸光度值(A j )，分别测得A j 值。
A 1 ；A 2 ；A 3 ；A 4 ；A 5 ；A 6 ；A 7 。
将以上数据代入下列公式计算其清除率。
清除率SR(％)=%100A A A 10j i ⨯⎪⎪⎭
⎫ ⎝⎛
-- 其中，
A i ：为2mL 绿原酸、维生素C 和没食子酸与 2mL 的DPPH.溶液混合后在波长 nm 处的吸光度值； A j ：为2mL 绿原酸、维生素C 和没食子酸分别与2mL 无水乙醇溶剂混合后在波长 nm 处的光值； A 0：2mLDPPH.溶液与2mL 无水乙醇溶剂混合后在波长 nm 处的吸光度值。