派伊尔结在肠道黏膜免疫中的作用

TNF-A 和 IL-10 的 能 力 相 当 。
2.2 对腹腔巨噬 cell 吞噬活性的影响
从结果来看，第②组小鼠腹腔巨噬 cell 吞噬活
性显著增强，p＜0.05 具有统计学意义， 第③组进一
步显著上升，p＜0.05 具有统计学意义， 其它菌株组
除了第⑥组与空白组相比较也均有提升，且差异明
显，p＜0.05 具有统计学意义， 而第⑥组与空白组无
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代当 Husbandry Animal Modern 业殖养禽畜
（7）测定小鼠腹腔巨噬 cell 的吞噬活性
在实验 3 周后，脱臼处死小鼠，使用 PBS 溶液
取其腹腔渗出液，经过与荧光标记以及培养基的培
养后， 在 530nm 发射光以及 485nm 激光波长的光
致敏可抑制小鼠对 sIgA 的分泌,乳酸菌则可增
强小鼠对 sIgA 的分泌 ，第③，④，⑤三 组 均 可 削 弱
由于致敏导致的 sIgA 分泌下降情况，且效果显著，
p＜0.05 （具有统计学意义）。 第⑥组菌株无明显作
用，p＞0.05（不具有统计学意义）。 详细见表 2。
表 2 各组对小鼠分泌 sIgA 的影响比较
8.96±0.39 11.09±0.45ab 9.95±1.23ab 8.96±0.17a
⑤致敏 plantarumFn008 L 洗胃组
7.97±0.35
标注：a 表示与空白组差异 显 著 （p＜0.05），b 表 示 与 致 敏 组 差 异 显 著 （p＜0.05）。
2.3 测定小鼠粪便中 sIgA
关键词：派伊尔结；乳酸菌；肠道黏膜；免疫作用 肠道相关淋巴组织由细胞因子以及相关淋巴 组织（PP）构成，其中 PP 也是我们惯称的派伊尔结。 肠 道 的 免 疫 反 应 诱 导 器 官 派 伊 尔 结 (Peyer.s patches, PP)外表的滤泡连接上皮(FAE)具有一些特 定的受体可以结合某些细菌[1]。 本次实验主要研究 乳酸菌黏附内化于派伊尔结性能从而发挥免疫作 用的机制。 结果发现派伊尔结是通过细菌的内化吸 附能力从而被诱导产生免疫因子发挥免疫作用的。 具体内容如下。 1 材料和方法 1.1 材料 FITC(异硫氰酸荧光素)于 Amresco 采购；OVA （ 卵 清 蛋 白 ） 于 Hyclone 采 购 ；RPMI1640 是 由 GIBCO 公 司生产的培 养基。 用于 TNF-A，IL-10， IL-12 检测的试剂为中国医药上海化学试剂公司产 品。 实验采用的所有菌株均为本实验室培养。 1.2 方法 （1）培养乳酸菌 将保存在含 甘油 15%的细菌 培养基中的 乳酸 菌菌株进行活化（使用-70e 的琼脂培养基），之后将 其进行单株 菌落分离 培 养 在 37e 的 液 体 培 养 基 内 17h，进 行连续 2 次的 转接，使用 4800r/min 的离心 速度离心 10min，进行菌株的收集。 （2）荧光标记乳酸菌
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派伊尔结在肠道黏膜免疫中的作用
齐旺梅 海日汗 内蒙古农业大学兽医学院 010018
摘要:采用荧光标记法对乳酸菌内化于派伊尔 结的能力进行定量分析，培养派伊尔结与乳酸菌内 化的组织块并测定派伊尔结在肠道黏膜免疫中所 起的作用。 派伊尔结是通过细菌菌株的内化黏附， 被诱导产生免疫细胞因子，从而发挥其在肠道黏膜 免疫中的作用，并且免疫因子分泌的多少与细菌菌 株的内化黏附能力成正比。
⑥致敏 caseiFn012 洗胃组
26.34±0.30
标 注 ：a 表 示 与 空 白 组 差 异 显 著 （p＜0.05），b 表 示 与 致
敏 组 差 异 显 著 （p＜0.05）
3 结论
笔者通过此次研究得出， 派伊尔结是通过细菌
菌株的内化黏附，被诱导产生免疫细胞因子从而发
挥其在肠道黏膜免疫中的作用，并且免疫因子分泌
hydrophobicity, mucosal immuno -modulating
capacities and cell wall protein profiles in indige-
nous and exogenous bacteria [J].J Appl Microbiol,
2004,96(2): 230-243.
组别
sIgA（pg/ml）
①空白组
26.13±0.14
②致敏空白组
26.13±0.15
③致敏 L. rhamnosusGG 洗胃组
29.15±0.17ab
④致敏 L. acidophilusFn037 L 洗胃组
27.94±0.41ab
⑤致敏 plantarumFn008 L 洗胃组
26.67±0.21ab
下，检测荧光值。
（8）测定小鼠粪便中 sIgA
实验 3 周后，对每只小鼠进行粪便的新鲜收集
并给予称重， 使用 PBS 稀释后于温室培养半个小
时，混合离心，按照测定试剂说明书测定小鼠粪便
中的 sIgA。
（9） 统计学方法
所有实验数据均采用统计学软件 SPSS19.0 进
行计算处理，并使用方差检验。
2 结果
for vaccine delivery [J]. AdvDrug Deliv Rev,
2004, 56 (6): 721-726.
[2] Vinderola CG, Medici M, Perdigon G.
Relationship betweeninteraction sites in the gut,
响因素[J].科技导报，2008，26（23）：65-69.
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的多少与细菌菌株的内化黏附能力成正比。 这可为
以后工作中对免疫调节性乳酸杆菌以及活菌疫苗
载体的筛选提供科学依据。
参考文献：
[1] Brayden DJ, Baird AW. Apical membrane
receptors on intes -tinal M cells: potential targets
把 活 细 菌 或 处 理 过 的 细 菌 悬 浮 于 100 mg PmLFITC 中 (溶解于 PBS,pH7.3),37e 暗处作用 1 h, PBS 洗四次,然后把细菌悬浮于 PBS(109CFUPmL)[2]。
（3）制备体外派伊尔结 参 照 原 雪 琦 、 常 桂 芳 等 [3,4]的 制 备 进 行 方 法 总 结：把 6 周 龄 健 康 KM 种 小 鼠 用 乙 醚 麻 醉,脱 颈 处 死,取出小肠,用预冷的 PBS（磷酸缓冲液）清洗内容 物,剪下派伊尔结段组织块。 （4）测定乳酸菌内化黏附于派伊尔结 将被荧光素标记的乳酸菌按照菌株的不同放 入 96 孔板的微孔， 每个微孔内放入 4 个派伊尔结 组织块（内壁朝上）。 于暗处 37e 的培养基进行 1 小 时的摇床培养。 然后使用 PBS 进行清洗，加入消化 液， 于 70e 培养基 内 17 小 时 ， 待 组 织 块 耗 尽 ，以 PBS 为空白对照， 使用化学发光或荧光分析仪，分 别在 530nm 发射光以及 485nm 激光波长的光下对 荧光值进行检测。 内化黏附性为每克派伊尔结相对 的荧光数值。 （5）测定细胞因子 按照 TNF-A，IL-10，IL-12 检测试剂的说明书 进行检测。 每个样品要重复检测。 （6）小鼠分组处理 实验采用的是 6 周龄的小鼠（KM 种），随机分 成 6 个小组，每组 10 只。 ①为空白组：不进行 OVA 致敏处理， 全程使用 PBS 洗胃。 ②为致敏空白组： 进行 OVA 致敏处理，全程使用 PBS 洗胃。 ③致敏 L. rhamnosusGG 洗胃组：进行 OVA 致敏处理，全程 使用菌悬溶液洗胃。第④，⑤，⑥三组分别为致敏 L. acidophilusFn037 L 洗胃组，致敏 plantarumFn008 L 洗胃组，致敏 caseiFn012 洗胃组，其操作方法均与第 ③组相同。 在实验 3 周后，脱臼处死小鼠，看小鼠粪 便形状，水样球状粪便就成功。
2.1 乳酸菌对派伊尔结的黏附性以及诱导细胞因
子的数量比较L . ca源自eiFn012 ， L . plantarumFn008 ， L.philu-
sFn037，L. rhamnosusGG 对 派 伊 尔 结 的 内 化 能
力 依 次 增 强 ， 但 对 派 伊 尔 结 诱 导 产 生 IL -12 ，
明显差异（p＞0.05）。 具体见表 1。
表 1 各组对腹腔巨噬 cell 吞噬活性的影响比较
组别
腹腔巨噬 cell 吞噬活性荧光值
①空白组
8.06±0.36
②致敏空白组 ③致敏 L. rhamnosusGG 洗胃组 ④致敏 L. acidophilusFn037 L 洗胃组 ⑤致敏 plantarumFn008 L 洗胃组
[3] 原雪琦,孙进,常桂芳,乐国伟,施用晖. 10 株乳酸
菌 黏 附 小 鼠 派 伊 尔 结 及 免 疫 调 节 作 用 研 究 [J]. 中 国
微生态学杂志，2009，21(7):577-580.
[4] 常 桂 芳 ， 施 用 晖 ， 乐 国 锋 ， 孙 进 ， 徐 子 伟 ， 原 雪 琪 ，
胡晓丽. 乳酸菌内化小鼠小肠派伊尔结特性及其影