[课件]植物原生质体的分离与纯化PPT

4 纯化： 1 ）过滤：用双层漏斗将原生质体过滤到离心 管中。 2 ）纯化 - 漂浮法：用比原生质体比重大的 20% 蔗糖盐溶液经过离心后原生质体漂浮在蔗糖溶液的 表面。（还有沉降法）
过滤后的液体进行500rpm，3min离心，收集原生质体 弃上清，沉淀用 2 ml 8%甘露醇盐溶液轻轻悬浮 在一新离心管中加入6~8 ml的20%蔗糖盐溶液，将原生 质体悬浮液轻轻环加在蔗糖盐溶液上面 1000rpm，3min离心，漂浮原生质体 原生质体在蔗糖溶液上面形成绿环，吸出原生质体置于 另一离心管中
过 滤 前 的 酶 解 液
过 滤 前 的 酶 解 液
过 滤 前 的 酶 解 液
2 讨论： ① 选择合适的材料是实验成功的首要因素， 请问该实验选材时注意什么问题？ ② 酶解时酶液的组成及浓度如何确定？ ③ 研究原生质体的意义是什么？
实验材料：
菠菜、油菜等。
实验用品：
用具：尼龙过滤网（ 400 目）、双层漏斗、吸 管、离心管、显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻 片等。 药品：纤维素酶、果胶酶、 8%甘露醇盐溶液、 20%蔗糖盐溶液等。
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实验步骤：
1 取材：选取充分伸展开的幼嫩叶片，冲洗干 净。
2 去下表皮：用镊子将下表皮撕掉，让叶肉细 胞暴露，注意不要损伤细胞。 3 酶解：去除下表皮的叶片剪成小块，铺于酶 液中，充分接触酶液。 25~30℃酶解 1~1.5 小时，期 间可晃动培养皿1~2次。
再加入8%甘露醇盐溶液进行洗涤2~3次
5 镜检：将原生质体悬浮液滴在载玻片上，轻 轻盖上盖玻片，先在低倍镜下找到原生质体，再换 成高倍镜仔细观察。
实验报告：
1 画出在显微镜下看到的原生质体的图像； 2 在整个实验操作过程中需要注意哪些问题？
结果与讨论：
1 预期结果：完整的原生质体形态上是圆球状 的，颜色鲜艳，富含细胞质。
植物原生质体的分离与纯 化
实验目的：
1 学习植物原生质体的分离和纯化技术；
2 了解原生质体在植物体细胞遗传学上的意义。
实验原理：
植物原生质体即为去除了细胞壁的植物细胞。 分离原生质体的基本要求是获得大量的有活力的原 生质体。去除细胞壁有两种方法，机械法和酶法。 其中酶法是一种温和、有效的方法，但是仅局限于 具有初生细胞壁的组织。植物的细胞壁由纤维素、 半纤维素、果胶质和少量的蛋白质和脂类组成的， 通常使用纤维素酶和果胶酶的混合酶液来分离原生 质体。