《化妆品微生物标准检验方法》GB ~ ——
化妆品 cma 微生物 认证检测项目
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化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解
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化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定 UDC 668:576 .85.07(GB7918.2-87)Standard methods of microbiological examination for cosmeticsStandard plate count细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌,数量。
测定细菌总数可用来判明化妆品被细菌污染的程度,以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况,是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。
本标准采用标准平板计数法。
1 方法提要化妆品中污染的细菌种类不同,每种细菌都有它一定的生理物质性,培养时对营养要求,培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。
在实际工作中,不可能做到满足所有菌的要求,因此所测定的结果,只包括在本方法所使用的条件下(在卵磷脂、吐温80营养琼脂上,于37℃培养48h)生长的一群嗜中温的需氯及兼性厌氧的细菌总数。
2 培养基和试剂2.1 生理盐水:见GB 7918-87《化妆品微生物标准检验方法总则》。
2.2 卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基成分:蛋白胨 20g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 15g卵磷脂 1g吐温80 7g蒸馏水 1000ml制法:先将卵磷脂加到少量蒸馏水中,加热溶解,加入吐温80将其他成分(除琼脂外)加到其余蒸馏水中,溶解。
加入已溶解的卵磷脂、吐温80,混匀,调pH值为7.1~7.2,加入琼脂,121℃(15 1b)20min高压灭菌,储存于冷暗处备用。
3 仪器3.1 锥形烧瓶。
3.2 量筒。
3.3 pH计或精密pH试纸。
3.4 高压消毒锅。
3.5 试管。
3.6 灭菌平皿:直径9cm。
3.7 灭菌刻度吸管:10ml、2ml、1ml。
3.8 酒精灯。
3.9 恒温培养箱。
3.10 放大镜。
4 操作步骤4.1 用灭菌吸管吸取1:10稀释的检样2ml,分别注入到两个灭菌平甲内,每皿1ml。
化妆品微生物检验方法标准
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化妆品微生物检验方法标准概述:化妆品微生物检验是对产品中的微生物含量和活性进行检测,旨在确保化妆品的质量和安全性。
本文将介绍化妆品微生物检验的方法标准,包括采样方法、微生物总数测试、致病微生物测试等内容。
一、采样方法采样是化妆品微生物检验的第一步,正确的采样方法对检验结果的准确性至关重要。
总体的采样方法包括以下几个方面:1. 选取适当数量和规格的样品,并确保样品具有代表性;2. 使用干净的取样工具,避免污染样品;3. 选择不同生产批次和生产日期的化妆品进行采样,以评估产品的质量稳定性;4. 遵循严格的卫生规范和操作规程进行采样。
二、微生物总数测试微生物总数测试是对化妆品样品中微生物总数量的测定。
其目的是评估产品的细菌污染程度和是否符合相关的卫生标准。
以下是常用的微生物总数测试方法:1. 高效液相色谱法(HPLC):该方法通过分离、测定化妆品中微生物代谢产物的含量,从而推断微生物总数;2. 膜过滤法:通过将样品通过膜过滤器,然后将膜培养在适当的培养基上,计数培养基上出现的菌落数量;3. 稀释平板计数法:将样品进行系列稀释后,移取适量的稀释液均匀涂布在含有适当培养基的平板上,培养并计数菌落数量;4. 流式细胞术:利用流式细胞仪对样品中微生物进行计数和鉴定。
三、致病微生物测试致病微生物测试是对化妆品样品中致病微生物含量的检测。
该测试主要关注常见的致病菌,如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
以下是常用的致病微生物测试方法:1. 酶免疫分析法(ELISA):通过检测样品中致病菌特异性的抗原或抗体来判断样品是否存在致病菌;2. PCR技术:通过引物特异性扩增样品中的致病菌DNA,从而检测样品是否受到致病菌污染;3. 快速培养技术:利用快速培养方法,减少培养周期,快速检测致病菌的存在。
四、标准和参考文献化妆品微生物检验方法的标准和参考文献主要包括国际组织和国家相关机构发布的标准。
以下是几个常见的标准:1. 国家药品监督管理局发布的《化妆品质量规范》2. 国际标准化组织(ISO)发布的相关标准,如ISO 21149:2020 "Cosmetics -- Microbiology -- Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria"3. 美国食品药品管理局(FDA)发布的相关指导文件,如《微生物检验的尺度适应性》总结:化妆品微生物检验是保证化妆品质量和安全的重要环节。
化妆品原料微生物检验标准
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化妆品原料微生物检验标准一、细菌总数1.目的:评估化妆品原料的细菌污染程度,反映化妆品生产过程中的卫生状况。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行细菌总数的测定。
3.判定标准:细菌总数小于或等于1000 CFU/g(CFU/ml)为合格,超过此标准为不合格。
二、霉菌和酵母菌总数1.目的:评估化妆品原料的霉菌和酵母菌污染程度,反映原料的卫生状况。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行霉菌和酵母菌总数的测定。
3.判定标准:霉菌和酵母菌总数小于或等于100 CFU/g(CFU/ml)为合格,超过此标准为不合格。
三、耐热大肠菌群1.目的:检测化妆品原料中是否存在耐热大肠菌群,反映原料的卫生状况。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行耐热大肠菌群的测定。
3.判定标准:未检出耐热大肠菌群为合格,检出耐热大肠菌群为不合格。
四、金黄色葡萄球菌1.目的:检测化妆品原料中是否存在金黄色葡萄球菌,预防感染性疾病的发生。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行金黄色葡萄球菌的测定。
3.判定标准:未检出金黄色葡萄球菌为合格,检出金黄色葡萄球菌为不合格。
五、铜绿假单胞菌1.目的:检测化妆品原料中是否存在铜绿假单胞菌,预防感染性疾病的发生。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行铜绿假单胞菌的测定。
3.判定标准:未检出铜绿假单胞菌为合格,检出铜绿假单胞菌为不合格。
六、沙门氏菌1.目的:检测化妆品原料中是否存在沙门氏菌,预防感染性疾病的发生。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行沙门氏菌的测定。
3.判定标准:未检出沙门氏菌为合格,检出沙门氏菌为不合格。
七、志贺氏菌1.目的:检测化妆品原料中是否存在志贺氏菌,预防感染性疾病的发生。
2.采样方法:随机取样,按照标准程序进行志贺氏菌的测定。
3.判定标准:未检出志贺氏菌为合格,检出志贺氏菌为不合格。
八、大肠埃希氏菌O157:H71.目的:检测化妆品原料中是否存在大肠埃希氏菌O157:H7,预防感染性疾病的发生。
化妆品卫生标准
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化妆品卫生标准化妆品卫生标准 GB 7916-87化妆品安全性评价程序和方法化妆品安全性评价程序和方法 GB 7919-87化妆品卫生化学标准检验方法化妆品卫生化学标准检验方法汞 GB 7917.1-87(及注解) 化妆品卫生化学标准检验方法砷 GB 7917.2-87(及注解) 化妆品卫生化学标准检验方法铅 GB 7917.3-87(及注解) 化妆品卫生化学标准检验方法甲醇 GB 7917.4-87(及注解)检验样品预处理方法测定无机成分的样品预处理测定有机成分的样品预处理化妆品禁用、限用等成分的检验方法pH值酸碱度汞砷铬镉氟化物铋甲醇苯酚、氢醌4-羟基苯磺酸锌巯基乙酸及其盐类氧化型染发剂中染料防腐剂防晒剂着色剂(色素)激素磺氨灭脓佛手柑茨烯内酯喷雾气体卵磷脂硬酯酰干草酸化妆品中维生素E的检验方法化妆品成品系统分析止汗和除臭产品头发定型剂冷烫产品指甲油香水和香气的分析化妆品微生物标准检验方法化妆品微生物标准检验方法总则及注解 GB 7918.1-87细菌总数测定的标准检验方法及注解 GB 7918.2-87粪大肠菌群标准检验方法及注解 GB 7918.3-87绿脓杆菌标准检验方法及注解 GB 7918.4-87金黄色葡萄球菌标准检验方法及注解 GB 7918.5-87化妆品中常见其它微生物的检验化妆品中霉菌和酵母菌的检验粉类化妆品中需氧芽孢菌和蜡状样芽孢杆菌的检验化妆品原料和生产环境中污染菌的检验化妆品的防腐及防腐效力试验化妆品诊断标准及其处理原则化妆品皮肤病诊断标准及处理原则总则 GB 17149.1-1997 化妆品接触性皮肤炎诊断标准及处理原则 GB 17149.2-1997 化妆品痤疮诊断标准及处理原则 GB 17149.3-1997化妆品毛发损害诊断标准及处理原则 GB 17149.4-1997化妆品甲损害诊断标准及处理原则 GB 17149.5-1997化妆品光感性皮炎诊断标准及处理原则 GB 17149.6-1997 化妆品皮肤色素异常诊断标准及处理原则 GB 17149.7-1997。
化妆品微生物检验及安全技术规范比较
![化妆品微生物检验及安全技术规范比较](https://img.taocdn.com/s3/m/e6febd371fb91a37f111f18583d049649a660e46.png)
最终结果判断
增菌培养
供试液的制备
书写检验 记录单
分离纯化
无菌落或无特征菌落
配培养基和稀释液
革兰染色、镜检→ 氧化酶试验 绿脓菌素试验 生化试验 硝酸盐还原试验 42℃生长试验 明胶液化试验
人员培训能力掌握的检验重要指标。
有条件可做视具体样品测试结果。
在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中,检测时不易洗脱下来,因此,需要验证检测方法的有效性。
推荐了解:
接种阳性菌计算回收率
未检出2天,检出3-4天
耐热大肠菌群 Thermotolerant coliform bacteria系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌,在44.5℃培养24h—48h能发酵乳糖产酸并产气。
方法比较
2007版化妆品卫生规范与2015版化妆品安全技术规范对比: 总则
总则重点
具有代表性。2.不少于2个包装单位的取样中共取10g或10mL。3.供检样品,应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂,在检验前不得打开,防止样品被污染。4.应置于室温阴凉干燥处,不要冷藏或冷冻。4.宜先取出部分样品做微生物检验。5.严格上微生物无复测一说。(可能的因素多),因此对微生物检验人员要求严格。6.生物安全开始重视。
★铜绿假单胞菌检查流程图
SCDLP培养基
十六烷三甲基溴化铵琼脂
36±1℃
18~24h
36±1℃
18~24h
特征菌落
灰白色、扁平、周围有水溶性蓝绿色素
镜检
十六烷三甲基溴化铵平板 SCDLP培养基 黄绿色菌膜 灰白色湿润 氧化酶试验 粉红/紫红色
绿脓菌素试验 盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色 硝酸盐还原产气试验 N2 明胶液化试验 明胶培养基(高层) 明胶液化
化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定 PDF
![化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定 PDF](https://img.taocdn.com/s3/m/77f518bf65ce050876321391.png)
化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定Standard methods of microbiological examination for determination of aerobic bacterial count 中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定UDC 668:576 .85.07GB7918.2-87Standard methods ofmicrobiological examination for cosmetics Standard plate countThe people's Republic of China National Standard for cosmeticsstandard methods of microbiological examination for UDC 668:576methods of microbiological examination for.85.07GB7918.287Standard cosmetics Standard plate count细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌,数量。
测定细菌总数可用来判明化妆品被细菌污染的程度,以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况,是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。
本标准采用标准平板计数法。
1 方法提要化妆品中污染的细菌种类不同,每种细菌都有它一定的生理物质性,培养时对营养要求,培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。
在实际工作中,不可能做到满足所有菌的要求,因此所测定的结果,只包括在本方法所使用的条件下(在卵磷脂、吐温80营养琼脂上,于37℃培养48h)生长的一群嗜中温的需氯及兼性厌氧的细菌总数。
2 培养基和试剂2.1 生理盐水:见GB 7918-87《化妆品微生物标准检验方法总则》。
2.2 卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基成分:蛋白胨 20g牛肉膏3g氯化钠 5g琼脂 15g卵磷脂 1g吐温80 7g蒸馏水 1000ml制法:先将卵磷脂加到少量蒸馏水中,加热溶解,加入吐温80将其他成分(除琼脂外)加到其余蒸馏水中,溶解。
化妆品霉菌与酵母菌检测方法
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作业文件版次A/0 页码1/1化妆品霉菌与酵母菌检测方法生效日期1 适用范围适用于化妆品厂霉菌与酵母菌数量检测方法。
参照GB7918《化妆品微生物标准检验方法总则》。
2 实验用具2.1实验用具:霉菌培养箱(28±1°C)、干燥箱、恒温水浴锅、高压灭菌锅、酒精喷壶、酒精灯、打火机、去离子水、棉签、500ml锥形瓶(带硅胶塞)、直径9cm培养皿、移液枪、1ml吸头、150ml 锥形瓶、酒精棉、生理盐水、电子称、量筒、记号笔、银子、药匙。
2. 2培养基与生理盐水虎红(孟加拉红)培养基生理盐水:氯化钠8. 5克,蒸懾水1000毫升。
3 实验准备:3.1培养基的配制:配制方法:孟加拉红(虎红)培养基称取粉末31.6克,加入蒸憎水或去离子水1L,搅拌加热至完全溶解分装三角瓶。
(具体参照购买的培养基说明书进行配制)。
3.2用具和培养基灭菌:将上述实验用具及培养基于121°C高压灭菌20分钟,冷却后待用。
4 样品制备:(制备顺序需要严格按如下标准操作,不能前后颠倒)4.1液体样品:水溶性的液体样品,可量取10ML加到90ML灭菌生理盐水中,如样品少于10ML,仍按10 倍稀释法进行。
如为5ML则加到45ML灭菌生理盐水,混匀后制成1:10稀释液。
油性液体样品,取样品10ML,先加5ML灭菌液体石蜡混匀,再加10ML灭菌吐温80,加入灭菌生理盐水75ML,制成1:10稀释液。
4.2 W霜类半固体状样品亲水性样品,称取10克,加来灭菌带玻璃珠加有90ML生理盐水的锥形瓶中,充分混匀,用其上清液作为1:10的稀释液。
疏水性样品,称取10克,放到灭菌的研钵中,加10ML灭菌液体石蜡,研磨成粘稠状,再加上10ML灭菌吐温,研磨待溶解后,加70ML灭菌生理盐水,制成1:10的稀释液。
4.3固体样品称取10克,加到灭菌生理盐水稀释瓶中,混匀,使其分散混悬后,取上清液作为1:10稀释液。
5 操作步骤:5.1用灭菌吸管吸取1:10稀释的检样2ML,分别注入到两个灭菌平皿内,每皿1ML。
化妆品微生物检测标准
![化妆品微生物检测标准](https://img.taocdn.com/s3/m/919fb1301611cc7931b765ce0508763231127483.png)
化妆品微生物检测标准化妆品是人们日常生活中不可或缺的一部分,而微生物污染是化妆品生产中一个不容忽视的问题。
微生物的存在可能会导致化妆品的变质,甚至对人体健康造成危害。
因此,制定和执行化妆品微生物检测标准至关重要。
首先,化妆品微生物检测标准应包括对微生物的种类和数量的要求。
常见的微生物种类包括大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等。
对于不同种类的化妆品,其微生物种类和数量的标准也有所不同。
比如,对于水基化妆品,其微生物种类和数量的要求可能会更为严格,因为水是微生物生长的良好环境。
因此,制定标准时需要充分考虑到不同种类化妆品的特点。
其次,化妆品微生物检测标准还应包括对微生物检测方法的要求。
目前,常见的微生物检测方法包括菌落总数检测、霉菌和酵母菌检测、大肠埃希氏菌检测等。
这些方法各有优劣,应根据化妆品的特点和实际情况选择合适的检测方法。
此外,还应规定检测的样品数量、检测的频率以及检测结果的评定标准等细节问题,以确保检测结果的准确性和可靠性。
最后,化妆品微生物检测标准还应包括对微生物检测实验室的要求。
实验室应具备一定的技术能力和设备条件,能够进行各种微生物检测方法,并且能够保证检测结果的准确性和可靠性。
此外,实验室还应建立健全的质量管理体系,确保检测过程的可追溯性和可控性。
在制定化妆品微生物检测标准时,应充分考虑到化妆品生产的实际情况和技术水平,避免标准过高导致生产成本的增加,也要避免标准过低导致产品质量无法保证。
同时,还应加强对生产企业的监督检查,确保其严格执行微生物检测标准,保障消费者的安全和权益。
综上所述,化妆品微生物检测标准对于保障化妆品质量和消费者健康至关重要。
只有制定科学合理的标准,并加强监督检查,才能有效地防止化妆品微生物污染问题的发生,为消费者提供安全放心的化妆品产品。
化妆品微生物检验标准
![化妆品微生物检验标准](https://img.taocdn.com/s3/m/838601c38662caaedd3383c4bb4cf7ec4afeb605.png)
化妆品微生物检验标准化妆品在现代社会中扮演着重要的角色,不仅用于美化外观,还有保养皮肤的功效。
然而,如果化妆品中存在微生物污染,可能会对使用者的健康造成潜在的威胁。
因此,制定和执行化妆品微生物检验标准是确保产品安全性、有效性和质量的关键。
一、什么是化妆品微生物检验标准是指制定和执行用于评估化妆品产品中微生物污染和控制的规范和方法。
这些标准通常由监管机构、行业组织和国际标准化组织确定。
标准的目的是为了保证化妆品的安全性,确保产品在生产、运输和使用过程中不会受到细菌、真菌和其他病原微生物的污染。
二、为什么需要化妆品作为与人体直接接触的产品,其微生物安全性非常重要。
微生物污染可能会导致使用者发生过敏反应、感染或其他健康问题。
此外,微生物的生长还可能导致产品质量恶化,出现异味或腐败现象。
因此,制定和执行化妆品微生物检验标准是确保产品安全、有效和高质量的关键。
三、化妆品微生物检验标准的内容化妆品微生物检验标准通常包括以下内容:1. 产品分类和适用范围:根据产品类型,将不同的化妆品划分为不同的类别。
每个类别都有相应的微生物检验标准适用范围。
2. 抽样和检验方法:确定在何种情况下进行抽样,并选择适当的检验方法。
常见的方法包括培养法、快速检测法和分子生物学技术。
3. 微生物指标:制定可接受的微生物指标,例如总菌落计数、霉菌和酵母菌计数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌等。
4. 检测限度:确定微生物指标的最大接受限度。
这些限度通常由相关法规或标准设定。
5. 产品评估:根据检验结果,对产品的微生物安全性进行评估,并采取相应的措施,如改进生产工艺、消灭细菌或重新设计包装。
6. 结果解释:描述如何解释检验结果,包括阳性、阴性和可接受范围的定义。
7. 工厂环境检验:确保生产过程中的卫生条件和环境符合微生物控制的要求,在工厂内进行定期检验。
四、化妆品微生物检验标准的执行和应用化妆品微生物检验标准的执行是由化妆品生产者和监管机构共同负责的。
化妆品中绿脓杆菌的检验与鉴定1
![化妆品中绿脓杆菌的检验与鉴定1](https://img.taocdn.com/s3/m/07318990bdeb19e8b8f67c1cfad6195f312be8af.png)
化妆品铜绿假单胞菌检验与鉴定若干问题的探讨摘要依照GB/T 7918.4—87标准对化妆品进行绿脓杆菌的检验,近期从不同类别的化妆品中检出四株铜绿假单胞菌及多株恶臭假单胞菌等假单胞菌。
本文对铜绿假单胞菌检验与鉴定过程中应用十六烷三甲基溴化铵和乙酰胺作为选择性分离培养基,采用微量管手工鉴定与API 20NE、VITEK生化鉴定仪器鉴定进行比较,对不同鉴定方法出现的情况进行了分析和讨论。
关键词铜绿假单胞鉴定分析Discussion of Detection and Identification of Paeudomonasaeruginosa in ComesticsAbstact According to Standards GB/T7918.4-87, we recently detected 4 Paeudomonas aeruginosa and several Pseudomonas putida in varied comestics. This article analysed the adoption of Cetrimide Agar and Acetamide Agar, comparing Synchron artificial identification and API 20NE as well as VITEK.Key words Paeudomonas aeruginosa Identification Analyisis1材料、仪器与方法1.1 材料、仪器样品来源:汕头口岸进出境的化妆品。
主要试剂:SCDLP液体培养基、十六烷三甲基溴化铵、乙酰胺等培养基,革兰氏染液等购自北京陆桥公司、绿脓杆菌微量生化鉴定管,购自广东环凯公司;氧化酶试剂、API 20NE 测试条、VITEK GN/GNI测试卡购自法国生物梅里埃公司。
仪器:VITEK-32型、VITEK2为法国生物梅里埃公司产品。
化妆品中微生物检测指标及相应国家标准
![化妆品中微生物检测指标及相应国家标准](https://img.taocdn.com/s3/m/fd424278dd88d0d232d46a90.png)
化妆品中微生物的检测指标及方法讨论
一、检测指标
1、2003年《化妆品卫生规范》
1.1、眼部、口唇等粘膜用化妆品以及婴儿和儿童用化转盘细菌总数<500cfu/ml(g) 1.2、其他化妆品细菌总数<1000cfu/ml(g)
1.3、每克或没毫升产品中不得检出粪大肠菌群,铜绿假单包菌,金黄色葡萄球菌。
1.4、化妆品中霉菌和酵母菌的总数<100cfu/ml(g)。
2、化妆品中检测项目及标准
1、菌落总数卫生部化妆品卫生规范(2002)
化妆品微生物标准检验方法GB7918.2-1987
2、粪大肠菌群卫生部化妆品卫生规范(2002)
化妆品微生物标准检验方法GB7918.3-1987
3、绿脓杆菌卫生部化妆品卫生规范(2002)
化妆品微生物标准检验方法GB7918.4-1987
4、金黄葡萄球菌卫生部化妆品卫生规范(2002)
化妆品微生物标准检验方法GB7918.5-1987
2、霉菌酵母菌数
卫生部化妆品卫生规范(2002)
三、化妆品检测的注意事项
1、样品前处理
亲水性+NS
疏水性+液状石蜡
2、中和防腐剂的抑菌作用+相应中和剂
3、培养基德高营养成分
附件:
1、特定菌的卫生学意义
粪大肠菌群——被粪便污染
铜绿假单胞菌——条件致病,化脓性感染
金黄色葡萄球菌——局部化脓病灶。
化妆品微生物标准检验方法总则的菌落计数及报告方法
![化妆品微生物标准检验方法总则的菌落计数及报告方法](https://img.taocdn.com/s3/m/cbfb6626bcd126fff7050b7d.png)
化妆品微生物标准检验方法总则的菌落计数及报告方法6 菌落计数方法先用肉眼观察,点数菌落数,然后再用放大5~10倍的放大镜检查,以防遗漏。
记下各平皿的菌落数后,求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时,该平皿不宜计数。
若片状菌落不到平皿中的一半,而其余一半中菌落数分布又很均匀,则可将此半个平皿菌落计数后乘以2,以代表全皿菌落数。
7 菌落计数及报告方法7.1 首先选取平均菌落数在30~300个之间的平皿,作为菌落总数测定的范围。
当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,即以该平皿菌落数乘其稀释倍数(见表1中例1)。
7.2 若有两个稀释度,其平均菌落数均在30~300个之间,则应求出两菌落总数之比值来决定,若其比值小于或等于2,应报告其平均数,若大于2则报告其中稀释度较低的平皿的菌落数(见表1中例2及例3)。
7.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)。
7.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30个,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1例5)。
7.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300个之间,其中一个稀释度大于300个,而相邻的另一稀释度小于30个时,则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例6)。
7.6 若所有的稀释度均无菌生长,报告数为每g或每mL小于10CFU。
7.7 菌落计数的报告,菌落数在10以内时,按实有数值报告之,大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,应以四舍五入法计算。
为了缩短数字后面零的个数,可用10的指数来表示(见表1报告方式栏)。
在报告菌落数为“不可计”时,应注明样品的稀释度。
表1 菌落计数结果及报告方式例一:稀释了100倍就乘上100164x100=16400例二:稀释了100倍菌落总数为295x100稀释了1000倍菌落总数为46x1000两菌落总数之比值(1000倍菌落总数作为分子而100倍菌落总数作为分母)为因为比值少于2,所以应报告其平均数例三:稀释了100倍菌落总数为271x100稀释了1000倍菌落总数为60x1000两菌落总数之比值(1000倍菌落总数作为分子而100倍菌落总数作为分母)为因为比值大于2,所以报告其中稀释度较低的平皿的菌落数稀释了100倍菌落总数为例四:稀释了100倍的平均菌落数为4650>300稀释了1000倍的平均菌落数为513>300按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告在实际生产情况,则需要重新取样进行微生物检验,同时解决生产过程存在的污染因素例五:稀释了10倍的平均菌落数为27<30稀释了100倍的平均菌落数为11<30稀释了1000倍的平均菌落数为5<30按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告27x10=270例六:稀释了100倍的平均菌落数为305接近300305x100=30500。
化妆品中微生物的控制指标和检测标准
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化妆品中微生物的控制指标和检测标准微生物对化妆品的污染,不仅影响产品本身的质量,而更严重的是它危及消费者的健康和安全。
因此世界各国极为重视,各国都制定了化妆品中微生物的卫生标准,将化妆品中微生物的污染状况作为产品的一个质量指标,以防止和控制微生物对化妆品的污染,这对提高化妆品的质量和保证化妆品的安全性具有重要的意义。
下面是yjbys 小编为大家带来的化妆品中微生物的控制指标和检测标准的知识,欢迎阅读。
化妆品中微生物的控制指标和检测标准(1)化妆品中微生物的控制指标关于化妆品中微生物的控制指标,世界上并无统一标准,各国都是依据本国的情况自己制定化妆品的微生物指标。
需要说明两点:①在各国关于化妆品中微生物控制指标的第一项是细菌总数指标,如我国规定在眼部、口唇、口腔粘膜用化妆品以及婴儿和儿童用化妆品细菌总数不得大于500 个/ml 或500 个/8,其他化妆品细菌总数不得大于1000 个/mi 或1000 个屯。
它是指在单位容量(m1)(或单位重量(g))中的细菌个数,这里讲的细菌计数单位是个。
而在实际检测化妆品的细菌总数时,活的细菌总数是通过对检测试样处理后,在一定条件下培养生长出来的细菌菌落形式单位(colony—formingunits,以cfu 表示)的个数。
菌落(colony)它是微生物细菌存在的一种特有形式,是指细菌在固体培养基上发育而形成的能被肉眼所识别的生长物,它是由数以万计的相同细菌聚积而成的,,故又有细菌集落之称。
所以菌落总数是指每g 或每m1 化妆品中所含的活菌能于固体培养基上,在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。
基于化妆品试样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在,因而在培养基平板上出现的菌。
化妆品微生物标指检验
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微生物指标检验的重要性
1 2 3
防止微生物污染
通过微生物指标检验,可以及时发现并控制化妆 品生产过程中的微生物污染,保障产品质量和消 费者安全。
评估产品性能
微生物指标检验可以反映产品的防腐效果,评估 产品的保质期和稳定性,为消费者选择合适的产 品提供依据。
保障公共卫生
对化妆品进行微生物指标检验可以有效预防和控 制由化妆品引起的微生物感染和传播,维护公共 卫生安全。
检验方法
02
按照国家或行业标准,采用适当的微生物培养、计数和鉴定方
法,对样品进行检验。
检验结果
03
经过检验,该品牌面膜的微生物指标符合国家或行业标准,未
发现致病菌和超标微生物。
案例二:某品牌护肤霜的微生物指标检验
检验目的
评估某品牌护肤霜的微生物指标 是否符合国家或行业标准,以确 保产品的安全性和有效性。
微生物指标检验标准
化妆品中微生物指标应符合 国家相关法规和标准的规定
。
1
对于不同类型的化妆品,如 护肤霜、面膜、口红等,其 微生物指标检验标准也有所
不同。
对于进口化妆品,应符合进 口国相关法规和标准的规定 。
对于特殊用途的化妆品,如 儿童用化妆品、孕妇用化妆 品等,其微生物指标检验标 准也需特别关注。
消费者在购买和使用化妆品时应关注产品微生物指标,选择符合标准 要求的合格产品。
化妆品行业应加强技术研发和创新,提高产品质量和安全水平,推动 行业健康发展。
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评估某品牌洗发水的微生物指标是否符合国 家或行业标准,以确保产品的安全性和有效 性。
检验结果
经过检验,该品牌洗发水的微生物指标符合 国家或行业标准,未发现致病菌和超标微生 物。
化妆品微生物检验标准
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化妆品微生物检验标准为了保障化妆品的安全性和稳定性,微生物检验是非常重要的一项工作。
化妆品微生物检验标准是指对化妆品中的微生物进行检测和评价的一系列规范和要求。
本文将从化妆品微生物检验的目的、方法和标准等方面进行详细介绍。
首先,化妆品微生物检验的目的是为了确保化妆品在生产、储存和使用过程中不会因微生物污染而产生安全隐患,同时也是为了保证化妆品的品质和稳定性。
微生物检验包括对细菌、酵母菌、霉菌等微生物的检测,以及对其数量和种类的评价。
通过微生物检验,可以及时发现和控制化妆品中的微生物污染,确保产品的安全性和稳定性。
其次,化妆品微生物检验的方法主要包括菌落总数检测、大肠菌群检测、真菌和酵母菌检测等。
菌落总数检测是通过将样品接种在富含营养物质的培养基上,培养一定时间后,观察并计数形成的菌落数量,从而评价样品中的微生物总数。
大肠菌群检测是通过特定的培养基和条件,筛选出大肠菌群中的细菌,并进行鉴定和计数。
真菌和酵母菌检测则是利用特定的培养基和条件,筛选出真菌和酵母菌,并进行鉴定和计数。
这些方法可以全面、准确地评价化妆品中微生物的数量和种类,为产品的安全性提供有力的保障。
此外,化妆品微生物检验的标准主要包括国家标准、行业标准和企业标准。
国家标准是指由国家相关部门颁布的,对化妆品微生物检验的方法、要求和限定值等进行规范的标准。
行业标准是指由行业协会或组织制定的,对化妆品微生物检验的具体要求和限定值等进行规范的标准。
企业标准是指由化妆品生产企业根据自身实际情况和要求制定的,对化妆品微生物检验的具体要求和限定值等进行规范的标准。
这些标准的制定和执行,可以有效地规范化妆品微生物检验的工作,保障产品的安全性和稳定性。
总之,化妆品微生物检验是保障化妆品安全性和稳定性的重要环节,其标准化和规范化对于化妆品行业的发展至关重要。
只有严格执行微生物检验标准,才能确保化妆品在生产、储存和使用过程中不会因微生物污染而产生安全隐患,同时也是为了保证化妆品的品质和稳定性。
化妆品微生物指标检验
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化妆品微生物指标检验化妆品微生物指标检验是对化妆品中微生物含量的检测,旨在评估化妆品是否符合卫生标准和质量要求。
其中包括常见的细菌、酵母菌和霉菌等微生物指标。
本文将以化妆品微生物指标检验为主题,从检验项目、方法和意义三个方面进行详细介绍。
首先,化妆品微生物指标检验的项目主要包括总菌落总数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、酵母菌和霉菌等。
其中,总菌落总数是指在标准培养条件下,在一定时间内形成的可见菌落的数量。
大肠菌群是指生活在大肠内的细菌,其检测可体现微生物是否来自于外界环境污染。
金黄色葡萄球菌常见于皮肤和粘膜的表面,其存在可能引发感染和过敏反应。
酵母菌和霉菌是一类真菌,其过高的含量会导致化妆品变质,并有可能产生有害物质。
其次,化妆品微生物指标检验的方法有多种,常用的有微生物计数法、缓冲液稀释法和PCR法等。
微生物计数法是采用培养基培养所需检验的微生物,然后通过观察和计数菌落数量来评估微生物含量。
缓冲液稀释法是将样品进行稀释后,分别接种于富含营养物质的培养基中,以评估微生物的增殖情况。
PCR法是一种快速、灵敏的检测方法,通过检测微生物的DNA或RNA来判断是否存在目标微生物。
最后,化妆品微生物指标检验的意义主要有以下几点。
首先,微生物指标检验可以对化妆品进行合规性评估,以确保化妆品的质量和安全性。
高含量的微生物可能会引起皮肤感染、过敏等问题,因此可通过检验结果对产品的使用风险进行评估。
其次,微生物指标检验可以帮助监控化妆品生产过程中的卫生控制,减少微生物在生产中的污染。
此外,化妆品微生物指标检验还可以为消费者提供选择化妆品的参考依据,降低质量问题带来的健康风险。
综上所述,化妆品微生物指标检验是对化妆品中微生物含量进行评估的重要手段。
通过检验项目、方法和意义的分析,可以更好地了解该检验的相关内容及其重要性。
化妆品企业应充分重视化妆品微生物指标检验,并通过科学的方法和技术,确保产品的质量和安全性。
化妆品微生物检验方法
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8.5 化妆品微生物检验方法化妆品中,特别是一些高级的护肤膏等含有蛋白质、氨基酸、维生素以及各种植物的提取液等营养成分较高的物质,为霉菌、细菌等微生物的滋生、繁殖提供了良好的生长条件,影响化妆品的质量和并危害人体健康。
在国外,许多国家所制定的化妆品微生物控制标准相当严格。
欧美一些国家要求化妆品的杂菌数每克(或每毫升)控制在(100~1000)个,不允许有致病菌。
我国药品微生物检验法规定,乳剂或外用液体每克(或每毫升)含杂菌数按品种不同控制在(500~1000)个。
在此,主要讨论化妆品微生物检验时样品的采集,细菌总数测定,粪大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌的测定。
8.5.1 化妆品微生物标准检验方法总则化妆品微生物标准检验方法总则按国家标准(GB 7918.1-87)执行,该总则提供了样品的采集及注意事项,供检样品的制备,不同类型的样品的检样制备的统一标准。
1.样品的采集及注意事项(1)所采集的样品,应具有代表性,一般视每批化妆品数量大小,随机抽取相应数量的包装单位。
检验时,应分别从两个包装单位以上的样品中共取10 g或10 mL;包装量小的样品,取样量可酌减。
(2)供检样品,应严格保持原有的包装状态。
容器不应有破裂,在检验前不得启开,以防再污染。
(3)接到样品后,应立即登记,编写检验序号,并按检验要求尽快检验。
如不能及时检验,样品应放在室温阴凉干燥处,不要冷藏或冷冻。
(4)若只有一个样品,而同时需做多种分析,如细菌、毒理、化学等,则宜先取出部分样品作细菌检验,再将剩余样品作其它分析。
(5)如检出粪大肠菌群或其它致病菌,自报告发出起该菌种及被检样品应保存一个月备查。
2.供检样品的制备(1)培养基和试剂1)生理盐水:称取8.5 g氯化钠溶解于1000 mL蒸馏水中,分装入加玻璃球的三角瓶中,每瓶90 mL,在0.1 MPa压强下高压灭菌20 min。
2)SCDLP液体培养基:配方如表8-14所示。
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一、总则General Principle1 范围本规范规定了化妆品微生物学检验总则。
本规范适用于化妆品样品的采集、保存、供检样品制备。
2 仪器和设备天平。
高压灭菌器。
振荡器。
三角瓶。
玻璃珠。
玻璃棒。
刻度吸管。
研钵。
均质器。
恒温水浴箱。
采样用具:不锈钢勺,剪刀,开罐器等。
3 培养基和试剂生理盐水成分:氯化钠8.5g蒸馏水加至1000 mL溶解后,分装到加玻璃珠的三角瓶内,每瓶90mL,(15 lb)20min高压灭菌。
SCDLP液体培养基成分:酪蛋白胨17g大豆蛋白胨3g氯化钠5g磷酸氢二钾 2.5g葡萄糖 2.5g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL制法:先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后,再与其它成分混合,加热溶解,调pH为~,分装,(15lb)20min高压灭菌。
注意振荡,使沉淀于底层的吐温80充分混合,冷却至25℃左右使用。
注:如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨,也可用多胨代替。
灭菌液体石蜡。
3.4灭菌吐温80。
4 样品的采集及注意事项所采集的样品,应具有代表性,一般视每批化妆品数量大小,随机抽取相应数量的包装单位。
检验时,应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。
包装量小于20g的样品,采样量应适量增加,其总量应大于16g。
供检验样品,应严格保持原有的包装状态,进口产品应为市售包装。
容器不应有破裂,在检验前不得打开,防止样品被污染。
接到样品后,应立即登记,编写检验序号,并按检验要求尽快检验。
如不能及时检验,样品应放在室温阴凉干燥处,不要冷藏或冷冻。
若只有一份样品而同时需做多种分析,如微生物、毒理、化学等,应先做微生物检验,再将剩余样品做其它分析。
在检验过程中,从打开包装到全部检验操作结束,均须防止微生物的再污染和扩散,所用采样用具、器皿及材料均应事先灭菌,全部操作应在无菌室内进行,或在相应条件下,按无菌操作规定进行。
5 供检样品的制备液体样品5.1.1 水溶性的液体样品,量取10mL加到90mL灭菌生理盐水中,混匀后,制成1:10检液。
5.1.2 油性液体样品,取样品10mL,先加5mL灭菌液体石蜡混匀,再加10mL灭菌的吐温80,在40℃~44℃水浴中振荡混合10min,加入灭菌的生理盐水75mL(在40℃~44℃水浴中预温),在40℃~44℃水浴中乳化,制成1:10的悬液。
膏、霜、乳剂半固体状样品5.2.1 亲水性的样品,称取10g,加到装有玻璃珠及90mL灭菌生理盐水的三角瓶中,充分振荡混匀,静置15min。
取其上清液作为1:10的检液。
5.2.2 疏水性样品,称取10g,放到灭菌的研钵中,加10mL灭菌液体石蜡,研磨成粘稠状,再加入10mL灭菌吐温80,研磨待溶解后,加70mL灭菌生理盐水,在40℃~44℃水浴中充分混合,制成1:10检液。
固体样品,称取10g,加到90mL灭菌生理盐水中,充分振荡混匀,使其分散混悬,静置后,取上清液作为1:10的检液。
如有均质器,上述水溶性膏、霜、粉剂等,可称10g样品加入90mL灭菌生理盐水,均质1min~2min;疏水性膏、霜及眉笔、口红等,称10g样品,加10mL灭菌液体石蜡,10mL灭菌吐温80,70mL灭菌生理盐水,均质3min~5min。
二、菌落总数Aerobic Bacterial Count1 范围本规范规定了化妆品中菌落总数的检验方法。
本规范适用于化妆品菌落总数的测定。
2 定义本规范采用下列定义菌落总数(aerobic bacterial count)是指化妆品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等),1g(1mL)检样中所含菌落的总数。
所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。
测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度,是对样品进行卫生学总评价的综合依据。
3 仪器和设备三角瓶。
量筒。
pH计或精密pH试纸。
高压灭茵器。
试管。
平皿:直径9cm。
刻度吸管: 10mL、2mL、1mL。
酒精灯。
恒温培养箱。
放大镜。
4 培养基和试剂生理盐水:见总则中。
卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基4.2.1 成分:蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL4.2.2 制法:先将卵磷脂加到少量蒸馏水中,加热溶解,加入吐温80,将其他成分(除琼脂外)加到其余的蒸馏水中,溶解。
加入已溶解的卵磷脂、吐温80,混匀,调pH值为~,加入琼脂,(15 lb)20min高压灭菌,储存于冷暗处备用。
%氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl terazolium chloride,TTC)成分: TTC 0.5g蒸馏水 100mL溶解后过滤,(15 lb)20min高压灭菌,装于棕色试剂瓶,置4℃冰箱备用。
5 操作步骤用灭菌吸管吸取1:10稀释的检液2mL,分别注入到两个灭菌平皿内,每皿1mL。
另取1mL注入到9mL灭菌生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面),更换一支吸管,并充分混匀,制成1:100检液。
吸取2mL,分别注入到两个灭菌平皿内,每皿1mL。
如样品含菌量高,还可再稀释成1:1000,1:10000,……等,每种稀释度应换1支吸管。
将融化并冷至45℃~50℃的卵磷脂吐温80营养琼脂培养基倾注到平皿内,每皿约15mL,随即转动平皿,使样品与培养基充分混合均匀,待琼脂凝固后,翻转平皿,置37℃培养箱内培养48h。
另取一个不加样品的灭菌空平皿,加入约15mL卵磷脂吐温80营养琼脂培养基,待琼脂凝固后,翻转平皿,置37℃培养箱内培养48h,为空白对照。
为便于区别化妆品中的颗粒与菌落,可在每100mL卵磷脂吐温80营养琼脂中加入%的TTC溶液,如有细菌存在,培养后菌落呈红色,而化妆品的颗粒颜色无变化。
6 菌落计数方法先用肉眼观察,点数菌落数,然后再用放大5~10倍的放大镜检查,以防遗漏。
记下各平皿的菌落数后,求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时,该平皿不宜计数。
若片状菌落不到平皿中的一半,而其余一半中菌落数分布又很均匀,则可将此半个平皿菌落计数后乘以2,以代表全皿菌落数。
7 菌落计数及报告方法首先选取平均菌落数在30~300个之间的平皿,作为菌落总数测定的范围。
当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,即以该平皿菌落数乘其稀释倍数(见表1中例1)。
若有两个稀释度,其平均菌落数均在30~300个之间,则应求出两菌落总数之比值来决定,若其比值小于或等于2,应报告其平均数,若大于2则报告其中稀释度较低的平皿的菌落数(见表1中例2及例3)。
若所有稀释度的平均菌落数均大于300个,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30个,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1例5)。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300个之间,其中一个稀释度大于300个,而相邻的另一稀释度小于30个时,则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例6)。
若所有的稀释度均无菌生长,报告数为每g或每mL小于10CFU。
菌落计数的报告,菌落数在10以内时,按实有数值报告之,大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,应以四舍五入法计算。
为了缩短数字后面零的个数,可用10的指数来表示(见表1报告方式栏)。
在报告菌落数为“不可计”时,应注明样品的稀释度。
表1 菌落计数结果及报告方式*CFU:菌落形成单位。
三、粪大肠菌群Fecal Coliforms1 范围本规范规定了化妆品中粪大肠菌群的检验方法。
本规范适用于化妆品中粪大肠菌群的检验。
2定义本规范采用下列定义粪大肠菌群(Fecal coliforms)系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌,在44.5℃培养24h~48h能发酵乳糖产酸并产气。
该菌来自人和温血动物粪便,是重要的卫生指示菌。
3 仪器恒温水浴箱或隔水式恒温箱:44℃±0.5℃。
温度计。
显微镜。
载玻片。
接种环。
电炉。
三角瓶。
试管。
小倒管。
pH计或pH试纸。
高压灭茵器。
刻度吸管:10mL、2mL、1mL。
平皿。
4 培养基和试剂双倍乳糖胆盐培养基成分:蛋白胨40g猪胆盐10g乳糖10g%溴甲酚紫水溶液5mL蒸馏水1000mL制法:将蛋白胨、胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中,调pH到,加入%溴甲酚紫水溶液5mL,混匀,分装试管(每支试管中加一个小倒管)。
(10 lb)20min灭菌。
伊红美兰(EMB)琼脂成分:蛋白胨10g乳糖10g磷酸氢二钾2g琼脂20g2%伊红水溶液20mL%美蓝水溶液13mL蒸馏水1000mL制法:先将琼脂加到900mL蒸馏水中,加热溶解,然后加入磷酸氢二钾、蛋白胨,混匀,使之溶解。
再以蒸馏水补足至1000mL。
校正pH值为~,分装于三角瓶内,(15 lb)15min高压灭菌备用。
临用时加入乳糖并加热融化琼脂。
冷至60℃左右无菌操作加入灭菌的伊红美蓝溶液,摇匀。
倾注平皿备用。
蛋白胨水(作靛基质试验用)成分:蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g氯化钠5g蒸馏水1000mL制法:将上述成分加热融化,调pH值为~,分装小试管,(15 lb)15min高压灭菌。
靛基质试剂柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中,然后缓慢加入浓盐酸25mL。
试验方法:接种细菌于蛋白胨水中,于44±0.5℃培养24h。
沿管壁加柯凡克试剂~,轻摇试管。
阳性者于试剂层显深玫瑰红色。
注:蛋白胨应含有丰富的色氨酸,每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。
革兰氏染色液:4.5.1 染液制备4.5.1.1 结晶紫染色液:结晶紫1g95%乙醇20mL1%草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。
4.5.1.2 革兰氏碘液:碘1g碘化钾2g蒸馏水加至300mL将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300mL。
4.5.1.3 脱色液:95%乙醇。
4.5.1.4 复染液:a. 沙黄复染液:沙黄0.25g95%乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。
b. 稀石碳酸复红液:称取碱性复红10g,研细,加95%乙醇100mL,放置过夜,滤纸过滤。
取该液10mL,加5%石碳酸水溶液90mL混合,即为石碳酸复红液。
再取此液10mL加水90mL,即为稀石碳酸复红液。
4.5.2 染色法4.5.2.1 将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。
4.5.2.2 滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。
4.5.2.3 滴加95%乙醇脱色,约30s,或将乙醇滴满整个涂片,立即倾去,再用乙醇滴满整个涂片,脱色10s,水洗。