实验 血涂片的制作与血细胞的观察

实验血涂片的制作与血细胞的观察

一、引言

血涂片显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对各种血液病的诊断有很大价值，但血涂片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论，因此，制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。

二、实验目的

掌握血涂片的制作，观察血细胞的形态及在不同环境下的反应。

三、实验器材与试剂

器材：显微镜、医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片、盖玻片等。

试剂：瑞氏染液、0.9%Nacl溶液、蒸馏水等。

四、实验步骤

1、消毒与采血

先按摩采血部位（人的指腹），使血流通畅，采血前用70%酒精消毒人的指腹，干燥后用采血针刺破指腹，使血液自然流出（第一滴血不要）。取干净载玻片，让血滴在离玻片一端中4-5mm处，注意手指持载玻片的边缘，不触电及表面，也不能使载玻片接触取血部位的皮肤。

2、推片

取一块边缘光滑的载玻片做推片。将其一端置于血滴前方，向后移动到接触血滴，使血液均匀分散在推片与载玻片呈30-40º角，向另一端平稳地推出（图1）。涂片推好后，迅速在空气中摇，使之自然干燥。

图1 推片示意图

3、染色

用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线，防止染液外溢。再将瑞氏染色液（伊红-亚甲基蓝）滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染30秒。加等量蒸馏水与染色液混合后再染5分钟。最后用蒸馏水把染色液洗掉，用吸水纸吸干，自然干燥后，即可观察。

4、封片

经染色的涂片完全干燥后，用中性树胶封片保存。

五、结果观察

显微镜下观察血涂片结果如图2所示。血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。

1、红细胞：

小而圆，没有细胞核，血涂片中最多，常被染成淡红色，细胞的边缘厚，中间薄，使细胞边缘的颜色比中间的深。

2、白细胞：

分为有粒白细胞和无粒白细胞，有粒白细胞包括嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞和嗜中性白细胞；无粒白细胞包括淋巴细胞和单核细胞。

（1）嗜酸性白细胞：

数量较少，但在血涂片中可以找到。细胞质中存在粗大的嗜酸性颗粒，胞质常被染成红色或玫瑰花色，细胞核分叶形，染成紫红色。

（2）嗜碱性白细胞：

数量最少，在血涂片中很难找到。细胞质中存在粗大的嗜碱性颗粒，胞质常被染成兰紫色，细胞核分叶形，染色较深，但常被粗大的兰紫色颗粒掩盖。

（3）嗜中性白细胞：

在有粒白细胞中，它的数量最多，很容易找到。细胞质染成淡红色，胞质内含有细小的颗粒，一般不易看清，细胞核为兰紫色，核分杆状、蹄形和分叶形。

（4）淋巴细胞：

在白细胞中数目是最多的，大小不等，可分为大淋巴细胞、中淋巴细胞、小淋巴细胞。大淋巴细胞较少，占中小淋巴细胞的1/4～1/18。细胞质所占的比例较小，但随细胞体积增大而相应增多，核周围细胞质，染成天兰色，细胞核大，圆形，染成紫兰色。

（5）单核细胞：

数目不多，是血细胞中最大的细胞。核为肾形或马蹄形，颜色比淋巴细胞较淡，细胞质为淡灰兰色。

3、血小板：

为不规则的细胞质小块或碎片，形状象雪花，在血小板中有细小的紫兰色颗粒。血小板常聚集在红细胞之间（注意：在观察过程中注意染料、渣子和细胞及血小板等的区别）。

图2 血涂片中血细胞观察结果

五、注意事项：

1、载玻片的清洗：新玻片有游离碱质，因此应用10%盐酸浸泡24小时，然后再清水和蒸

馏水清洗。2、使用玻璃片时只能手持边缘，切忌触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥，无油腻。3、血涂片制好后，立即固定染色，以免细胞溶解和发生退行性变。3、血膜必

须要干燥，以免在染色过程中容易脱落。5、染色时间应视具体情况而定。染色与染液浓度、室温高低、细胞多少有关。染色液浓度越淡，室温越低，细胞越多，所需要的染色时间越长，或适当增加染色液。6、染液不可过少，以防止蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗。7、冲洗时应用流水将染色液冲去，不能先倒掉染色液，以免染料沉着于血片上。

六、作业

说明红细胞在不同渗透环境中的变化情况并讨论原因。