巴氏染色方法
巴氏染色原理
巴氏染色原理
巴氏染色原理是由德国微生物学家巴氏（F. Loeffler）和日本细菌学家小野寺（K. Kitasato）于1884年共同提出的。
该原理是指用一种特定的染色方法，可以
将细菌染色成蓝色或紫色，而其他组织则保持无色或染成红色。
这种染色方法在细菌学和病原微生物学研究中得到了广泛的应用。
巴氏染色原理的核心是利用染色剂与细菌细胞壁的特定化学成分之间的亲和作用，通过染色剂的作用，使细菌细胞壁吸附染色剂，从而使细菌呈现出特定的颜色。
这种染色方法的原理简单，操作方便，且染色效果稳定，因此被广泛应用于细菌学实验室中。
巴氏染色原理的具体步骤包括，将细菌涂片加热固定，然后用甲苯或其他溶剂
处理，使细菌细胞壁透明，接着用染色剂如甲基蓝或结晶紫染色，最后用水洗去余染色剂，晾干即可观察。
通过这种染色方法，可以清晰地观察到细菌的形态、结构和分布情况。
巴氏染色原理的应用不仅局限于细菌学领域，还广泛应用于医学临床诊断中。
通过染色技术，医生可以观察到患者体液或组织中的细菌、病毒等微生物，从而进行疾病的诊断和治疗。
比如在结核病的诊断中，巴氏染色方法可以帮助医生观察到结核杆菌的存在，从而进行准确的诊断。
总的来说，巴氏染色原理是一种简单而有效的细胞染色方法，通过对细菌细胞
壁的特定化学成分的染色作用，使细菌呈现出特定的颜色，从而方便观察和研究。
这种染色方法在细菌学和医学领域都有着重要的应用，对于微生物学研究和临床诊断都具有重要意义。
巴氏染色技术要点
巴氏染色巴氏（Papanicolaou）染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。
其适用于上皮细胞及间皮组织的标本。
是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法。
该染色法不但具有显示细胞核结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。
对如何染好巴氏染色，笔者有以下几点体会，报告如下。
1 EA 36染液pH值的测试EA 36染液的酸碱度对巴氏染色的成功起着关键性作用，EA 36染液由伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等染料配成。
伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等属于酸性染料。
在溶媒中其发色团是负离子部分。
发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而使胞浆显蓝色、绿色、桔黄色或红色。
但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的pH值而改变的。
在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电）。
在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电）。
所以必须把染液pH值调至5.2为宜［1］。
EA 36染液pH的调节，可用石蕊试纸法，也可用酸度计测试。
当然用酸度计法最为准确。
但以上方法均比较麻烦，同时还要受到仪器设备的限制，不方便。
本文采用一种简单方便的方法。
即用10%磷钨酸及饱和碳酸锂溶液直接测试。
具体做法是，拿一张滤纸先滴少量染液于纸上，若滴染液处呈紫色，说明染液偏碱，则滴加少量10%磷钨酸。
若显绿色，说明染液偏酸，则滴加少量饱和碳酸锂。
并充分混匀。
直至染液滴在纸上既显绿色又有红色，颜色鲜艳为宜。
用此法测试染液pH同用石蕊试纸法测试一样，同样可获得满意的染色效果。
磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力。
同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂。
可中和分色及蓝化时可能留下的少量酸或碱。
保证染色达到理想效果。
2 分色分色或酸化，对染色效果也很重要。
分色目的是去掉胞浆中染上的多余的苏木素，使胞核着色显示特异性。
因此，经分色后的胞浆在镜下观察应无色为佳。
若胞浆中还残留有苏木素染料，会影响EA 36染液的着色。
巴氏染色快速方法
95％乙醇固定（15min）→80%，50%酒精中各30秒—清水冲洗多次→苏木素染液
（3-5min）→清水冲洗三次→盐酸酒精分化数秒—碳酸锂蓝化30秒→水洗1-2分钟—50%，80%酒精中各30秒—95％乙醇漂洗2分钟→橙黄染液（1-3分钟）→95％乙醇漂洗2次，各10-20秒→EA36（2-5分钟）→95％乙醇漂洗2-5秒→95％乙醇漂洗2-5秒→无水乙醇漂洗→无水乙醇（2min）→二甲苯（2min时间浸泡）→中性树胶封片
1、取自然干燥涂片。
或涂片未干时放入95％
酒精固定（湿固定）涂片。
2、加A液4-6滴，染6-10分钟（夏天6分钟、冬天10分钟），用75%酒精冲洗。
（如浸染：先用水冲去多余染料，在放入75%酒精中1-2分钟取出，滴去多余酒精
后放入B液）
3、加B液4-6滴，染2-4分钟（夏天2分
钟、冬天4分钟），水洗，镜检。
巴氏染色原理
巴氏染色原理
巴氏染色原理是一种用于细胞核的染色方法，由德国科学家巴氏于1882年首次提出。
该方法通过染色剂与细胞核中的染色质结合，使其显现出不同的颜色，从而帮助科研人员观察和研究细胞核的结构和功能。
巴氏染色原理在生物学、医学和生物技术领域具有重要的应用价值。
巴氏染色原理的基本步骤包括固定、染色和洗涤。
首先是固定，即利用甲醛等化学物质使细胞固定在载玻片上，保持其形态和结构不变。
接着是染色，通过染色剂如甲苯胺蓝、伊红等与细胞核中的染色质结合，使其显现出特定的颜色。
最后是洗涤，将载玻片在适当的溶液中洗涤，去除多余的染色剂，使细胞核清晰可见。
巴氏染色原理的应用范围非常广泛。
在医学领域，巴氏染色原理被用于研究疾病的发病机制和病理变化，如癌症细胞的形态学特征和染色体异常。
在生物技术领域，巴氏染色原理被应用于基因工程和细胞工程中，帮助科研人员观察和分析基因的表达和调控。
在生物学领域，巴氏染色原理被用于研究细胞核的结构和功能，如染色体的形态和数量。
巴氏染色原理的优点在于操作简便、成本低廉、结果清晰可见。
然而，也存在着一些局限性，如染色效果受到固定和染色条件的影响，染色质与其他细胞结构的区分度不高等。
总的来说，巴氏染色原理作为一种重要的细胞核染色方法，在生物学、医学和生物技术领域具有重要的应用价值。
随着科学技术的不断进步，相信巴氏染色原理将会在更多领域得到广泛应用，为人类健康和科学研究做出更大的贡献。
什么是巴氏染色巴氏染色的操作方法
什么是巴氏染色巴氏染色的操作方法巴氏染色有4个步骤，分别是固定、核染色、胞浆染色和透明，那么你对巴氏染色了解多少呢?以下是由店铺整理关于什么是巴氏染色的内容，希望大家喜欢!巴氏染色的操作方法及注意事项染色有4个步骤：1、固定;2、核染色;3、胞浆染色;4、透明。
主要达到以下要求：1、核的结构清晰;2、透明度高;3、分色恰当。
固定固定的目的细胞制片的迅速固定是制片过程中关键的一步，否则会影响细胞学诊断的准确性。
对于不同的标本需要不同的固定方法。
最为常用的固定方法是95%酒精作为固定液的湿固定法。
酒精作为一种脱水剂能够防止细胞内的酶捋蛋白质分解而自容，并凝固细胞内的物质如蛋白质、脂肪和糖类等，使其保持与组织生活相仿的成分，从而使细胞各部分，尤其核染色质易于着色。
对于巴氏染色来说，酒精固定最为重要的。
如果酒精浓度不足引起的固定不佳，可造成细胞的人为变化，并可导致假阳性或假阴性的诊断。
1、固定方法湿固定法：作为用95%酒精固定液固定的细胞学标本一定使用湿固定法。
制片制备完后，趁标本新鲜而又湿润时，立即放入盛有95%酒精的固定缸内。
制片在固定液内至少保持15-30min。
固定时间通常不超过1周。
这种制片染色后，颜色鲜艳，结构清晰。
如果细胞制片需要送至另一实验室或邮寄他处染色时，可以固定15min后，把制片取出后立即密封的容器中或者使用甘油防止制片干燥。
因为无论固定前或固定后的制片，如果发生干燥后都会影响染色的效果。
2、固定注意事项固定液的过滤：为了防止细胞污染，凡是使用过的固定液，必须过滤后才能再使用。
使用过长的固定液，必须用酒精相对密度计测定，酒精浓度低于90%时应该及时更换新液。
湿固定的重要性：标本再新鲜时及时固定时保证染色效果的重要因素。
如苏木素对细胞核的染色，巴氏染色中胞浆的特殊着色作用，均可因标本干燥后固定而大受影响。
制片标本的邮寄：标本再固定15min后取出，立即加甘油数滴于制片上，装入密封的小盒中。
巴氏染色流程及注意事项
巴氏染色流程及注意事项
以下是 8 条关于巴氏染色流程及注意事项的内容：
1. 嘿，你知道巴氏染色第一步是干啥不？那就是涂片的制作呀！就像建房子得先打牢地基一样重要呢！把样本均匀地涂在玻片上，可不能马虎哦！你想啊，要是涂得不好，后面不就全乱套啦？例子：你看这涂片，是不是得像精心雕琢的艺术品一样呀！
2. 接下来，固定可不能小看呀！就好比把东西紧紧抓住一样。
固定不好，后面染色就容易出问题哦！你说，这重要不重要呀？例子：要是不固定好，那颜色不就乱跑啦。
3. 染色啦染色啦！这可是关键的步骤哟！就像给画上色一样，得仔细把握好颜色的深浅和均匀度呀！你能想象颜色乱七八糟的样子吗？例子：看这颜色，得染得恰到好处才行呢。
4. 冲洗也得注意呀！冲得太狠或者不够都不行，就跟洗车似的，不能太粗暴也不能太温柔呀！不然会咋样呢？例子：哎呀，冲洗可得小心点，不能把好不容易染上的颜色给冲没了呀！
5. 脱水干燥也很关键呢！这就好像让东西变得干脆利落一样，可不能拖泥带水哟！要不然会影响效果呀！例子：这脱水干燥，得迅速干脆呀。
6. 透明也不能马虎呢！就像给东西罩上一层清晰的外衣一样。
做不好的话，前面的努力不就白费啦？例子：你想想，不透明好怎么能看清呀。
7. 封片也很重要哦！把染好的片子保护起来，就像给宝贝穿上保护衣一样。
这你能不重视吗？例子：封片封得好，才能好好保存呀。
8. 哎呀呀，整个巴氏染色流程就是这样啦，每个步骤都得认真对待呀！可千万别掉以轻心哦，不然就达不到好的效果啦！注意事项都记住了吗？一定要记住呀！
我的观点结论：巴氏染色需要仔细按照流程操作并注意各项事项，才能保证染色的质量和效果。
巴氏染色原理
巴氏染色原理巴氏染色原理是指在细胞学领域中，用来染色和观察细胞的一种特殊方法。
它是由德国生物学家巴氏发明的，因此得名。
巴氏染色原理在生物学研究中有着广泛的应用，尤其在细胞形态学和细胞遗传学研究中起着重要作用。
巴氏染色原理的基本原理是利用染色剂与细胞内的某些结构或成分发生特异性的化学结合，从而使这些结构或成分在显微镜下显现出不同的颜色和形态。
这种染色方法可以使细胞的各种结构和器官清晰可见，有利于观察和研究细胞的形态、结构和功能。
巴氏染色原理主要包括以下几个步骤，固定、染色、脱水、透明和封片。
首先是固定，即将待观察的细胞或组织用适当的方法固定在载玻片上，使其保持原有形态和结构。
然后是染色，利用染色剂对细胞进行染色，使细胞内的各种结构和器官显现出不同的颜色。
接着是脱水，将染色后的载玻片在酒精中逐渐脱水，使细胞内的水分逐渐被酒精取代。
然后是透明，将脱水后的载玻片在透明介质中浸泡，使细胞透明。
最后是封片，将载玻片用封片剂封好，以便长期保存和观察。
巴氏染色原理在细胞学和遗传学研究中有着重要的应用价值。
通过巴氏染色，可以观察和研究细胞的形态和结构，了解细胞的功能和代谢过程，揭示细胞的生理和生化特性。
同时，巴氏染色还可以用于观察染色体的形态和数量，研究细胞的遗传性状和变异规律，为遗传学研究提供重要依据。
除了在科学研究中的应用，巴氏染色原理还在医学诊断和临床治疗中有着重要的作用。
通过对患者组织和细胞的染色观察，可以帮助医生诊断疾病，判断病情和预后，指导临床治疗和药物选择。
总之，巴氏染色原理作为一种重要的细胞学染色方法，在生物学研究、医学诊断和临床治疗中发挥着重要的作用。
它为科学家研究细胞的形态和结构，揭示细胞的功能和遗传规律提供了重要工具，也为医生诊断疾病、指导治疗提供了重要依据。
巴氏染色原理的发展和应用将进一步推动细胞学和遗传学领域的发展，促进人类健康和生命科学的进步。
巴氏染色法的原理及结果判读
巴氏染色法的原理及结果判读巴氏染色法，这个名字听起来像是某个高深莫测的化学实验，其实它就是一招能让细菌乖乖现身的“魔法”。
想象一下，科学家们在实验室里忙得不可开交，手里拿着一根小刷子，像是在给细菌涂抹化妆品，其实他们是在为细菌“上妆”，把它们变得更加引人注目。
这样一来，我们就能一眼看出它们是好是坏了，真是方便极了。
说到原理，巴氏染色法其实就是通过不同的染料，把细菌染成不同的颜色。
你瞧，染料有的像春天的花朵一样鲜艳，有的则深沉得像秋天的落叶。
比如，细菌被染上了紫色，那就说明它们是革兰阳性菌，换句话说，它们就像是穿着紫色外套的小可爱。
而如果是红色的，那就不那么讨喜了，说明它们是革兰阴性菌。
这时候，不妨想象一下，紫色的菌儿在舞台上跳舞，红色的则在角落里默默呜咽，生怕被发现。
哎，说到这里，不得不提一下这个染色过程。
实验室里总是弥漫着各种奇怪的气味，仿佛是化学实验的调色板。
科学家们会把细菌涂抹在玻璃片上，然后用火焰轻轻烤烤，嘿，这一步就像是给细菌做个小烤箱烤熟的感觉。
加入染料，紫色的、红色的，调皮的细菌们就开始“洗澡”了。
洗完澡之后，水一冲，染料随之而去，留下的就是那一抹亮丽的色彩。
结果判读就是另一番风味了。
你瞧，显微镜就像是一扇魔法窗户，让我们能看到那些微小的细菌世界。
科学家们紧盯着显微镜，像是在看一场精彩的戏剧。
紫色的小家伙们个个活泼好动，像是在舞台上肆意挥洒，红色的则显得有些沉闷，仿佛在琢磨人生的哲学。
通过这些颜色的对比，科学家们能够判断细菌的种类和特性，真是了不起。
不过，巴氏染色法并不是一成不变的。
这些细菌也会耍点小花样，颜色不够明显，或许是染料不够给力，或者细菌太顽皮。
这时，科学家们就得耐心对待，重复实验，调试染料的浓度，像是在调配一杯完美的鸡尾酒。
只有这样，才能让细菌们的真实面貌展现无遗。
对于那些刚入门的小伙伴来说，巴氏染色法就像是一场有趣的游戏。
每一步都充满了惊喜，结果也让人忍不住想要分享。
巴氏染色原理及操作步骤
巴氏染色原理及操作步骤巴氏染色法就是脱落细胞染色中最好得染色方法.苏木素染液，细胞核内得染色质主要就是去氧核糖核酸（DNA，DNA得双螺旋结构中,两条链上得磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷得苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
分化：苏木素染色之后，用水洗去未结合在细胞上得染液，但就是在细胞核中结合过多得染料与细胞浆中吸附得染料必须用分化液 1 %盐酸酒精脱去，才能保证细胞核与细胞浆染色得分明，把这个过程称为染色得分化作用.因酸能破坏苏木素得醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。
蓝化：分化之后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色，所以分化之后用水洗去酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木精染上得细胞核变呈蓝色，称蓝化作用,一般多用自来水浸洗即可变蓝，也可用温水（50度温水最佳）变蓝。
E A50 染液得酸碱度对于巴氏染色得成功起着关键作用,EA50染液由伊红、亮绿、等染料配成。
伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团就是负离子部分，发色团可与蛋白质中带正电得氨基结合，从而就是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色，但蛋白质所带正负电荷得多少就是随溶液得PH值而改变得，在偏碱环境中,蛋白质得羧基游离增多（带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料得着色力，同时磷钨酸与碳酸锂还就是一对弱酸弱碱，实际上就是一对缓冲剂，可中与分化及蓝化时可能留下得少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织得标本,就是阴道脱落细胞检查中最常用得染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点•巴氏染色法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色；细菌:灰色；滴虫：淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞与淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色。
巴氏染液配制
巴氏染液配制1、苏木精：Harris苏木精：苏木精5g溶于无水乙醇50ml ，硫酸铝钾100g溶于蒸馏水1000ml ，混合后煮沸，待稍冷加入氧化汞2.5g，再煮沸2min，用前加冰醋酸20ml改良Gill氏半氧化苏木精：苏木精2g, 无水乙醇250ml, 硫酸铝17.6g,（可减半量）碘酸钠0.2g, 柠檬酸2g，甘油50ml, 蒸馏水750ml。
配制方法：将苏木精溶于无水乙醇，硫酸铝溶于蒸馏水，完全溶解后两液混合，依次加入碘酸钠，柠檬酸，甘油。
此配方特点：配制时勿须加温。
配后即可应用。
性能稳定，基本消除了过度氧化的苏木精结晶污染涂片的麻烦。
唯染色时间较长，须5～10min。
2、桔黄G6(orangeG6)：桔黄G 0.5g，溶于95%酒精100ml, 加磷钨15mg。
3、EA染液：EA36：由三种贮备液按比例混合而成：0.5%亮绿(light green)酒精溶液45ml，0.5%裨士麦褐(bismark brown)酒精溶液10ml，0.5%伊红Y(eosin yellowish)酒精溶液45ml，混合后，再加磷钨酸0.2g，饱和碳酸锂水溶液1滴。
EA50：3%亮绿水溶液10ml，纯甲醇250ml，20%伊红Y 水溶液20ml，冰醋酸20ml，磷钨酸2g (水溶后加入)，95%酒精700ml 。
染色方法1、经固定的涂片入水、苏木精染核、盐酸酒精分化、返兰同HE染色。
2、70%、80%、95%酒精逐级脱水各1min。
3桔黄G6 3～ 5 min 。
4、95%酒精二缸漂洗各 1 min 。
5、EA36或EA50 5 min 。
6、95%酒精二缸漂洗各 1 min 。
7、无水酒精二缸漂洗各 1 min 。
8、二甲苯二缸透明各 1 min 。
9、中性树胶封片。
染色结果核深蓝色, 鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞浆染绿色，表层不全角化细胞胞浆染粉红色, 完全角化细胞胞浆呈桔黄色, 红细胞染鲜红色，粘液染淡蓝色或粉红色。
HE染色和巴氏染色法
HE染⾊和巴⽒染⾊法HE染⾊和巴⽒染⾊法普通染⾊⼜称常规染⾊或HE（Haematoxylin and eosin）染⾊。
它是病理技术中最常⽤的⼀种⽅法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助⽅法，以达到准确，完整的病理诊断。
⼀、染⾊⽬的病理学的所有切⽚，都必须通过⼀种以上的染料，通过各种不同的⽅法，将切⽚中各种不同的物质，在不同染液的作⽤下，将其显⽰出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。
例如，HE染⾊，好质量的切⽚可以清晰地显⽰出许多不同的结构，细胞核着蓝⿊⾊，细胞浆着粉红⾊，软⾻着蓝⾊等。
清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因此，染⾊技术也是病理技术中的重要组成部分，必须不断地总结，⽅能提⾼。
如果染⾊不好，切⽚染⾊⼀团糟，红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊断，染⾊结果的好坏直接关系到诊断的准确性。
⼆、染⾊的作⽤1．化学作⽤：所有的染⾊液中，可把它们分为两种类型，⼀种为酸性，另⼀种为碱性。
酸性染料中有染⾊作⽤的为阴离⼦；碱性染料中有染⾊作⽤的为阳离⼦，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。
在染⾊时，细胞核中的酸性物质与苏⽊素染液中的阳离⼦发⽣作⽤，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离⼦发⽣作⽤，由于反应的部位不同，结果着⾊有异。
2．物理作⽤：在染⾊过程中，染液中的⾊素微粒⼦浸⼊到被染组织的粒⼦间隙内，此时，因受分⼦的引⼒作⽤，⾊素微粒⼦被吸附⽽着⾊。
由于各种组织有不同的吸附能⼒和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜⾊来。
⼀般来说，染⾊的学说还有许多，但说服⼒强的仅有上述两种。
但不管怎么样解释，实际上完成的每⼀种染⾊，都与上述两种学说分不开，它们的作⽤是相辅相成，同时存在的。
三、染⾊⽅法及步骤1．⼈⼯苏⽊素，伊红染⾊法（HE法）(1)切⽚浸⼊⼆甲苯中5-10min；(2)切⽚浸⼊⼆甲苯中5-10min；(3)100%酒精1min。
巴氏染色步骤之令狐文艳创作
巴氏染色步骤
1．
令狐文艳
2．将涂片置于95%酒精固定15分钟以上。
3．水洗后，用苏木素染液3—5分钟，直到染色明显为止后用清水冲洗。
4．置于稀碳酸锂溶液1—2分钟。
使涂片返蓝后用水冲洗。
5．放入95%乙醇中脱水1分钟，水洗甩干。
6．在橘黄G6染色3分钟，水洗。
7．依次放入80%、95%、95%乙醇中各10秒、脱水。
8．水洗后放入EA36染液中染色5分钟左右，至胞浆着色鲜明
为止，再水洗。
9．用95%酒精洗涤2—3次，再置于纯酒精中脱水
10．晾干或吹干后用树胶封片固定即可。
注：①一套染液可根据染色深浅情况更换，一般为3—5月更换一次
②更换染液时，苏木素及EA36染液可适量加入10ml冰醋酸，
③春冬两季及温度较低时，可适当延长染色时间。
快速染色法
苏木素色精染色液1-2min水洗晾干，苏木素分色液3s水洗晾
干，苏木素返蓝液5s水洗晾干，苏木素多彩染液1-2min,水洗吹干，封片。
HE染色和巴氏染色法
HE染色和巴氏染色法普通染色又称常规染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。
它是病理技术中最常用的一种方法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法，以达到准确，完整的病理诊断。
一、染色目的病理学的所有切片，都必须通过一种以上的染料，通过各种不同的方法，将切片中各种不同的物质，在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。
例如，HE染色，好质量的切片可以清晰地显示出许多不同的结构，细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，软骨着蓝色等。
清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因此，染色技术也是病理技术中的重要组成部分，必须不断地总结，方能提高。
如果染色不好，切片染色一团糟，红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊断，染色结果的好坏直接关系到诊断的准确性。
二、染色的作用1．化学作用：所有的染色液中，可把它们分为两种类型，一种为酸性，另一种为碱性。
酸性染料中有染色作用的为阴离子；碱性染料中有染色作用的为阳离子，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。
在染色时，细胞核中的酸性物质与苏木素染液中的阳离子发生作用，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离子发生作用，由于反应的部位不同，结果着色有异。
2．物理作用：在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此时，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而着色。
由于各种组织有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜色来。
一般来说，染色的学说还有许多，但说服力强的仅有上述两种。
但不管怎么样解释，实际上完成的每一种染色，都与上述两种学说分不开，它们的作用是相辅相成，同时存在的。
三、染色方法及步骤1．人工苏木素，伊红染色法（HE法）(1)切片浸入二甲苯中5-10min；(2)切片浸入二甲苯中5-10min；(3)100%酒精1min。
(4)100%酒精1min。
巴氏染液配制
巴氏染液配制巴氏染液配制1、苏木精：Harris苏木精：苏木精5g溶于无水乙醇50ml ，硫酸铝钾100g溶于蒸馏水1000ml ，混合后煮沸，待稍冷加入氧化汞2.5g，再煮沸2min，用前加冰醋酸20ml改良Gill氏半氧化苏木精：苏木精2g, 无水乙醇250ml, 硫酸铝17.6g,（可减半量）碘酸钠0.2g, 柠檬酸2g，甘油50ml, 蒸馏水750ml。
配制方法：将苏木精溶于无水乙醇，硫酸铝溶于蒸馏水，完全溶解后两液混合，依次加入碘酸钠，柠檬酸，甘油。
此配方特点：配制时勿须加温。
配后即可应用。
性能稳定，基本消除了过度氧化的苏木精结晶污染涂片的麻烦。
唯染色时间较长，须5～10min。
2、桔黄G6(orangeG6)：桔黄G 0.5g，溶于95%酒精100ml, 加磷钨15mg。
3、EA染液：EA36：由三种贮备液按比例混合而成：0.5%亮绿(light green)酒精溶液45ml，0.5%裨士麦褐(bismark brown)酒精溶液10ml，0.5%伊红Y(eosin yellowish)酒精溶液45ml，混合后，再加磷钨酸0.2g，饱和碳酸锂水溶液1滴。
EA50：3%亮绿水溶液10ml，纯甲醇250ml，20%伊红Y 水溶液20ml，冰醋酸20ml，磷钨酸2g (水溶后加入)，95%酒精700ml 。
染色方法1、经固定的涂片入水、苏木精染核、盐酸酒精分化、返兰同HE 染色。
2、70%、80%、95%酒精逐级脱水各1min。
3桔黄G6 3～5 min 。
4、95%酒精二缸漂洗各 1 min 。
5、EA36或EA50 5 min 。
6、95%酒精二缸漂洗各 1 min 。
7、无水酒精二缸漂洗各 1 min 。
8、二甲苯二缸透明各 1 min 。
9、中性树胶封片。
染色结果核深蓝色, 鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞浆染绿色，表层不全角化细胞胞浆染粉红色, 完全角化细胞胞浆呈桔黄色, 红细胞染鲜红色，粘液染淡蓝色或粉红色。
常用的五种细胞化学染色方法
常用的五种细胞化学染色方法一、细胞化学染色方法概述细胞化学染色是生物学和医学研究中常用的技术手段，通过对细胞内各种化学成分的染色，可以揭示细胞的结构、功能以及病变过程。
根据染色原理和目的的不同，细胞化学染色方法有多种分类。
本文将介绍五种常用的细胞化学染色方法，分别是：吉姆萨染色、瑞氏染色、巴氏染色、苏木素-伊红染色和福尔根染色。
二、常用的五种细胞化学染色方法1.吉姆萨染色吉姆萨染色是用于显示细胞内蛋白质和核糖体的方法。
该方法使用含有天青、伊红、酸性品红等染料的吉姆萨染液对细胞进行处理，使蛋白质和核糖体呈现紫红色或蓝紫色。
吉姆萨染色在免疫学和寄生虫学等领域有广泛应用。
2.瑞氏染色瑞氏染色是一种用于显示细胞内颗粒物质的染色方法，如细胞内酶、核酸等。
该方法使用含有伊红和天青染料的瑞氏染液对细胞进行处理，使颗粒物质呈现蓝紫色或红色。
瑞氏染色常用于病理学和血液学中的骨髓涂片检查。
3.巴氏染色巴氏染色是一种用于显示细胞内糖原的染色方法。
该方法使用含有苏丹III 或苏丹IV染料的巴氏染液对细胞进行处理，使糖原呈现红色或橙色。
巴氏染色在妇科和肿瘤学等领域有重要应用，常用于检查宫颈脱落细胞中的糖原含量。
4.苏木素-伊红染色苏木素-伊红染色是一种显示细胞核和细胞质的染色方法。
该方法使用含有苏木素和伊红染料的染液对细胞进行处理，使细胞核呈现蓝色，细胞质呈现红色或橘黄色。
苏木素-伊红染色在病理学中广泛用于组织切片的诊断。
5.福尔根染色福尔根染色是一种用于显示DNA的染色方法。
该方法使用含有品红和苦味酸的福尔根染液对细胞进行处理，使DNA呈现蓝色。
福尔根染色在遗传学和肿瘤学研究中常用作显示肿瘤细胞的DNA含量。
三、结论细胞化学染色在生物学和医学研究中具有重要价值，有助于揭示细胞的结构、功能和病变过程。
常用的五种细胞化学染色方法各有其特点和适用范围，可以根据研究目的和需求选择适合的方法。
这些常用的细胞化学染色方法在实验操作和试剂选择等方面有一定的标准和要求，熟练掌握这些方法有助于提高实验结果的可靠性和准确性。
巴氏染色步骤之欧阳德创编
巴氏染色步骤
1．
2．将涂片置于95%酒精固定15分钟以上。
3．水洗后，用苏木素染液3—5分钟，直到染色明显为止后
用清水冲洗。
4．置于稀碳酸锂溶液1—2分钟。
使涂片返蓝后用水冲洗。
5．放入95%乙醇中脱水1分钟，水洗甩干。
6．在橘黄G6染色3分钟，水洗。
7．依次放入80%、95%、95%乙醇中各10秒、脱水。
8．水洗后放入EA36染液中染色5分钟左右，至胞浆着色鲜明
为止，再水洗。
9．用95%酒精洗涤2—3次，再置于纯酒精中脱水10．晾干或吹干后用树胶封片固定即可。
注：①一套染液可根据染色深浅情况更换，一般为3—5月更换一次
②更换染液时，苏木素及EA36染液可适量加入10ml冰醋酸，
③春冬两季及温度较低时，可适当延长染色时间。
快速染色法
苏木素色精染色液12min水洗晾干，苏木素分色液3s 水洗晾干，苏木素返蓝液5s水洗晾干，苏木素多彩染液12min,水洗吹干，封片。
巴氏染色步骤
巴氏染色步骤
1．将涂片置于95%酒精固定15分钟以上。
2．水洗后，用苏木素染液3—5分钟，直到染色明显为止后用清水冲洗。
3．置于稀碳酸锂溶液1—2分钟。
使涂片返蓝后用水冲洗。
4．放入95%乙醇中脱水1分钟，水洗甩干。
5．在橘黄G6染色3分钟，水洗。
6．依次放入80%、95%、95%乙醇中各10秒、脱水。
7．水洗后放入EA36染液中染色5分钟左右，至胞浆着色鲜明为止，再水洗。
8．用95%酒精洗涤2—3次，再置于纯酒精中脱水
9．晾干或吹干后用树胶封片固定即可。
注：①一套染液可根据染色深浅情况更换，一般为3—5月更换一次
②更换染液时，苏木素及EA36染液可适量加入10ml冰醋酸，
③春冬两季及温度较低时，可适当延长染色时间。
快速染色法
苏木素色精染色液1-2min水洗晾干，苏木素分色液3s水洗晾干，苏木素返蓝液5s水洗晾干，苏木素多彩染液1-2min,水洗吹干，封片。
如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！
如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
巴氏染色液说明书
【产品名称】 巴氏染色液 【包装规格】
货号：DA0082
单瓶(盒)包装规格：100ml 、250ml 、500ml 、5000ml ；
套组(盒)包装规格：4×100ml/盒、4×250ml/盒、4×500ml/盒。
【预期用途】
主要用于对脱落细胞的组织细胞学染色。
【检验原理】
细胞学常规染色普遍使用巴氏(Papanicolaou)法，橘黄G 与EA36或EA50联合使用可将胞浆染成颜色鲜明的绿色、蓝色和粉色，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料的亲和力较强；而细胞浆则相反，它含有碱性物质和酸性染料的亲和力较大。
巴氏染色液利用这一特性对细胞进行多色性染色，细胞经染色后能清晰地显示细胞的结构，胞质透亮鲜丽，各种颗粒分明，细胞核染色质非常清楚，从而较容易发现异常细胞。
通过巴氏染色可反映出细胞在炎症刺激下和癌变后的形态学变化，对早期发现和诊断一些病变和肿瘤具有较重要意义。
【主要组成成分】
试剂组成
主要成分 l 、苏木素染色液
苏木素 2、1%盐酸乙醇分化液 盐酸、乙醇 3、橘黄G 染色液
橘黄G
4、EA50染色液或EA36染色液
EA50染色液：淡绿、伊红、磷钨酸、冰乙酸； EA36染色液：淡绿、伊红、磷钨酸
【储存条件及有效期】
5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】
新鲜标本涂片后，应尽快用95%乙醇固定，以避免细胞变形。
【检验方法】
1、固定：将细胞涂片置于95%乙醇中固定；
2、染色，按要求进行染色。
3、二甲苯透明，中性树脂封片，镜检。
【检验结果的解释】
【检验方法的局限
性】
仅供形态学初检观察染色使用。
【注意事项】
1、冬季气温较低时，苏木素染色液不易着色，可适当延长染色时间。
细胞核
蓝紫色或黑色 非角化细胞的胞质 淡蓝色或淡绿色 角化细胞的胞质 粉红或橘黄色 红细胞 鲜红色或橙红色 粘液
淡蓝或粉红色
2、橘黄G染色液染色时间不宜过长，且在乙醇中要尽量洗净多余的染色液，否则会影响EA50染色液或EA36染色液的着色。
3、请不要将新旧批号的EA50染色液或EA36染色液混合使用。
4、该试剂盒贮存时，尽量避免高温及光亮环境以免影响品质和效果
5、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。
6、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。
7、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
【基本信息】
备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司
住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房。