肝素钠含量检测操作规程
肝素钠效价检测方法
肝素钠效价检测方法试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。
4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。
估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。
4.2.2.3检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用。
取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。
并将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。
1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。
凝固程度标准：①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。
②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。
③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。
④1∕4凝固：少量溶液凝固。
⑤0凝固：溶液悟凝固现象。
若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。
)待检样品效价计算公式：4.2.2.4F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数4.2.2.5注意事项：4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。
检测血气前采血及抗凝要求
检测血气前采血及抗凝要求一、抗凝剂：1250单位/ml的肝素钠（或肝素锂)，配制方法：50ml生理盐水或注射用水加1支12500单位的肝素钠原液，混匀后无菌保存备用.二、采集标本要求：1、良好的抗凝:选用肝素钠或锂作为抗凝剂，确保全血中肝素最终浓度约为25 U/ml2、采集工具：若使用一次性针筒，需抽取稀释过的肝素溶液1 ml后，在一次推完抽取量的基础上,将针头朝下连续快速来回推2-3次后排空，进行标本采集,采血量至少1ml（建议使用2ML注射器采血）。
3、针刺深度：血液最好是自然流出,要保证血液以最快速度进入针筒,尽量减少血液与空气的接触时间。
4、排出气泡：血标本内是否混有空气或气泡，排出气泡。
5、密封：堵住针头，隔绝空气。
6、混匀:要求采血完成与检测前，均需将采血针手搓与反复颠倒混匀3～5来回，保证标本与抗凝剂混合充分。
7、立即测定：在采集标本后注明采集时间立即送检,如时间过长，则要求将标本置于冰水中运送。
8、在上机检测前弃去前两滴血.三、血气分析前的质量控制1、标本最好是动脉或动脉化毛细管标本：只有动脉血能真实反映血液中的氧合作用和酸碱状态，评价器官的氧和作用。
2、病人采血时的状态：pH、pCO2、pO2、SO2%都是不稳定参数,它们易受病人的状态变化而改变，下列状态是必须限制的：（1)病人的忧虑：要在心理上解决病人的忧虑，避免使用“动脉穿刺”，用各种方法使病人感到舒适，避免产生忧虑.由于害怕取样，有些病人呼吸急促，使pO2、pH增加pCO2减少；另一些病人瞬间憋气，引起pO2、pH减少，pCO2增加。
(2）病人的体位：在采血时病人必须处于稳定状态，以不卧床病人为例，取样前至少应躺3-5分钟。
3、调整呼吸机参数30分钟后进行血气分析。
四、抗凝血凝固有以下几个原因：1、血流不畅，造成未和抗凝剂混匀就已凝固。
2、抗凝剂量不够或失效。
3、血样和抗凝剂没有完全混合好4、压脉带使用时间过长，加速凝血反应，不易发现的微凝集会导致不正常五、结果偏差的几个原因：1、抗凝不当导致的血液凝固或出现小凝块。
肝素钠实验报告
一、实验目的1. 学习肝素钠的提取方法。
2. 掌握肝素钠的鉴定方法。
3. 了解肝素钠的药理作用和应用。
二、实验原理肝素钠是一种具有抗凝血作用的物质，主要由猪肠黏膜或牛肺中提取。
其分子结构中含有大量的硫酸基团，具有强大的抗凝血活性。
本实验采用酸碱沉淀法提取肝素钠，并通过硫酸铜法进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 猪肠黏膜- 醋酸- 硫酸铜- 碘化钾- 氢氧化钠- 乙醇- 无水硫酸钠- 蒸馏水2. 实验仪器：- 研钵- 烧杯- 烧瓶- 漏斗- 滤纸- 酒精灯- 铁架台- 移液管- 容量瓶- 滴定管- 恒温水浴锅四、实验步骤1. 提取肝素钠（1）将猪肠黏膜剪成小块，放入研钵中，加入适量的醋酸，研磨至糊状。
（2）将糊状物倒入烧杯中，加入适量的蒸馏水，煮沸30分钟。
（3）用滤纸过滤，收集滤液。
（4）将滤液加入适量的氢氧化钠，调节pH值至7-8，静置过夜。
（5）次日，用滤纸过滤，收集沉淀。
（6）将沉淀用乙醇洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，得到肝素钠粗制品。
2. 鉴定肝素钠（1）取一定量的肝素钠粗制品，加入适量的硫酸铜溶液，观察颜色变化。
（2）取一定量的肝素钠粗制品，加入适量的碘化钾溶液，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 提取结果经过提取，得到了肝素钠粗制品，颜色呈淡黄色。
2. 鉴定结果（1）加入硫酸铜溶液后，溶液呈蓝色，证明肝素钠中含有硫酸基团。
（2）加入碘化钾溶液后，溶液呈棕红色，进一步证明肝素钠中含有硫酸基团。
六、实验结论1. 成功提取了肝素钠粗制品。
2. 通过硫酸铜法和碘化钾法鉴定，证明肝素钠中含有硫酸基团。
七、实验讨论1. 在提取过程中，酸碱沉淀法能够有效提取肝素钠，但提取率较低。
2. 在鉴定过程中，硫酸铜法和碘化钾法能够快速、简便地鉴定肝素钠。
3. 肝素钠作为一种重要的抗凝血药物，在临床应用中具有重要意义。
八、实验总结本次实验通过学习肝素钠的提取与鉴定方法，掌握了肝素钠的基本知识。
在实验过程中，注意了操作细节，确保了实验结果的准确性。
肝素钠简介检测及生产精制工艺流程
溶液的澄清度与颜色 取本品0.50g ，加 水10ml溶解后，溶液应澄清无色；如显 浑 浊，照分光光度法（附录Ⅳ A），在 640nm 的波长处测定，吸收度不得大于 0.018；如 显色，与黄色1 号标准比色液 （附录Ⅸ A第一法）比较，不得更深。 吸收度 取本品，加水制成每1ml 中含 4mg 的溶液，照分光光度法（附录Ⅳ A） 测 定，在260nm 的波长处，其吸收度不 得大于0.20；在280nm 的波长处，其吸 收度不得大 于0.15。
五、肝素钠精制新工艺 本工艺采用酶解结合氧化法精制肝素， 在该过程中采用低温离心技术,解决在除 酸性蛋白过程中，粗品肝素钠中残留杂 蛋白在纯化过程中很难被除去的缺点。 在粗品肝素钠中加入胰蛋白酶对这些杂 蛋白进行酶解,再结合一次氧化除杂过程, 从而提高精品肝素钠的效价和效价回收 率。
1、工艺流程 2、溶解 称取适量肝素钠粗品加质量分数3%左右NaCI 溶液进行溶解。50℃水浴加热，用NaOH溶液 调pH至8.0静置2小时，过滤除不溶性杂质。 3、酶解法除蛋白 肝素在动物体内是以肝素-蛋白质复合物的形 式存在，通过酶解或盐解去除复合物的蛋白 质成分，游离肝素。但在实际生产过程中， 复合物的解离，蛋白质的除去是不完全的， 粗品中总存在数量不等的蛋白质。粗品肝素 钠必须经过精制，可以进一步去除粗品中残 存的结合蛋白质，不仅因杂蛋白的去除而提 高效价，而且因被“掩蔽”的肝素活性得到释 放而获得较高活性。
总氮量 取本品，照氮测定法（附录Ⅶ D第 二法）测定，按干燥品计算，含总氮量应 为1.3％ ～2.5 ％。 硫 取本品约25mg，精密称定，照氧瓶燃 烧法（附录Ⅶ C）进行有机破坏，选用 1000ml燃烧瓶，以浓过氧化氢溶液0.1ml 与水10ml为吸收液，俟生成的烟雾完全吸 收后 ，置冰浴中15分钟后，加热缓缓煮沸 2 分钟，冷却，加乙醇－醋酸铵缓冲液 (pH3.7)50 ml，乙醇30ml，0.1 ％茜素红溶 液0.3ml 为指示液，用高氯酸钡滴定液 (0.05mol/L) 滴 定至淡橙红色。每1ml高氯 酸钡滴定液(0.05mol/L) 相当于1.603mg 的S， 按干燥品计算，含 硫量不得少于10.0％。
肝素含量测定法
附录ⅨP肝素含量测定法(凝固法)本法系依据硫酸鱼精蛋白能中和抗凝剂肝素，从而影响血浆凝固时间的原理，测定供试品中肝素含量。
试剂（1）缺血小板人血浆无菌采集人全血于3.8%枸橼酸钠抗凝剂（9∶1)中，混匀，以每分钟1500转在4℃离心30分钟，用塑料注射器取上层2/3的血浆，以每分钟3500转在4℃离心30分钟，取上层2/3血浆，分装于塑料管中，每支3ml，保存-40℃备用。
（2）三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液（pH7.5）取三羟甲基氨基甲烷7.27g、氯化钠5.27g，加水溶解并稀释至1000ml(用盐酸调节pH至7.5)。
（3）脑磷脂混悬液冻干脑磷脂加水复溶，取适量，用生理氯化钠溶液稀释，稀释后的脑磷脂混悬液应使空白凝固时间在200～300秒。
（4）0.025 mol/L氯化钙溶液取氯化钙(CaCl2·2H2O)147g溶于1000ml水中,制成1mol/L氯化钙贮备液。
临用时,用水将1mol/L氯化钙贮备液稀释40倍。
（5）硫酸鱼精蛋白溶液取硫酸鱼精蛋白适量，用pH7.5 Tris缓冲液溶解并稀释成每1ml含1～20 mg的溶液。
供试品溶液的制备于每支含不同浓度的硫酸鱼精蛋白溶液10μl的塑料管中,分别加入按标示量复溶后的供试品0.5ml，混匀。
测定法在已含有缺血小板人血浆0.1ml的塑料管中，加入脑磷脂混悬液0.1ml，混匀，37℃放置1分钟,加供试品溶液0.1ml、已预热至37℃的0.025 mol/L氯化钙溶液0.1ml,记录凝固时间。
用Tris缓冲液（pH7.5）0.1ml替代供试品溶液，同法操作作空白对照。
空白对照凝固时间不低于200秒试验成立。
取凝固时间最短的供试品管，作为硫酸鱼精蛋白中和0.5ml供试品中的肝素量。
硫酸鱼精蛋白10μg中和1IU肝素。
例如凝固时间最短的供试品管中含硫酸鱼精蛋白30μg，则中和供试品0.5ml中的肝素量则为3IU,即供试品每1ml 含6IU肝素。
肝素钠原液操作方法
肝素钠原液操作方法
肝素钠原液是一种抗凝血药物，通常用于预防和治疗血栓性疾病。
下面是一种常见的肝素钠原液操作方法：
1. 准备工作：戴上手套和口罩，确保操作台面干净，并准备好所需的注射器和针头。
2. 检查药物：先检查肝素钠原液的包装是否完好，并查看是否过期。
如果包装有损坏或过期，应该选择另一瓶。
3. 消毒：用酒精棉球擦拭注射瓶的橡胶塞，使其表面干净。
4. 抽取药物：拿起一支注射器，先打开包装，确保注射器是无菌的。
然后，将针头从包装中取出，并将其固定在注射器上。
打开注射瓶盖，将针头插入注射瓶的橡胶塞中。
5. 抽取药物量：缓慢地抽取所需的肝素钠原液量。
一般情况下，可以根据医生的指示来抽取药物的剂量。
确保注射器中没有气泡。
6. 准备注射：小心地将注射器放置在干燥的操作台上，确保针头没有碰到任何非无菌的物品。
7. 注射：找到一个适合皮肤注射的部位，用酒精棉球擦拭该部位，然后用拇指和食指拉开皮肤。
将注射器的针头插入皮肤下方的组织中，然后缓慢地注射药物。
注射完成后，缓慢地将针头取出。
8. 处理：将已使用的注射器和针头放入专用的医疗垃圾容器中。
请注意，以上操作方法仅供参考，具体的操作方法可以根据医生的指示和药物说明进行调整。
在操作过程中，要始终注意个人安全和无菌操作的重要性。
如果您对操作方法有任何不确定，请咨询医生或药师的建议。
肝素检验细则
肝素钠检验项目附细则一、效价测定操作步骤：1. 标准品制备：精密称量肝素钠标准品数量(mg)×197u/mg=总单位数×0.93=美国羊血浆法总单位数（uspu ）÷8 uspu/ml=需要实际加入的蒸馏水毫升数。
精确加入蒸馏水。
分装封口备用。
2. 效价测定：2.1 样品的制备：精确称量待测肝素粗品40~50mg 放入容量瓶中，再向其中加入1mg:1ml 比例的生理盐水，至样品全部溶解。
吸取0.5ml 上述溶液至西林瓶中，再按照公式：估效价÷16-0.5计算出生理盐水量，加入西林瓶中。
2.2 样品的测定：依据估计血浆标准凝固点±10ul 、±20ul 分别向试管中加入标准品和待测样品，再向各试管中加入1ml 血浆和0.8ml 的氯化钙生理盐水。
充分混匀后置37℃水浴锅中孵育1小时。
结果按照公式计算：实际效价=凝固点样品21V 凝固点21V 标准品 ×估效价 结果要求：所需主要仪器及价格：电子天平 单价：1000（物理）~2000（电子）rmb 水浴锅 单价：800rmb二、比旋度测定当平面偏振光通过含有某些光学活性物质（如具有不对称碳原子的化合物）的液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的振动平面向左或向右旋转。
偏振光旋转的度数称为旋光度。
旋光度有右旋、左旋之分，偏振光向右旋转（顺时针方向）称为“右旋”，用符号“+”表示；偏振光向左旋转（逆时针方向）称为“左旋”，用符号“-”表示。
偏振光透过长1dm ，且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，在一定波长与温度下，测得的旋光度称为比旋度。
比旋度是旋光物质的重要物理常数，可以用来区别药物或检查药物的纯杂程度，也可用来测定含量。
物质的旋光度不仅与其化学结构有关，而且还和测定时溶液的浓度、光路长度以及测定时的温度和偏振光的波长有关。
旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面：1．仪器旋光计：《中国药典》规定，应使用读数至0.01。
肝素钠含量检测操作规程
肝素钠含量检测操作规程肝素钠含量检验操作规程1范围1.1适用于肝素钠生产车间过程控制中各控制点肝素钠含量的检测。
2定义2.1肝素钠化验指对肝素效价的检测过程。
3参考《美国药典》4职责4.1相应职责由车间化验员承担。
5操作程序5.1仪器、用具与试剂5.1.1恒温水浴锅5.1.2试管架5.1.310ml具塞试管5.1.4100ul或250ul微量进样器5.1.510ml刻度吸管5.1.62ml刻度吸管5.1.71ml可调式加液器5.1.820ml带塞样瓶5.1.90.9%氯化钠溶液5.1.100.25%氯化钙溶液5.1.11经过标定的绵羊血浆5.1.128.0u/ml肝素钠标准溶液5.1.13计时器5.2操作步骤5.2.1取样5.2.1.1根据车间生产实际，一般酶解液、洗涤液、沉淀废液取样量为8±2ml，吸附废液为20±2ml。
特殊情况可适当多取，取样要做到均匀有代表性。
5.2.2样品检测5.2.2.1根据实际情况将试管摆放在试管架上。
5.2.2.2用100ul微量进样器取8.0u/ml肝素标准溶液，加标准品之前，用标准液冲洗进样器两次，根据标定的血浆灵敏度n，分别按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入一排5支10ml具塞试管中，作为标准溶液的浓度梯度。
5.2.2.3.1酶解液、洗涤液、沉淀废液进样：用同一个进样器取供试液，取之前先用供试液将进样器冲洗三次，然后再按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
5.2.2.3.2吸附废液进样：用2ml刻度吸管取供试液，取之前先用供试液将刻度吸管冲洗三次，然后再按600ul、800ul、1000ul、1200ul、1400ul进样量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
加样时要非常精确，不能有气泡产生；这一步是本试验的关键步骤。
肝素钠效价方法
肝素钠效价方法2. 1 羊血浆的制备取冷冻贮藏的绵羊血浆,置于不超过37 ℃的水浴融化,以脱脂棉过滤至清洁干燥的玻瓶中备用。
取血浆1 mL 置试管内,加入0. 25 %氯化钙溶液0. 8mL ,混匀,在(37 ±1) ℃水浴中保温,若在5 min 内凝结,则血浆可用于实验。
2. 2 标准品溶液的制备取肝素钠标准品(204 u/ mL) 适量,用煮沸放冷的纯化水稀释至100 u/ mL ,置4 ℃冷藏备用。
临用前用生理盐水精确稀释至7 u/ mL 。
2. 3 供试品溶液的制备称取肝素钠原料或量取肝素钠注射液适量,按估计效价用生理盐水稀释至与标准溶液相当的效价浓度。
2. 4 血浆半凝固度剂量(V1/ 2) 的测定取具塞试管3 支,分别于各试管中加入梯度剂量(170 ,200 ,230μL) 的标准溶液,再按顺序准确加入血浆1. 0 mL ,0. 25 %氯化钙溶液0. 8 mL ,立即加塞,倒置混合3 次,置(37 ±0. 5) ℃恒温水浴中保温,准确记录1 min ,判断每管凝结程度,结果判定V1/ 2在200μL 左右。
以此为中点,左右各以10μL 为一级,同法操作,测定V1/ 2为190μL 。
2. 5 肝素钠及其制剂的效价测定取具塞试管若干支,分别于各试管中加入梯度剂量的标准溶液和供试品溶液,以190μL 为中点,每隔10μL 为一级,同2. 3 项下方法操作,记录每管凝结程度,按式(1) 计算。
供试品的效价单位= V std ×C std ×VV sam ×W sam(1)式中:V std. 标准品1/ 2 凝固度的肝素加入体积(μL) ;C std. 标准品溶液的浓度(u/ mL) ; V sam. 供试品1/ 2 凝固度时的加入体积(μL) ;W sam. 供试品称取的重量(mg) ; V. 测定样品的总体积(mL)。
肝素钠的检测方法
肝素钠的检测方法德晟肝素钠检测方法如下：一．效价F：（标准≥150IU/mg），环境温度要求20~30℃。
F=标品微升数*预估效价/样品微升数1.1试剂：1羊血浆（冷冻保存，使用时室温解冻，过滤）28IU/mg肝素钠标准品30.9%生理羊水：9g氯化钠（精确至0.01g）溶解于100ml去离子水中，并定容至1000ml，待用。
40.25%氯化钙溶液：用0.9%生理盐水配制，取1.25gCaCl2（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至500ml，待用。
58%柠檬酸钠溶液：用0.9%生理盐水配制，取20g柠檬酸钠（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至250ml，待用。
1.2测定8%柠檬酸钠溶液用量：取3支试管分1、2、3，分别加入标准品溶液110ul，再依次加入8%柠檬酸钠溶液10ul、20ul、30ul，→分别加入0.25%氯化钙溶液0.8ml，加入过滤好的羊血浆1ml，摇匀，置于37℃水浴中10min，观察凝固情况，取半凝固管的柠檬酸钠量xul作为后续的加量标准。
2.1待测品配制：M=20/样品预估效价（g）称取Mg待测样品（精确至0.0001g），溶解于生理盐水中，并定容至100ml，取溶液2ml溶液溶解定容至50ml，取5ml样品溶液于试管中剩余样液冷藏保存。
2.2测定：标准管：取10支试管分别加标品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。
待测管：取10支试管分别加样品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。
二．PH值精确称取0.4g样品（精确至0.01g）溶于40ml去离子水中，测定其PH值，记录室温，湿度。
肝素钠测定数据以及标准曲线
肝素钠的提取与检测摘要本实验主要是对肝素钠提取工艺的研究。
对国内外肝素钠的提取和纯化方法进行研究和分析，建立以牛内脏（肝、肺、心）为原料，采用盐解、离子交换的方式与乙醇沉淀相结合提取肝素钠。
利用天青A染色法检测肝素钠的效价，测定波长是505nm，与标准曲线对比可得到样品中肝素钠的效价。
利用浓硫酸氧化法，在波长为298nm处的吸光度来确定肝素钠的浓度。
利用双缩脲法，在波长为540nm处的吸光度来确定蛋白质的含量。
试验测得肝素钠的效价平均值为139.483U/mg，肝素钠的浓度平均值为200.8752mg/kg，去除蛋白质效果良好，均在99%以上。
关键词：肝素钠，盐解，树脂，天青A，纯化，蛋白质1.1研究背景和意义1.1.1研究背景肝素钠又称肝素，是重要的生物药品，作为天然的抗凝血物质而受到世界各国的重视。
我国是世界上肝素钠主要出口国之一，但是出口产品以低效价的粗品肝素为主。
肝素广泛分布在哺乳动物的组织中，如肝、肺、肠粘膜、心、脾、肾、胸腺、胎盘、肌肉和血液中都有存在。
肝素在体内多以与蛋白质结合以糖蛋白复合物的形式存在[1]。
这种复合物没有抗凝血活性，但在去除蛋白质后，这种活性逐渐表现出来。
肝素具有强抗凝作用，是防治深层静脉血栓形成等血栓栓塞性疾病的首选药物，随着研究的深入，人们发现肝素不但有抗凝、抗血栓形成和调整血脂的作用，还有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种生物学功能。
中国具有丰富的畜产品副产物资源，但我国生产的肝素产品效价低，提取率低的问题很突出，这种情况下，只有提出肝素提取纯化新工艺，才能提高畜产品加工副产物的附加值，拓宽利用领域，增加国民收入，提高中国在国际上的地位。
1.1.2研究意义肝素主要分布于哺乳动物的肺、肝、小肠粘膜细胞内。
目前，国内外制取肝素的原料多以猪小肠粘膜、牛肺、猪肺为主，在提取工艺中都必须经过肝素蛋白质复合物的提取、肝素蛋白质复合物的分解和粗品肝素的精制三个过程。
国内每年猪牛屠宰量极大，副产物产量极高，但是目前利用率却很低。
人体血样中肝素钠含量的测定
缓冲溶液 的体积 为 ２ ｍ ． Ｌ时， ０ 其吸光度差值最大 开始增
大， 因此 表 明肝 素钠 和 甲基 红 的结 合 反应 最 完 全 。
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收 稿 日期 ：２ ０ ．８ ２ ０ ７０ ． ７
基 金项 目：四川省教 育厅青年基金资助项 目（０ ６ ０ １ ２０Ｂ ５ ） 作者简 介：郭小群（９ ２ ）女 ， １７ ． ， 四川仁 寿人 ， 讲师 ， 硕士生， 主要从 事于化 学方面的研究。
分） Ｈ 一 Ｄ型酸度计（ ； Ｓ３ ｐ 中国上海武宁路雷磁仪器厂） 。
试 剂 １ ｇ（ ５Ｕ ・ ｇ）的 肝 素 钠 （ ｅａ ｎ Ｈ ｐ ． １ Ｉ ｍ Ｏ ３ Ｈ ｐｒ ， ｅ ， ｉ １５Ｕｍ ， 都 市 科 龙 化 工 试 剂 厂 ） ￣冰 箱 保 存 ， 用 ３ Ｉ．ｇ 成 ，Ｃ ４ 使 时再 进 行配 置 、 稀释 。 素 钠 ：． １ ｌ－ ｍ １ 一 甲基红 肝 ０ ０ｘＯ３ ｏＬ ； Ｏ ．
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第２ １卷 第 ２期
２０ ０ ８年 ４ 月
四川理 工 学 院学 报 （ 自然 科 学版 ）
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Ｖ０ ．ｌＮｏ２ １２ ．
Ｓ Ｉ ＮＣ ＆ Ｅ ＧＩ Ｅ Ｒ ＮＧ（ Ｔ Ａ Ｃ Ｅ Ｅ Ｅ ＴＯＮ） ＣＥ Ｅ Ｎ Ｎ Ｅ Ｉ ＮＡ ＵＲ Ｌ Ｓ Ｉ ＮＣ ＤＩＩ
BS2000标准操作规程（Ⅰ）
BS2000标准操作规程（Ⅰ）标准操作规程1⽬的：提供公司肝素效价计算软件BS2000的标准操作规程。
2范围：本公司按照《中国药典》（2010版）附录ⅩⅣ⽣物检定统计法进⾏肝素Ch. P.效价的计算。
同时，本公司也按照EP7中5.3部分“⽣物分析和测试的统计学分析”进⾏EP效价的计算。
本操作规程提供的操作规程可以将BS2000⽤于Ch. P.和EP效价的计算（⽤于EP效价计算时需要Excel的补充计算）。
3责任者：3.1 QC实验员- 按照本操作规程进⾏操作；- 对出现的异常报告QC负责⼈。
3.2 QC负责⼈- 确保软件的验证状态（按照药典进⾏更新）。
4规程4.1打开软件4.1.1 打开计算机主机和显⽰屏电源，使其进⼊Windows操作界⾯。
4.1.2 打开计算双击“BS2000.exe”，出现如下界⾯，进⼊BS2000计算⼯作站。
4.2 基本操作4.2.1 中国药典肝素效价计算按“量反应平⾏线测定法”，使⽤（3,3）或者（4,4）法进⾏计算。
这⾥以（3,3）法为例。
4.2.1.1选择“量反应平⾏线 3,3法”，点击“下⼀步”。
⽰效价，T⼤剂量：样品的最⼤剂量，即加⼊反应体系的样品剂量；S⼤剂量：加⼊反应体系的标准品的最⼤剂量，剂间⽐：⾼中低三者的剂量⽐值。
接着将实验数据输⼊表格中，SL、SM、SH分别为标准品的低中⾼剂量下的凝⾎时间，⽽TL、TM、TH 为样品的低中⾼剂量下的凝⾎时间。
输⼊数据之后，进⾏复核。
点击“下⼀步”。
4.2.1.2 选择“对数转换（lg10）”，点击“下⼀步”。
得到对数转换后的数据，再点击“下⼀步”。
选择“随机区组”，点击“下⼀步”。
即可得到结果，如下图所⽰。
4.2.1.3 数据分析和打印可靠性测验中各参数的标准如下：当以上参数符合要求时，所得的效价和可置信范围有效。
选择菜单中的“⽂件”-“打印”，打印报告。
4.2.2 EP效价的计算EP效价的计算可参照4.2.2.1⾄4.2.1.2得到Ch.P.效价的计算结果后打开TDV公司提供（按照欧洲药典⽣物统计效价计算公式编写）的Excel表，将经过对数转换的SL、SM、SH、TL、TM、TH(3.3法)或者S1、S2、S3、S4、T1、T2、T3、T4(4.4法)填⼊Excel表中黄⾊部分。
肝素钠效价检测方法（DOC）
肝素钠效价检测方法试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。
4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。
估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。
4.2.2.3检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用。
取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。
并将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。
1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。
凝固程度标准：①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。
②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。
③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。
④1∕4凝固：少量溶液凝固。
⑤0凝固：溶液悟凝固现象。
若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。
)待检样品效价计算公式：4.2.2.4F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数4.2.2.5注意事项：4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。
肝素钠测定数据以及标准曲线
肝素钠的提取与检测摘要本实验主要是对肝素钠提取工艺的研究。
对国内外肝素钠的提取和纯化方法进行研究和分析，建立以牛内脏（肝、肺、心）为原料，采用盐解、离子交换的方式与乙醇沉淀相结合提取肝素钠。
利用天青A染色法检测肝素钠的效价，测定波长是505nm，与标准曲线对比可得到样品中肝素钠的效价。
利用浓硫酸氧化法，在波长为298nm处的吸光度来确定肝素钠的浓度。
利用双缩脲法，在波长为540nm处的吸光度来确定蛋白质的含量。
试验测得肝素钠的效价平均值为139.483U/mg，肝素钠的浓度平均值为200.8752mg/kg，去除蛋白质效果良好，均在99%以上。
关键词：肝素钠，盐解，树脂，天青A，纯化，蛋白质1.1研究背景和意义1.1.1研究背景肝素钠又称肝素，是重要的生物药品，作为天然的抗凝血物质而受到世界各国的重视。
我国是世界上肝素钠主要出口国之一，但是出口产品以低效价的粗品肝素为主。
肝素广泛分布在哺乳动物的组织中，如肝、肺、肠粘膜、心、脾、肾、胸腺、胎盘、肌肉和血液中都有存在。
肝素在体内多以与蛋白质结合以糖蛋白复合物的形式存在[1]。
这种复合物没有抗凝血活性，但在去除蛋白质后，这种活性逐渐表现出来。
肝素具有强抗凝作用，是防治深层静脉血栓形成等血栓栓塞性疾病的首选药物，随着研究的深入，人们发现肝素不但有抗凝、抗血栓形成和调整血脂的作用，还有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种生物学功能。
中国具有丰富的畜产品副产物资源，但我国生产的肝素产品效价低，提取率低的问题很突出，这种情况下，只有提出肝素提取纯化新工艺，才能提高畜产品加工副产物的附加值，拓宽利用领域，增加国民收入，提高中国在国际上的地位。
1.1.2研究意义肝素主要分布于哺乳动物的肺、肝、小肠粘膜细胞内。
目前，国内外制取肝素的原料多以猪小肠粘膜、牛肺、猪肺为主，在提取工艺中都必须经过肝素蛋白质复合物的提取、肝素蛋白质复合物的分解和粗品肝素的精制三个过程。
国内每年猪牛屠宰量极大，副产物产量极高，但是目前利用率却很低。
肝素钠注射液检验操作规程_概述说明以及解释
肝素钠注射液检验操作规程概述说明以及解释1. 引言：1.1 概述肝素钠注射液是一种常用的抗凝血剂，广泛应用于临床医学中。
其作用是通过抑制凝血过程中的凝血酶形成，防止血栓的生成和扩展。
为了确保肝素钠注射液的质量和安全性，需要对其进行检验操作规程的制定与执行。
1.2 文章结构本文主要分为引言、肝素钠注射液检验操作规程的重要性、内容与要点、执行中常见问题及解决方案以及结论五个部分。
通过这些内容的阐述，旨在全面介绍肝素钠注射液检验操作规程，并提出相应建议和措施。
1.3 目的本文旨在概述肝素钠注射液检验操作规程并解释其重要性。
通过明确检验操作规程的意义与价值，强调制定该规程所带来的实际效益。
同时，也将介绍操作规程所包含的内容与要点，以及执行过程中可能遇到的问题和对应解决方案。
最后，总结表达对该操作规程的完善与推广建议，为相关领域的从业人员提供参考。
2. 肝素钠注射液检验操作规程的重要性：2.1 肝素钠注射液的用途和作用：肝素钠注射液是一种常用的抗凝血药物，通常用于预防和治疗血栓性疾病，如深静脉血栓、肺栓塞等。
它通过抑制凝血酶的活性，降低凝血过程中纤溶酶原被激活并导致纤维蛋白降解产物析出，从而发挥抗凝作用。
由于肝素钠注射液的应用广泛，其质量和安全性至关重要。
2.2 检验操作规程的意义和价值：肝素钠注射液检验操作规程是保证产品质量和使用安全的重要保障。
通过制定标准化的操作规程，可以确保检验过程的严谨性、可复现性和快速高效性。
合理的操作规程能够有效识别潜在问题或错误，并及时采取纠正措施，提高产品质量稳定性及使用安全。
2.3 为什么需要制定肝素钠注射液检验操作规程：制定肝素钠注射液检验操作规程的主要目的是确保产品质量的一致性和稳定性，以及使用安全性。
这样可以预防低质量肝素钠注射液的使用和销售，并减少由于药物缺陷引起的不良事件和患者风险。
操作规程还可以指导操作人员正确进行样品采集、保存、处理和测试等环节，降低人为因素对结果的影响。
肝素钠效价测定步骤
肝素钠效价测定步骤准确称取0.035-0.05g样品，放入小烧杯中，加入35-50ml0.9%Nacl 盐，配成0.1%的样品溶液；吸取0.5ml上述样品溶液至小瓶中；根据估计效价，加入适量0.9%Nacl,其量为估计效价除以标准品效价（即8），减去1，除以2，即：[（估计效价/8）-1]/2 摇匀；取5个试管，分别吸取上述3的溶液140ul、150ul、160ul、170ul、180ul；分别加入1ml血浆，再加入0.8ml0.25%Cacl2,盖上塞子，摇匀；放入37℃±1水浴箱中1小时，1小时后观察结果结果判定，实际效价=估计效价*标准品凝固点/样品凝固(1L(升)=1000ML（毫升）\1ML=1000UL（微升）)废液残留测定试验目的为了加强生产监控力度，在过程中进行检测吸附废液残留，从而根据废液残留量，在后道工序进行调整，最大程度的提高肝素钠效价和出率。
试验原理肝素钠是具有抗凝血活性的一类物质，在溶液中肝素钠含量越高，抗凝血作用越强，吸附废液中肝素残留量的高低，直接跟血浆的凝固程度有关，含量越高，凝固程度越大。
三、试验器材及试剂1、试验器材：-18度冰箱1个，吸耳球2个，10ml吸量管3个，1ml吸量管1个，试管架1个，恒温水浴箱1个，锥形漏斗1个，脱脂棉；2、试验所需试剂：血浆，标准品，0.9%的Nacl,0.25%的Cacl2；四、试验方法1、吸附结束后，关闭搅拌电机，静置2分钟，用瓶子取半瓶吸附废液，盖上瓶盖，放冷水中冷却备用；2、取1个试管架，装试管4排，第一排装5支，后面3排各装3支；3、在第1排试管中分别按顺序加入吸附废液1400ul、1600ul、1800ul、2000ul、2200ul,后3排分别按顺序加入标准品150ul、160ul、170ul；4、分别在上述4排试管里加入1ml血浆，然后再加入0.8ml0.25%的Cacl2，盖上试管塞，摇匀；5、放入37℃±1 的恒温水浴箱中1小时，1小时后观察每1管的凝固程度；五、试验结果1、观察每一排试管中血浆的凝固程度，以第1排血浆的凝固程度作为吸附废液的血浆凝固点，后3排中凝固程度相同的两排的凝固程度作为标准品的凝固点；凝固程度判断：1）、完全凝固：溶液完全凝固，倒转管子，凝块不从管壁脱落；2）、3/4凝固：溶液完全凝固，倒转管子，凝块有气泡产生，能从管壁脱落；3）、1/2凝固：倒转管子，大约有一班体积的溶液凝固；4）、1/4凝固：倒转管子，只有很少溶液凝固；5）、0凝固：倒转管子，溶液无凝固现象，并完全流动；2、废液残留量的计算方式：废液残留量=8*标准品凝固点/样品凝固点新树脂处理方案1、用60度的热水浸泡4小时，沥干。
肝素钠_中国药典2015版公示标准
肝素钠GansunaHeparin Sodium■本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质，是由不同分子量的糖链组成的混合物，由α-D-氨基葡萄糖（N-硫酸化，O-硫酸化，或N-乙酰化）和O-硫酸化糖醛酸（α-L-艾杜糖醛酸或β-D葡萄糖醛酸）交替连接形成聚合物，具有延长血凝时间的作用。
按干燥品计算，每1mg中抗Ⅱa因子效价不得少于180 IU，抗Xa因子效价与抗IIa因子效价比为0.9～1.1。
■[修订]■核酸取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含4mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA）测定，在260nm的波长处，吸光度不得大于0.10。
■[增订]■蛋白质取本品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含30mg的溶液，作为供试品溶液；另取牛血清白蛋白对照品适量，分别加水制成每1ml中各含0、10μg、20μg、30μg、40μg与50μg的溶液，作为对照品溶液，照蛋白质含量测定法（附录ⅦM 第二法）测定。
按干燥品计，含蛋白质不得过0.5%。
■[增订]■有关物质取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含100mg的溶液，涡旋混合至完全溶解，取0.5ml，加入1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加入1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为供试品溶液；取肝素对照品250mg，加水2ml，涡旋混匀至完全溶解，作为对照品溶液（1）；取对照品溶液（1）1.2ml，加2%硫酸皮肤素对照品0.15ml与2%多硫酸软骨素对照品0.15ml，作为对照品溶液（2）；取对照品溶液（2）0.1ml，加水稀释至1ml，作为对照品溶液（3）；取对照品溶液（1）0.4ml，加水0.1ml，混匀，加1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为对照品溶液（4）；取对照品溶液（2）0.5ml，加1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为对照品溶液（5）。
肝素抗凝实验报告
一、实验目的本次实验旨在探究肝素在血液抗凝中的作用，通过检测肝素对凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血酶时间（TT）的影响，评估肝素抗凝的效果。
二、实验材料1. 试剂：肝素钠、凝血酶原时间测定试剂盒、活化部分凝血活酶时间测定试剂盒、凝血酶时间测定试剂盒。
2. 仪器：血液凝固分析仪、离心机、移液器、试管等。
三、实验方法1. 标准化肝素溶液的制备：称取肝素钠10mg，用生理盐水溶解，配制成100ml肝素钠溶液，浓度为100U/ml。
2. 血样采集：采集志愿者静脉血2ml，分为三组，分别标记为A组、B组和C组。
3. 实验分组：A组：生理盐水组，用于对照组；B组：肝素钠组，加入肝素钠溶液0.1ml；C组：肝素钠过量组，加入肝素钠溶液0.2ml。
4. 血样处理：将血样在室温下静置30分钟，使血浆自然凝固，然后离心分离血浆。
5. PT、APTT和TT检测：按照试剂盒说明书，依次进行PT、APTT和TT检测。
四、实验结果1. PT检测：A组（生理盐水组）PT为（11.5±1.2）秒；B组（肝素钠组）PT为（14.3±2.1）秒；C组（肝素钠过量组）PT为（20.5±3.2）秒。
2. APTT检测：A组（生理盐水组）APTT为（31.2±2.5）秒；B组（肝素钠组）APTT为（35.6±3.1）秒；C组（肝素钠过量组）APTT为（44.3±4.2）秒。
3. TT检测：A组（生理盐水组）TT为（17.8±1.9）秒；B组（肝素钠组）TT为（20.1±2.3）秒；C组（肝素钠过量组）TT为（25.6±3.0）秒。
五、实验分析1. 肝素对PT的影响：B组与A组相比，PT延长，说明肝素具有抗凝作用。
C组与B组相比，PT进一步延长，表明肝素过量时抗凝效果增强。
2. 肝素对APTT的影响：B组与A组相比，APTT延长，说明肝素具有抗凝作用。
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肝素钠含量检验操作规程
1范围
1.1适用于肝素钠生产车间过程控制中各控制点肝素钠含量的检测。
2定义
2.1肝素钠化验指对肝素效价的检测过程。
3参考
《美国药典》
4职责
4.1相应职责由车间化验员承担。
5操作程序
5.1仪器、用具与试剂
5.1.1恒温水浴锅
5.1.2试管架
5.1.310ml具塞试管
5.1.4100ul或250ul微量进样器
5.1.510ml刻度吸管
5.1.62ml刻度吸管
5.1.71ml可调式加液器
5.1.820ml带塞样瓶
5.1.90.9%氯化钠溶液
5.1.100.25%氯化钙溶液
5.1.11经过标定的绵羊血浆
5.1.128.0u/ml肝素钠标准溶液
5.1.13计时器
5.2操作步骤
5.2.1取样
5.2.1.1根据车间生产实际，一般酶解液、洗涤液、沉淀废液取样量为8±2ml，吸附废液为20±2ml。
特殊情况可适当多取，取样要做到均匀有代表性。
5.2.2样品检测
5.2.2.1根据实际情况将试管摆放在试管架上。
5.2.2.2用100ul微量进样器取8.0u/ml肝素标准溶液，加标准品之前，用标准液冲洗进样器两次，根据标定的血浆灵敏度n，分别按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入一排5支10ml具塞试管中，作为标准溶液的浓度梯度。
5.2.2.3.1酶解液、洗涤液、沉淀废液进样：用同一个进样器取供试液，取之前先用供试液将进样器冲洗三次，然后再按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
5.2.2.3.2吸附废液进样：用2ml刻度吸管取供试液，取之前先用供试液将刻度吸管冲洗三次，然后再按600ul、800ul、1000ul、1200ul、1400ul进样量
加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
加样时要非常精确，不能有气泡产生；这一步是本试验的关键步骤。
5.2.2.4在上述各试管中，用10ml刻度吸管依次加入处理好的绵羊血浆，加入前用血浆在吸管内来回过三遍，以保证加入的血浆浓度的均一性，加入顺序为从量多→少的方向进行。
5.2.2.5用1ml可调式加液器再依次加入0.8ml的0.25(w/v)氯化钙溶液，加入的顺序为：从样品量多→少的方向加。
加完后盖紧瓶盖立即摇匀，摇时从样品量少→多的方向进行；注意摇动时不要有气泡产生，同时让试管内壁全部润湿。
5.2.2.6将试管架放入37±0.5℃水浴锅中，开始计时：在保温过程中，大约30分钟时将拿出观察，如果①-⑤全凝表示效价估高（在n+20或1400的后面补），如果①-⑤一管都没有凝表效价估低（在n-20或600的前面补），这时就应补做试验，一般情况下补做5管。
5.2.2.7试管在37±1℃水浴锅中保温60±1min后取出，观察各试管中血浆凝固情况，如果一组试验样品同时有0和1的状态，则试验成功。
然后根据血浆凝固情况判断结果。
5.2.2.8供试品的凝固状态：1100%的凝固
1/425%的凝固
1/250%的凝固
3/475%的凝固
0不凝固
5.2.2.8.1根据标准品的凝固点确定供试品1-0的凝固范围，再将其分成五个点即：1、3/4、1/2、1/4、0，观察凝固状态在哪一个点上，当其凝固在3/4点上，就在该点的样品体积上加(进样间隔/4)便是该供试品的凝固点；如果其凝固在1/2点上，该点的样品体积就是供试品的凝固点；如果其凝固在1/4点上，就在该点的样品体积上减(进样间隔/4)便是该供试品的凝固点。
5.3结果计算
实际效价=﹙标准品的凝固点／供试品的凝固点﹚×8。