肝素钠含量检测操作规程

肝素钠含量检验操作规程

1范围

1.1适用于肝素钠生产车间过程控制中各控制点肝素钠含量的检测。

2定义

2.1肝素钠化验指对肝素效价的检测过程。

3参考

《美国药典》

4职责

4.1相应职责由车间化验员承担。

5操作程序

5.1仪器、用具与试剂

5.1.1恒温水浴锅

5.1.2试管架

5.1.310ml具塞试管

5.1.4100ul或250ul微量进样器

5.1.510ml刻度吸管

5.1.62ml刻度吸管

5.1.71ml可调式加液器

5.1.820ml带塞样瓶

5.1.90.9%氯化钠溶液

5.1.100.25%氯化钙溶液

5.1.11经过标定的绵羊血浆

5.1.128.0u/ml肝素钠标准溶液

5.1.13计时器

5.2操作步骤

5.2.1取样

5.2.1.1根据车间生产实际，一般酶解液、洗涤液、沉淀废液取样量为8±2ml，吸附废液为20±2ml。特殊情况可适当多取，取样要做到均匀有代表性。

5.2.2样品检测

5.2.2.1根据实际情况将试管摆放在试管架上。

5.2.2.2用100ul微量进样器取8.0u/ml肝素标准溶液，加标准品之前，用标准液冲洗进样器两次，根据标定的血浆灵敏度n，分别按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入一排5支10ml具塞试管中，作为标准溶液的浓度梯度。

5.2.2.3.1酶解液、洗涤液、沉淀废液进样：用同一个进样器取供试液，取之前先用供试液将进样器冲洗三次，然后再按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。

5.2.2.3.2吸附废液进样：用2ml刻度吸管取供试液，取之前先用供试液将刻度吸管冲洗三次，然后再按600ul、800ul、1000ul、1200ul、1400ul进样量

加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。

加样时要非常精确，不能有气泡产生；这一步是本试验的关键步骤。

5.2.2.4在上述各试管中，用10ml刻度吸管依次加入处理好的绵羊血浆，加入前用血浆在吸管内来回过三遍，以保证加入的血浆浓度的均一性，加入顺序为从量多→少的方向进行。

5.2.2.5用1ml可调式加液器再依次加入0.8ml的0.25(w/v)氯化钙溶液，加入的顺序为：从样品量多→少的方向加。加完后盖紧瓶盖立即摇匀，摇时从样品量少→多的方向进行；注意摇动时不要有气泡产生，同时让试管内壁全部润湿。

5.2.2.6将试管架放入37±0.5℃水浴锅中，开始计时：在保温过程中，大约30分钟时将拿出观察，如果①-⑤全凝表示效价估高（在n+20或1400的后面补），如果①-⑤一管都没有凝表效价估低（在n-20或600的前面补），这时就应补做试验，一般情况下补做5管。

5.2.2.7试管在37±1℃水浴锅中保温60±1min后取出，观察各试管中血浆凝固情况，如果一组试验样品同时有0和1的状态，则试验成功。然后根据血浆凝固情况判断结果。

5.2.2.8供试品的凝固状态：1100%的凝固

1/425%的凝固

1/250%的凝固

3/475%的凝固

0不凝固

5.2.2.8.1根据标准品的凝固点确定供试品1-0的凝固范围，再将其分成五个点即：1、3/4、1/2、1/4、0，观察凝固状态在哪一个点上，当其凝固在3/4点上，就在该点的样品体积上加(进样间隔/4)便是该供试品的凝固点；如果其凝固在1/2点上，该点的样品体积就是供试品的凝固点；如果其凝固在1/4点上，就在该点的样品体积上减(进样间隔/4)便是该供试品的凝固点。

5.3结果计算

实际效价=﹙标准品的凝固点／供试品的凝固点﹚×8