细菌的生化试验
实验五 细菌的生化试验
酵管中，置37℃培养48h后，取出培养液加入甲基 红试剂2-3滴，观察结果。
[结果判定] ：培养液变红色，反应阳性，用+表示；
培养液不变色，反应阴性，用-表示。
4.乙酰甲基甲醇试验（V-P试验）
[基本原理]：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，进 一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧 化成二乙酰，后者与蛋白胨中的精氨酸所含的胍 基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验阳性。
标记气室示意图
二 实验内容
（一）病毒的鸡胚分离培养
1.鸡胚：9-10日龄健胚
2.病毒：NDⅣ-Lasota株，100×稀释，加双抗各 5000单位/ml，室温下30min或4℃过夜
3.接种部位：尿囊腔接种
4.接种量：0.1-0.2ml/胚
5.接种步骤：照蛋→标记→打孔→接毒→封孔→37 ℃孵化箱中继续孵化，及时照蛋，24h内死胚丢 弃，以后死亡者随时取出，冷藏，120h不死者， 冻死。
[结果判定]：
溴甲酚紫是一种酸碱指示剂，在中性时为紫色，碱 性时为深红色，而在酸性时呈现黄色。
紫色无气泡，既不产酸也不产气，用-表示； 黄色无气泡，产酸不产气，用+表示； 黄色有气泡，产酸产气，用⊕表示。
2.吲哚（靛基质）试验
[基本原理]：有些细菌有色氨酸酶，能分解蛋白胨 中的色氨酸形成吲哚，吲哚与对位二甲基氨基苯 甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。该试验主要 用于肠道杆菌的鉴定。
[试验方法]：将待检菌液接种到葡萄糖蛋白胨水微 量发酵管中，置于37℃培养48h，取出后加入VP 试剂甲液3滴，乙液各1滴，充分摇动，静置1530分钟后，观察实验结果。
[结果判定]：管内变红色为阳性，用+表示； 管内不变色为阴性，用-表示。
细菌的生化试验
一、枸橼酸盐利用实验 二、吲哚试验 三、硫化氢试验 四、脲酶试验细ຫໍສະໝຸດ 的生化实验简介部分细菌生化试验
细菌的生化反应是指用化学 反应来测定微生物的代谢产 物，生化反应常用来鉴别一 些在形态和其它方面不易区 别的细菌，简单来说，就是 鉴别细菌。因此细菌生化反 应是细菌分类鉴定中的重要 依据之一，检验中常用的生 化反应有：氧化酶试验，触 酶试验，氧化发酵试验等。
吲哚（indole）试验：有些细菌如大肠埃希菌、 变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨 酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲 基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色， 是为吲哚试验阳性。
三、硫化氢试验
有些细菌如变形杆菌等能分解胱氨酸，甲 硫氨酸等含硫氨基酸，生成硫化氢。若遇 醋酸铅或硫酸亚铁，则生成黑色硫化铅或 硫化亚铁。
一、枸橼酸盐利用实验
在以枸橼酸钠为唯一碳源的 培养基，某些细菌（如产气 杆菌）分解枸橼酸钠产生碳 酸盐，并分解铵盐生成氨， 使培养基由酸性变为碱性， 培养基中指示剂溴麝香草酚 蓝（BTB）由淡绿色变为深 蓝色，此为阳性。大肠杆菌 因不能利用枸橼酸盐，此试 验为阴性反应。
二、吲哚试验
吲哚：
1.其外观呈无色或 浅黄色片状结晶。 有特殊气味。露置 空气中或见光色即 变红并树脂化。 2.溶于热水、热乙 醇、乙醚、苯。能 随水蒸气同时挥发。
四、脲酶试验
脲酶又称尿素酶。某 些细菌有脲酶（如变 形杆菌）有脲酶，能 分解培养基中的尿素 产生氨，是其碱性增 加，可用酚红指示剂 检测，呈红色，为阳 性。沙门菌无脲酶， 则为阴性。
实验六细菌的生理生化试验教学
02
酶活性测定是了解细菌代谢途径的重要手段。
03
在实验中，我们对该细菌的几种关键酶进行了活性测定。通过分析酶活性，我 们发现该细菌具有较高的酶活性水平，这表明该细菌具有较为活跃的代谢状态 。这些结果有助于我们进一步了解该细菌的生化特性和代谢途径。
结果总结与讨论
总结
通过对生理和生化试验结果的综合分析，我们对该细 菌的生理生化特性有了更深入的了解。这些结果不仅 有助于我们更好地认识该细菌的生长、繁殖和代谢特 点，还为进一步研究该细菌的生物学特性和应用提供 了重要的参考依据。
糖发酵试验是鉴定细菌生化特性的重要手段。
生化试验一：糖发酵试验
在糖发酵试验中，我们观察到该细菌能够利用不同的 糖类作为碳源进行发酵。通过分析不同糖类的发酵产 物，我们可以了解该细菌对不同糖类的代谢能力和发 酵特性。这些结果对于进一步了解该细菌的生化特性 具有重要的意义。
生化试验结果与分析
01
生化试验二：酶活性测定
生理试验结果与分析
生理试验二：对数生长期的代谢产物
在细菌的对数生长期，其代谢产物具有一定的特点。
在对数生长期，我们观察到该细菌产生了一些具有特殊性质的代谢产物， 这些代谢产物可能对该细菌的生长和繁殖具有重要作用。通过对这些代 谢产物的分析，我们可以更深入地了解该细菌的生理特性。
生化试验结果与分析
实验六细菌的生理生化试验 教学
contents
目录
• 实验目的与简介 • 实验材料与试剂 • 实验步骤与操作 • 实验结果与分析 • 实验结论与建议 • 参考文献与拓展阅读
生理生化 特性，了解不同细菌 在生化反应中的差异。
通过实验结果分析， 能够对细菌进行初步 鉴定。
《细菌与人类健康》
细菌的常用生化试验
本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株
的快速鉴定。
4.七叶苷水解试验
原理 方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结 果。 结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。 应用：主要用于D群链球菌 与其他链球菌的鉴别，
前者阳性，后者阴性。
5.甲基红试验
原理：肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生 丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥 珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5 以下，使甲基红指示剂变红。 方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，培养2～4d，于培 养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。 结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。
应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者为阳性，后者 为阴性。肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆 菌属等为阳性，而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性。
6.V-P试验
原理 方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，于 35℃培养48h后加入甲液（6%α-萘酚酒精溶液）和乙液 （40%KOH溶液），振摇。 结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于 35℃4h后仍如故者即为阴性。 应用：本试验常与甲基红试验 一起使用，因为前者阳性的细
产碱型
发酵型（产酸）
氧化型
应用Байду номын сангаас主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型， 而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴 别，前者是发酵型，后者是氧化型。
3.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）
细菌生化试验的主要用途
细菌生化试验的主要用途细菌生化试验是一种基础科学研究手段，主要用于研究和解析细菌的生物学特性、代谢途径、遗传机制等方面的问题。
细菌是一类存在于自然界中广泛分布的微生物，其研究对于理解细胞生物学、微生物学、生态学以及人类健康与疾病等领域具有重要的意义。
以下将从不同的方面介绍细菌生化试验的主要用途。
1. 细菌代谢研究：细菌代谢研究是细菌生化试验的重要应用之一。
通过细菌代谢试验，可以了解细菌对不同碳源、氮源和其他营养物质的利用能力。
通过测定细菌在不同代谢途径下的产物生成情况，可以推测细菌利用的代谢途径以及相关的酶系统。
此外，细菌代谢试验还可以研究细菌在特定环境条件下的生长情况，探究不同因素对细菌生长和代谢的影响。
2. 细菌酶活性分析：细菌生化试验还可以通过测定细菌酶的活性来研究细菌的特性。
利用研究细菌酶的催化反应过程，可以了解细菌代谢途径中不同酶的功能和调控机制。
例如，利用亚硝酸还原酶活性分析方法，可以判断细菌是否具有还原亚硝酸的能力，进而推测其可能的氮代谢途径和氮源选择性。
3. 细菌毒性和药敏性研究：细菌生化试验对于研究细菌的毒性和对抗微生物药物的敏感性也具有重要意义。
通过测定细菌对抗生素的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)，可以评估抗生素对细菌的杀菌效果，并对细菌对抗生素的耐药性进行研究。
此外，细菌生化试验还可用于评估不同物质对细菌的毒性作用，如常用消毒剂、药物和化学试剂等。
4. 细菌遗传机制研究：细菌生化试验还可用于研究细菌的遗传机制，如水平基因转移和垂直基因转移等。
通过构建不同的遗传操作，如突变、基因敲除和表达等，可以了解细菌基因对细菌生长、代谢和适应环境的调控作用。
此外，通过分析细菌基因和基因产物的表达情况，还可以探究细菌的表观遗传调控机制和信号传导系统。
5. 细菌生态学研究：细菌生长和代谢的研究对于了解细菌在环境中的角色和功能具有重要意义。
通过细菌生化试验，可以探究细菌在不同环境条件下的适应性和竞争优势。
实验九 细菌的生化鉴定
实验九细菌的生化鉴定一、实验目的1、了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；2、掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V. P的原理、方法及相应培养基的制备方法。
3、了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；4、掌握以上实验的用途。
二、实验原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。
由于细菌特有的单细胞原核生物特性，这种差异就表现得更加明显。
不同细菌具有不同的酶系统，故不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，它们对物质的代谢谱和分解产物也就不同，细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。
用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应，其在菌株的分类鉴定中具有主要意义。
1、糖发酵实验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
发酵后产生的有机酸：乳酸、醋酸、丙酸等（溴甲酚紫变色范围pH5.2~6.8, pH<5.2黄色，pH>6.8紫色）；发酵后产生的气体：甲烷、氢、二氧化碳等（杜氏小管内有气泡，产气漂浮）。
2、M.R.及V.P实验很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）-pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
细菌的生化试验
细菌的生化实验一、糖的发酵培养基：糖培养基PH7.6的蛋白胨水溶液（蛋白胨1%）（氯化钠0.5%）适量糖，1% 1.6%澳甲酚紫酒精溶液0.1% 分装10*100mm小试管，每管3-41^,内置一密闭端向上的发酵管， 10磅10分灭菌。
方法: 用接种环取少量纯培养物接种于培养基中，37摄氏度培养18-24小时后观察，一般观察2-3天。
结果: 产酸则培养基由兰紫变黄，用“ + ”表示。
产酸又产气，则培养基变黄，小管内有气泡，用“。
”表示，无变化则培养基仍为兰紫色，管内也无气泡，用“-”表示。
原理: 指示剂澳甲酚紫的指示范围为PH5.2-6.8（黄-紫）。
每一种糖（醇）培养基内只含一种糖（醇）的成分，接种进去的细菌若能发酵这种糖，则可产生乳酸，使PH下降，培养及就由兰紫色变为黄色，如果同时还产生CO2、H2、CH4等气体，则小管内留有气泡，如果不能发酵分解这种糖，则培养及不变色也无气泡。
培养基：蛋白胨水蛋白胨1%氯化钠0.5%蒸馏水适量其中的蛋白胨最好选用含色氨酸较多的多价蛋白胨。
每支小试管分装3-4ml, 10磅10分灭菌。
试剂：（欧立希氏试剂）对二甲基氨基苯甲醛 1g纯乙醇95ml浓盐酸20ml以上物品依次混合溶解方法：接种细菌于培养基中，37摄氏度培养24-48小时后，取出加乙醚约0.7cm厚，塞紧棉塞后摇震，使乙醚与培养物混匀，静置于试管架内数分钟，待乙醚浮至培养基表面，打开棉塞，沿试管壁慢慢加入靛基质试剂4-5滴，不要摇。
结果：乙醚层现红色为阳性，以“ + ”表示，不变者为阴性，以“-”表示。
原理：细菌若有色氨酸酶，就能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚）。
靛基质无色，但遇到对二甲基氨基苯甲醛，则可以生成红色的靛基质，以肉眼可见。
三、甲基红实验：培养及：葡萄糖蛋白胨水（PH7.4）葡萄糖0.5%磷酸氢二钾0.5%蛋白胨0.5%蒸馏水适量加热溶解后，分装小试管，每管3-4ml，10磅10分灭菌试剂：0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中，加蒸馏水至500ml方法：接种细菌于培养液中，37摄氏度培养2-4天，取出加M、R试剂3-4 滴。
细菌的生化实验报告
一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理细菌的生理生化反应是指细菌在生长繁殖过程中，利用各种酶类将底物分解、合成、转化等生物化学过程。
这些反应能够产生不同的代谢产物，从而为细菌鉴定提供依据。
常见的生理生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与用具1. 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌；2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂；3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管。
四、实验方法1. 糖发酵试验（1）将待鉴定菌种接种于糖发酵培养基中；（2）将培养基放入37℃恒温培养箱中培养24-48小时；（3）观察培养基中指示剂的颜色变化，判断细菌对糖的发酵能力。
2. 吲哚试验（1）将待鉴定菌种接种于蛋白胨水培养基中；（2）加入吲哚试剂，观察培养基中是否产生红色沉淀，判断细菌是否具有色氨酸酶。
3. 甲基红试验（1）将待鉴定菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中；（2）加入甲基红试剂，观察培养基中是否产生红色沉淀，判断细菌是否具有产酸能力。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验实验结果显示，大肠杆菌和产气肠杆菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖均能发酵，产生红色沉淀；普通变形菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖均不能发酵，无红色沉淀；枯草芽孢杆菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖均不能发酵，无红色沉淀。
2. 吲哚试验实验结果显示，大肠杆菌和产气肠杆菌在蛋白胨水培养基中加入吲哚试剂后，产生红色沉淀，说明这两种细菌具有色氨酸酶；普通变形菌和枯草芽孢杆菌在蛋白胨水培养基中加入吲哚试剂后，无红色沉淀，说明这两种细菌不具有色氨酸酶。
3. 甲基红试验实验结果显示，大肠杆菌和产气肠杆菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中加入甲基红试剂后，产生红色沉淀，说明这两种细菌具有产酸能力；普通变形菌和枯草芽孢杆菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中加入甲基红试剂后，无红色沉淀，说明这两种细菌不具有产酸能力。
细菌的生化实验
细菌的生化实验一、糖的发酵培养基：糖培养基PH7.6的蛋白胨水溶液（蛋白胨1%）（氯化钠0.5%）适量糖，1%1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1%分装10*100mm小试管，每管3-4ml，内置一密闭端向上的发酵管，10磅10分灭菌。
方法：用接种环取少量纯培养物接种于培养基中，37摄氏度培养18-24小时后观察，一般观察2-3天。
结果：产酸则培养基由兰紫变黄，用“+”表示。
产酸又产气，则培养基变黄，小管内有气泡，用“☉”表示，无变化则培养基仍为兰紫色，管内也无气泡，用“-”表示。
原理：指示剂溴甲酚紫的指示范围为PH5.2-6.8（黄-紫）。
每一种糖（醇）培养基内只含一种糖（醇）的成分，接种进去的细菌若能发酵这种糖，则可产生乳酸，使PH下降，培养及就由兰紫色变为黄色，如果同时还产生CO2、H2、CH4等气体，则小管内留有气泡，如果不能发酵分解这种糖，则培养及不变色也无气泡。
二、靛基质实验培养基：蛋白胨水蛋白胨 1%氯化钠 0.5%蒸馏水适量其中的蛋白胨最好选用含色氨酸较多的多价蛋白胨。
每支小试管分装3-4ml，10磅10分灭菌。
试剂：（欧立希氏试剂）对二甲基氨基苯甲醛 1g纯乙醇 95ml浓盐酸 20ml以上物品依次混合溶解方法：接种细菌于培养基中，37摄氏度培养24-48小时后，取出加乙醚约0.7cm厚，塞紧棉塞后摇震，使乙醚与培养物混匀，静置于试管架内数分钟，待乙醚浮至培养基表面，打开棉塞，沿试管壁慢慢加入靛基质试剂4-5滴，不要摇。
结果：乙醚层现红色为阳性，以“+”表示，不变者为阴性，以“-”表示。
原理：细菌若有色氨酸酶，就能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚）。
靛基质无色，但遇到对二甲基氨基苯甲醛，则可以生成红色的靛基质，以肉眼可见。
三、甲基红实验：培养及：葡萄糖蛋白胨水（PH7.4）葡萄糖 0.5%磷酸氢二钾 0.5%蛋白胨 0.5%蒸馏水适量加热溶解后，分装小试管，每管3-4ml，10磅10分灭菌试剂：0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中，加蒸馏水至500ml方法：接种细菌于培养液中，37摄氏度培养2-4天，取出加M、R试剂3-4滴。
细菌 的生化反应
6.V-P试验
• 结果：数分钟内出现红色为阴性，如无红 色且35℃4h后仍不变为阴性 。
• 应用：常与甲基红试验一起使用，因为前 者为阴性，后者通常为阴性。
2、氧化-发酵试验（O/F试验）
• 结果：均无变化为产碱型或不分解糖型， 均产酸为发酵型，仅不加石蜡的培养基产 酸为氧化型。
• 应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌 的鉴别，前者均为发酵型，而后者通常为 氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微 球菌的鉴别。
3、β-半乳糖苷酶（ONPG试验）
• 结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般 在20-30分钟内显色。
• 应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细 菌的鉴定。变形杆菌属，肺炎克雷伯菌属， 摩根菌属，普罗威登斯菌属，幽门螺杆菌 和结肠耶尔森菌阳性，而斯氏和产碱普罗 威登菌阴性。
苯丙氨酸脱氨酶试验
• 结果：出现绿色为阳性。应立即观察结果， 反应时间过长会褪色。
• 应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变 形杆菌属，普罗威登斯菌属和摩根菌属为 阳性，肠杆菌科中其他细菌均为阴性。
细菌的生化反应
1、糖（醇，苷）类发酵试验
• 结果：若能分解糖（醇，苷）类产酸时， 培养基的指示剂呈酸性反应。若产气可使 液体培养基中倒管内或半固体培养基内出 现气泡，固体培养基内有裂隙等现象。若 不分解，培养基中除有细菌生长外，无任 何其他生长变化。
• 应用：鉴定细菌最主要和最基本的试验， 特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。
1、明胶液化试验
• 结果：培养基呈液化状态为阳性。 • 应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如普通变形
[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验
![[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验](https://img.taocdn.com/s3/m/1967ad89f01dc281e43af093.png)
[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验实验六细菌的生化试验目的要求1．通过本试验加深对细菌生化反应原理和意义的理解；2．掌握常规细菌生化试验操作方法。
操作步骤一、糖类发酵（分解）试验原理：细菌含有分解不同蔗糖（醇、苷）类的酶，因而分解各种糖（醇、苷）类的能力也不必一样。
有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸（符号：+）、产气（符号：○），培养基由兰变黄（指示剂溴指示剂麝香草酚兰由兰遇酸福兰县的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：－），培养基仍为兰色。
（一）适用于需氧菌的方法培养基用邓亨氏（Dunham）蛋白胨水溶液（蛋白胨1g，氯化钠0.5g，水100ml，pH7.6按0.5～1％的比例分别加入各种辣椒），每100ml加入1.2ml的0.2％溴麝香草酚蓝（或用1.6％溴甲酚紫酒精溶液0.1ml）作指示剂。
分装于试管（每一个试管事先都加有一枚倒立的小发酵管），10磅高压灭菌10分钟。
如在培养基中加入琼脂达0.5～0.7％，则成半固体，可省去倒立的小失水管。
0.2％溴麝香草酚蓝溶液配法：溴麝香草酚蓝 0.2g0.1N NaOH 5ml蒸馏水 95ml方法：从琼脂斜面的纯培养物上，用接种环取少量被检细菌接种于糖发酵管培养基中（如为半固体，应穿刺），在37℃培养，一般观察2～3天，观察时用上述符号标记之。
（二）适用于厌氧菌的方法培养基：蛋白胨 20g氯化钠 5g琼脂 1g1.6％硫甲酚紫酒精溶液 1ml糖 10g硫乙醇酸钠 1g蒸馏水 1000ml将胨、盐、硫乙醇酸钠、琼脂和水放于水槽内，加热使融化，再加入所需的糖，调整pH到7.0，加入指示剂，分装试管，在10磅高压灭菌15分钟后，做成高层。
方法将厌氧菌的培养物用穿刺接种法接种于上述培养基的深部，于37℃培养。
结果观察同需氧菌。
二、V－P试验（二乙酰试验）原理：某些细菌能从葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇（Acetymethyl carbinol）→2，3-丁烯二醇（2，3-bytaylene cylycol），在有碱阿提斯鲁夫尔谷存在时氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用，会带来粉红色的化合物。
常用细菌生化反应试验
不发酵的V-P试验
总结词
详细描述
不发酵的V-P试验表示细菌不能发酵葡萄糖， 不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
有些细菌不能发酵葡萄糖，因此不产生乙酰 甲基甲醇属、不动杆菌 属等。不发酵的V-P试验有助于鉴别非发酵 菌与肠杆菌科细菌。
临床意义
非发酵菌为医院感染的重要病原菌，可引起 呼吸道、泌尿道、伤口等感染。
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检测细菌对酸性环境的 适应能力，用于鉴别肠
道菌属。
试验原理
糖发酵试验
氧化酶试验
不同细菌含有不同的酶系，能够分解糖类 产生酸性或碱性产物，通过指示剂变色反 应判断细菌对糖类的代谢能力。
氧化酶催化过氧化氢分解为水和氧气，过 氧化氢在铁离子存在下形成棕色沉淀，通 过观察沉淀判断氧化酶活性。
触酶试验
甲基红试验
V-P试验阴性
总结词
V-P试验阴性表示细菌不能利用葡萄糖，不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
详细描述
当细菌不能利用葡萄糖或不产生乙酰甲基甲醇时，V-P试验呈阴性。这通常表明该细菌 不属于肠杆菌科，因为肠杆菌科细菌通常能够发酵葡萄糖并产生乙酰甲基甲醇。V-P试
验阴性有助于排除某些肠道细菌感染的可能性。
过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为水和氧 气，氧气在硫酸中形成白色沉淀，通过观 察沉淀判断过氧化氢酶活性。
肠道菌属能够代谢糖类产生酸性产物，使 培养基pH降低，加入甲基红指示剂后呈红 色，通过观察颜色变化判断肠道菌属。
02 糖发酵试验
葡萄糖发酵试验
总结词
葡萄糖发酵试验是细菌生化反应试验中的一种，用于鉴别细菌对葡萄糖的代谢 能力。
04 Voges-Proskauer试验
细菌的常用生化试验
应用：主要用于厌氧菌的鉴别。类杆菌属中的中间类杆 菌产生脂酶，其他类杆菌则阴性；芽胞梭菌属中产芽胞 梭菌、肉毒梭菌和诺维梭菌也有此酶，而其他梭菌阴性。
5.卵磷脂酶试验
原理：有的细菌产生卵磷脂酶（α-毒素），在钙离子存 在时，此酶可迅速分解卵磷脂，生成浑浊沉淀状的甘油 酯和水溶性磷酸胆碱。
方法：将被检菌划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，于 35℃培养3～6h。
普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯
氏和产碱普罗威登菌阴性
5.苯丙氨酸脱氨酶试验
原理 方法：将被检菌浓厚接种于苯丙氨酸琼脂培养基斜面上， 于35℃培养l8～24h，滴加10%三氯化铁试剂3～4滴，自 斜面上方流下。 结果：出现绿色为阳性。应立即观察结果，延长反应时 问会引起褪色。 应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变 形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属细 菌均为阳性，肠杆菌种中其他细菌均为阴 性。
原理
由于细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能 力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的 虽能分解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分 解糖。据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。
具体试验有：①糖类发酵试验；②葡萄糖代谢类 型鉴别试验；③七叶苷水解试验；④淀粉水解试 验；⑤甲基红试验；⑥V-P试验；⑦β-半乳糖苷 酶试验（ONPG试验）。
1.明胶液化试验
原理 方法：将被检菌穿刺接种于明胶培养基，于22℃培养7d， 逐日观察结果。 结果：培养基呈液化状态为阳性。 应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如沙 雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆 菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其 他细菌很少液化明胶。有些厌氧菌 如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也 能液化明胶。另外多数假单胞菌也 能液化明胶。
细菌的生化反应
1. 葡萄糖酸盐试验1)原理：某些细菌可氧化葡萄糖酸钾，生成α-酮基葡萄糖酸。
α-酮基葡萄糖酸是一种还原性物质，可与班氏试剂起反应，出现棕色或砖红色的氧化亚铜沉淀。
(2)方法：将待检菌接种于葡萄糖酸盐培养基中(1ml)，置35℃孵育48h,加入班氏试剂1ml，于水浴中煮沸10min并迅速冷却，观察结果。
(3)结果：出现黄到砖红色沉淀为阳性。
不变或仍为蓝色为阴性。
(4)应用：主要用于假单胞菌的鉴定和肠杆菌科菌分群。
帮助属间鉴别、种间鉴别和沙雷菌属菌种的鉴定。
取待检菌大量接种培养基，35 ℃培养24-48h ，加斑氏试剂1ml，充分混匀，隔水加热煮沸10min ，观察结果。
产生黄-橙色沉淀为阳性，蓝色沉淀为阴性（5）质量控制肺炎克雷伯菌A TCC 27236阳性；大肠埃希菌A TCC 25922 阴性2 粘液酸利用试验培养基用于无动力不产气不发酵乳糖的大肠埃希菌与志贺菌属的鉴别。
前者多数为阳性，后者均为阴性取试验菌株18-24h 肉汤培养物1 环接种培养基。
35 ℃孵育1-2 周，每天观察结果。
培养基呈黄色为阳性表明细菌能利用粘液酸盐；若培养基不变色则为阴性[质量控制]大肠埃希菌A TCC 25922 阳性；痢疾志贺I 型A TCC 13313阴性3. 醋酸钠利用试验(1)原理：细菌利用铵盐作为唯一氮源，同时，利用醋酸盐作为唯一碳源时，可在醋酸盐培养上生长，分解醋酸盐生成碳酸钠，使培养基变为碱性。
（2)方法：将被检菌接种于醋酸盐培养基中，置35℃孵育2~7d，逐日观察结果。
(3)结果：培养基上有细菌生长，并变为蓝色为阳性。
（4）应用：主要用于大肠埃希菌和志贺菌属的鉴别，前者为阳性，而后者为阴性。
4. 葡葡糖铵培养基（1）成分：氯化钠5g硫酸镁（MgSO4•7H2O）0.2g磷酸二氢铵1g 磷酸氢二钾1g葡萄糖2g琼脂20g蒸馏水1000ml0.2%溴麝香草酚蓝溶液40ml pH6.8（2）制法：先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。
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细菌的生化试验
目的要求了解细菌生化试验的原理、方法及在细菌鉴定中的意义。
仪器及材料温箱、接种环、酒精灯、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、醋酸铅蛋白胨水培养基、柠檬酸盐琼脂斜面培养基、MR试剂、VP试剂、靛基质试剂、大肠杆菌、产气杆菌、沙门氏菌的24h纯培养物等。
方法与步骤
细菌的生化试验，就是通过用生物化学的方法分析细菌的代谢产物来鉴别细菌的试验。
下面是几种常用的生化试验。
只有纯培养的细菌才能用来做生化试验。
1．糖发酵试验将细菌无菌操作接种于糖发酵培养基中，于37℃培养24～48h，结果：只产酸(＋)，产酸产气(⊕)，不发酵(-)。
2．甲基红(MR)试验与维－培(VP)试验取菌接种于2支含0.5%葡萄糖蛋白胨水培养基中，置37℃温箱培养4d，分别作甲基红和维－培试验。
（1）甲基红试验取上述培养基一支，加入甲基红试剂(甲基红0.1g溶于95%酒精300ml中)5～6滴，液体呈红色者为阳性，黄色者为阴性，橙色者为可疑。
（2）维－培试验取上述培养基一支，先加维－培甲液(6%α－甲萘酚酒精溶液)3ml，再加入维－培乙液(40%氢氧化钾水溶液)1ml，混和后静置于试管架内观察2～4h，凡液体呈红色者为阳性，不变色者为阴性。
3．靛基质试验有些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸产生靛基质(吲哚)，遇相应试剂而呈红色。
试验时，取菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃培养2～3d；于培养基中加入戊二醇或二甲苯2～3ml，摇均，静置片刻后，沿试管壁加入靛基质试剂(配法：对二甲基氨基苯甲醛1.0g，95%酒精95ml溶解后，再加浓盐酸50ml)2ml，若能形成玫瑰靛基质而呈红色，则为阳性反应，不变色为阴性反应。
4．H
S试验某些细菌能分解培养基中含硫氨基酸如半胱氨酸等产生硫化氢，硫化
2
氢遇醋酸铅或硫酸亚铁则形成黑色的硫化铅或硫化亚铁。
用接种针取菌穿刺于含有醋酸铅或硫酸亚铁的琼脂培养基中，37℃培养4d，凡沿穿刺线或穿刺线周围呈黑色者为阳性，不变色者为阴性。
5．三糖铁试验三糖：葡萄糖、蔗糖、乳糖 = 1：10：10；铁为FeSO
4
S。
大肠杆菌：产酸多，不能产生H
2
沙门氏菌：产酸少，能产生H
S。
2。