微生物学实验指导.

微生物实验守则

微生物学实验的目的是：加深对微生物学理论知识的理解；扎实掌握实验的基本操作，并牢固建立无菌操作的概念；培养学生认真观察、发现问题、分析问题和解决问题的工作能力；树立学生实事求是、严肃认真的科学态度和勤俭节约、协作攻关的优良作风。

为了提高教学效果，保证实验质量和实验室安全，特提出如下注意事项。

1.每次实验前必须充分预习实验教材，以了解实验的目的、原理和方法，熟悉实验操作中的主要步骤和环节。

2.非必要的物品不要带入实验室，必须带进的物品应放在不影响实验操作的地方。

3.实验时认真听教师的讲解，仔细观察示范操作。

4.许多微生物有潜在的致病能力。实验中要严格无菌操作，以免培养的微生物进入外界环境，并保证所培养的微生物不受污染。

①实验室内严禁餐饮。

②实验前洗手并用酒精棉球擦拭手和台面。

③实验操作过程中，要严格进行无菌操作，以防止菌体间交叉感染或致病菌对人体造成危害。

④在进行接种操作时，要关闭门窗，以防止空气对流，要尽量减少走动和讲话，以防止尘埃飞扬和唾沫四溅。

⑤用过的带菌吸管、滴管、玻片、涂布棒和移液器枪头等，用酒精或来苏尔等浸泡以后再进行清洗。

⑥离开实验室之前要用肥皂洗手。

⑦实验室中的菌种和物品等，未经教师允许，不得携带出实验室。

凡需进行培养的材料，都应注明菌种名、接种日期、处理方法及操作者姓名（或组别），放在制定的培养箱中进行培养。

5.如发生培养菌的器皿打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况时，应立即报告指导教师，及时处理，菌液污染实验台面或其他物件时，应及时用3％的来苏尔或5％的石炭酸液擦拭消毒。

6.爱护仪器、设备，严格按照操作规程使用仪器、设备，以确保仪器的安全和学生的人身安全，并做好使用记录，确保仪器的正常使用。

7.按时观察实验现象，认真及时的做好实验记录，对于当时不能得到实验结果而需要连续观察的，则需记下每次的实验结果，以便分析。清晰填写实验报告作业，科学阐述实验结论。

8.节约水、电，适量取用药品等耗材。

9.实验结束后，应将实验记录交指导教师审阅及检查，经同意后方可结束实验。实验完毕，认真清洗个人器皿、保养仪器、清理试剂和清洁台面，确保实验以后各种药品和仪器回归原位，台面干净整洁。

10.值日生负责打扫实验室卫生及检查实验室安全状况（门窗、水、电、煤气等）。

实验一微生物学实验基础

一、目的要求

1.熟悉实验室的各种仪器与设备。

2.学会制作棉塞的与包扎玻璃器皿，了解玻璃器皿的洗涤方法。

二、实验材料

实验室内各种仪器、培养皿、三角瓶、试管、纱布、棉花、棉线、牛皮纸、剪刀等。

三、实验内容

（一）微生物实验室常用仪器和设备

1.显微镜

显微镜是微生物实验中常用的仪器，应对它非常的熟悉。

根据光源不同，显微镜可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（或者紫外光）为光源，后者以电子束为光源。在我们的实验中常用的是光学显微镜。光学显微镜有多种，主要有普通光学显微镜、荧光显微镜、暗视野显微镜、倒置显微镜等。

在我们的实验中最常用的是普通光学显微镜，下面介绍它的主要构造。

（1）普通光学显微镜构造

此类显微镜的构造主要可分为两部分：机械部分和光学部分。显微镜的机械部分包括镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、调焦螺旋等部件，是显微镜的基本组成单位，主要是保证光学系统的准确配合和灵活调控。光学部分由物镜、目镜、聚光器、光源、反光镜等组成，它们直接影响显微镜的性能，是显微镜的核心部分。

图1-1显微镜的构造图

（2）普通光学显微镜的使用方法：

①取镜安放：

取镜：右手握住镜臂，左手平托镜座，保持镜体直立。（特别要禁止单手提着显微镜走，防止目镜从镜筒中滑脱）。

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安放：放置桌边时动作要轻。一般应在身体的前面，略偏左，镜筒向前，镜臂向后，距桌边7～10 ㎝处，以便观察和防止掉落。

②低倍镜的使用：

观察任何标本都必须先用低倍镜。

放置切片：升高镜筒，把玻片标本放在载物台中央，标本材料正对通光孔的中心，用压片夹压住载玻片的两端。

调焦：将要观察的玻片标本放在载物台通光孔的中央，玻片标本两端用压片夹夹紧，再用手沿顺时针方向旋转粗调节器，把镜筒徐徐降到接物镜头差不多接近玻片标本（约半厘米）为止（从侧面观察下降镜筒）。然后左眼观察，边观察边用调节器将镜筒徐徐上升（逆时针方向旋转粗调节器）直到发现物象，观察清晰为止。如果不够清楚，可用细准焦螺旋调节（不可以在调焦时边观察边使镜筒下降，以免压碎装片和镜头）。

③低倍镜的观察由所用的目镜放大倍数与物镜放大倍数相乘，即为原物被放大的倍数。如果物像不在视野中央，要慢慢移动到视野中央，适当再进行调节。

④高倍镜的使用

选好目标：如果要观察视野内某部分更细微的结构，则需要用高倍镜观察。先用低倍物镜确定要观察的目标，将其移至视野中央。转动转换器，把低倍物镜轻轻移开，原位置小心换上高倍物镜。再用粗调节器徐徐将镜筒距离调整，至视野中出现物象，然后用细调节器调节到看清物象止（用高倍物镜工作距离较短，操作要十分仔细，以防镜头碰击玻片）。

调焦：在正常情况下，当高倍物镜转正之后，在视野中央即可见到模糊的物像，只要向反时针方向略微调动细准焦螺旋，既可获得清晰的物像。

在换上高倍物镜观察时，视野变小变暗，要重新调节视野亮度，可升高聚光器或利用凹面反光镜。

⑤油镜的使用

高倍镜下观察的标本，如果放大倍数还不够，可用油镜，换用前，同样要先在高倍镜下观察，把要观察的部分放在视野的正中央。观察到清晰的物象之后，在盖玻片上表面的中央滴一小滴香柏油，再换上油镜头，使油镜头与香柏油接触，然后由目镜观察。一边观察，一边用手稍移动细调节器（切忌用粗调节器）以看清物象。用油镜观察完毕后，转开油镜，必须用擦镜纸点二甲苯擦去镜头上的香柏油。下降镜筒，直立反光镜，使光学部件的光线不再对在一条直线上。

应当了解的是，在显微镜中观察到的物象是倒象，因此移动玻片时，应注意移动方向。如果要使物象左移动就要向右移动玻片，同样要使物象向前移动，就要向后移动玻片。

⑥使用后的整理

观察结束，应先将镜筒升高，聚光器下降，再取下切片，然后转动转换器，使物镜与通光孔错开，做好清洁工作。清洁完毕，再下降镜筒，使物镜和载物台处于最大距离处，然后移动转换器，使两个物镜位于载物台上通光孔的两侧，呈“八”字形，将反光镜转至与载物台垂直，罩上防尘罩，仍用右手握住镜臂，左手平托镜座，按号放回镜箱中。

（3）显微镜的保养

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