生物技术制药 第二版 课后思考题及答案(全)
生物技术制药课后思考题 (2)
生物技术制药课后思考题1. 什么是生物技术制药?生物技术制药是利用生物技术手段,通过生物材料(如细胞、微生物、酶等)进行药物的研发、生产和应用的一种新型药物生产技术。
该技术利用生物工程、分子生物学、细胞生物学等学科的知识,将生物体内的特定基因或蛋白质进行分离、克隆和重组,进而生产出具有特定药理作用的药物。
2. 生物技术制药的优势有哪些?生物技术制药相对于传统的化学合成药物有以下优势:2.1 高效性和特异性生物技术制药可以通过定向克隆和重组技术,针对特定疾病靶点设计并制备药物。
由于药物的结构和功能可精确控制,因此在治疗效果上具有更高的效率和特异性。
2.2 可重复性和稳定性利用生物技术制药生产的药物,可以通过生物体系的复制和扩增得到,具有较高的生产稳定性。
与传统化学合成药物相比,生物技术制药的药物生产过程更为可控,能够保证批次之间的一致性和质量稳定性。
2.3 安全性和可调控性生物技术制药所使用的生物体或细胞经过严格筛选和检测,可以保证药物的可靠性和安全性。
此外,由于药物的来源可以通过基因工程技术进行调整和干预,使药物的生产和效果在一定程度上可调控。
2.4 可持续发展和生态友好相对于化学合成药物,生物技术制药的生产过程更为环保和持续。
生物技术制药利用生物材料进行生产,可以减少对环境的污染并节约资源。
3. 生物技术制药在医药领域中的应用有哪些?生物技术制药在医药领域中有广泛的应用,包括但不限于以下几个方面:3.1 蛋白质药物生物技术制药主要以重组蛋白质药物为主。
这些药物通过基因工程技术将目标蛋白的基因引入到特定的宿主细胞中,通过表达和纯化等工艺步骤获得目标蛋白质药物。
常见的蛋白质药物包括生长激素、胰岛素、抗体药物等。
3.2 基因治疗基因治疗是一种通过修复或改变人体基因来治疗疾病的方法。
生物技术制药可以通过基因工程技术向患者体内导入特定基因,从而纠正基因缺陷或提高免疫系统的活性,达到治疗效果。
3.3 细胞疗法细胞疗法是一种利用活体细胞来治疗疾病的方法。
生物技术制药课后思考题
第一章:绪论思考题1.什么是生物技术?生物技术所包含的内容及定义。
答:1)生物技术又称生物工程,指人们以现代生命科学为基础,结合先进的工程技术手段和其他基础学科的科学原理,按照预先的设计改造生物体或加工生物原料,为人类生产出所需产品或达到某种目的的技术。
2)包括基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程、蛋白质工程、抗体工程、糖链工程、海洋生物技术及生物转化等。
(具体定义见P1)。
2.生物技术药物的概念及分类。
答:1)指采用DNA重组技术或其他生物技术生产的用于预防、治疗和诊断疾病的药物,主要是重组蛋白或核酸类药物。
2)a.按照用途:预防、诊断、治疗;b.按作用类型:细胞因子类、激素类、酶类、疫苗、单克隆抗体类、反义核酸、RNA干扰类、基因治疗药物;c.按照生化特性:多肽类、蛋白质类、核酸类、聚乙二醇化多肽或蛋白质。
3.生物技术药物在理化性质、药理学与作用、生产制备和质量控制方面的特性。
答:1)理化性质(从药物多是蛋白质或核酸出发):a.相对分子质量大;b.结构复杂;c.稳定性差;2)药理学作用:a.活性与作用机制明确;b.作用针对性强;c.毒性低;d.体内半衰期短;e.有种属特异性;f.可产生免疫原性;3)生产制备特性:a.药物分子在原料中含量低;b.原料中常存在降解目标产物的杂质;c.制备工艺条件温和;d.分离纯化困难;e.产品易受有害物质污染;4)质量控制特性:a.质量标准内容的特殊性;b.制造项下的特殊规定;c.检定项下的特殊规定。
4.生物技术制药的概念和主要研究内容与任务。
答:1)指利用基因工程、细胞工程等生物技术的原理和方法,来研究、开发和生产预防、治疗和诊断疾病的药物的一门科学。
2)主要研究内容与任务:a.生物制药技术的研究、开发与应用;b.利用生物技术研究、开发和生产药物。
第二章:基因工程制药思考题1.简述基因工程制药的基本原理和基本流程。
答:1)利用重组DNA技术将外源基因导入到宿主菌或宿主细胞进行大规模培养和诱导表达以获取蛋白质药物的过程称为基因工程制药。
生物技术制药课后习题答案
第一章绪论1生物技术是以生命科学为基础,利用生物体(或生物组织、细胞及其组分)的特性和功能,设计构建有预期性状的新物种或新品系,并与工程相结合,进行加工生产,为社会提供商品和服务的一个综合性的技术体系。
2生物技术的主要内容:P1基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程蛋白质工程:运用基因工程全套技术改变蛋白质结构的技术。
染色体工程:探索基因在染色体上的定位,异源基因导入、染色体结构改变。
生化工程:生物反应器及产品的分离、提纯技术。
3生物技术制药采用现代生物技术人为创造条件,借助微生物、植物或动物来生产所需的医药品过程被称为4生物技术药物采用DNA重组技术或其它生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物才能被称为5生物药物生物技术药物与天然生化药物、微生物药物、海洋药物和生物制品一起归类为PPT复习题第二章基因工程制药1、简述基因工程制药的基本程序。
P162、说明基因工程技术用于制药的三个重要意义。
P15第一段第一行3、采用哪两种方法来确定目的cDNA克隆?P18(7目的基因cDNA的分离和鉴定)①核酸探针杂交法用层析法或高分辨率电泳技术(蛋白质双向电泳技术或质谱技术)分离出确定为药物的蛋白质,氨基酸测序,按照密码子对应原则合成出单链寡聚核苷酸,用做探针,与cDNA文库中的每一个克隆杂交。
这个方法的关键是分离目的蛋白,②免疫反应鉴定法(酶联免疫吸附检测)4、说明用大肠杆菌做宿主生产基因工程药物必须克服的6个困难。
①原核基因表达产物多为胞内产物,必须破胞分离,受胞内其它蛋白的干扰,纯化困难;②原核基因表达产物在细胞内多为不溶性(包含体, inclusion body),必须经过变性、复性处理以恢复药物蛋白的生物学活性,工艺复杂;③没有翻译后的加工机制,如糖基化,应用上受到限制;④产物的第一个氨基酸必然是甲酰甲硫氨酸,因无加工机制,常造成N-Met冗余,做为药物,容易引起免疫反应;⑤细菌的内毒素不容易清除;⑥细菌的蛋白酶常常把外源基因的表达产物消化;5、用蓝藻做宿主生产基因工程药物有什么优越性?蓝藻:很有前途的药物基因的宿主细胞①有内源质粒,美国Wolk实验室已构建1200种人工质粒,可用做基因载体。
【精品】生物制药思考题
第一章绪论1。
生物技术的定义与内容生物技术是指应用自然科学和工程学的原理,依靠生物作用剂的作用将物料进行加工以提供产品或为社会服务的技术。
生物技术内容:基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程等.生物技术的一个主要目标就是生物物质的高效生产.2.什么是生物药物?生物药物可分为哪些类型?生物药物:利用生物体的初级或次级代谢产物、生物组织或整个生物体来生产用于预防、诊断或治疗疾病的医用品。
生物药物的分类(按来源与性质分类)1。
天然生物药物:天然存在于动物、植物、微生物以及各种海洋生物等生物体内,直接通过提取、分离和纯化获得的有效的药理成分;2.重组药物:重组多肽、蛋白质3.基因药物:核酸类药物(基因治疗剂、基因疫苗、反义药物等)4。
合成与半合成的生物药物生物药物按功能与用途划分为:1。
治疗药物2.预防药物(主要预防传染病,疫苗、类毒素)3.诊断药物(速度快、灵敏度高、特异性强)3。
了解和熟悉一些常见的基因工程肽类药物。
细胞因子(cytokine):细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白质的统称.在很多情况下,多种免疫细胞间的相互作用是通过细胞因子介导完成的。
干扰素类(interferon,IFN),白细胞介素类(interleukin,IL),集落刺激因子类(colony—stimulatingfacor,CSF),表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF),神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF),肿瘤坏死因子类(tumornecrosisfactor,TNF),红细胞生成素(erythropoietin,EPO),凝血因子VIII、IX。
激素:胰岛素(insulin),生长激素(growth,GH),降钙素(calcitonin),心钠素(atrialnatriureticfactor,ANF)。
药用酶及其他蛋白药物:链激酶(streptokinase,SK),尿激酶(urokinase),葡激酶(staphylokinase),组织型纤溶酶原激活剂(tissue—typeplasminogenactivator,t—PA),超氧化物岐化酶(superoxidedismutases,SOD).第二章基因工程制药1、写出基因工程的基本要素及制备基因工程药物的基本过程.基因工程基本要素:工具酶,目的基因,载体,宿主制备基因工程药物的基本过程2、列出4种获取目的基因的方式。
生物制药工艺学第二版各章习题
生物制药工艺学第二版各章习题《现代生物制药工艺学》配套习题班级:姓名:学号:第1章绪论习题一、名词解释:1、生物药物:2、生化药物3、生物制品二、填空题:1、按照药物的化学本质,把生物药物分为()、()、()、()、()、()、()七类。
2、生物药物的原料来源分为()、()、()、()、()五大类。
3、肝素的化学成分属于一种(),其最常见的用途是()。
4、SOD的中文全称是(),能专一性清除()。
5、辅酶在人体内的酶促反应中起重要的递H、递e等作用,有药用价值,请任意列举4种人体生化反应中重要的辅酶:()、()、()和()。
6、前列腺素的成分是一大类含五元环的(),重要的天然前列腺素有()、()、()等。
三、选择题1、复方氨基酸注射液临床最主要的用途是()A,治疗肝脏疾病;B,为重症患者提供蛋白类原料;C,为病人提供能量;D,用做稀释抗生素类药物的载体。
2、某些氨基酸的衍生物具有特殊药效,例如()是治疗帕金森病的最有效药物。
A,N-乙酰-Cys;B,S-甲基-Cys;C,S-氨基甲酰-Cys;D,L-多巴(L-二羟-Phe)3、下列药物其本质不属于多肽的为()A,催产素;B,加压素;C,胰岛素;D,胰高血糖素4、细胞因子如EGF、EPO等对特定细胞有重要的调节作用,有重要医用价值,目前发现的细胞因子,其成分主要为()类。
A,蛋白或多肽;B,多糖;C,固醇;D,核酸5、下列()药品目前已主要使用基因工程方法制备。
(多选)A,乙肝疫苗;B,胰岛素;C,人生长素;D,抗蛇毒血清6、抗生素的成分大多为()A,多糖;B,多肽;C,脂类;D,小分子化学物质7、cty C (细胞色素C)参与代谢的机制是()A,参与细胞内的无氧酵解;B,参与细胞内的有氧呼吸,是呼吸链的组成部分;C,参与氨基酸的转氨基反应;D,参与核苷酸的合成8、胰岛组织中胰岛素的含量仅为()A,0.5%;B,0.2%;C,0.02%;D,0.002%四、简答题1、请说明酶类药物主要有哪几类,并分别举例。
(完整版)生物技术制药习题答案(夏焕章版)
(完整版)生物技术制药习题答案(夏焕章版)第一章绪论填空题1. 生物技术制药的特征高技术、高投入、高风险、高收益、长周期。
2. 生物药物广泛应用于医学各领域,按功能用途可分为三类,分别是治疗药物、预防药物、诊断药物。
3.现代生物药物已形成四大类型:一是应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂;二是基因药物;三是来自动物植物和微生物的天然生物药物;四是合成与部分合成的生物药物;4.生物技术的发展按其技术特征来看,可分为三个不同的发展阶段,传统生物技术阶段;近代生物技术阶段;现代生物技术阶段。
5.生物技术所含的主要技术范畴有基因工程;细胞工程;酶工程;发酵工程;蛋白质核酸工程和生化工程;选择题1.生物技术的核心和关键是(A )A 细胞工程B 蛋白质工程C 酶工程D 基因工程2. 第三代生物技术( A )的出现,大大扩大了现在生物技术的研究范围A 基因工程技术B 蛋白质工程技术C 海洋生物技术D细胞工程技术3.下列哪个产品不是用生物技术生产的(D )A 青霉素B 淀粉酶C 乙醇D 氯化钠4. 下列哪组描述(A )符合是生物技术制药的特征A高技术、高投入、高风险、高收益、长周期B高技术、高投入、低风险、高收益、长周期C高技术、低投入、高风险、高收益、长周期D高技术、高投入、高风险、低收益、短周期5. 我国科学家承担了人类基因组计划(C )的测序工作A10% B5% C 1% D 7%名词解释1.生物技术制药采用现代生物技术可以人为的创造一些条件,借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医学药品,称为生物技术制药。
2.生物技术药物一般说来,采用DNA重组技术或其它生物新技术研制的蛋白质或核酸来药物称为生物技术药物。
3.生物药物生物技术药物是重组产品概念在医药领域的扩大应用,并与天然药物、微生物药物、海洋药物和生物制品一起归类为生物生物药物。
简答题1.生物技术药物的特性是什么?生物技术药物的特征是:(1)分子结构复杂(2)具有种属差异特异性(3)治疗针对性强、疗效高(4)稳定性差(5)免疫原性(6)基因稳定性(7)体内半衰期短(8)受体效应(9)多效应和网络效应(10)检验特殊性2.简述生物技术发展的不同阶段的技术特征和代表产品?(1)传统生物技术的技术特征是酿造技术,所得产品的结构较为简单,属于微生物的初级代谢产物。
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第二版生物制药技术习题答案HUA system office room 【HUA16H-TTMS2A-HUAS8Q8-HUAH1688】第一章绪论1、生化药物:从生物体分离纯化所得的一类结构上十分接近人体内正常生理活性物质的,能调节人体生理功能以达到预防和治疗疾病目的的物质。
P12、按照药物的化学本质,把生物药物分为氨基酸类、蛋白质类、酶类、核酸类、多糖类、脂类、维生素及辅酶类。
P3-53、生物药物的原料来源分为动物、植物、微生物、海洋生物、人体五大类。
P54、肝素的化学成分属于一种多糖,其最常见的用途是抗血凝。
P45、SOD的中文全称是超氧化物歧化酶,能专一性清除氧自由基。
P46、辅酶在人体内的酶促反应中起重要的递H、递e等作用,有药用价值,人体生化反应中重要的辅酶:NAD、NADP、FMN和FAD 。
P47、前列腺素的成分是一大类含五元环的不饱和脂肪酸,重要的天然前列腺素有PGE1、PGE2、PGF2α等。
P58、请说明酶类药物主要有几类,并分别举例。
P4第二章生物药物的质量管理与控制1、中试:是把已取得的实验室研究成果进行放大的研究过程。
P282、热原:是指在药品中污染有能引起动物及人的体温升高的物质。
P423、生物检定法:利用药物对生物体的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。
4、生物药物质量检验的程序包括取样、鉴别、检查、含量测定、写出检验报告。
5、药物的ADME表示药物在体内的整个过程,它们分别是吸收Absorption、分布Distribution、代谢Metabolism、排泄Excretion。
6、生物药物在表示含量的时候有百分含量和活性效价两种。
7、英美等国在药品的质量管理上采取典型的主副典机制,其中美国的药典和副药典分别简称为 USP 和 NF 。
8、在生物药物的质量管理规范中,GMP、GLP、GCP分别指良好药品生产规范、良好药品实验研究规范、良好药品临床试验规范。
9、为了对新兴的基因工程药物进行质量管理,中国在2000年编制并颁布了中国生物制品规程。
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生物制药工程思考题(推荐5篇)第一篇:生物制药工程思考题第一章绪论1.生物药物的概念及21世纪生物药物的分类2.生物技术(Biotechnology)概念及现代生物技术的组成和特点3.基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术、发酵工程技术定义4.基因诊断、基因治疗概念5.生物技术在药学应用中的两类方式6.生物药物的两大来源及生物药物的特点7.生物制药的特点、生物制药基本过程及生物制药基本方法第二章基因工程制药复习思考题1.基因的概念及基因的一般特性2.基因工程药物的概念3.基因工程药物制药的主要流程4.基因工程药物建立分离纯化工艺的根据5.基因工程药物分离纯化的一般流程6.基因工程产品的质量控制内容7.基因工程药物临床前安全性评价的特殊性8.蛋白质工程的概念与基本流程第三章动物细胞工程制药复习思考题1.细胞定义、细胞的特征和细胞的化学组成2.细胞培养定义、细胞培养基本条件和基本过程3.细胞融合技术定义和基本过程4.细胞工程技术概念和动物细胞工程制药的基本概念5.动物细胞培养技术概念和动物细胞培养特点6.细胞株、细胞系、原代培养和传代培养的概念7.概念——抗体(antibody)、多克隆抗体(Polyclonalantibody,PcAb)、单克隆抗体(monoclonal antibody)、杂交瘤细胞(hybridoma)技术、抗体工程8.单抗制备的基本流程9.HAT培养基的选择培养杂交瘤细胞的原理10.单克隆抗体的鉴定与检测项目11.动物细胞的大规模培养方法12.干细胞、胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)、组织工程的概念及应用第四章植物细胞工程制药1.植物细胞工程制药的两大内容2.植物细胞的全能性定义和原理3.植物细胞特点——外植体(explant)、脱分(dedifferentiation)、再分化(redifferentiation)、愈伤组织(callus culture)概念4.植物细胞的培养方法6.植物细胞工程制药应用于哪些方面第五章发酵工程制药复习思考题1.发酵定义及发酵类型及特点2.发酵工程的定义和研究内容3.发酵工程制药的特点及其生产药物种类4.理想菌种应该具备哪些条件及菌种的选育方法和这些方法各自的特点5.菌种保藏的目的、关键和保藏方法6.培养基概念和培养基的配制原则7.发酵的基本过程是什么?微生物发酵方式有几种?8.发酵过程影响因素及控制10代谢工程定义11.发酵工程下游加工过程的的特点和一般程序简述各种主要的分离纯化方法的操作原理。
生物制药第二版
(第2版Biotechnological Pharmaceutics)(夏焕章熊宗贵,主编北京:高等教育出版社,2006年)复习思考题第一章绪论(4学时)一、目的要求:1、掌握生物技术制药、生物技术的概念。
2、了解生物技术的组成及其在各个领域的应用。
3、了解医药生物技术的新进展与发展展望。
二、复习思考题1、生物技术制药的概念?2、生物技术可分为哪几个发展阶段?3、生物技术药物有哪些类型?有什么特点?3、生物技术制药有哪些特征?4、生物技术在制药中有哪些应用?第二章基因工程制药(18学时)一、目的要求:1、掌握基因工程技术的概念及基因工程制药的基本过程。
2、理解目的基因的获得,基因在宿主细胞中的表达。
3、理解基因工程菌的生长代谢特点,其质粒不稳定产生的原因及提高质粒稳定性的方法。
4、理解基因工程药物的分离纯化。
5、理解基因工程菌的培养方式,发酵工艺及培养设备。
6、了解基因工程药物的质量控制。
二、复习思考题1、基因工程制药的基本过程是什么?2、逆转录法获得目的基因的过程是什么?3、影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些?4、质粒不稳定产生的原因及提高质粒稳定性的方法是什么?5、影响基因工程菌发酵的因素有哪些?如何控制发酵的各种参数?6、什么是高密度发酵?影响高密度发酵的因素有哪些?采取哪些方法实现高密度发酵?7、分离纯化常用的色谱分离方法有哪些?各原理是什么?8、对基因重组技术所获得的蛋白质药物产品进行鉴定时,常作哪些项目分析?第三章动物细胞制药(10学时)一、目的要求:1、掌握细胞工程的概念。
2、理解动物细胞的形态和生理特点。
3、理解生产用动物细胞的要求和获得。
4、理解动物细胞的培养条件和培养基。
5、了解动物细胞生物反应器及其检测控制系统。
6、了解动物细胞制药的前景与展望。
二、复习思考题1、离体培养的动物细胞分哪些类型?2、生产用动物细胞分哪些类型?各有何特点?3、简述动物细胞的培养基种类和培养基对动物细胞培养的影响。
生物技术制药课后思考题
第一章:绪论思考题1.什么是生物技术?生物技术所包含的内容及定义。
答:1)生物技术又称生物工程,指人们以现代生命科学为基础,结合先进的工程技术手段和其他基础学科的科学原理,按照预先的设计改造生物体或加工生物原料,为人类生产出所需产品或达到某种目的的技术。
2)包括基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程、蛋白质工程、抗体工程、糖链工程、海洋生物技术及生物转化等。
(具体定义见P1)。
2.生物技术药物的概念及分类。
答:1)指采用DNA重组技术或其他生物技术生产的用于预防、治疗和诊断疾病的药物,主要是重组蛋白或核酸类药物。
2)a.按照用途:预防、诊断、治疗;b.按作用类型:细胞因子类、激素类、酶类、疫苗、单克隆抗体类、反义核酸、RNA干扰类、基因治疗药物;c.按照生化特性:多肽类、蛋白质类、核酸类、聚乙二醇化多肽或蛋白质。
3.生物技术药物在理化性质、药理学与作用、生产制备和质量控制方面的特性。
答:1)理化性质(从药物多是蛋白质或核酸出发):a.相对分子质量大;b.结构复杂;c.稳定性差;2)药理学作用:a.活性与作用机制明确;b.作用针对性强;c.毒性低;d.体内半衰期短;e.有种属特异性;f.可产生免疫原性;3)生产制备特性:a.药物分子在原料中含量低;b.原料中常存在降解目标产物的杂质;c.制备工艺条件温和;d.分离纯化困难;e.产品易受有害物质污染;4)质量控制特性:a.质量标准内容的特殊性;b.制造项下的特殊规定;c.检定项下的特殊规定。
4.生物技术制药的概念和主要研究内容与任务。
答:1)指利用基因工程、细胞工程等生物技术的原理和方法,来研究、开发和生产预防、治疗和诊断疾病的药物的一门科学。
2)主要研究内容与任务:a.生物制药技术的研究、开发与应用;b.利用生物技术研究、开发和生产药物。
第二章:基因工程制药思考题1.简述基因工程制药的基本原理和基本流程。
答:1)利用重组DNA技术将外源基因导入到宿主菌或宿主细胞进行大规模培养和诱导表达以获取蛋白质药物的过程称为基因工程制药。
生物技术制药课后习题答案
第一章绪论1生物技术是以生命科学为基础,利用生物体(或生物组织、细胞及其组分)的特性和功能,设计构建有预期性状的新物种或新品系,并与工程相结合,进行加工生产,为社会提供商品和服务的一个综合性的技术体系。
2生物技术的主要内容:P1基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程蛋白质工程:运用基因工程全套技术改变蛋白质结构的技术。
染色体工程:探索基因在染色体上的定位,异源基因导入、染色体结构改变。
生化工程:生物反应器及产品的分离、提纯技术。
3生物技术制药采用现代生物技术人为创造条件,借助微生物、植物或动物来生产所需的医药品过程被称为4生物技术药物采用DNA重组技术或其它生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物才能被称为5生物药物生物技术药物与天然生化药物、微生物药物、海洋药物和生物制品一起归类为PPT复习题第二章基因工程制药1、简述基因工程制药的基本程序。
P162、说明基因工程技术用于制药的三个重要意义。
P15第一段第一行3、采用哪两种方法来确定目的cDNA克隆?P18(7目的基因c DN A的分离和鉴定)①核酸探针杂交法用层析法或高分辨率电泳技术(蛋白质双向电泳技术或质谱技术)分离出确定为药物的蛋白质,氨基酸测序,按照密码子对应原则合成出单链寡聚核苷酸,用做探针,与cDNA文库中的每一个克隆杂交。
这个方法的关键是分离目的蛋白,②免疫反应鉴定法(酶联免疫吸附检测)4、说明用大肠杆菌做宿主生产基因工程药物必须克服的6个困难。
①原核基因表达产物多为胞内产物,必须破胞分离,受胞内其它蛋白的干扰,纯化困难;②原核基因表达产物在细胞内多为不溶性(包含体, inclusi on body),必须经过变性、复性处理以恢复药物蛋白的生物学活性,工艺复杂;③没有翻译后的加工机制,如糖基化,应用上受到限制;④产物的第一个氨基酸必然是甲酰甲硫氨酸,因无加工机制,常造成N-Met冗余,做为药物,容易引起免疫反应;⑤细菌的内毒素不容易清除;⑥细菌的蛋白酶常常把外源基因的表达产物消化;5、用蓝藻做宿主生产基因工程药物有什么优越性?蓝藻:很有前途的药物基因的宿主细胞①有内源质粒,美国Wolk实验室已构建1200种人工质粒,可用做基因载体。
生物制药思考题(树达)
生物制药思考题(树达)生物制药概论1.生物药品和生物制药的概念2.?生物制药的主要研究内容及其代表性产品3.?按生化性质来分,生物药物主要有几类,指出各类代表性的产品及其用途4.?生物制药历史上里程碑式的发现、发明或关键技术的建立5.?基因工程技术、细胞工程技术、发酵工程和酶工程在医药工业中应用的主要内容6.?什么是基因治疗?目前考虑用基因治疗的疾病有哪些?7.?细胞因子的含义?哪些是细胞因子?基因工程制药1.?基因工程技术的含义2.?目前开发和上市的主要基因工程药品及其生化性质、基本用途。
3.目前基因工程制药中常用的目的基因克隆载体主要有哪几种?4.?克隆(无性繁殖)的含义?基因工程无性繁殖系的构建过程?5.?获得目的基因的主要方法?哪种在目前的基因工程技术中应用得更普遍??简要回答利用酶促合成法(逆转录法)制取目的基因的步骤?7.?请说出在基因工程技术中,从真核细胞总RNA中分离mRNA 的基本原理。
8.?采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术合成目的cDNA的一般程序是什么?9.?请说出聚合酶链式反应(PCR)体外扩增DNA技术的原理和步骤并图示说明。
10.?受体细胞、转化、转染、转导的含义。
11.?最常用的重组体(菌)的筛选方法有哪三种?12.?Sanger双脱氧链终止法测序的基本原理。
13.?请说明在原核细胞中表达真核基因,合成真核蛋白存在的主要问题。
14.?基因工程产物的分离纯化与传统发酵产物的分离纯化相比具有哪些特点?细胞工程制药1.?细胞工程的含义2.?细胞融合的含义3.?细胞融合的方法有哪几种?其基本原理是什么?4.?两种亲本细胞经过融合后,在其融合混合物种可能会存在几种类型的细胞?杂种细胞筛选的一般原理是什么?有哪些最常用的杂种细胞筛选系统??什么是杂种细胞的有用性状?有用性状的检测方法有哪些?6.?原生质体融合的含义?微生物原生质体融合育种的主要步骤是什么?7.?酶法进行微生物和植物细胞破壁时,不同酶与不同微生物或植物之间的对应关系如何?8.?植物原生质体融合后的杂种细胞有哪些筛选方法?9.?单克隆抗体的含义?利用杂交瘤技术制备单克隆抗体的一般过程如何?利用单克隆抗体检测病原微生物会产生假阳性吗?10.?利用HAT筛选系统筛选杂交瘤细胞的基本原理11.?什么是杂交瘤细胞的克隆化?克隆化的方法有哪些?12.?目前大规模生产单克隆抗体的方法有哪些,简述其基本原理?13.?单克隆抗体的应用14.?微生物的生物转化的含义?利用微生物的生物转化可生产哪些生物药品?15.什么是核酸适配体、肽配体?动植物细胞培养制药1.?动物细胞培养大致可生产哪些药物?2.?血清作为动物细胞培养基的补充成分有哪些优缺点?3.?请说出贴壁依赖性动物细胞的生长阶段并作简要说明4.?动物细胞培养支原体污染的主要处理方法5.?动物细胞类型及其培养方法,操作方式。
生物制药工艺学复习思考题答案
⽣物制药⼯艺学复习思考题答案第⼀章⽣物药物概论1.⽣物药物有哪⼏类?DNA重组药物与基因药物有什么区别?( 1 )重组DNA药物(⼜称基因⼯程药物)(2)基因药物:以遗传物质DNA、RNA为物质基础制造的药物(3)天然⽣物药物(4)合成或半合成⽣物药物2.⽣物药物有哪些作⽤特点?(⼀)药理学(pharmacology)特性:1、活性强: 体内存在的天然活性物质。
2、治疗针对性强,基于⽣理⽣化机制。
3、毒副作⽤⼀般较少,营养价值⾼。
4、可能具免疫原性或产⽣过敏反应(⼆)、理化特性:1. 含量低、杂质多、⼯艺复杂、收率低、技术要求⾼;2. 组成结构复杂,具严格空间结构,才有⽣物活性。
对多种物理、化学、⽣物学因素不稳定。
3. 活性⾼,有效剂量⼩,对制品的有效性,安全性要严格要求(包括标准品的制订)。
3.DNA重组药物主要有哪⼏类?举例说明之。
1)细胞因⼦⼲扰素(IFN)类药物(2)细胞因⼦⽩介素类和肿瘤坏死因⼦(3)造⾎功能药物(4)⽣长因⼦类药物(5)重组蛋⽩和多肽类激素(6)⼼⾎管病治疗剂与酶制剂(7)重组疫苗与治疗性抗体4.术语:药物与药品⽣物药物,DNA重组药物:⼜称基因⼯程药物,应⽤基因⼯程和蛋⽩质⼯程技术制造的重组活多肽,蛋⽩质及其修饰物基因药物:这类药物是以基因物质(RNA或DNA及其衍⽣物)作为治疗的物质基础,包括基因治疗⽤的重组⽬的DNA⽚段、重组疫苗、反义药物和核酶等。
反义药物:以⼈⼯合成的10~⼏⼗个反义寡核苷酸序列与模板DNA或mRNA互补形成稳定的双链结构,抑制靶基因的转录和mRNA的翻译,从⽽起到抗肿瘤和抗病毒作⽤。
核酸疫苗:是指将编码外源性抗原的基因插⼊到含真核表达系统的载体上,然后直接导⼊⼈或动物体内,让其在宿主细胞中表达抗原蛋⽩,该抗原蛋⽩可直接诱导机体产⽣免疫应答。
RNAi :在实验室中是⼀种强⼤的实验⼯具,利⽤具有同源性的双链RNA(dsRNA)诱导序列特异的⽬标基因的沉寂,迅速阻断基因活性。
生物技术制药课后思考题资料
第一章:绪论思考题1.什么是生物技术?生物技术所包含的内容及定义。
答:1)生物技术又称生物工程,指人们以现代生命科学为基础,结合先进的工程技术手段和其他基础学科的科学原理,按照预先的设计改造生物体或加工生物原料,为人类生产出所需产品或达到某种目的的技术。
2)包括基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程、蛋白质工程、抗体工程、糖链工程、海洋生物技术及生物转化等。
(具体定义见P1)。
2.生物技术药物的概念及分类。
答:1)指采用DNA重组技术或其他生物技术生产的用于预防、治疗和诊断疾病的药物,主要是重组蛋白或核酸类药物。
2)a.按照用途:预防、诊断、治疗;b.按作用类型:细胞因子类、激素类、酶类、疫苗、单克隆抗体类、反义核酸、RNA干扰类、基因治疗药物;c.按照生化特性:多肽类、蛋白质类、核酸类、聚乙二醇化多肽或蛋白质。
3.生物技术药物在理化性质、药理学与作用、生产制备和质量控制方面的特性。
答:1)理化性质(从药物多是蛋白质或核酸出发):a.相对分子质量大;b.结构复杂;c.稳定性差;2)药理学作用:a.活性与作用机制明确;b.作用针对性强;c.毒性低;d.体内半衰期短;e.有种属特异性;f.可产生免疫原性;3)生产制备特性:a.药物分子在原料中含量低;b.原料中常存在降解目标产物的杂质;c.制备工艺条件温和;d.分离纯化困难;e.产品易受有害物质污染;4)质量控制特性:a.质量标准内容的特殊性;b.制造项下的特殊规定;c.检定项下的特殊规定。
4.生物技术制药的概念和主要研究内容与任务。
答:1)指利用基因工程、细胞工程等生物技术的原理和方法,来研究、开发和生产预防、治疗和诊断疾病的药物的一门科学。
2)主要研究内容与任务:a.生物制药技术的研究、开发与应用;b.利用生物技术研究、开发和生产药物。
第二章:基因工程制药思考题1.简述基因工程制药的基本原理和基本流程。
答:1)利用重组DNA技术将外源基因导入到宿主菌或宿主细胞进行大规模培养和诱导表达以获取蛋白质药物的过程称为基因工程制药。
生物制药思考题
思考题一、绪论1.生物药物生物药物种类2.生物技术药物3.生物技术药物种类4、生物技术药物的主要特点及用途5、生物技术制药概念及特征6、简述我国生物技术制药行业状况及存在的问题?7、简述我国生物技术制药产业发展方向。
二、第二章1、生物药物概念2、生物药物特性有哪些?3、生物药物如何分类?4、蛋白质药物的分离纯化方法有哪些?5、核酸类药物的分离纯化方法有哪些?6、糖类药物的分离纯化方法有哪些?7、简述尿激酶制备过程。
三、第三章1、简述基因工程制药的基本程序。
2、采用哪两种方法来确定目的cDNA克隆?3、用蓝藻做宿主生产基因工程药物有什么优越性?4、简述基因工程菌中质粒不稳定的两个指标?如何计算质粒的稳定性?5、简述提高质粒稳定性的方法。
6、重组蛋白不同表达策略的优缺点7、简述基因工程药物分离纯化工艺设计中必须考虑的药物的5个特点。
8、简述重组蛋白(包涵体)的复性过程?9、简述基因工程制备胰岛素的三种方法?10、简述基因工程制备干扰素 2b的二种方法?11、简述基因工程法制备重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的方法?第四章1、动物细胞体外培养形态有哪三种?2、动物细胞体外生长三阶段?3、动物细胞培养方法?4、动物细胞培养操作方式有哪些?5、简述动物细胞工程制药过程?6、药物生产用动物细胞的来源有哪些?7、常用生产用动物细胞系?8、高效表达工程细胞株的筛选方法?9、什么是原始细胞库和生产用细胞库?10、简述利用动物细胞工程法生产促红细胞生成素的过程?11、试述利用动物细胞工程法生产乙肝疫苗的过程?第五章1、名词解释:抗体工程药物 CDR移植抗体 Fab抗体 Fv抗体单链抗体单域抗体双特异抗体噬菌体抗体库技术2、抗体药物存在的问题有哪些?主要研究方向在哪?3、简述单克隆抗体的制备方法?4、基因工程抗体有哪些?简述单链抗体的优缺点?5、简述抗体库技术优点?6、试述噬菌体抗体库的制备方法7、简述单克隆抗体杂交瘤技术与噬菌体抗体技术区别?8、抗体诊断试剂有哪些类型?第六章1、微生物次级代谢产物生物合成的特点?2、微生物药物生产的优点?3、微生物药物包括哪些?4、新型微生物药物的筛选方法?5、微生物药物合成的生源有哪些?6、简述基因工程技术在改进微生物菌种方面的应用。
生物制药思考题资料
生物制药思考题思考题一、绪论1.生物药物生物药物种类2.生物技术药物3.生物技术药物种类4、生物技术药物的主要特点及用途5、生物技术制药概念及特征6、简述我国生物技术制药行业状况及存在的问题?7、简述我国生物技术制药产业发展方向。
二、第二章1、生物药物概念2、生物药物特性有哪些?3、生物药物如何分类?4、蛋白质药物的分离纯化方法有哪些?5、核酸类药物的分离纯化方法有哪些?6、糖类药物的分离纯化方法有哪些?7、简述尿激酶制备过程。
三、第三章1、简述基因工程制药的基本程序。
2、采用哪两种方法来确定目的cDNA克隆?3、用蓝藻做宿主生产基因工程药物有什么优越性?4、简述基因工程菌中质粒不稳定的两个指标?如何计算质粒的稳定性?5、简述提高质粒稳定性的方法。
6、重组蛋白不同表达策略的优缺点7、简述基因工程药物分离纯化工艺设计中必须考虑的药物的5个特点。
8、简述重组蛋白(包涵体)的复性过程?9、简述基因工程制备胰岛素的三种方法?10、简述基因工程制备干扰素 2b的二种方法?11、简述基因工程法制备重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的方法?第四章1、动物细胞体外培养形态有哪三种?2、动物细胞体外生长三阶段?3、动物细胞培养方法?4、动物细胞培养操作方式有哪些?5、简述动物细胞工程制药过程?6、药物生产用动物细胞的来源有哪些?7、常用生产用动物细胞系?8、高效表达工程细胞株的筛选方法?9、什么是原始细胞库和生产用细胞库?10、简述利用动物细胞工程法生产促红细胞生成素的过程?11、试述利用动物细胞工程法生产乙肝疫苗的过程?第五章1、名词解释:抗体工程药物 CDR移植抗体 Fab抗体 Fv抗体单链抗体单域抗体双特异抗体噬菌体抗体库技术2、抗体药物存在的问题有哪些?主要研究方向在哪?3、简述单克隆抗体的制备方法?4、基因工程抗体有哪些?简述单链抗体的优缺点?5、简述抗体库技术优点?6、试述噬菌体抗体库的制备方法7、简述单克隆抗体杂交瘤技术与噬菌体抗体技术区别?8、抗体诊断试剂有哪些类型?第六章1、微生物次级代谢产物生物合成的特点?2、微生物药物生产的优点?3、微生物药物包括哪些?4、新型微生物药物的筛选方法?5、微生物药物合成的生源有哪些?6、简述基因工程技术在改进微生物菌种方面的应用。
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1. 生物技术制药分为哪些类型?生物技术制药分为四大类:(1)应用重组DNA技术(包括基因工程技术、蛋白质工程技术)制造的基因重组多肽,蛋白质类治疗剂。
(2)基因药物,如基因治疗剂,基因疫苗,反义药物和核酶等(3)来自动物、植物和微生物的天然生物药物(4)合成与部分合成的生物药物2.生物技术制药具有什么特征?(1)分子结构复杂(2)具有种属特异性(3)治疗针对性强,疗效高(4)稳定性差(5)基因稳定性(6)免疫原性(7)体内的半衰期短(8)受体效应(9)多效性(10)检验的特殊性3.生物技术制药中有哪些应用?应用主要有:(1)基因工程制药:包括基因工程药物品种的开发,基因工程疫苗,基因工程抗体,基因诊断与基因治疗,应用基因工程技术建立新药的筛选模型,应用基因工程技术改良菌种,产生新的微生物药物,基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用,利用转基因动植物生产蛋白质类药物(2)细胞工程制药:包括单克隆抗体,动物细胞培养,植物细胞培养生产次生代谢产物(3)酶工程制药(4)发酵工程制药4.基因工程药物制造的主要程序有哪些?基因工程药物制造的主要步骤有:目的基因的克隆,构造DNA重组体,构造工程菌,目的基因的表达,外源基因表达产物的分离纯化产品的检验5.影响目的的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些?(1)外源基因的计量(2)外源基因的表达效率:a、启动子的强弱 b、核糖体的结合位点 c、SD序列和起始密码的间距 d、密码子组成(3)表达产物的稳定性(4)细胞的代谢付荷(5)工程菌的培养条件6.质粒不稳定分为哪两类,如何解决质粒不稳定性?质粒不稳定分为分裂分为分裂不稳定和结构不稳定。
质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象;质粒的结构不稳定是DNA从质粒上丢失或碱基重排,缺失所致工程菌性能的改变。
提高质粒稳定性的方法如下:(1)选择合适的宿主细菌2)选择合适的载体(3)选择压力(4)分阶段控制培养(5)控制培养条件(6)固定化7.影响基因工程菌发酵的因素有哪些?如何控制发酵的各种参数?影响因素:(1)培养基(2)接种量(3)温度(4)溶解氧(5)诱导时机的影响(6)诱导表达程序(7) PH值8.什么是高密度发酵?影响高密度发酵的因素有哪些?可采取哪些方法来实现高密度发酵?高密度发酵:是指培养液中工程菌的菌体浓度在50gDCW/L以上,理论上的最高值可达200gDCW/L 影响因素:(1)培养基(2)溶氧浓度(3)PH (4)温度(5)代谢副产物实现高密度发酵的方法:(1)改进发酵条件:a、培养基 b、建立流加式培养基 c、提高供养能力(2)构建出产乙酸能力低的工程菌宿主菌:a、阻断乙酸产生的主要途径 b、对碳代谢流进行分流 c、限制进入糖酵解途径的碳代谢流 d、引入血红蛋白基因(3)构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌9.分离纯化常用的色谱分离方法有哪些?它们的原理是什么?方法有离子交换色谱、疏水色谱、反相色谱、亲和色谱、凝胶过滤色谱及高压液相色谱。
(1)离子交换色谱IEC:是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。
(2)疏水层析HIC:是利用蛋白质表面的疏水区与固定相上疏水性基团相互作用力的差异,对蛋白质组进行分离的层析方法。
(3)亲和层析AC:是利用固定化配体与目的蛋白质之间的非常特异的生物亲和力进行吸附,这种结合既是特异的,又是可逆的,改变条件可以使这种结合解除。
(4)凝胶过滤层析:以多孔性凝胶填料为固定相,按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相层析方法。
10.对由基因重组技术所获得的蛋白质药物进行鉴定时,常做哪些项目分析?基因工程药物质量控制主要包括以下几点:产品的鉴别,纯度,活性,安全性,稳定性和一致性项目分析主要有:(1)生物活性测定(2)理化性质鉴定(3)蛋白质含量鉴定(4)蛋白质纯度分析(5)杂志检测(6)稳定性考察(7)产品一致性的保证11.离体培养的动物细胞分为哪些类型?分为三类:(1)贴壁细胞:细胞生长必须有可以贴附的支持物表面,细胞依靠自身分泌的培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长增殖。
(2)悬浮细胞:细胞的生长不依赖支持物表面,可在培养液中悬浮状态生长(3)兼性贴壁细胞:既可贴附于支持物表面生长,又在悬浮生长。
12.生产用的动物细胞有哪些种类?它们各有什么特点?(1)生产用的动物细胞的种类:原代细胞系、二倍体细胞系、转化细胞、融合细胞系、重组工程细胞系(2)它们各自的特点:(A)二倍体细胞系的特点:①染色体组型仍然是2n的核型②具有明显的贴壁依赖和接触抑制的特性③只有有限的增值能力,一般可连续传代培养50代④物致瘤性(B)转化细胞系的特点:①具有无限生命力②倍增时间较短③对培养条件和生长因子等要求较低(C)融合细胞系的特点:①可使不同的动物和动物细胞融合②可是动物和植物细胞融合13.常用的培养动物细胞的培养基的种类有哪些?(1)天然培养基(2)合成培养基(3)无血清培养基14.如何进行动物细胞大规模培养?大规模培养的方法:(1)悬浮细胞(2)贴壁细胞(3)贴壁—悬浮细胞:a、微载体培养 b、包埋和微囊培养 c、结团培养大规模培养的操作方式:(1)分批式操作(2)半连续式操作(3)灌流式操作15.动物细胞生物反应器必须具备哪些基本要求?有哪些类型?特定是什么?动物细胞反应器具备的基本要求:(1)制造生物反应器所采用的一切材料,尤其是与培养基,细胞直接接触的材料,对细胞必须是无毒性的。
(2)生物反应器的结构必须使之具有良好的传质、传热和混合的性能(3)密封性良好,可避免一切外采的不需要的微生物污染。
(4)对培养基环境中多种物理化学参数能自动检测和调节控制,控制的精度高,而且能保持环境质量的均一。
(5)可长期连续运转,这对于培养动物细胞的生物反应器显得尤其重要。
(6)容器加工制造时要求内面光滑,无死角,以减少细胞或微生物的沉积。
(7)拆装,连结和清洁方便,能耐高压蒸汽消毒,便于操作维修(8)设备成本尽可能低。
反应器类型及特点:(1)搅拌罐式生物反应器:主要用于是悬浮细胞培养,微载体培养,微囊和巨载体培养以及结团培养(2)气升式生物反应器:气体通过装在罐底的喷管进入反应器的导流管,致使该部液体的密度小于导流管外部的液体形成循环流。
(3)中空纤维式生物反应器:占地空间小,产品产量、质量高,生产成本低,不能重复使用,不能耐高压蒸汽灭菌,需用环氧乙烷或其它消毒剂灭菌,难以取样检测。
(4)透析袋或膜式生物反应器:可使细胞达到高密度,又可随意组合进行操作,对产品进行浓缩纯化。
(5)固定床或流化床生物反应器:结构简单,装填材料易得。
16.动物细胞制药有哪些新进展?①改进表达载体,提高表达水平和产量②利用代谢工程改进培养工艺③抑制细胞凋亡,延长培养周期④采用糖基化工程,提高产品质量⑤转基因动物的研究⑥组织工程研究17.什么是单克隆抗体?单克隆抗体有哪些不足?单克隆抗体:是针对一个抗原决定簇的抗体,又是单一的B淋巴细胞克隆产生的抗体。
不足:(1)单克隆抗体均是鼠源性抗体,应用于人体内可产生人抗鼠抗体,加速了排斥反应,在人体内半衰期只有5-6h,难以维持有效药物作用靶组织时间。
(2)完整的抗体分子,即Ig的相对分子质量过大,难以穿透实体肿瘤组织,达不到有效治疗浓度。
18如何制备杂交瘤细胞?将两个细胞(例如 B淋巴细胞和骨髓瘤细胞)通过诱导融合形成杂交细胞,具体操作时为了提高成功率会用多个细胞同时杂交,然后筛选出目的细胞,再进行细胞培养使其有丝分裂而增值,得到大量目的细胞(杂交瘤细胞)。
19.基因工程抗体有哪些类型?其特性和制备方法有什么不同?基因工程抗体主要包括嵌合抗体、人源化抗体、完全人源抗体、单链抗体、双特异性抗体等。
(1)嵌合抗体嵌合抗体( chimeric atibody )是最早制备成功的基因工程抗体。
它是由鼠源性抗体的 V 区基因与人抗体的 C 区基因拼接为嵌合基因,然后插入载体,转染骨髓瘤组织表达的抗体分子。
因其减少了鼠源成分,从而降低了鼠源性抗体引起的不良反应,并有助于提高疗效。
(2)人源性抗体是将人抗体的 CDR 代之以鼠源性单克隆抗体的 CDR ,由此形成的抗体,鼠源性只占极少,称为人源化抗体。
(3)完全人源化抗体采用基因敲除术将小鼠 Ig 基因敲除,代之以人 Ig 基因,然后用 Ag 免疫小鼠,再经杂交瘤技术即可产生大量完全人源化抗体。
(4)单链抗体是将 Ig 的 H 链和 L 链的 V 区基因相连,转染大肠杆菌表达的抗体分子,又称单链 FV ( single chain fragment of variable region,sFv )。
SFv 穿透力强,易于进入局部组织发挥作用。
(5)双特异性抗体将识别效应细胞的抗体和识别靶细胞的抗体联结在一起,制成双功能性抗体,称为双特异性抗体。
如由识别肿瘤抗原的抗体和识别细胞毒性免疫效应细胞( CTL 细胞、 NK 细胞、 LAK 细胞)表面分子的抗体( CD3 抗体或 CD16 抗体)制成的双特异性抗体,有利于免疫效应细胞发挥抗肿瘤作用。
20.抗体治疗药物有哪些?(1)放射性同位素标记的抗体治疗药物(2)抗癌药物偶联的抗体药物(3)毒素偶联的抗体药物21.抗体诊断试剂有哪些类型?(1)血清学鉴定用的抗体试剂(2)免疫标记用的抗体试剂(3)导向诊断药物(4)CD单克隆抗体系列22. 单克隆抗体制备的基本原理与过程?有什么意义?原理:B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。
B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。
将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,再进一步克隆化,这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力,又具有产生特异性抗体的B 淋巴细胞的能力,将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。
这种技术即称为单克隆抗体技术。
过程1)免疫脾细胞的制备制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。
免疫的方法取决于所用抗原的性质。
免疫方法同一般血清的制备,也可采用脾内直接免疫法。
2)骨髓瘤细胞的培养与筛选在融合前,骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选,防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性(恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活)。
骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养,融合前24h换液一次,使骨髓瘤细胞处于对数生长期。
3)细胞融合的关键:1技术上的误差常常导致融合的失败。
例如,供者淋巴细胞没有查到免疫应答。