第十八章 临床标本的细菌学检验
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临床标本的细菌学检验
临床标本的细菌学检验临床标本的细菌学检验，从各种标本中查找病原菌及其对抗生素的敏感性，在明确诊断、指导用药、预防和流行病学调查等方面具有重要意义。
对各种标本，应根据实际要求和标本特点选择适当的检验步骤及方法，准确、快速地检测病原菌，分析检验结果并报告，同时应注意低耗和安全防护。
分离细菌的目的是查找与疾病相关的病原体及其对抗生素的敏感性，对临床诊断、治疗、预后和流行病学调查很有价值。
1临床标本的采集与送检临床标本的质量对于细菌学检验的结果至关重要，严格按操作规程的要求进行标本采集、运送、保存和处理，才能保证检验结果准确、可靠。
1.1临床标本的采集1.1.1细菌学检验申请单的检查与登记：应仔细检查检验申请单上的内容，如标本类型、来源、送检目的、患者姓名、性别、年龄、临床诊断(如未明确，应注明主要症状)及是否已用抗生素等，并及时登记。
1.1.2标本盛放容器：采集的标本，尤其是采自无正常菌群寄居部位的标本如血液、脑脊液、穿刺液等，必须盛放于无菌容器内[1]。
容器灭菌应采用干热、湿热等物理方法灭菌。
容器上应贴上标签，注明待检患者姓名、床号等信息。
1.1.3无菌操作：在采集血液、脑脊液、穿刺液、骨髓时，应严格进行无菌操作，避免杂菌污染标本。
采集粪便、痰液、咽拭子、肛拭子等标本，虽无需严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌污染。
1.1.4采集时间和部位：选择合适的采集时间是很重要的，一般情况下，标本应尽量在疾病早期或在症状、体征明显时，在抗生素治疗之前采集，一些特殊检验的标本应按规定的时间采集。
根据感染的具体情况，选择适当的部位采集标本。
1.1.5安全防护：采集的标本可能含有病原菌，因而采集、运送、保存和处理过程中必须注意安全，防止标本中的病原菌溢出导致污染甚至传播；同时还需防止自身感染。
1.2标本的送检与保存采集标本后，在盛装标本的容器上应贴好标签，并在标签上写明相关信息，立即将标本送至检验室。
标本收集时间应加以准确记录，使检验人员接种时能判断标本是否延误。
临床标本细菌学
生长现象普通平板（示教）
菌落黄色（有时黄色不典型） 怎么区分？
菌落白色或柠檬色
金黄色葡萄球菌： 溶血毒素：溶血环 血浆凝固酶：
在血平板的生长现象（示教）
金葡菌菌落周围 有宽而透明的溶血环 β溶血
表皮/腐生性葡萄球菌 无溶血环
血浆凝固酶试验（示教）
• 鉴别葡萄球菌致病即金黄色葡萄球菌的重要指标 • 原理：凝固酶可催化：
• 抑制性成分：硫代硫酸钠,煌绿,胆盐等抑制革 兰氏阳性菌和大肠菌群生长
• 鉴别性成分：乳糖—分解产酸
• 指示性成分：中性红—酸碱指示剂—产酸变红
可疑的 致病菌
不发酵乳糖菌落
大肠杆菌 发酵乳糖的菌落
挑取可疑的致病菌菌落 接种于半固体双糖铁培养基
上层固体斜面：乳糖+指示剂 下层半固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4
？ 肺炎链球菌 溶血，菌落灰白色、细小
溶血 （窄、半透明、
草绿色） 溶血
（宽、透明） γ溶血
（无溶血）
肺炎球菌与甲型溶血性链球菌 的区别试验（示教）
• 胆汁溶菌试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性）
• 菊糖发酵试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性）
含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等
大肠埃希菌
乳糖 发酵
产酸中 呈性 红红 色 菌落桃红色，乳糖发酵菌落
沙门菌 志贺菌
乳糖 菌落无色透明，乳糖不发酵菌落 不发酵
胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌， 提高肠道致病菌检出率
SS琼脂平板（下次实验课示教）
无色、半透明、 光滑、较小
• 基础性成分：牛肉膏,蛋白胨,琼脂
临床标本的细菌学鉴定1 （综合性实验）
菌落黄色（有时黄色不典型） 怎么区分？
菌落白色或柠檬色
金黄色葡萄球菌： 溶血毒素：溶血环 血浆凝固酶：
在血平板的生长现象（示教）
金葡菌菌落周围 有宽而透明的溶血环 β溶血
表皮/腐生性葡萄球菌 无溶血环
血浆凝固酶试验（示教）
• 鉴别葡萄球菌致病即金黄色葡萄球菌的重要指标 • 原理：凝固酶可催化：
• 抑制性成分：硫代硫酸钠,煌绿,胆盐等抑制革 兰氏阳性菌和大肠菌群生长
• 鉴别性成分：乳糖—分解产酸
• 指示性成分：中性红—酸碱指示剂—产酸变红
可疑的 致病菌
不发酵乳糖菌落
大肠杆菌 发酵乳糖的菌落
挑取可疑的致病菌菌落 接种于半固体双糖铁培养基
上层固体斜面：乳糖+指示剂 下层半固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4
？ 肺炎链球菌 溶血，菌落灰白色、细小
溶血 （窄、半透明、
草绿色） 溶血
（宽、透明） γ溶血
（无溶血）
肺炎球菌与甲型溶血性链球菌 的区别试验（示教）
• 胆汁溶菌试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性）
• 菊糖发酵试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性）
含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等
大肠埃希菌
乳糖 发酵
产酸中 呈性 红红 色 菌落桃红色，乳糖发酵菌落
沙门菌 志贺菌
乳糖 菌落无色透明，乳糖不发酵菌落 不发酵
胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌， 提高肠道致病菌检出率
SS琼脂平板（下次实验课示教）
无色、半透明、 光滑、较小
• 基础性成分：牛肉膏,蛋白胨,琼脂
临床标本的细菌学鉴定1 （综合性实验）
临床常见标本的细菌学检验
43
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
44
痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
45
痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
30
尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
31
尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
8
（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
41
粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
42
第二节 临床常见标本的细菌学检验
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
44
痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
45
痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
30
尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
31
尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
8
（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
41
粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
--临床常见标本的微生物学检验
取新鲜标本分别接种于两个血平板上一个取新鲜标本分别接种于两个血平板上一个血平板按一般的培养方法进行需氧培血平板按一般的培养方法进行需氧培养另或厌氧袋内进行厌氧培养内进行厌氧培养经经3535培养培养2天后认真天后认真观察生观察生长情况和菌落特征并挑取菌落涂片革兰染长情况和菌落特征并挑取菌落涂片革兰染色镜检根据形态特征得出初步印色镜检根据形态特征得出初步印象再按象再按各类厌氧菌的特征进行鉴定
尿液标本 细菌学检验Fra bibliotek标本采集
中段尿采集方法 肾盂尿采集法 膀胱穿刺采集法 导尿法
注意事项
1．尿液标本的采取和培养最大的问题是污染 杂菌，故应严格进行无菌操作。
2．标本采取后应立即送检和接种，放置时间 长，杂菌容易在尿液标本中生长繁殖， 影 响诊断。
3．尿液标本中不得加入防腐剂及消毒剂，否 则会影响阳性检出率。
细菌培养
L 型细菌培养
将尿液接种于血琼脂平皿和高渗液体培养基， 置35 ℃培养，由 于L 型细菌生长缓慢，所 以高渗培养应放5 ～7d ，液体中呈颗粒状生 长，可粘附于管壁 或沉于管底，吸出颗粒镜
下观察，同时转种平皿。无阳性发现可报告 无L 型细菌生长， 根据需要还可做结核菌、 沙门菌、厌氧菌培养。
6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。
血 液 骨 髓 标 本 的 细 菌 学 检 验 程 序
血液骨髓 细菌学检验
一般细菌的检验
标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内 孵育，每天取出一次观察有无 细菌生长，应特别注 意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液 变色、指示剂变 色等现象，并记录之。
涂片检查 假丝酵母菌 涂片检查
取尿液离心沉淀物置于玻片上，加盖玻片 后用高倍镜观察，如发现卵圆形芽生孢子 或假菌丝，且革兰染色为阳性，即可做出 初步报告。
尿液标本 细菌学检验Fra bibliotek标本采集
中段尿采集方法 肾盂尿采集法 膀胱穿刺采集法 导尿法
注意事项
1．尿液标本的采取和培养最大的问题是污染 杂菌，故应严格进行无菌操作。
2．标本采取后应立即送检和接种，放置时间 长，杂菌容易在尿液标本中生长繁殖， 影 响诊断。
3．尿液标本中不得加入防腐剂及消毒剂，否 则会影响阳性检出率。
细菌培养
L 型细菌培养
将尿液接种于血琼脂平皿和高渗液体培养基， 置35 ℃培养，由 于L 型细菌生长缓慢，所 以高渗培养应放5 ～7d ，液体中呈颗粒状生 长，可粘附于管壁 或沉于管底，吸出颗粒镜
下观察，同时转种平皿。无阳性发现可报告 无L 型细菌生长， 根据需要还可做结核菌、 沙门菌、厌氧菌培养。
6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。
血 液 骨 髓 标 本 的 细 菌 学 检 验 程 序
血液骨髓 细菌学检验
一般细菌的检验
标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内 孵育，每天取出一次观察有无 细菌生长，应特别注 意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液 变色、指示剂变 色等现象，并记录之。
涂片检查 假丝酵母菌 涂片检查
取尿液离心沉淀物置于玻片上，加盖玻片 后用高倍镜观察，如发现卵圆形芽生孢子 或假菌丝，且革兰染色为阳性，即可做出 初步报告。
临床标本的细菌学检查PPT课件
法尿 和液 操标 作本 流细 程菌 检 验 方
Uricult 操作步骤
Uricult 菌落比密图
Uricult 细菌种类标准模式 图
4.特殊菌落培养 （1）淋病奈瑟菌培养 （2）厌氧菌培养 （3）结核分枝杆菌培养 5.报告方式 培养48h无细菌生长，报告“2 天无细菌生长”。查见细菌，报告菌名及 其菌落计数（菌落数/ml）和药敏结果。
（二）检验方法和操作流程
1.涂片检查 （1）革兰染色镜检 （2）梅毒螺旋体涂片检查 2.分离培养 （1）普通细菌培养 （2）淋病奈瑟菌培养 （3）阴道加特纳菌培养 （4）报告方式：如查见淋病奈瑟菌、阴道加特 纳菌等病原菌，报告菌名和药敏结果。
验生 方殖 法道 和标 操本 作细 流菌 程学 检
临床标本的细菌 学检查
（2）男性
（一）标本采集
1. 中段尿标本采集法 （1）女性：
（3）儿童、婴儿
（4）两侧肾盂尿
（5）膀胱穿刺
（二）检验方法和操作流程 ■1.涂片检查 （1）一般细菌及淋病奈瑟菌 （2）念珠菌 （3）结核分枝杆菌 ■ 2.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃 去。 （1）倾注平板法 （2）平板接种环法 （3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml， 则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数 >105/ml”。 （4）Uricult 半定量法
二 生殖道标本
正常的内生殖器是无菌的，而外生殖器 （包括男性尿道口和女性阴道）有多种细 菌寄生。 查见病原菌提示有细菌感染。 常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、 链球菌、淋病奈女性生殖道标本 2.男性生殖道标本 3.梅毒螺旋体标本
常见临床标本的细菌学检验ppt课件
奥梅梁斯基法则：
100cm2 5’→10L A t → A·t *10L
100*50
N
50000N
XX个/M3= A·t
100*5
*1000= *10
→39.32N A·t （49.0；20’）
结果报告应注明 “普通琼脂平板培养”/“血 琼
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
4 、如病人已实施治疗，应在酚红葡萄糖肉汤 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 中加入相应对抗剂。
磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml.
青霉素→2u青霉素酶/ml
其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
（五）痰： 1、先让病人用清水嗉口数次，
以除去口腔内大量杂菌。 2、取清晨第一口咳出的痰，
（晨痰） 3、作结核杆菌培养可收集24h
痰。（冰箱保存）
（六）胆汁： 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用
1、行十二指肠引 流水收集“胆汁乙”1015ml。
革兰氏染色
球菌 G+杆菌:根据菌落特征,细 菌染色性,形态排列选择恰当 生化反应,免疫学反应及动物 试验 报告
G-杆菌
KIA
菌落描述:颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润 湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
临床标本的细菌学检验培训课件
• 3、封闭性脓肿 要求先消毒局部皮肤或黏膜表面 后，用注射器抽取，将脓液注入无菌试管内送检 。疑为厌氧菌感染时，应作床边接种或置厌氧运 送培养基内送检。
•临床标本的细菌 •19
谢谢
•临床标本的细菌 •20
Байду номын сангаас
• （二）标本采集 • １、采集时间 一般以晨痰为好；支气管扩张症患者清晨
起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。
• 2、标本采集方法 • （1）自然咳痰法 在留取痰之前，用清水反复漱口，以减
少常居菌的污染，应从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内 。
• （2）气管镜下采集法：在病灶附近用导管吸或用支气管 刷直接取得标本。
•临床标本的细菌学检 验
第一节 血液及骨髓标本 一、 血液标本 （一）标本采集 静脉采血，应严格消毒血培养瓶盖和皮肤，用无菌
采血装置采血，不换针头，直接将血液标本注入 血培养瓶中，注入血液后应颠倒混匀以防凝固。 采用真空采血装置可降低污染。
•临床标本的细菌 •2
• 2、采血部位 以无菌操作在患者肘静脉采血。儿童和 婴幼儿其采血的部位多为颈部和腹股沟，这两个部位 皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染，因此必须严格 消毒。消毒过程同成人，但氯己定（洗必泰）不能用 于2个月以下婴儿。成人不建议采集动脉血，不宜从 静脉导管或静脉留置口取血，因其常伴有高污染率。 如果必须从留置导管内采血，必须同时从外周静脉采 集另外一个血培养标本，有助于对比和结果解释。静 脉导管采血时，不要弃去初段血，不要用抗凝剂冲洗 。
• （6）尿标本采集应及时送检，2h内进行接种，否 则应置4~8℃冰箱保存，冷却保存标本时间不得超 过8h。
•临床标本的细菌 •15
• 二、生殖道标本 • （一）标本采集 • 1、女性生殖道标本 由妇产科医师用无菌棉拭采
•临床标本的细菌 •19
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• （二）标本采集 • １、采集时间 一般以晨痰为好；支气管扩张症患者清晨
起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。
• 2、标本采集方法 • （1）自然咳痰法 在留取痰之前，用清水反复漱口，以减
少常居菌的污染，应从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内 。
• （2）气管镜下采集法：在病灶附近用导管吸或用支气管 刷直接取得标本。
•临床标本的细菌学检 验
第一节 血液及骨髓标本 一、 血液标本 （一）标本采集 静脉采血，应严格消毒血培养瓶盖和皮肤，用无菌
采血装置采血，不换针头，直接将血液标本注入 血培养瓶中，注入血液后应颠倒混匀以防凝固。 采用真空采血装置可降低污染。
•临床标本的细菌 •2
• 2、采血部位 以无菌操作在患者肘静脉采血。儿童和 婴幼儿其采血的部位多为颈部和腹股沟，这两个部位 皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染，因此必须严格 消毒。消毒过程同成人，但氯己定（洗必泰）不能用 于2个月以下婴儿。成人不建议采集动脉血，不宜从 静脉导管或静脉留置口取血，因其常伴有高污染率。 如果必须从留置导管内采血，必须同时从外周静脉采 集另外一个血培养标本，有助于对比和结果解释。静 脉导管采血时，不要弃去初段血，不要用抗凝剂冲洗 。
• （6）尿标本采集应及时送检，2h内进行接种，否 则应置4~8℃冰箱保存，冷却保存标本时间不得超 过8h。
•临床标本的细菌 •15
• 二、生殖道标本 • （一）标本采集 • 1、女性生殖道标本 由妇产科医师用无菌棉拭采
常见临床标本细菌学检验简述
分离培养
将标本接种在适宜的培养 基上进行细菌分离培养。
注意事项
01 确保采集工具的无菌性，避免交叉感染。
02 采集足够的标本量，以保证检验结果的准 确性。
03
及时送检，避免延误检验时间。
04
注意个人防护，避免感染。
PART 02
临床标本细菌学检验方法
分离培养
分离培养
将临床标本接种于适宜的固体或 液体培养基上，在适宜的温度和 环境下进行培养，使细菌得以生
免疫学鉴定
利用抗原-抗体反应的原理 ，通过免疫学方法进行细 菌的鉴定。
药敏试验
纸片扩散法
将含有不同抗菌药物的纸片贴在已接 种细菌的平板上，观察细菌的生长情 况，以判断细菌对抗菌药物的敏感程 度。
稀释法
E试验
将细菌接种在含有抗菌药物的平板上 ，通过测量抑菌圈的大小来判断细菌 对抗菌药物的敏感程度。
通过不断增加抗菌药物的浓度，观察 细菌的生长情况，以判断细菌对抗菌 药物的敏感程度。
结果解读
1 2
解读临床意义
根据细菌培养和药敏试验结果，判断细菌种类、 感染部位及病原体对抗生素的敏感性，为临床医 生提供诊断和治疗依据。
鉴别病原菌
通过细菌形态、染色、生化反应等实验手段，鉴 别不同病原菌，有助于针对性地选择抗菌药物。
3
判断耐药性
监测细菌对抗生素的耐药性，预测治疗效果，为 临床医生提供抗菌药物选择的参考依据。
伤口分泌物标本
用无菌棉签擦拭伤 口表面分泌物。
血液标本
采集静脉血液，常 用无菌注射器抽取 。
呼吸道标本
采集鼻咽拭子或痰 液，用无菌棉签擦 拭鼻咽部或咳痰。
粪便标本
采集新鲜粪便，避 免污染。
临床标本的细菌学检查
第五节 泌尿、生殖道标本
标本采集 1.中段尿标本采集法 （1）女性： 男性 儿童、婴儿 两侧肾盂尿 膀胱穿刺
（二）检验方法和操作流程 ■1.涂片检查 （1）一般细菌及淋病奈瑟菌 （2）念珠菌 （3）结核分枝杆菌 ■ 2.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃去。 （1）倾注平板法 （2）平板接种环法 （3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml，则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数>105/ml”。 （4）Uricult 半定量法
分级
划线区菌落数目
第1区
第2区
第3区
少见（+）
<10
少量（++）
>10
<5
中等（+++）
>10
>5
<5
多量（++++）
>10
>5
>5
表5-3 痰标本在平板上的菌落量化指标
正常咽试有多种上呼吸道的正常菌群（如草绿色链球菌）。若从患者标本中查出致病菌提示上呼吸道有细菌感染（如急、慢性扁桃体炎，咽炎，喉炎等）
第7节 脓液及创伤感染分泌物标本
脓液和创面分泌物标本细菌学检查方法和操作流程
（一）标本采集 1.开放性脓肿和脓性分泌物 2.大面积烧伤的创面分泌物 3.封闭性脓肿 （二）检验方法和操作流程 1.涂片检查 根据形态和染色特点，可报告“查见革兰×性细菌，形似× ×菌”或报告“未查见习菌”。 2.培养 （1）普通菌培养 （2）厌氧菌培养 （3）嗜血杆菌及奈瑟菌培养 （4）结核分枝杆菌培养 （5）真菌培养 3.报告方式 查见致病菌，报告菌名和药敏结果。
穿刺液标本细菌学检验方法和操作流程
标本采集 1.中段尿标本采集法 （1）女性： 男性 儿童、婴儿 两侧肾盂尿 膀胱穿刺
（二）检验方法和操作流程 ■1.涂片检查 （1）一般细菌及淋病奈瑟菌 （2）念珠菌 （3）结核分枝杆菌 ■ 2.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃去。 （1）倾注平板法 （2）平板接种环法 （3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml，则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数>105/ml”。 （4）Uricult 半定量法
分级
划线区菌落数目
第1区
第2区
第3区
少见（+）
<10
少量（++）
>10
<5
中等（+++）
>10
>5
<5
多量（++++）
>10
>5
>5
表5-3 痰标本在平板上的菌落量化指标
正常咽试有多种上呼吸道的正常菌群（如草绿色链球菌）。若从患者标本中查出致病菌提示上呼吸道有细菌感染（如急、慢性扁桃体炎，咽炎，喉炎等）
第7节 脓液及创伤感染分泌物标本
脓液和创面分泌物标本细菌学检查方法和操作流程
（一）标本采集 1.开放性脓肿和脓性分泌物 2.大面积烧伤的创面分泌物 3.封闭性脓肿 （二）检验方法和操作流程 1.涂片检查 根据形态和染色特点，可报告“查见革兰×性细菌，形似× ×菌”或报告“未查见习菌”。 2.培养 （1）普通菌培养 （2）厌氧菌培养 （3）嗜血杆菌及奈瑟菌培养 （4）结核分枝杆菌培养 （5）真菌培养 3.报告方式 查见致病菌，报告菌名和药敏结果。
穿刺液标本细菌学检验方法和操作流程
临床细菌学检验技术ppt课件
革兰染色过程
革兰染色过程
一紫二碘三酒精 第四复红皆水冲
时间要看说明书
阴性菌红阳性紫
第二节
细菌分离培养和鉴定
一.培养基的种类和选择
（一）.培养基的种类
按物理状态分： 液体、半固体、固体培养基
高层
斜面
高层斜面
平板
按用途分：基础、营养、鉴别、选择和特殊培养基
克 氏 双 糖 铁 培 养 基 （KIA）
（二）培养基的选择
1.血平板（BA） 2.巧克力平板 3.中国蓝或伊红美蓝平板
4.麦康凯平板（MAC）
5.SS平板 6.碱性琼脂或TCBS琼脂平板 7.血液增菌培养基 8.营养肉汤
二.分离培养
主要用于各种临床标本或培养物中有一种或多 种细菌时，对某一种细菌进行分离，使细菌在平 板上分散生长，便于观察单个菌落特性，也易于 挑去单个菌落进行纯化（分纯），进行下一步鉴 定和药敏试验等。
◆ 培养基 ：葡萄糖蛋白胨水 ◆ 方法 将待测纯菌接种于葡萄糖蛋白胨水中， 孵育后加入甲基红试剂，立即观察结果。 ◆结果应用
6. V-P试验
◆ 原理 ：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成 中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气 中的氧氧化生成二乙酰，二乙酰再与培养基中精氨酸、肌 酐等所含的胍基结合，形成红色化合物（胍缩二乙酰）。
知识延伸
a 细菌分解乳糖需要两种酶，一种是半乳糖苷渗 透酶，可是乳糖通过细菌的细胞壁进入菌体内 另一种是β-半乳糖苷酶，可将乳糖分解成半 乳糖和葡萄糖，进而再分解。缓慢分解乳糖的 细菌缺乏渗透酶，不能将乳糖快速运到细胞内 所以需几天乳糖才能被分解。 b 乳糖：葡萄糖和半乳糖通过β-半乳糖苷键连接 ONPG：邻硝基酚取代了葡萄糖，其分子小很多 可直接进入菌体内。
临床标本的细菌学鉴定实验报告
临床标本的细菌学鉴定实验报告临床标本的细菌学鉴定实验报告一、引言在临床医学中，细菌学鉴定是一项至关重要的实验。
通过对临床标本进行细菌学鉴定, 可以帮助医生准确诊断和治疗感染性疾病。
本实验报告将对临床标本的细菌学鉴定进行评估和讨论，旨在加深我们对该实验方法的理解，并提供有关细菌学鉴定的综合性知识。
二、细菌学鉴定的目的和意义细菌学鉴定作为一种直接、快速、可靠的诊断方法，对临床诊断和治疗起到重要作用。
细菌学鉴定的主要目的是准确确定临床标本中存在的细菌种类，以便为医生提供科学依据。
通过细菌学鉴定，我们能够了解细菌的形态、结构、生物学特性以及对药物的敏感性，从而指导医生选择合适的抗生素进行治疗。
三、细菌学鉴定的方法1. 标本采集：选择适当的临床标本，按照规范采集方法采集标本。
常见的标本包括血液、尿液、呼吸道分泌物等。
2. 标本处理：对采集的标本进行适当的处理，如培养、染色等。
培养可以通过将标本划取于培养基上进行，以便细菌在适宜环境下生长繁殖，从而进行进一步的鉴定。
3. 微生物学特性观察：观察培养基上出现的微生物种类及其生长情况。
根据细菌的形态、结构、染色特性等，可以初步鉴定细菌的属种。
4. 生理生化特性测试：通过一系列生化试剂和培养基，检测微生物的生理特性，如产气、产酸、氧需求等。
根据生化反应的结果，可以进一步缩小细菌的鉴定范围。
5. 抗生素敏感性测试：选取不同类型的抗生素，用其调配成不同浓度的药品，将细菌接种在含有不同药物的培养基上进行培养。
观察细菌的生长情况，以判断其对抗生素的敏感性。
四、个人观点和理解在细菌学鉴定实验中，我认为标本采集的规范性非常重要。
只有正确采集到具有代表性的标本，才能更准确地进行鉴定并提供有效的治疗建议。
由于抗生素耐药性的增加，抗生素敏感性测试也变得越来越重要。
通过该测试，我们可以为医生提供更精确的抗生素选择，避免不必要的药物使用和抗药性的进一步扩散。
总结回顾：本实验报告全面评估了临床标本的细菌学鉴定方法，并深入探讨了如何通过观察微生物学特性、生理生化特性和抗生素敏感性来鉴定细菌种类。
临床微生物学检验完整版
临床微生物学检验题型单选（4选1）多选（5选多）判断改错（错误的并改正）简答（适当解释说明）论述（案例分析，具体阐述）革兰氏染色属复染法，初染，媒染，脱色，复染4个过程革兰阳性（呈紫色）革兰阴性（呈红色）第二章1.细菌大小以微米（μm）为测量单位。
2.细菌结构：①附属结构：鞭毛、菌毛（光镜下看不见，不能作为鉴定依据，没鉴定价值）或纤毛；②表层结构：糖萼（荚膜或粘液层）；③内部结构：细胞质、质粒、芽孢。
3.细菌功能：①动力（鞭毛是细菌的运动器官），观察细菌动力可用悬滴法或压滴法在显微镜下直接观察其运动，也可将细菌穿刺接种半固体培养基观察动力。
鞭毛具有鉴定价值，采用鞭毛特殊染色（如镀银染色）可观察有无鞭毛及鞭毛数量、分布；一般染色不能看见鞭毛（如革兰氏染色）。
4.芽孢的功能：①对热力、干燥、辐射、化学消毒剂等具有强大抵抗力；②以是否杀死芽孢作为物品消毒灭菌判断效果的指标。
③芽孢在菌体的位置和直径大小随菌种不同，这种形态特点有助于细菌鉴别。
5.细菌生长曲线（要求整个过程，结合生长曲线记忆4个时期比较容易，可能是简答题）细菌二分裂方式进行繁殖。
以倾注平板法计数孵育后的菌落数换算菌落形成单位（）。
生长曲线：连续检测细菌不同培养时间的，以为纵坐标，培养时间为横坐标作出一条反映细菌生长数变化的规律曲线。
典型的生长曲线分为迟缓期、对数生长期、稳定期、衰亡期。
①迟缓期。
也称为准备时期，是细菌适应环境的过程。
特点：细菌的核酸、蛋白质、辅酶等物质合成增加，细胞体积增大，细菌数量恒定或极少量增加。
②对数生长期。
特点：细菌以最大的速率生长和分裂，细菌数量成对数增加。
细菌代谢活跃、稳定，其大小、形态、染色性和生化反应典型，对外界因素反应敏感，是检测细菌生物学性状和进行药物敏感性试验的适宜阶段。
不添加培养基下一般细菌对数期维持4~8h。
③稳定期。
特点：由于培养基中营养物质消耗、有害代谢产物积累和等环境变化，细菌生长速率降低，细菌死亡数增加使生长繁殖菌数和死亡菌数处于动态平衡，细菌数量达到最大，即处于稳定期。
临床标本的细菌学检验.ppt
35
• 结果报告
1. 阳性结果报告: (1) 初级报告 (2) 最终报告
2. 阴性结果报告：
36
中枢神经系统感染的细菌学 检查
• 脑脊液为一水样透明液体，存在于脑室 和蛛网膜下腔内。在生理情况下，血液 和脑脊液之间有血脑屏障，阻碍各种微 生物通过血液进入中枢神经系统。正常 人的脑脊液是绝对无菌的。在病理情况 下，血脑屏障受到破坏，病原微生物及 其产物进入脑脊液，引起中枢神经系统 损害。此时在脑脊液中可培养检出病原 微生物 。
their toxins in tissues or in the blood. Systemic disease caused by the spread of the microorganisms via the circulating blood is commonly called SEPTICEMIA. 一过性、间歇性、持续性
39
脑膜炎类型
观察物
细菌性的 结核性的 真菌性的 病毒性的
优势白细 胞类型
糖
分裂的多形核 嗜中性粒细胞
单核细胞
很低
低
5-20mg/100ml 20-40mg/100ml
单核细胞
低 20-40mg/ml
蛋白
增高
增高
增高
涂片染色 革兰染色
抗酸染色
印度墨汁
单核细胞
正常 65-70mg/ml
感染早期 轻度增高
31
•菌血症时血液中的细菌并不多，通常仅10～20 CFU/ml, 故采血量大阳性率高。 •采血培养应该尽量在使用抗菌药之前进行,在24 h 内采 集2～3 次做血培养(一次静脉采血注入到多个培养瓶中 应视为单份血培养) 。 •对间歇性寒战或发热，应在寒战或体温高峰到来之前 0.51h采集血液，或于寒战或发烧后1h进行。 •标本运送: 采血后应该立即送检,如不能立即送检,需室温 保存或置35 ℃～37 ℃孵箱中,切勿冷藏。
• 结果报告
1. 阳性结果报告: (1) 初级报告 (2) 最终报告
2. 阴性结果报告：
36
中枢神经系统感染的细菌学 检查
• 脑脊液为一水样透明液体，存在于脑室 和蛛网膜下腔内。在生理情况下，血液 和脑脊液之间有血脑屏障，阻碍各种微 生物通过血液进入中枢神经系统。正常 人的脑脊液是绝对无菌的。在病理情况 下，血脑屏障受到破坏，病原微生物及 其产物进入脑脊液，引起中枢神经系统 损害。此时在脑脊液中可培养检出病原 微生物 。
their toxins in tissues or in the blood. Systemic disease caused by the spread of the microorganisms via the circulating blood is commonly called SEPTICEMIA. 一过性、间歇性、持续性
39
脑膜炎类型
观察物
细菌性的 结核性的 真菌性的 病毒性的
优势白细 胞类型
糖
分裂的多形核 嗜中性粒细胞
单核细胞
很低
低
5-20mg/100ml 20-40mg/100ml
单核细胞
低 20-40mg/ml
蛋白
增高
增高
增高
涂片染色 革兰染色
抗酸染色
印度墨汁
单核细胞
正常 65-70mg/ml
感染早期 轻度增高
31
•菌血症时血液中的细菌并不多，通常仅10～20 CFU/ml, 故采血量大阳性率高。 •采血培养应该尽量在使用抗菌药之前进行,在24 h 内采 集2～3 次做血培养(一次静脉采血注入到多个培养瓶中 应视为单份血培养) 。 •对间歇性寒战或发热，应在寒战或体温高峰到来之前 0.51h采集血液，或于寒战或发烧后1h进行。 •标本运送: 采血后应该立即送检,如不能立即送检,需室温 保存或置35 ℃～37 ℃孵箱中,切勿冷藏。
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1、革兰阳性菌： 金黄色葡萄球菌、A群链球菌、B群链球菌、肺炎链球菌、肠球菌 草绿色链球菌 产单核细胞李斯特菌、结核分枝杆菌 2、革兰阴性菌
脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌
伤寒及副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌 3、其他病原菌：念珠菌、新型隐球菌
血培养最佳的采血时机？
最佳采血时机
• 一般于病人发热1-2天内采集血液标本。 • 尽可能在未使用抗菌药物前采集。 • 对已经使用抗菌药物的患者，则在下一次使用抗菌药物之 •
正常人中段尿细菌数≤103 cfu/ml
（一）尿液标本的采集
1.中段尿采集法 最常用 2.直接导尿采集法 易造成逆行感染，尽量不用 3.留置导尿管收集尿液法 注意不能从尿液收集袋中采集标本 4.膀胱穿刺法
（二）尿液标本中常见的病原菌
细菌中80％为革兰阴性杆菌，20％为革兰阳性菌
革兰阴性菌 大肠埃希菌 变形杆菌属 铜绿假单胞菌 克雷伯菌属 肠杆菌属 沙雷菌属 沙门菌属 淋病奈瑟菌 革兰阳性菌 肠球菌 金黄色葡萄球菌 腐生葡萄球菌 表皮葡萄球菌 链球菌 结核分枝杆菌 其他病原菌 真菌 支原体 衣原体 螺旋体
报告 阳性结果：培养出XX细菌 有XX细菌生长 检出XX群XX菌 培养XX天有XX菌生长 阴性结果：未培养出细菌 未检出细菌 培养XX天无细菌生长
第一节、 血液标本的细菌学检验
血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。
• 如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。 • 常见的病原菌主要有：
法尿 和液 操标 作本 流细 程菌 检 验 方
（三）检验方法和操作流程
【细菌培养】 1.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃去。 尿培养的步骤： （1）收集中段尿 （2）用10μl标准接种环取尿液接种血平板（连续划线）和中国 蓝平板（分区划线） （3）35℃ 培养24h （4）菌落计数 计数血平板上生长菌落，乘以稀释倍数（× 100） 得出cfu/ml。 若整个平板菌落多得无法计数，可报告“菌落 数>105/ml”。 （5）若≤2种菌生长对每种菌进行鉴定和药敏；若＞ 2种菌生长 报告“混合菌群”。
其一、确定标本是否适合作培养，在低倍镜下观察白细胞和上皮细胞 的数目多少来评定(如表)； 其二、初步判定是否有病原菌存在。
痰标本镜下分类 分级 A B C 白细胞（个） >25 >25 <10 上皮细胞（个） <10 <25 >25
注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合适，应重新留标本
（1）一般细菌涂片
表5-3 痰标本在平板上的菌落量化指标
分级
第 1区 少见（+） 少量（++） 中等（+++） <10 >10 >10 <5 >5 <5
划线区菌落数目
第 2区 第 3区
多量（++++）
>10
>5
>5
第四节 尿标本
中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要
价值。
细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。
（一）痰标本的采集
标本采集方法 (1) 自然咳痰法 (2) 支气管镜采集法 (3) 气管穿刺法 (4) 结核分枝杆菌标本收集法：收集24h痰液 以提高阳性检出率。
验呼 方吸 法系 和统 操标 作本 流细 程菌 学 检
（二）检验方法和操作流程
1. 肉眼观察 包括颜色、粘度、有无血丝或脓。 2. 涂培养 （1）培养标本的选择：应选择粘液脓痰作涂片，排除不合格的标本。 （2）痰标本培养前处理：用无菌生理盐水将痰洗涤3次，加入等量的1% 胰酶溶液（PH7.6)，35º C水浴90min，使痰液均质化后备用。 （3）分离培养 处理后痰液接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯(或EMB ， 中国蓝)琼脂平板，置5%-10%二氧化碳环境中，35℃培养18-24h,根据菌 落及形态特点，作出初步判断然后按各类细菌特征进行生化鉴定，并同 时作药物敏感测定。 4. 报告方式 痰标本培养48小时后仅有草绿色链球菌生长而无致病菌生长， 报告“正常菌群”。查出致病菌，报告菌名和药敏结果，同时报告细菌 的量化指标(表5-3)，如“少量、中等或多量”。
（三）检验方法和操作流程
【涂片检查 】 取离心沉淀物涂片 （1）一般细菌 革兰染色、镜检、报告 （2）淋病奈瑟菌 革兰染色、镜检，如发现肾形双球 菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，位于细胞内 （或外），形似淋病奈瑟菌” （3）念珠菌 革兰染色、镜检，如发现芽生孢子和假 菌丝，且革兰染色阳性时，可报告“检出念珠菌”。 （4）结核分枝杆菌 抗酸染色、镜检，如在蓝色背景中 查见红色杆菌，报告“找到抗酸杆菌”。
肠热症患者，病程第1周采集血液、第2周粪便、
第3周尿液
安全采集 注意防止污染、避免自身感染
标本的运送
采样后立即送检，一般不超过1h
痰、尿标本应保存在4℃；脑脊液、滑膜液应25℃保存
检验的基本程序
初次分离选用的培养基类别
血液、骨髓 先增菌后接种血、巧、中 胸腹水 先增菌后接种血、巧、中 脑脊液 先增菌后接种血、巧、中 胆汁 先增菌后接种血、中 尿液 接种血、中 粪便 接种SS、中 痰 、咽拭子 接种血、巧、中 脓、伤口分泌物 接种血、巧、中 白喉棒状杆菌 接种血、胱氨酸亚碲酸钾血琼脂 淋病奈瑟菌 接种血、MTM 真菌 沙保罗琼脂
感染性心内膜炎对血培养检测的特殊要求
• 血培养套数：建议起始采集3套血培养，如果24h内报告阴性，则继续采集2
套血培养，共采集5套血培养。
• 解释：采集多套血培养，
其一，可以帮助判断阳性血培养是真性菌血症，还是由污染菌引起， 因为由污染菌引起的往往在多套血培养中仅有一套报阳性； 其二，多套血培养可以提供更充足的采血量，而血量是影响血中微 生物检出的非常重要的因素； 其三，多套血培养可帮助判断是否为持续性菌血症。
•
第一管作微生物学检验、第二管生化和免疫学检验、第三管脑脊
液常规。
法脑 和脊 操液 作标 流本 程细 图菌 学 检 验 方
（二）检验方法和操作流程
1、涂片检查 (1)一般细菌涂片检查:
化脓性脑膜炎脑脊液大部分明显混浊，可直接涂片，无色、透明的脑脊 液3000r/min ,离心10-15min后涂片，革兰染色后镜检。 根据染色及形态特征,常可初步提示细菌的种类例如，革兰阴性、凹面相 对的球菌，可能是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌，可能是链球菌； 长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。
检验的报告方式
• 初步报告方式
涂片染色、直接镜检 从染色性、基本形态、排列方式几方面报告 阳性结果： 检出XX性XX菌，形似XX菌 找到XX性XX菌 找到真菌菌丝和孢子 阴性结果：未找到或未检出细菌 未查到抗酸杆菌
未发现真菌菌丝或孢子
检验的报告方式
• 确定报告方式 经分离培养、生化反应及血清学试验后
三、真菌
新型隐球菌 白色念珠菌
（一）标本的采集
• •
由临床医师以无菌操作腰椎穿刺(图5一3)，抽取脑脊液3一5ml,盛
于无菌容器中立即送检，一般不能超过1h。 脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶素、迅速自溶 ;肺炎链球菌及流感 嗜血杆菌也易死亡。因此脑脊液无论涂片或培养、必须于采集后 立即送检或床旁接种，不宜将其置于冰箱保存、否则影响检出率。
⑵结核分枝杆菌涂片检查:
取脑脊液的离心(3000r/min ,30min)沉淀物作抗酸染色，发现红色杆菌， 报告“找到抗酸杆菌”。如有纤维团，直接取纤维团涂片。镜检必须非常仔 细，因为往往在一张玻片上只能找到1一2个结核菌。
(3)新型隐球菌涂片检查
取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色，加盖片后高倍镜检，黑色背景 中见有菌体和较宽的荚膜，可能为“新型隐球菌”。
（二）检验方法和操作流程
2. 分离培养
标本离心后接种血平板、巧克力平板，5-10％ CO2 35℃ 18-24h，进一步鉴定。 血平板 CO2 环境培养，易于识别β溶血链球菌和肺炎链球菌 培养
巧克力平板CO2 环境培养，有利于检出肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、
流感嗜血杆菌。
3. 报告方式
培养48小时，仍无菌生长者报告“培养2天无细菌生长”。 查见细菌报告细菌，报告菌名和药敏结果。
第三节 痰标本
下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正 常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致 病菌，提示有下呼吸道感染。
常见的病原菌主要有：
（1）革兰阳性菌 肺炎链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌 结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌 （2）革兰阴性菌 卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌 流感嗜血杆菌、肠杆菌科细菌 铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌 （2）其他病原菌 放线菌、奴卡菌、真菌、肺炎支原体
• 如病人已实施治疗，应在增菌培养液中加入相应拮抗剂：
磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml. 青霉素→2u青霉素酶/ml 氨基糖苷类、多粘菌素类→聚回香脑磺酸钠 其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
血标本采集的注意事项
• 应从静脉采血，不建议采集动脉血。 • 血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置取血。 • 血培养瓶常温保存，不应冷藏；采集血标本后请立即送
挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片， 革兰染色后镜检。 （2）结核分枝杆菌涂片 ①挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片，作抗酸染色镜检。 ②浓集法菌检 根据所见结果报告“找到(或未查到)抗酸杆菌”。
（3）放线菌及诺卡菌涂片 将痰液用生理盐水洗涤数次，挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点，置载玻 片上、覆以盖玻片、轻轻挤压，置高倍镜下观察其结构、如见中央为交织的 菌丝，末端呈放线状排列，然后揭去盖玻片。干燥后作革兰和抗酸染色镜检。 如查见中间菌丝部分为革兰阳性，四周放射菌丝为革兰阴性，而抗酸染色 阴性，可报告为“找到染色、形态疑似放线菌”; 如查见革兰染色结果与放线菌相同，而抗酸染色弱阳性者，可报告为 “找到染色、形态疑似奴卡菌”; 肉眼观察未见黄色颗粒，革兰染色与抗酸染色均为阴性，报告为阴性。
脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌
伤寒及副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌 3、其他病原菌：念珠菌、新型隐球菌
血培养最佳的采血时机？
最佳采血时机
• 一般于病人发热1-2天内采集血液标本。 • 尽可能在未使用抗菌药物前采集。 • 对已经使用抗菌药物的患者，则在下一次使用抗菌药物之 •
正常人中段尿细菌数≤103 cfu/ml
（一）尿液标本的采集
1.中段尿采集法 最常用 2.直接导尿采集法 易造成逆行感染，尽量不用 3.留置导尿管收集尿液法 注意不能从尿液收集袋中采集标本 4.膀胱穿刺法
（二）尿液标本中常见的病原菌
细菌中80％为革兰阴性杆菌，20％为革兰阳性菌
革兰阴性菌 大肠埃希菌 变形杆菌属 铜绿假单胞菌 克雷伯菌属 肠杆菌属 沙雷菌属 沙门菌属 淋病奈瑟菌 革兰阳性菌 肠球菌 金黄色葡萄球菌 腐生葡萄球菌 表皮葡萄球菌 链球菌 结核分枝杆菌 其他病原菌 真菌 支原体 衣原体 螺旋体
报告 阳性结果：培养出XX细菌 有XX细菌生长 检出XX群XX菌 培养XX天有XX菌生长 阴性结果：未培养出细菌 未检出细菌 培养XX天无细菌生长
第一节、 血液标本的细菌学检验
血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。
• 如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。 • 常见的病原菌主要有：
法尿 和液 操标 作本 流细 程菌 检 验 方
（三）检验方法和操作流程
【细菌培养】 1.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃去。 尿培养的步骤： （1）收集中段尿 （2）用10μl标准接种环取尿液接种血平板（连续划线）和中国 蓝平板（分区划线） （3）35℃ 培养24h （4）菌落计数 计数血平板上生长菌落，乘以稀释倍数（× 100） 得出cfu/ml。 若整个平板菌落多得无法计数，可报告“菌落 数>105/ml”。 （5）若≤2种菌生长对每种菌进行鉴定和药敏；若＞ 2种菌生长 报告“混合菌群”。
其一、确定标本是否适合作培养，在低倍镜下观察白细胞和上皮细胞 的数目多少来评定(如表)； 其二、初步判定是否有病原菌存在。
痰标本镜下分类 分级 A B C 白细胞（个） >25 >25 <10 上皮细胞（个） <10 <25 >25
注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合适，应重新留标本
（1）一般细菌涂片
表5-3 痰标本在平板上的菌落量化指标
分级
第 1区 少见（+） 少量（++） 中等（+++） <10 >10 >10 <5 >5 <5
划线区菌落数目
第 2区 第 3区
多量（++++）
>10
>5
>5
第四节 尿标本
中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要
价值。
细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。
（一）痰标本的采集
标本采集方法 (1) 自然咳痰法 (2) 支气管镜采集法 (3) 气管穿刺法 (4) 结核分枝杆菌标本收集法：收集24h痰液 以提高阳性检出率。
验呼 方吸 法系 和统 操标 作本 流细 程菌 学 检
（二）检验方法和操作流程
1. 肉眼观察 包括颜色、粘度、有无血丝或脓。 2. 涂培养 （1）培养标本的选择：应选择粘液脓痰作涂片，排除不合格的标本。 （2）痰标本培养前处理：用无菌生理盐水将痰洗涤3次，加入等量的1% 胰酶溶液（PH7.6)，35º C水浴90min，使痰液均质化后备用。 （3）分离培养 处理后痰液接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯(或EMB ， 中国蓝)琼脂平板，置5%-10%二氧化碳环境中，35℃培养18-24h,根据菌 落及形态特点，作出初步判断然后按各类细菌特征进行生化鉴定，并同 时作药物敏感测定。 4. 报告方式 痰标本培养48小时后仅有草绿色链球菌生长而无致病菌生长， 报告“正常菌群”。查出致病菌，报告菌名和药敏结果，同时报告细菌 的量化指标(表5-3)，如“少量、中等或多量”。
（三）检验方法和操作流程
【涂片检查 】 取离心沉淀物涂片 （1）一般细菌 革兰染色、镜检、报告 （2）淋病奈瑟菌 革兰染色、镜检，如发现肾形双球 菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，位于细胞内 （或外），形似淋病奈瑟菌” （3）念珠菌 革兰染色、镜检，如发现芽生孢子和假 菌丝，且革兰染色阳性时，可报告“检出念珠菌”。 （4）结核分枝杆菌 抗酸染色、镜检，如在蓝色背景中 查见红色杆菌，报告“找到抗酸杆菌”。
肠热症患者，病程第1周采集血液、第2周粪便、
第3周尿液
安全采集 注意防止污染、避免自身感染
标本的运送
采样后立即送检，一般不超过1h
痰、尿标本应保存在4℃；脑脊液、滑膜液应25℃保存
检验的基本程序
初次分离选用的培养基类别
血液、骨髓 先增菌后接种血、巧、中 胸腹水 先增菌后接种血、巧、中 脑脊液 先增菌后接种血、巧、中 胆汁 先增菌后接种血、中 尿液 接种血、中 粪便 接种SS、中 痰 、咽拭子 接种血、巧、中 脓、伤口分泌物 接种血、巧、中 白喉棒状杆菌 接种血、胱氨酸亚碲酸钾血琼脂 淋病奈瑟菌 接种血、MTM 真菌 沙保罗琼脂
感染性心内膜炎对血培养检测的特殊要求
• 血培养套数：建议起始采集3套血培养，如果24h内报告阴性，则继续采集2
套血培养，共采集5套血培养。
• 解释：采集多套血培养，
其一，可以帮助判断阳性血培养是真性菌血症，还是由污染菌引起， 因为由污染菌引起的往往在多套血培养中仅有一套报阳性； 其二，多套血培养可以提供更充足的采血量，而血量是影响血中微 生物检出的非常重要的因素； 其三，多套血培养可帮助判断是否为持续性菌血症。
•
第一管作微生物学检验、第二管生化和免疫学检验、第三管脑脊
液常规。
法脑 和脊 操液 作标 流本 程细 图菌 学 检 验 方
（二）检验方法和操作流程
1、涂片检查 (1)一般细菌涂片检查:
化脓性脑膜炎脑脊液大部分明显混浊，可直接涂片，无色、透明的脑脊 液3000r/min ,离心10-15min后涂片，革兰染色后镜检。 根据染色及形态特征,常可初步提示细菌的种类例如，革兰阴性、凹面相 对的球菌，可能是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌，可能是链球菌； 长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。
检验的报告方式
• 初步报告方式
涂片染色、直接镜检 从染色性、基本形态、排列方式几方面报告 阳性结果： 检出XX性XX菌，形似XX菌 找到XX性XX菌 找到真菌菌丝和孢子 阴性结果：未找到或未检出细菌 未查到抗酸杆菌
未发现真菌菌丝或孢子
检验的报告方式
• 确定报告方式 经分离培养、生化反应及血清学试验后
三、真菌
新型隐球菌 白色念珠菌
（一）标本的采集
• •
由临床医师以无菌操作腰椎穿刺(图5一3)，抽取脑脊液3一5ml,盛
于无菌容器中立即送检，一般不能超过1h。 脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶素、迅速自溶 ;肺炎链球菌及流感 嗜血杆菌也易死亡。因此脑脊液无论涂片或培养、必须于采集后 立即送检或床旁接种，不宜将其置于冰箱保存、否则影响检出率。
⑵结核分枝杆菌涂片检查:
取脑脊液的离心(3000r/min ,30min)沉淀物作抗酸染色，发现红色杆菌， 报告“找到抗酸杆菌”。如有纤维团，直接取纤维团涂片。镜检必须非常仔 细，因为往往在一张玻片上只能找到1一2个结核菌。
(3)新型隐球菌涂片检查
取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色，加盖片后高倍镜检，黑色背景 中见有菌体和较宽的荚膜，可能为“新型隐球菌”。
（二）检验方法和操作流程
2. 分离培养
标本离心后接种血平板、巧克力平板，5-10％ CO2 35℃ 18-24h，进一步鉴定。 血平板 CO2 环境培养，易于识别β溶血链球菌和肺炎链球菌 培养
巧克力平板CO2 环境培养，有利于检出肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、
流感嗜血杆菌。
3. 报告方式
培养48小时，仍无菌生长者报告“培养2天无细菌生长”。 查见细菌报告细菌，报告菌名和药敏结果。
第三节 痰标本
下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正 常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致 病菌，提示有下呼吸道感染。
常见的病原菌主要有：
（1）革兰阳性菌 肺炎链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌 结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌 （2）革兰阴性菌 卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌 流感嗜血杆菌、肠杆菌科细菌 铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌 （2）其他病原菌 放线菌、奴卡菌、真菌、肺炎支原体
• 如病人已实施治疗，应在增菌培养液中加入相应拮抗剂：
磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml. 青霉素→2u青霉素酶/ml 氨基糖苷类、多粘菌素类→聚回香脑磺酸钠 其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
血标本采集的注意事项
• 应从静脉采血，不建议采集动脉血。 • 血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置取血。 • 血培养瓶常温保存，不应冷藏；采集血标本后请立即送
挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片， 革兰染色后镜检。 （2）结核分枝杆菌涂片 ①挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片，作抗酸染色镜检。 ②浓集法菌检 根据所见结果报告“找到(或未查到)抗酸杆菌”。
（3）放线菌及诺卡菌涂片 将痰液用生理盐水洗涤数次，挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点，置载玻 片上、覆以盖玻片、轻轻挤压，置高倍镜下观察其结构、如见中央为交织的 菌丝，末端呈放线状排列，然后揭去盖玻片。干燥后作革兰和抗酸染色镜检。 如查见中间菌丝部分为革兰阳性，四周放射菌丝为革兰阴性，而抗酸染色 阴性，可报告为“找到染色、形态疑似放线菌”; 如查见革兰染色结果与放线菌相同，而抗酸染色弱阳性者，可报告为 “找到染色、形态疑似奴卡菌”; 肉眼观察未见黄色颗粒，革兰染色与抗酸染色均为阴性，报告为阴性。