免疫比浊法检测免疫球蛋白汇总.

透射比浊法测定原理
光 源
诱 导 剂
透射比浊法测定原理
样品
光电计
滤光片 光源
透射比浊法的缺陷：
(1)溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大， 分子太小则阻挡不了光线的通过。 (2)溶液中的抗原－抗体复合物的数量要足够多。如 果数量太小，溶液浊度变化太小，对光通量影响 不大。 (3) 透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的，因 此只能测定抗原－抗体反应的第二阶段，检测仍 需抗原－抗体温育反应时间，检测时间较长。
材料
1.免疫球蛋白试剂A,M,G 2.免疫球蛋白试剂A,M,G校准品，蒸馏水 3.微量加样枪 4.分光光度仪
结果计算方法
样本管吸光度 Ig浓度（g/L）= 校准管浓度 × Ig校准浓度（g/L）
时间
速率散射比浊法
（一）基本原理
— 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。 — 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。 — 当仪器测定到某一时 间内形成速率下降时， 即出现速率峰，该峰 值的高低，即代表所 测抗原的量。
透射比浊法: 在光源的光路方向（00） 测量透射光强度和被检测 溶液微粒浓度关系的方法。
透射比浊法和散射比浊法光路
IC
透射比浊法 I
I0
θ
检测器A
Iθ 检测器B
散射比浊法
免疫透射比浊法
（一）基本原理 是个极其简单的方法。在抗原过量情况下，与待测 样品中相应的Ig发生抗原-抗体反应，形成可溶性复合 物，使反应介质的浊度发生改变。 测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以 吸收单位（A）或OD值表示，A值反映了入射光和透射光 的比率。待测物中Ig含量可通过标准曲线计算得出。 待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比，而与透射 光呈反比。 反应在PEG的作用下，加速复合物的形成。
本实验中应用聚乙二醇的生理特性
聚乙二醇是中性、无毒且具有独特理化性质和良好的 生物相溶性的高分子聚合物，聚乙二醇即PEG具有高度 的亲水性，在水溶液中有较大的水动力学体积，并且 没有免疫原性。当藕联到药物分子或药物表面时，可 以将其优良性质赋予修饰后的药物分子，改变它们在 水溶液中的生物分配行为和溶解性，在其修饰的药物 周围产生空间屏障，减少药物的酶解，避免在肾脏的 代谢中很快消除，并使药物能被免疫系统的细胞识别 。
散射比浊法的缺陷
(1)因为是一次性测定光吸收值，没有考虑每一个 待测样本的吸收和散射效果，可测定结果不准 确 (2)测定的仍是抗原－抗体反应的第二阶段，不适 合快速检测。 (3) 终点法存在反应本底，测定样本的含量越低 本底比例越大，故在微量测定时，本底的干扰 是影响准确测定的重要因素。
影响免疫比浊测定的因素
免疫浊度法测定中应注意的问题 1、伪浊度的影响 伪浊度形成原因很复杂，主要是抗血清含有非特 异性的交叉反应性杂抗体成分；增浊剂浓度和反应时间 掌握不当；样品本身的浊度处理不当；试剂的污染和变 质；器材尤其是比色杯等不够清洁等因素。 2、非特异性散射光的影响 免疫浊度法经常受内源性光散射的干扰，为避免这 些非特异性光散射的影响，应用透射比浊法时需保证抗 体组分在3％以下，散射比浊法需保证在 0.5％以下。
免疫比浊法检测免疫球蛋白
免疫学系
实验原理 免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中 特异结合，产生一定大小的复合物，形成 光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后 的透射光或散射光作为计算单位。
免 疫 比 浊 法 分 类
当一束光 线通过溶 液受到光 散射和光 吸收两个 因素的影 响而使光 的强度减 弱
散射比浊法: 在光源的光路方向（50-960） 角的方向上测量透射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。
光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面 的光能数量
散射比浊法
• 原理 在入射光的一定角度检测粒子发出的散 射光，散射光的强度与IC的含量呈正比。
散射比浊法测定原理
聚集形成
诱导剂
增 加 散 透 率 : 660nm 测 定 散 射 光
散射光测定
检测器 (LED) 样品
光电计 散射光强度
100 %
0%
在速率峰基础上完成的标准曲线
RATE
CONCENTRATION
方法评价：ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
敏感度高 快速(不必达平衡）
抗原抗体结合的动态测定，理论上测定不
受本底散射信号的影响
可检测微量样品
2.终点散射比浊法
• 原理
让抗原抗体作用一定时间，使其反应达到平衡后， 测定其IC形成的量。IC的浊度不再受时间的影响，但 反应IC聚合产生絮状沉淀之前，进行浊度测定。
1、抗原抗体比例 2、抗体的质量 抗体的特异性、效价、亲和力 3、反应的溶液 4、增浊剂的使用
透射比浊法和散射比浊法优缺点比较
1、透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪 和普通的分光光度计，几乎所有的实验室均能开展。不 足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大 ，检测的周期较长。 2、散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高，检测快 速。其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。