石蜡切片方法

簇处理。 二、固定
首先，将材料从植株上剪下，泡入FAA或者卡 诺氏固定液中。取一针筒注射器，在针筒中加入34ml固定液（与泡材料的固定液同），将材料夹 入，然后用针筒注射器进行真空抽气操作（左手握 住针筒，右手推动推进器，推动液体排出针筒内空 气，左手大拇指堵住针筒上插注射器针头的插口, 右手向外拉推进器，如此反复），尽量抽尽材料内 空气，然后将材料放入同一固定液保存。
加入1/3体积的纯二甲苯混匀-5分钟 ↓
加入1/3体积的纯二甲苯混匀-5分钟 ↓
加入1/3体积的纯二甲苯混匀-5分钟 ↓
纯二甲苯20分钟 ↓
纯二甲苯25分钟 ↓
换新的纯二甲苯，削蜡块放入其中，室温下过夜 （蜡块最好不要压到材料）
五、升温浸蜡 将装着二甲苯、蜡块和材料的试管放到恒温箱
中，将温度调到37度，等温度升到37度后继续上 调升温。
100%酒精----10分钟 ↓
100%酒精+少量龙胆紫(GUS材料不加)-10分钟 浸蜡：
纯石蜡----2小时 ↓
纯石蜡----2小时 ↓
纯石蜡----2小时
茎 脱水：
70%酒精----2小时 ↓
70%酒精---- 2小时 ↓
80%酒精---- 2小时 ↓
80%酒精---- 2小时 ↓
85%酒精----1小时 ↓
GUS的材料已经过显色处理，可直接进行脱 水过程。
三、脱水
70%酒精----30分钟 ↓
80%酒精----30分钟 ↓
85%酒精----20分钟 ↓
95%酒精----20分钟 ↓
100%酒精----5分钟
100%酒精+少量龙胆紫固体(GUS材料不加)-5分钟 四、透明及渗蜡（脱酒精，紧接着上部过程）
纯石蜡----1小时 ↓
纯石蜡----1小时 ↓
纯石蜡----1小时 六、包埋
浸完纯石蜡最后一个小时后，进行包埋。 折一个方型纸盒，倒入干净纯石蜡（所用纯石 蜡与渗蜡时所用蜡块石蜡同） ，用镊子迅速将材 料夹到其中，按一定的间隔和方向放好，待石蜡凝 固（石蜡稍微凝固，即可将纸盒放入冰箱快速冷 却，防止石蜡结晶不好切），包埋即完成。 七、修块 将包埋好后含有材料的石蜡块修成切面长、宽
纯石蜡---- 1天 ↓
纯石蜡---- 1天（到更长）
FAA固定液固定的材料，可以在FAA内保存很 长的时间，再进行下一步的操作，同时FAA固定材 料需要的时间也相对较长，一般要18-24小时才能 达到较好的固定效果，如果时间要求不是很急，一 般建议用FAA固定材料。
卡诺氏固定液固定的材料，固定时间不要超过 6个小时。然后就必须进行下一步的脱水操作。如 果时间要求较急，卡诺氏固定液在短时间内可以达 到较好的固定效果。
叶 取材：取较为成熟的叶，幼小的嫩叶不适合于做石 蜡切片。 脱水：
70%酒精----30分钟 ↓
70%酒精----30分钟 ↓
80%酒精----30分钟 ↓
80%酒精----30分钟
85%酒精----15分钟 ↓
85%酒精----15分钟 ↓
95%酒精----15分钟 ↓
95%酒精----15分钟 ↓
85%酒精----1小时 ↓
95%酒精----1小时 ↓
95%酒精----1小时 ↓
100%酒精----30分钟 ↓
100%酒精+少量龙胆紫(GUS材料不加)-30分钟 透明：时间延长至2到3倍 浸蜡：
纯石蜡wk.baidu.com---1天 ↓
纯石蜡---- 1天 ↓
纯石蜡---- 1天
根 取材：建议取完整的根系进行处理，包埋及切片 时都保持完整的根系形态。完整的根系在切片时将 得到横切，纵切以及各个角度的切片结果。 脱水：
液，取合适长度的蜡带，让其粘浮在粘片液上，注 意不要有气泡。
然后将其放到烘片台上，保持烘片台温度三、 四十度，让粘片液上的蜡带充分伸展，直到整个蜡 带表面均一平整，吸去多余粘片液，把其从烘片台 取下，放入37度恒温箱。待粘片液干完之后，继 续下一步处理。 十、脱蜡
把处理好的载有蜡带的玻片从恒温箱取出，将 其泡入纯二甲苯中：
70%酒精----过夜 ↓
80%酒精---- 过夜 ↓
85%酒精----2小时 ↓
85%酒精----2小时 ↓
95%酒精----2小时 ↓
95%酒精----2小时 ↓
100%酒精----1小时 ↓
100%酒精+少量龙胆紫(GUS材料不加)-1小时 透明：时间延长至2到3倍 浸蜡：
纯石蜡----1天 ↓
到37度→到42度→到47度→到50度→到52度 →到54度→到56度→到58度→到60度→到61度→
到62度→到63度（不要超过63度） 各个温度等级最好稍做停留，如果有事的话可
以适当延长停留时间，但高温时不宜停留超过标准 操作太久的时间。
升到63度后，保持20-30分钟，继续下步操作, 将材料从试管中夹出（所用纯石蜡与渗蜡时所用蜡 块石蜡同）：
纯二甲苯----30分钟 ↓
纯二甲苯----30分钟 ↓
纯二甲苯----30分钟 取出等二甲苯挥发干净，即可进行下一步操作. 注意在整个过程中要保持玻片有材料的一面不碰到 东西，以防材料脱落。
十一、封片 在脱完蜡的玻片有材料的一面上，点上适量的
加拿大树脂，然后将干净的盖玻片盖上，注意尽量 不要产生气泡，待树脂氧化干燥后，即可观察。
最好是0.5-1cm的方体，然后将其粘到小木块上， 以备切片。
粘好后，确保切面是正四方形，如不是继续修 块。 八、切片
将粘上材料蜡块的小木块固定到切片机上，尽 量使切面与水平面垂直。切面上的两条与水平线平 行的边也与刀刃线平行。
切片时应该保证刀刃的锋利，切出来的蜡带应 该平整且连续。
九、粘片及烘片 取干净的载玻片，在其上均匀的涂上一层粘片
FAA固定液 70%酒精↓80%酒精 85%酒精95%酒精100%酒精
拟南芥石蜡切片方法总结
花 一、取材
横切：建议取完整的花簇进行处理，包埋及切片 时都保持完整的花簇形态，不要让单个的花朵掉离 花簇。可较好的保持花簇上每朵花的完整性，可以 看到连续的花期。
纵切：前期都取完整花簇进行处理，浸蜡、包 埋、切片时则分离成单朵处理，最小的几朵花可成