血液学一般检查概论

集并使血涂片染色后产生蓝色背景
4.草酸钠 • 与血液中的钙离子形成草酸钙沉淀，阻止血液凝固 • 对凝血因子Ⅴ保护作用差，不适于凝血检查
5.双草酸盐抗凝剂 草酸钾使红细胞体积缩小，草酸铵是红细胞体积增大，两 者以适当比例混合，恰好不影响红细胞体积和形态，可用于
血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等项目检查。
三、血液标本的抗凝
抗凝：用物理或化学的方法，除去或抑制血液中某 些凝血因子以阻止血液凝固的方法。
抗凝剂：能阻止血液凝固的化学试剂
常用化学抗凝剂
1.枸橼酸钠（柠檬酸钠）
浓度：109mmol/L(32g/L) 抗凝原理：与血液中的钙离子形成 可溶性螯合物，阻止血液凝固 适用于：血栓与止血检验（1：9）
这类误差通过主观努力可以避免或显著减少，属于系统误差。
（2）固有误差：包括计数域误差和仪器误差
计数域误差：由于每次充池后细胞在计数池的分布不可能完全
相同所造成的误差 仪器误差：指器材（计数板、盖片、吸管等）不准确、不精密 等造成的误差，该误差可通过定期校正各种器材来减少。
6.优缺点
优点：方便快捷
缺点： 末梢循环受多种因素影响
标本混有组织液
采血量受限 疼痛明显
7、注意：
①穿刺部位消毒酒精干后方可穿刺
②烧伤病人应选择皮肤完整处采血
③一人一针
激光采血仪
（三）动脉采血法
1、适用：用于血气分析
2、部位：股动脉等
3、器材：专用采血器
4、注意：采血后立即封闭针头， 避免与空气接触， 及时送检， 最好在30分钟内检测
可稳定Ⅴ因子和Ⅷ因子；
血沉测定（1：4）； 因其毒性小，也用于配制血液保存液
2.乙二胺四乙酸盐（EDTA）
EDTA有钠盐和钾盐，钠盐溶解度低于钾盐，一般用 钾盐 浓度：1.4～1.6mg/mL血 抗凝原理：与血液中的钙离子形成可溶性螯合物， 阻止血液凝固 适用于：全血细胞分析（CBC），血小板计数
黄色透明液体。
血浆：血液加抗凝剂后分离出来的淡黄色液体。 区别：血清缺少某些凝血因子，主要是纤维蛋
白原。
血清
血浆
全血
（二）血液理化性质
1. 血量
血浆量与血细胞量的总和，成人约4～5L，约占体重的6%～8%，其 中血浆占55%,血细胞占45%。
2. 颜色
红色，来自红细胞内血红蛋白
动脉血：鲜红色 静脉血：暗红色 严重贫血者：血液红色变浅 严重CO或氰化物中毒：樱红色 高脂膳食后：血浆呈乳白色 溶血患者：不同程度的红色
化 学 血 型
真空采血
毛细血管采血法
1.适用于：需血微量的检查 2.采血部位：耳垂（检查结果不够恒
定）或手指
左手中指或无名指指端内侧为宜
婴幼儿可选用大趾及足底内外侧缘
3.采血器材 带刃的三棱针或专用采 血针 4.穿刺深度 2～2.5mm
一次性专用采血针
三棱针
微量采血管
一次性微量采血吸管
5.采血顺序 血小板计数、 红细胞计数 、血红蛋白测定、 白 细胞计数、 血型鉴定等
四、血涂片的制备
一张良好的血涂片，其标准是厚薄适宜、头体尾分
明、细胞分布均匀、边缘整齐、两边留有空隙
1.载玻片的清洁
新购置的载玻片必须用浓度约1mol/L HCL浸泡24h后，再 用清水彻底冲洗，干燥后备用。 使用载玻片时，切勿用手触及表面，以保持玻片清洁、干 燥、中性、无油渍
2.血涂片的制备
影响因素
涂片的厚薄与血滴的大小、推片与载片之间的角度、推片 时的速度及血细胞比容有关 血滴大、角度大、速度快则血膜越厚，反之则血膜越薄 血膜分布不均：推片边缘不齐、用力不均和载玻片不清洁 所致
血细胞比容高于正常时，血液粘度较高，保持小的角度可
得到满意结果，反之，应保持大的角度
五、血细胞常用的染色方法
全血比密：主要取决于所含红细胞的百分比和血红蛋白的量 正常男性:1.055~1.063 正常女性：1.051～1.060 血浆比密：1.025～1.030 和血浆中的蛋白浓度有关 血细胞比密：1.090 血浆渗透压：290～310 Osm/（Kg.H2O)
6. 酸碱度 7. 凝固性
正常血液PH值7.35～7.45 是凝血因子激活的结果
3. 红细胞在血浆中的悬浮稳定性
循环血液中的红细胞呈均匀混悬状态。 原因（1）红细胞膜表面的唾液酸根带负电荷，形成Zeta电位。 （2）正常血浆成分，血浆粘度及血流动力学等的影响。
4. 粘滞性
取决于血细胞比容和血浆粘度 全血粘度为生理盐水的4～5倍，
血浆粘度为生理盐水的1.6倍左右
5. 比密和渗透浓度 比密：血液与同体积水重量之比
（三）血液标本的保存
1.血液标本的保存 CBC应在室温保存 需做镜检下分类者应及早推 制血片，因为2小时后粒细胞 形态即有改变，
4℃可延长血液贮存期，但会影响PLT和MPV值
2.检测后标本的保存 根据标本性质和要求保存 3.标本信息的保存
（四）检验后血液标本的处理
检验后废弃的标本应由专人负责处理，用专 用的容器或袋子包装，由专人送到指定的消 毒地点集中，一般专门机构采用焚烧的方法 处理。
30g/L碘酊和75%乙醇
从内向外、顺时针方向
6.穿刺 针头斜面和针筒刻度向上，沿静脉走向使针头与皮肤呈30。角斜 行快速刺入皮肤，然后以5。角向前穿破静脉壁进入静脉腔
7.抽血
缓慢抽动，迅速拔出
8.放血与混匀 注意要取下注射针头
普通静脉采血示意图
真空采血法
又称负压采血法，是将有头盖胶塞的采血试管预先抽成不
采血所需耗材
消毒液
棉棒
压脉带 垫巾 套筒式 头皮静脉式
一次性手套
真空采血管
真空采血装置
锐器盒
普通静脉采血操作方法
1.患者取坐位或卧位，准备合适数量和规格的试管备用 2.检查注射器 注射器针头斜面对准针筒刻度
3.选择静脉 肘部静脉 4.扎压脉带 采血部位上端 捆扎时间不应超过1min 握拳
5.消毒
采血质量控制
要注意影响标本质量的因素 1、患者情况 ①年龄、性别、种族 ②活动情况及精神状态 ③采血时间及体位 ④服药或吸烟
2、采血
①操作规范
②勿挤压皮肤 ③压脉带使用时间尽量短
压脉带使用时间应少于 1 分钟 建议在针头穿刺进入血管后即可放松压脉带
3.避免溶血 溶血：指红细胞破裂， 使血红蛋白从细胞内 溢出的现象
2.细胞的着色原理 是染料透入被染物并存留其内部的一种
过程。 化学的亲和作用+物理的吸附作用
嗜酸性物质：细胞中的碱性物质，与酸性染料伊红结合染成 红色，如：血红蛋白和嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒 嗜碱性物质：细胞中的酸性物质，与碱性染料亚甲蓝结合染成 蓝色，如淋巴细胞胞质和嗜碱性粒细胞胞质中的嗜碱性颗粒
中性物质：中性颗粒呈等电状态与伊红亚甲蓝均可结合，染
淡紫红色 细胞核蛋白染成紫红色
红细胞的染色
原始红细胞和早幼红细胞：胞质和核仁中含有较多的酸性
物质，故染成浓厚的蓝色
中幼红细胞：既含有酸性物质，又含有碱性物质，故染成 红蓝色或灰红色 成熟红细胞：只含有碱性物质，则被染成粉红色
3.PH对细胞染色的影响
禁忌于：凝血因子与血小板功能检查
3.肝素
抗凝原理：抗凝机制复杂
（1）加强抗凝血酶Ⅲ作用，抑制凝血活酶的形成，
（2）抑制血小板聚集与释放反应，从而阻止血液凝固
（3）灭活氨基酸蛋白酶，抑制凝血酶的形成 适用于：血细胞比容测定和临床生化多项检查 禁忌于：凝血功能检查； 白细胞计数和分类计数检查，因为它可使白细胞聚
（一）瑞氏染色法
1.瑞氏染液的组成 酸性染料伊红（E-）+碱性染料亚甲蓝（M+） +甲醇 伊红为钠盐，染色部分为阴离子；亚甲蓝是氯盐，染色部分是阳离子。 甲醇的作用：（1）溶解伊红和亚甲蓝 （2）固定细胞形态 优点：固定和染色合并在一起，操作简便，染色时间短，对白细胞特异 性颗粒着色较好
缺点：对细胞核的着色略差
第一章 血液学一般检验
龚晓华
第一节 概论
学习目标
1.了解血液的组成、理化性质及功能
2.掌握血液标本的采集及注意事项 3.熟悉血液标本的送检、保存与处理 4.掌握常用抗凝剂的作用原理及适用范围 5.掌握血涂片的制备及血细胞染色常用方法和评价
一、血液生理概要
（一）血液的组成
血液=血细胞（红细胞+白细胞+血小板）+血浆 血清：离体后的血清自然凝固，分离出来的淡
同的真空度，利用其负压自动定量采集静脉血样。
真空采血装置有头皮静脉式和套筒式两种
优点：定位准确、传送方便、 封闭无菌、标识醒目、 刻度清晰、容易保存
常 用 彩 色 真 空 采 血 管 容 器 的 用 途
凝 血 检 查 血 沉 血 常 规 血 型
化 学 检 查
耐葡 糖萄 量糖
化 学 检 查
化 学 检 查
5.染色效果分析
（1）血膜外观呈淡紫红色 （2）经瑞氏—吉姆萨染色显微镜下观察
红细胞：粉红色圆盘状
白细胞胞质：颗粒清楚，显示出各种细胞特有的色彩 细胞核：染紫红色，核染色质结构清楚 中性粒细胞颗粒染成紫红色 嗜碱性粒细胞颗粒染成深紫色
嗜酸性粒细胞颗粒染成桔黄色
淋巴wenku.baidu.com胞胞质染成淡蓝色
（二）吉姆萨染色法
4. 输液时采血部位的选择 若一侧手臂静脉输液时应从对侧手臂取血，以免 血液被稀释或输入的液体对测定结果的影响。
若二侧手臂同时进行静脉输液，应选择输液穿刺
点的远心端取血，且避免采血部位距输液处太
近。
（二）血液标本的送检
1.唯一标识原则 条形码系统
2.生物安全原则 专用容器运送
3.尽快运送原则 4.接收和拒收标本原则
4.瑞氏染液的质量评价
（1）血涂片实际染色评价
（2）吸光度比值（RA） 瑞氏染色的成熟指数以RA=1.3±0.1为宜 新配制的瑞氏染液往往偏碱，染色效果较差，须存放一 定时间，待染液成熟，染液成熟的过程主要是亚甲蓝逐渐转 变为天青B的过程。在密封条件下，贮存时间越久，转化的 天青B越多，染色效果越好。
使用PH6.4～6.8的磷酸盐缓冲液 如环境PH<PI(PI为该蛋白质的等电点），则该蛋白质带正电荷， 即在酸性环境中正电荷增多，易与酸性伊红结合，染色偏红 PH>PI:在碱性环境中负电荷增多，易于亚甲蓝结合染色偏蓝
缓冲液偏酸（PH<6.4):正电荷增多，易与伊红结合，红细胞和
嗜酸性颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色 缓冲液偏碱（PH>6.8)：所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗；嗜酸 性粒细胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色；中性颗粒偏粗， 染成紫黑色。
（三）血液生理功能
1.运输功能
2.协调功能 3.维护机体内环境稳定 4.防御功能
二、血液标本的采集、送检、保存与处理
（一）血液标本的采集
1.静脉采血法 普通采血法 真空采血法 2.毛细血管采血法 3.动脉采血法 动脉血主要用于血气分析
静脉采血法
采血部位
多采用位于体表的浅静脉， 肘部静脉——最常用 手背静脉 内踝静脉 股静脉 小儿可采集颈外静脉
造成溶血的原因
▲采血后将血从注射器注入试管，血细胞受外 力而溶血 ▲采血时定位或进针不准，针尖在静脉中探来
探去，造成血肿而溶血 ▲混匀含添加剂的试管时用力过猛或运输时动 作过大 ▲从已有血肿的静脉采血，血样可能含有已溶 血的细胞；
▲用压脉带时间过长，引起血管内溶血
▲血液和抗凝剂比例失调 ( 血量不足 ) ，由于渗透 压的改变发生溶血 ▲静脉穿刺处用酒精消毒，酒精未干即开始采血 ▲注射器或盛血容器带水或容器污染 ▲注射器和针头连接不紧，采血时空气进入，产 生泡沫，发生溶血。
染色原理与瑞氏染色法大致相同，染料由伊红和天青组成，
本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更为清晰。
（三）瑞氏—吉姆萨复合染色法
兼顾两种方法之长，使血细胞的颗粒及胞核均能获得满
意的染色结果。
六、血细胞显微镜计数法
显微镜计数法的质量控制 技术误差 误差 固有误差
计数域误差 仪器误差
（1）技术误差：由于操作不正规或使用器材不准确造成的误差。