弯曲菌与螺杆菌

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• The most commonly isolated species of Campylobacter is C. jejuni, an organism that causes gastrointestinitis. Humans acquire the organisms by eating undercooked chicken or drinking contaminated milk and water.
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分类
• 弯曲菌原归属于弧菌属，1973年正式命名 为弯曲菌属，属弯曲菌科。
• 2005年在伯杰系统细菌学手册 （ Bergry’s Manual of Systematic Bacteri ology）中将其分为30个种（亚种）。
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分布：
• 广泛分布于温血动物肠道内
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生物学特性
培养特性：
• 微需氧菌，最佳气体环境为5%O2,10%CO2 和85%N2，不能在空气中生长。
• 最适生长温度因菌种而异
---空肠/大肠弯曲菌最适生长温度42℃ ---胎儿弯曲菌 最适生长温度37℃。
• 营养要求高：常用布氏肉汤增菌，弯曲菌 选择培养基（skirrow、Campy-BAP）培
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临床意义
• 空肠弯曲菌（C. jejuni )主要引起肠道感染 与吉兰-巴雷综合征和反应性关节炎有关
急性外周神经脱髓鞘神经根神经炎 • 胎儿弯曲菌（C. fetus)等其他弯曲菌主要
引起肠外感染
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感染性腹泻常见微生物病原
• 病毒：诺如病毒、轮状病毒 • 细菌：大肠埃希菌某些血清型
• 扁平、融合成片，沿穿刺线扩散生长
生化反应
• 不活跃，不能利用糖类 • 脲酶强（+）、氧化酶和触酶（+）
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微生物检验程序
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胃、十二指肠活检标本
血清,胃液
显微镜 检查
革 病理 免疫 兰 切片 组化 染 特殊 色 染色
PCR
快速脲 酶试验
• 1975年Dr. Steer发表在临床病理杂志上文章第一次用电子显微镜 观察到胃粘膜螺旋状菌存在（再热）。
• 1979年澳大利亚病理学家Robin Warren在病理标本中看到这个细 菌，1981年与澳大利亚内科医生Barry Marshall合作。 Marshall1982年培养出细菌，1983年将他们发现的结果在布鲁塞 尔国际微生物学会发表，1984年在《Lancet》上发表“胃炎和消 化性溃疡患者胃部发现的不明弯曲杆菌”，1985年自服含菌液患胃 炎，结果发表在澳大利亚杂志上，1986年移民至美国，他们的发现 开始引起越来越多的关注，1989年正式命名幽门螺杆菌。
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灰 白 色 圆 形 凸 起 有 光 泽 的 小 菌 落
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大肠弯曲菌在Camp-BAP菌落
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灰 白 色 圆 形 凸 起 有 光 泽 的 小 菌 落
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生物学特性
生化反应： • 生化反应不活泼，不利用糖类，以氨
基酸为能量来源。 • 不能在3.5%NaCl环境中生长 • 氧化酶和触酶阳性，硝酸盐还原（+） • 尿素（-）、硫化氢（-）。
弯曲菌与螺杆菌
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弯曲菌属与螺杆菌属
弯曲菌目（Campylobacterale）
弯曲菌科
（Campylobacteraceae）
螺杆菌科
（Helicobacteraceae）
弯曲菌属
（Campylobacter）
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螺杆菌属
（Helicobacter）
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弯曲菌属
（Campylobacter ）
超过24h • 受检者术前应停服铋剂或抗菌药物一周
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2019/11/7 University of the Ryukyus (与病理学家Robin Warren合影） 40
Marshall
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Barry Marshall and Robin Warren
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幽门螺杆菌的发现历程
• 1875年德国解剖学家发现胃粘膜有螺旋样菌存在
微需氧环境 37℃、42℃ 72h 可疑菌落
涂片染色镜检
纯培养（布氏或弯曲菌血琼脂）
鉴定
关键：侧重于空肠和大肠弯曲
菌培养，培养基的选择和最佳孵育 条件的给予
微生物检验
标本采集
• 采取新鲜粪便与肛拭子、血液、分泌物等立即送检。 • 如不能及时送检应种入Cary-Blair运送培养基，放
4℃冰箱可保存3周。
养。
• 培养时间：较一般细菌稍久（一般72h左右）
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菌落特征：有两种（血平板均不溶血） • 灰白色扁平湿润边缘不整齐蔓延生长的
菌落（沿穿刺线拖尾样外观）
• 灰白色、粉红灰色、黄灰色圆形凸起有 光泽的小菌落
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拖 尾 样 外 观
空肠弯曲菌ATCC33291在Camp-BAP上菌落
原（+），脲酶（-） • 主要通过食物和水经口传播。
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CAMPYLOBACTER
• Campylobacter are Gram-negative,
microaerophiles, which means that they can survive in a low oxygen environment.
– 微氧环境培养 – 不同细菌培养温度不同
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鉴定要点：
– 形态培养特征 革兰阴性，菌体弯曲或呈S形，动力（+）氧化 酶（+） 生长温度 (37℃、42℃)试验；
– 奈啶酸、头孢噻吩（唑啉）敏感试验
空肠弯曲菌对奈啶酸敏感、对头孢噻吩耐药； 胎儿弯曲菌对奈啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。
形态染色
• 革兰阴性，菌体弯曲呈逗点、弧形、S形、 螺旋形或典型的海鸥展翅形，陈旧培养物 可呈球形或长丝状
• 一端或两端有单鞭毛，运动非常活泼 （“投镖样”运动）。
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大肠弯曲菌革兰染色
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创伤弧菌
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空肠弯曲菌鞭毛（扫描电镜）
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DNA探针和PCR扩增
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Key Points
• 革兰阴性逗点状或S形、海鸥展翅形菌,运动活泼 • 微需氧：最佳生长环境为含5%O2, 10% CO2 和
85%N2，空气中不能生长。 • 最适生长温度因菌种而异 • 营养要求高，常用Skirrow’s和Campy-BAP培养基 • 氧化酶、触酶阳性，不能利用各种糖类，硝酸盐还
幽门螺杆菌纯培养革兰染色
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菌体一端多根带鞘菌毛
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培养特征： • 微需氧： 5%O2, 10%CO2和85%N2
空气中不生长 • 最适生长温度：37℃ • 高湿度环境：湿度大于98% • 营养要求高：特殊血平板生长
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菌落特征：
• 无色半透明、圆形、“露滴样”小菌落，轻 度溶血
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临床意义
• 高度适应或只能生活于胃粘膜的细菌,胃窦为 其定植的最佳部位
• 菌体周围微环境的pH值为7.0。 • HP感染与慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎有关 • HP感染与胃溃疡、十二指肠溃疡有关
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胃镜下的胃溃疡
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HP致病机理
尚不清楚，可能与下列因素有关： – 特殊的螺旋状和端鞭毛运动有利于Hp穿透 – 具有高活性胞外脲酶分解尿素，产生氨中 和菌体周围胃酸，有助于细菌定植 – 细胞毒素相关蛋白（CagA）和空胞毒素 （VacA）
分离培养
微需氧, 高湿度 30℃ 、37℃,42℃
3-7天
血清检测 IgG SIgA
30℃ 不生长 37℃生长 42℃不生长
初报
可疑菌落
革兰染色、氧化酶（+） 触酶（+） 脲酶（+）动力（+） 生化反应
报告
微生物检验
标本采集 • 经胃镜活检胃部病变组织 • 床边接种或放入转运培养基内，4℃中保存不
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分类
• 弯曲菌目（Campylobacterale） • 螺杆菌科（Helicobacteraceae） • 螺杆菌属（Helicobacter）
• 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp) 曾命名为幽门弯曲菌(campylobacter pylori)
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• 1893年意大利的Dr. Bizzozero也有同上发现
• 1899年波兰的Walery Jaworski从灌胃液中发现螺旋状菌，猜测可 能是胃炎的病因，发表了波兰语的文章，未引起重视。
• 1955年美国的Dr. Palmeria检查了1180个胃粘膜标本未发现有上述 菌存在，结果写成论文发表（泼冷水）。
• 发热、头痛、腹痛，腹泻大多为水样便，小 部分为脓血粘液便
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弯曲菌感染后的自身免疫 性疾病
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• 四肢对称性 迟缓性瘫痪 • 咽-颈-臂无力 • 吞咽困难 • 呼吸困难 • 感觉异常 • 面瘫
等等
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面瘫
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生物学特性
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生物学特性
抵抗力：
• 对外环境抵抗力不强 • 不耐干燥,对热和巴氏消毒敏感. • 对酸性环境和消毒剂敏感,对氧也非常
敏感（空气环境不生长）.
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微生物检验程序
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血液等
粪便、肛拭子
直接检测
增菌 （布氏肉汤）
7天不生长 生长
弃去
动力检查 直接镜检 分离培养（弯曲菌血平板、Skirrow’s平板等） （多块选择平板）
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生物学特性
形态结构： • 革兰染色阴性 • 菌体细长弯曲呈螺形、S形或海鸥形。 • 固体培养基上生长时，除典型形态外，有时可出
现杆状或圆球状。 • 菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛，运动活泼。
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幽门螺杆菌纯培养革兰染色
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标本直接检查
• 直接显微镜检查
– 粪便与肛拭子可直接镜检：特殊形态和运动。
• 核酸检测
– PCR方法直接检测粪便标本中的弯曲菌
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分离培养与鉴定
分离培养
– 粪便或肛拭标本：直接接种改良Campy-BAP 选择平板或Skirrow’s平板
– 血、脑脊液标本：布氏肉汤增菌后转种分离培 养基
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• What is unusual about the organism, though, is that it also prefers a relatively high concentration of carbon dioxide in the environment. You can imagine the difficulty of producing an environment suitable for culturing this organism.
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– 马尿酸盐水解试验 • 凡马尿酸盐水解试验阳性、42℃生长、氧化 酶阳性、与镜检形态相符者，即可报告空肠 弯曲菌空肠亚种
– 醋酸吲哚水解试验 • 空肠弯曲菌阳性，胎儿弯曲菌阴性
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免疫学方法
– 胶乳凝集 – 酶免疫方法测定粪便中弯曲菌抗原 – 血清中抗体测定用于流行病学调查
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思考题
• 1.弯曲菌最适生长气体环境是什么？ • 2.空肠弯曲菌主要生化反应及结果是什么？ • 3.空肠弯曲菌的鉴定要点主要有哪些？ • 4. 弯曲菌可引起哪些疾病？
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螺杆菌属 （Helicobacter ）
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诺贝尔生理学和医学奖
• 1982年Marshall和Warren首先用微需氧技术从 慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃粘膜分离出弯曲 状的细菌，并证明该细菌感染胃部会导致胃炎、 胃溃疡和十二指肠溃疡，由此获得了2005年诺 贝尔生理学和医学奖
沙门菌
志贺菌
耶尔森菌
弧菌
弯曲菌
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常见感染弯曲菌：空肠弯曲菌与大肠弯曲菌 感染来源：污染的食物、水和鲜奶等。 传播途径：粪-口途径。
弯曲菌感染性质：多为自限性疾病
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致病物质：
• 不详（可能与细胞毒素Leabharlann Baidu内毒素和肠毒素有 关）
致病部位及表现：
• 感染部位通常在空肠、回肠，也可蔓延到结 肠。