高效液相色谱法鉴定西洋参保健食品中的人参皂甙_周美玲
HPLC法测定西洋参类保健食品中人参皂苷成分的含量研究
HPLC法测定西洋参类保健食品中人参皂苷成分的含量研究史志刚;李倩【期刊名称】《中国处方药》【年(卷),期】2015(13)10【摘要】目的对HPLC法测定西洋参类保健食品中人参皂苷成分含量的结果进行研究.方法选择四种不同类型的西洋参类保健食品,应用HPLC法对其中的人参皂苷成分含量进行测定,分析该方法测量西洋参类保健食品中人参皂苷成分含量的可靠性.结果人参皂苷成分Rg1、Re、Rb1在测定范围内均呈现出良好的线性关系;加样回收试验显示人参皂苷Rg1、Re、Rb1的平均回收率分别为99.4%、101.6%、100.4%,RSD分别为4.62%、1.63%、1.49%.结论将HPLC法应用于西洋参类保健食品人参皂苷成分含量的测量中,测定结果可靠、准确、重现性好,且该方法操作简单、分离效果佳,值得在西洋参类保健食品质控工作中选择应用.【总页数】2页(P33-34)【作者】史志刚;李倩【作者单位】鞍山市食品药品检验所,辽宁鞍山 114006;鞍山市食品药品检验所,辽宁鞍山 114006【正文语种】中文【相关文献】1.HPLC法测定含三七类保健食品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量 [J], 张治军;钟名诚;黄秋华2.HPLC法测定西洋参类保健食品中人参皂苷成分的含量 [J], 郝自新;程世云3.HPLC法测定不同产地西洋参中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量 [J], 李岚;陈华4.HPLC-PAD法测定西洋参类保健食品中10种皂苷的含量 [J], 吴晓云;刁飞燕;李秀慧;刘春霖;李启艳5.HPLC-PAD法测定西洋参类保健食品中10种皂苷的含量 [J], 吴晓云;刁飞燕;李秀慧;刘春霖;李启艳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定人参补气胶囊中人参皂苷的含量
高效液相色谱法测定人参补气胶囊中人参皂苷的含量目的建立人参补气胶囊中人参皂苷Rg1的高效液相色谱检测方法。
方法高效液相色谱条件为：色谱柱：Diamonsil C18（150 nm×4.6 nm，5μm），流动相：乙腈—水（25︰75），紫外检测波长：204 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，进样量为10μL。
结果以峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，计算得到回归方程Y=793 513X—7 482，R2=0.999 7，结果显示人参皂苷Rg1在0.100～0.902 mg/mL浓度范围内，其浓度与峰面积具有良好的线性关系，另外本法测定的精密度、稳定性、重复性及加样回收率考察均具有较好结果。
结论本研究建立的人参补气胶囊中人参皂苷含量的高效液相色谱法具有快速、稳定性，可以用于本药物中人参皂苷Rg1的含量测定。
标签：人参补气胶囊；高效液相色谱法；人参皂苷；含量检测人参补气胶囊是由人参，红参须，生晒参3味中药材制成的中药胶囊制剂[1]，具有大补元气、补益脾肺、生津安神的功效，临床主要用于肺虚咳喘、津伤口渴、久病体虚、失眠惊悸等症[2]。
随着本制剂在临床的应用不断增加，对本药物的质量控制也成为了一项值得关注的问题。
本研究采用高效液相色谱法进行了人参补气胶囊中人参皂苷Rg1的含量测定，确立了对于Rg1在本制剂中含量的测定方法，其结果快速、准确、重复性较好，现报道如下。
1?仪器与试剂Agilent 1200高效液相色谱仪；乙腈（上海国药集团，色谱纯）；去离子水（自制）；其他试剂均为分析纯；人参皂苷Rg1对照品（中国药品生物制品检定所）；人参补气胶囊（广东宏兴集团股份有限公司宏兴制药厂，批号：120204）。
2?方法与结果2.1?色谱条件与系统适用性色谱柱：Diamonsil C18（150 nm×4.6 nm，5μm），流动相：乙腈—水（25∶75），紫外检测波长：204 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，进样量为10μL。
高效液相色谱法测定西洋参冲剂中人参皂甙Rb1的含量
高效液相色谱法测定西洋参冲剂中人参皂甙Rb1的含量
李治洪;张莹
【期刊名称】《天津药学》
【年(卷),期】1998(010)001
【摘要】采用固相萃取净化技术及高效液相色谱法，测定西洋参冲剂中人参皂甙
Ｒｂ１的含量。
结果在１２．５￣２００μｇ／ｍｌ范围内，Ｒｂ１的含量现峰面积呈良好的线性，平均回收率及ＲＳＤ分别为：１０１．３±３．２％（０．４ｍｇ，ｎ＝５），１０１．２±２．６％（０．２ｍｇ，ｎ＝５）；９９．０±４４％（０．１ｍｇ，ｎ＝５）。
最小检出量为０．３μｇ，本法简便、快速、准确。
【总页数】3页(P79-81)
【作者】李治洪;张莹
【作者单位】深圳市药品检验所;天津市药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定银花感冒冲剂中绿原酸含量 [J], 陈述;席桂同
2.高效液相色谱法测定消炎利胆冲剂中虎杖苷的含量 [J], 白梓静;齐广才;刘珍叶;
刘福梅
3.高效液相色谱法测定银花感冒冲剂中绿原酸含量 [J], 李建芳;黄劲通
4.高效液相色谱法测定消炎利胆冲剂中芍药苷的含量 [J], 白梓静
5.高效注相色谱法测定西洋参冲剂中人参皂甙Rb1的含量 [J], 李治洪;张莹
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高效液相色谱法测定人参保健酒中11种人参皂苷含量
高效液相色谱法测定人参保健酒中11种人参皂苷含量胡杨;李先芝;毛琼丽;刘洋;严玲;朱艳;石豪【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2024(43)3【摘要】该研究建立了高效液相色谱法(HPLC)同时测定人参保健酒中11种人参皂苷(人参皂苷Rg1、Re、Rf、Ra2、Rb1、Rc、Ra1、Ro、Rb2、Rb3、Rd)的方法。
采用Agilent SB C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温28℃,人参皂苷的检测波长203 nm,进样量10μL的条件进行测定。
结果表明,11种人参皂苷在各自浓度范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9999),检出限在1.52~3.03 mg/L,定量限在4.59~9.18 mg/L,该方法精密度试验、稳定性试验、重复性试验结果相对标准偏差(RSD)均小于5%,平均加标回收率95.39%~101.96%,RSD为0.07%~2.46%。
该方法操作简单,准确度高,重复性好,可用于人参保健酒中11种人参皂苷含量测定。
【总页数】5页(P229-233)【作者】胡杨;李先芝;毛琼丽;刘洋;严玲;朱艳;石豪【作者单位】劲牌有限公司;劲牌有限公司中药保健食品质量与安全湖北省重点实验室【正文语种】中文【中图分类】TS262.1;R284【相关文献】1.高效液相色谱法测定心脉素注射液中20(S)-人参皂苷Rg2和20(R)-人参皂苷Rg2构型异构体的含量2.超高效液相色谱法同时测定人参酒中六种人参皂苷的含量3.固相萃取-超高效液相色谱法测定人参中5种原人参二醇型人参皂苷的含量4.高效液相色谱法测定人参茎叶浸膏及人参根中的人参皂苷含量5.双内标高效液相色谱法测定人参中3种人参皂苷的含量因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC法测定不同产地西洋参中人参皂苷Rb1、Re、Rg1的含量
HPLC法测定不同产地西洋参中人参皂苷Rb1、Re、Rg1的含量目的采用高效液相色谱法测定不同产地西洋参中人参皂苷Rb1、Re 、Rg1的含量，对比云南丽江西洋参与其他产地西洋参中人参皂苷Rb1、Re 、Rg1的含量差异。
方法C18柱为色谱柱，流动相采用乙腈-0.1%磷酸溶液为缓冲液，梯度洗脱，流速为1.1mL/min，检测波长为203nm，柱温为40℃。
精密吸取溶液各10μL注入高效液相色谱仪中测定。
结果人参皂苷Rb1、Re、Rg1在测定范围内有良好的线性关系，它的平均回收率分别为99.70、101.19、100.27%，RSD分别为2.3、2.1、1.7%。
结论该方法准确可靠、便于操作且重现性好，应用性强。
不同产地西洋参的化学成分大致相同，但各含量间却存在显著差异，其中吉林靖宇和云南丽江的三种单体皂苷总含量相对较高。
标签：HPLC 西洋参人参皂苷Rb1、Re 、Rg1西洋参P.quinquefolium L.是多年生宿根名贵药材，具有补气养阴、清热生津的功效，原产于北美洲东部的阔叶林带，具有与中国人参较相似的生态环境，在生产过程中忌地性极强。
上世纪50年代末，云南省丽江鲁甸乡引种东北人参成功，被植物学家称之为“北参南移”的创举，1984年又成功种植了西洋参[1]。
目前，这里已经成为全中国黄河以南唯一、也是最大的人参、西洋参种植基地[2]。
本文采用高效液相色谱法对不同产地西洋参进行含量测定，对比西洋参含量差异，以期对引种30年后的云南丽江西洋参资源进行质量评价，为丽江西洋参资源的利用和开发提供理论基础。
1 仪器与材料戴安UltiMate3000高效液相色谱仪，精密电子天平BSA223S-CW（北京塞多利斯科学仪器有限公司），CQ250超声波清洗器0030（上海超声波仪器厂）。
人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品均购于中国药品生物制品检定所，乙腈为色谱纯试剂，水为超纯水，其他试剂均为分析纯，丽江西洋参药材采自丽江市玉龙县鲁甸乡某参场，其它西洋参药材为各产地市售。
高效液相色谱法同时测定人参药材中的6种人参皂苷含量
HPLC-PAD法测定西洋参类保健食品中10种皂苷的含量
ＨＰＬＣ－ＰＡＤ法测定西洋参类保健食品中１０种皂苷的含量吴晓云ꎬ刁飞燕ꎬ李秀慧ꎬ刘春霖ꎬ李启艳(山东省食品药品检验研究院ꎬ山东济南２５０１０１)摘要:目的㊀建立同时测定西洋参类保健食品中人参皂苷Ｒｇ１㊁Ｒｇ２㊁Ｒｇ３㊁Ｒｂ１㊁Ｒｂ２㊁Ｒｂ３㊁Ｒｃ㊁Ｒｄ㊁Ｒｅ㊁Ｒｆ含量的高效液相色谱－二极管阵列检测法(ＨＰＬＣ－ＰＡＤ)ꎮ方法㊀采用ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)色谱柱ꎻ以乙腈(Ａ)－水(Ｂ)为流动相进行梯度洗脱ꎻ流速１.０ｍＬ ｍｉｎ－１ꎻ检测波长２０３ｎｍꎻ柱温３５ħꎮ结果㊀１０种人参皂苷的浓度在其各自线性范围内ꎬ与峰面积呈良好的线性关系ꎬｒ值均ȡ０.９９ꎮ该方法平均回收率为９３.０％~１０１.８％ꎬＲＳＤ均小于４.０％(ｎ＝６)ꎮ结论㊀本法准确可靠㊁灵敏度高㊁重现性好ꎬ可作为西洋参类保健食品的质量控制方法ꎮ关键词:高效液相色谱－二极管阵列检测法ꎻ保健食品ꎻ西洋参ꎻ人参皂苷中图分类号:Ｒ９２７.２㊀文献标识码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２０)０６－０３３６－００５ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２０.０６.００６Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ１０ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓｉｎｈｅａｌｔｈｆｏｏｄｏｆＰａｎａｘＱｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍｂｙＨＰＬＣ－ＰＡＤＷＵＸｉａｏｙｕｎꎬＤＩＡＯＦｅｉｙａｎꎬＬＩＸｉｕｈｕｉꎬＬＩＵＣｈｕｎｌｉｎꎬＬＩＱｉｙａｎ(ＳｈａｎｄｏｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌꎬＪｉｎａｎ２５０１０１ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＨＰＬＣ－ＰＡＤｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ１０ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ(ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｇ１ꎬＲｇ２ꎬＲｇ３ꎬＲｂ１ꎬＲｂ２ꎬＲｂ３ꎬＲｃꎬＲｄꎬＲｅａｎｄＲｆ)ｉｎｈｅａｌｔｈｆｏｏｄｏｆＰａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｏｎａｎａｎａｌｙｔｉｃａｌｃｏｌｕｍｎＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ｗｉｔｈｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｂｙａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ(Ａ)－ｗａｔｅｒ(Ｂ)ꎬａｔｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆ２０３ｎｍａｎｄａｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ１.０ｍＬ ｍｉｎ－１.Ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ３５ħ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ａｌｌｃａｌｉ￣ｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｓｈｏｗｅｄｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙｗｉｔｈｉｎｔｈｅｉｒｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｓ(ｒȡ０.９９).Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｗｅｒｅｂｅｔｗｅｅｎ９３.０％~１０１.８％ꎬＲＳＤ<４.０％(ｎ＝６).Ｃｏｎｃｌｕｔｉｏｎ㊀ＴｈｉｓｍｅｔｈｏｄｗａｓａｃｃｕｒａｔｅꎬｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅꎬａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｃｏｎｔｒｏｌｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆｈｅａｌｔｈｆｏｏｄｏｆＰａｎａｘＱｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＨＰＬＣ－ＰＡＤꎻＨｅａｌｔｈｆｏｏｄꎻＰａｎａｘＱｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍꎻＧｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ㊀㊀西洋参为五加科人参属植物ꎬ是名贵的中药材ꎬ人参皂苷是其主要活性成分ꎬ主要有人参皂苷Ｒｇ１㊁Ｒｂ１㊁Ｒｂ２㊁Ｒｃ㊁Ｒｄ和Ｒｅ等ꎮ以西洋参为原料的保健食品具有缓解体力疲劳ꎬ增强免疫力㊁抗氧化和抗肿瘤等作用[１]ꎮ目前ꎬ西洋参类保健食品的剂型有硬胶囊㊁软胶囊㊁片剂和口服溶液等ꎬ主要以总皂苷作为标志性成分ꎬ总皂苷的测定主要采用香草醛－高氯酸或硫酸显色后用紫外分光光度法测定[２]ꎬ该方法存在专属性差ꎬ操作复杂和干扰因素多等缺点ꎮ为此ꎬ徐灿辉等[３]改进了西洋参类保健食品中人参皂苷测定方法ꎬ建立了西洋参类保健食品中７种参皂苷含量高效液相色谱(ＨＰＬＣ)测定的方法ꎮ此外ꎬ人参皂苷测定方法还有超高效液相色谱(ＵＰ￣ＬＣ)[４]㊁高效液相色谱－质谱联用法(ＨＰＬＣ－ＭＳ)[５－６]等ꎮ在众多资料中ꎬ主要研究西洋参根茎叶提取物中人参皂苷含量ꎬ但对西洋参类保健食品中１０种人参皂苷含量测定的报道较少ꎮ本试验通过参考西洋参药材中皂苷测定的有关文献[７－９]ꎬ建立高效液相色谱法同时测定多种剂型西洋参类保健食品中１０种人参皂苷ꎬ为质量标准的提升提供依据ꎮ１㊀试验部分１.１㊀仪器㊀液相色谱仪(Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０高效液相色谱仪ꎬ美国安捷伦公司)ꎬ配二极管阵列检测器㊀作者简介:吴晓云ꎬ女ꎬ主管药师ꎬ研究方向:保健食品化妆品检验ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｗｕｘｉａｏｙｕｎ８２３＠１２６.ｃｏｍ㊀通信作者:李启艳ꎬ女ꎬ博士研究生ꎬ副主任药师ꎬ研究方向:保健食品化妆品检验ꎬＴｅｌ:０５３１－８１２１６７０８ꎬＥ－mail:152****8118＠１６３.ｃｏｍ(ＰＡＤ)ꎻ电子天平(ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏＭＳꎬ梅特勒－托利多)ꎻ数控超声波清洗器(ＫＱ－５００ＤＥ型ꎬ昆山市超声仪器有限公司)ꎻ恒温水浴锅(北京永光明)ꎮ１.２㊀试药与供试品㊀乙腈(色谱纯ꎬＨｏｎｅｙｗｅｌｌ)ꎻ甲醇(色谱纯ꎬＨｏｎｅｙｗｅｌｌ)ꎻ超纯水ꎻ正丁醇(分析纯ꎬ国药集团)ꎻ氨水(分析纯ꎬ国药集团)ꎮ标准品:人参皂苷Ｒｂ１㊁Ｒｂ２㊁Ｒｂ３㊁Ｒｇ１㊁Ｒｇ３㊁Ｒｄ㊁Ｒｅ由中国食品药品检定研究院提供ꎬ含量分别为９５.９％㊁９３.８％㊁９７.０％㊁９６.３％㊁１００％㊁９４.４％㊁９７.４％ꎬ人参皂苷Ｒｇ２㊁Ｒｃ㊁Ｒｆ由上海甄准生物科技有限公司提供ꎬ含量分别为９８.０２％㊁９９.１１％㊁９９.６２％ꎮ供试品均由市场购得ꎬ名称与剂型见表１ꎮ表１㊀１２种供试品的名称和剂型名称剂型Ｓ０１康富来牌西洋参口服液口服溶液Ｓ０２金日牌西洋参口服液口服溶液Ｓ０３新光牌西洋参口服液口服溶液Ｓ０４日圣牌西洋参氨基酸口服液口服溶液Ｓ０５无限能牌西洋参胶囊硬胶囊Ｓ０６雪佳牌西洋参珍珠胶囊硬胶囊Ｓ０７康富丽牌洋参淫羊藿软胶囊软胶囊Ｓ０８福来了牌西洋参含片片剂Ｓ０９喜之源牌西洋参含片片剂Ｓ１０金日牌西洋参含片片剂Ｓ１１康富来牌洋参含片片剂Ｓ１２百合康牌螺旋藻洋参片片剂２ 方法与结果２.１㊀色谱条件㊀色谱柱:ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎻ流动相:乙腈(Ａ)－水(Ｂ)ꎬ梯度洗脱(０~４０ｍｉｎꎬ１７％Ａң１９％Ａꎻ４０~６０ｍｉｎꎬ１９％Ａң２９％Ａꎻ６０~７５ｍｉｎꎬ２９％Ａꎻ７５~１００ｍｉｎꎬ２９％Ａң４０％Ａꎻ１００~１０５ｍｉｎꎬ４０％Ａң１７％Ａ)ꎻ流速１.０ｍＬ ｍｉｎ－１ꎻ检测波长２０３ｎｍꎻ柱温３５ħꎻ进样量:１０μＬꎮ２.２㊀对照品储备液及对照品混合工作液配制㊀分别精密称定人参皂苷Ｒｇ１㊁Ｒｇ２㊁Ｒｇ３㊁Ｒｂ１㊁Ｒｂ２㊁Ｒｂ３㊁Ｒｃ㊁Ｒｄ㊁Ｒｅ㊁Ｒｆ对照品适量ꎬ置于２５ｍＬ量瓶中ꎬ用甲醇溶解并定容ꎬ制成人参皂苷单体浓度分别为２.４０９㊁２.１４１㊁０.０４７１２㊁１.９４７㊁１.７５８㊁２.１３８㊁２.２５０㊁２.０６２㊁２.０７７㊁２.００８ｍｇ ｍＬ－１的对照品储备液ꎮ分别取１０种人参皂苷对照品储备液适量ꎬ加甲醇稀释制成６个浓度的混合对照品工作液ꎮ２.３㊀供试品溶液的制备２.３.１㊀片剂㊁胶囊剂供试品溶液的制备㊀片剂㊁胶囊剂ꎬ取内容物研磨混匀后ꎬ片剂２ｇꎬ胶囊剂１ｇꎬ精密称定ꎬ置于１００ｍＬ锥形瓶中ꎬ精密加水饱和正丁醇５０ｍＬꎬ密塞ꎬ放置过夜ꎬ超声处理(功率２５０Ｗꎬ频率５０ｋＨｚ)３０ｍｉｎꎬ滤过ꎬ弃去初滤液ꎬ精密量取续滤液２０ｍＬꎬ用氨试液洗涤两次ꎬ每次２０ｍＬꎬ正丁醇提取液蒸干后ꎬ残渣加甲醇适量使溶解ꎬ作为供试品溶液ꎮ２.３.２㊀口服溶液供试品溶液的制备㊀口服溶液ꎬ精密量取８.０ｍＬ供试品至分液漏斗中ꎬ用水饱和正丁醇振摇提取３次ꎬ每次１０ｍＬꎬ合并正丁醇提取液ꎬ用氨试液洗涤２次ꎬ每次１０ｍＬꎬ正丁醇提取液蒸干后ꎬ残渣加甲醇适量使溶解ꎬ作为供试品溶液ꎮ２.４㊀线性关系考察㊀分别取６个浓度的混合对照品工作液ꎬ进样１０μＬꎬ记录峰面积ꎬ以对照品浓度Ｘ(μｇ ｍＬ－１)为横坐标ꎬ对照品的峰面积Ｙ为纵坐标ꎬ绘制标准曲线ꎬ求得回归方程ꎮ得到１０种人参皂苷在相应线性范围内均具有良好的线性ꎬ相关系数都在０.９９以上ꎬ结果见表２ꎮ表２㊀标准曲线方程的结果成分标准曲线方程相关系数(ｒ)线性范围/μｇ ｍＬ－１Ｒｇ１Ｒｇ２Ｒｇ３Ｒｂ１Ｒｂ２Ｒｂ３ＲｃＲｄＲｅＲｆＹ＝１.７７０Ｘ＋４.６１３Ｙ＝３.０８４Ｘ＋２.０２１Ｙ＝２.３８１Ｘ－０.３５８４Ｙ＝２.３７７Ｘ＋２９.６７Ｙ＝２.４３３Ｘ＋１.３１９Ｙ＝２.５２０Ｘ＋２.２１０Ｙ＝２.８０６Ｘ＋３.６２９Ｙ＝２.３０３Ｘ－１２.９３Ｙ＝２.８５６Ｘ＋６.０６３Ｙ＝３.９８２Ｘ＋２.２５７０.９９９９０.９９９９０.９９９９０.９９９８０.９９９９０.９９９９０.９９９９０.９９９８０.９９９９０.９９９９４.８１８~２４０.９４.２８２~２１４.１１.１７８~４７.１２３.８９４~１９４.７３.５１６~１７５.８４.２７６~２１３.８４.５００~２２５.０４.１２４~２０６.２４.１５４~２０７.７４.０１６~２００.８２.５㊀试样重复性试验㊀准确量取６份口服溶液供试品(Ｓ０１)８.０ｍＬ至分液漏斗中ꎬ以下按 ２.３.２ 项下方法操作ꎬ制备供试品溶液ꎮ准确称取６份胶囊剂供试品(Ｓ０５)１ｇꎬ６份片剂供试品(Ｓ０８)２ｇꎬ置于１００ｍＬ锥形瓶中ꎬ以下按 ２.３.１ 项下方法操作ꎬ制备供试品溶液ꎮ分别取３种剂型供试品溶液１０μＬ注入液相色谱仪ꎬ以保留时间定性ꎬ测定峰面积ꎬ计算供试品中１０种人参皂苷的含量ꎮ３种剂型供试品中人参皂苷含量ＲＳＤ(ｎ＝６)均小于３％ꎬ结果表明方法重复性良好ꎬ结果见表３ꎮ２.６㊀系统适应性考察㊀取１０种人参皂苷混合对照品工作液１０μＬ进样ꎬ计算１０种人参皂苷的理论板数ꎮ得到人参皂苷Ｒｇ３㊁Ｒｇ１㊁Ｒｅ㊁Ｒｆ㊁Ｒｇ２㊁Ｒｂ１㊁Ｒｃ㊁Ｒｂ２㊁Ｒｂ３㊁Ｒｄ的理论板数分别为１０３４２７㊁５０７３２㊁１０４４９０㊁１５７２８４㊁１２０４５７㊁８２８７６㊁２５３４４０㊁２６０９９１㊁４１０６２８㊁２３９５５４ꎬ分离度分别为５.４㊁１.６㊁３２.６㊁１５.１㊁２.２㊁４.０㊁４.８㊁１.６㊁８.０ꎮ对于供试品ꎬ虽然存在基质干扰影响分离度ꎬ但是３种剂型供试品中１０种人参皂苷均能达到基线分离ꎬ分离度均能达到１.５以上ꎮ表３㊀重复性试验结果剂型口服溶液(Ｓ０１)胶囊剂(Ｓ０５)片剂(Ｓ０８)含量平均值/ｍｇ ｍＬ－１ＲＳＤ(％)含量平均值/ｍｇ ｇ－１ＲＳＤ(％)含量平均值/ｍｇ ｇ－１ＲＳＤ(％)Ｒｇ３０.０２０２.６０.９３５２.４０.２１１２.３Ｒｇ１０.０４０２.０４.６７３１.９０.１２２２.５Ｒｅ０.０５１１.７１９.３２５２.１０.２３４１.７Ｒｆ０.０２１２.９－－－－Ｒｇ２０.２９６０.６２.６５２１.３０.２１７１.４Ｒｂ１０.４３５０.６４８.６２６０.７０.４２４１.２Ｒｃ０.１５９１.０１１.８４２１.１１.７４６１.７Ｒｂ２０.１２０１.２２.１６１１.６１.４７１１.５Ｒｂ３０.０５４２.６３.６５４２.３３.０３０２.５Ｒｄ０.４８１０.８２１.５００１.３０.８２９１.８㊀注: － 表示未检出或低于定量限２.７㊀精密度试验㊀取１０种人参皂苷混合对照品工作液１０μＬ连续进样５次ꎬ以测得的峰面积响应值作评价标准ꎬ得到１０种人参皂苷的ＲＳＤ(ｎ＝５)均小于３.０％ꎬ表明在本方法仪器条件下ꎬ仪器精密度良好ꎮ２.８㊀稳定性试验㊀分别取供试品Ｓ０１㊁Ｓ０５㊁Ｓ０８ꎬ按 ２.３ 项下方法操作ꎬ得到供试品溶液ꎬ室温下放置２４ｈꎬ分别在０㊁２㊁４㊁８㊁１２㊁２４ｈ取１０μＬ进样ꎬ得到１０种人参皂苷峰面积ＲＳＤ(ｎ＝６)都在３.０％以内ꎬ表明供试品溶液在２４ｈ内稳定ꎮ２.９㊀回收率试验㊀准确量取６份已知含量的供试品(Ｓ０１)４.０ｍＬ至分液漏斗中ꎬ分别精密加入人参皂苷对照品储备液适量(对照品加入量与供试品中各人参皂苷含量之比为１ʒ１)ꎬ以下按 ２.３.２ 项下方法操作ꎬ即可得到加标溶液ꎮ准确称取已知含量的供试品(Ｓ０５)０.５ｇꎬ供试品(Ｓ０８)１ｇꎬ各６份ꎬ分别精密加入人参皂苷对照品储备液适量(对照品加入量与供试品中各人参皂苷含量之比为１ʒ１)ꎬ置于１００ｍＬ锥形瓶中ꎬ以下按 ２.３.１ 项下方法操作ꎬ即可得到加标溶液ꎮ取１０μＬ注入液相色谱仪ꎬ以保留时间定性ꎬ测定峰面积ꎬ得到１０种人参皂苷的平均加样回收率(ｎ＝６)ꎬＲＳＤ均小于４.０％ꎬ结果见表４ꎮ表４㊀回收率结果剂型成分口服溶液(Ｓ０１)胶囊剂(Ｓ０５)片剂(Ｓ０８)试样平均含量/ｍｇ平均回收率(％)ＲＳＤ(％)试样平均含量/ｍｇ平均回收率(％)ＲＳＤ(％)试样平均含量/ｍｇ平均回收率(％)ＲＳＤ(％)Ｒｇ３０.０８０９６.３２.１０.４６８９３.３１.９０.２１１９７.９２.５Ｒｇ１０.１６０９８.２３.３２.３３７９９.１２.８０.１２２９５.０２.６Ｒｅ０.２０４９６.６３.２９.６６６１００.３３.１０.２３４１０１.８３.６Ｒｆ０.０８４９８.８１.０－１０１.２１.５－１０１.３３.４Ｒｇ２１.１８４９４.４１.０１.３２７９３.７１.７０.２１７１００.４２.１Ｒｂ１１.７４０９６.４１.５２４.３２３９６.５１.４０.４２５９５.５２.４Ｒｃ０.６３６９４.４１.３５.９２３９８.２２.５１.７５０９６.２２.６Ｒｂ２０.４８０９６.０２.３１.０８１９３.９２.４１.４７４９７.５２.８Ｒｂ３０.２１６９３.０２.５１.８２８１００.１２.６３.０３６１０１.２３.２Ｒｄ１.９２４９３.３１.５１０.７５４９８.６２.２０.８３１９４.０２.４㊀注: － 表示未检出或低于定量限２.１０㊀检出限与定量限㊀Ｓ/Ｎ＝３时ꎬ得到检出限ＬＯＤꎬ人参皂苷Ｒｇ１㊁Ｒｇ２㊁Ｒｇ３㊁Ｒｂ１㊁Ｒｂ２㊁Ｒｂ３㊁Ｒｃ㊁Ｒｄ㊁Ｒｅ㊁Ｒｆ检出限分别为０.００２４㊁０.００２１㊁０.００２９㊁０.００１９㊁０.００１８㊁０.００２１㊁０.００２２㊁０.００２１㊁０.００２１㊁０.００２０μｇꎻＳ/Ｎ＝１０时ꎬ得到定量限ＬＯＱꎬ定量限分别为０.００６０㊁０.００５４㊁０.００７４㊁０.００５０㊁０.００４４㊁０.００５３㊁０.００５６㊁０.００５２㊁０.００５２㊁０.００５０μｇꎮ２.１１㊀供试品的测定㊀取１２批供试品ꎬ按照按 ２.３ 制备供试品溶液ꎬ每批平行处理２份ꎬ按上述色谱条件进行测定ꎬ将峰面积代入 ２.４ 线性回归方程计算含量ꎬ结果见图１~２及表５ꎮ表５㊀供试品中１０种成分含量测定结果含量/ｍｇ ｍＬ－１或ｍｇ ｇ－１编号Ｓ０１Ｓ０２Ｓ０３Ｓ０４Ｓ０５Ｓ０６Ｓ０７Ｓ０８Ｓ０９Ｓ１０Ｓ１１Ｓ１２Ｒｇ３０.０２００.００９０.０１００.０７８０.９３５０.１６９０.４９４０.２１１０.２１２０.２７５０.４１７０.４８９Ｒｇ１０.０４００.０７１０.０１５－４.６７３０.７６７１.７２２０.１２２０.２０９０.６７４０.８９３０.４３６Ｒｅ０.０５１０.２４００.０６６－１９.３２５１.４１８４.１２７０.２３４０.７０９３.０８５３.８０９１.３５０Ｒｆ０.０２１－－０.０１９－０.０２５－－－－０.０１６－Ｒｇ２０.２９６０.０６２０.１４７－２.６５２０.５４５１.０２４０.２１７０.１１３０.０８４０.２３９０.２６１Ｒｂ１０.４３５０.６６５０.６３１－４８.６２６１.３５４０.４０７０.４２４０.１０２６.７７７８.６３３－Ｒｃ０.１５９０.１２００.０８３－１１.８４２０.６５６０.６７５１.７４６０.６３７２.０６６２.７６６０.０９３Ｒｂ２０.１２００.０３９０.０１９－２.１６１０.３６１１.９８７１.４７１０.３８２０.３３９０.４８７０.５３６Ｒｂ３０.０５４０.０９５０.０２３－３.６５４０.３６９６.７５８３.０３０１.５６５０.５９００.８３４２.２２９Ｒｄ０.４８１０.２７３０.２３８－２１.５００１.４９８６.０１６０.８２９０.９７６３.２０３３.７５２３.１５４合计１.６８１.５７１.２３０.１０１１５.３７７.１６２３.２１８.２８４.９１１７.０９２１.８５８.５５㊀注: － 表示未检出或低于定量限㊀１.Ｒｇ３(２０.０ｍｉｎ)ꎻ２.Ｒｇ１(４５.０ｍｉｎ)ꎻ３.Ｒｅ(４５.８ｍｉｎ)ꎻ４.Ｒｆ(６５.９ｍｉｎ)ꎻ５.Ｒｇ２(７７.６ｍｉｎ)ꎻ６.Ｒｂ１(８０.０ｍｉｎ)ꎻ７.Ｒｃ(８３.６ｍｉｎ)ꎻ８.Ｒｂ２(８６.９ｍｉｎ)ꎻ９.Ｒｂ３(８７.８ｍｉｎ)ꎻ１０.Ｒｄ(９３.０ｍｉｎ)图１㊀１０种人参皂苷对照品图谱㊀１.Ｒｇ３(２０.０ｍｉｎ)ꎻ２.Ｒｇ１(４５.０ｍｉｎ)ꎻ３.Ｒｅ(４５.８ｍｉｎ)ꎻ４.Ｒｆ(６５.９ｍｉｎ)ꎻ５.Ｒｇ２(７７.６ｍｉｎ)ꎻ６.Ｒｂ１(８０.０ｍｉｎ)ꎻ７.Ｒｃ(８３.６ｍｉｎ)ꎻ８.Ｒｂ２(８６.９ｍｉｎ)ꎻ９.Ｒｂ３(８７.８ｍｉｎ)ꎻ１０.Ｒｄ(９３.０ｍｉｎ)图２㊀供试品Ｓ０１中１０种人参皂苷图谱３ 讨论３.１㊀前处理考察㊀由于保健食品剂型种类多ꎬ而每种剂型的基质比较复杂ꎬ导致１０种人参皂苷更难同时分离ꎮ首先ꎬ通过比较３种不同的提取试剂ꎬ水饱和正丁醇㊁甲醇和乙醇ꎬ最终得到水饱和正丁醇提取效率最高ꎮ其次ꎬ选用水饱和正丁醇分别采用回流提取㊁液－液萃取㊁浸泡放置过夜超声提取和直接超声提取４种提取方式进行比较ꎬ结果表明:对于片剂和胶囊剂ꎬ浸泡过夜超声提取与回流提取得到皂苷含量最高ꎬ又因为前者操作简单ꎬ且提取的多糖等杂质较少ꎬ最终采用浸泡过夜超声提取ꎻ对于口服溶液ꎬ回流提取与液－液萃取都能得到较高总皂苷含量ꎬ优先选取重现性好且操作较简单的处理方法ꎬ因此采用水饱和正丁醇振摇多次萃取ꎮ３.２㊀流动相及梯度的选择㊀本文对甲醇－水ꎬ乙腈－水和乙腈－０.１％磷酸溶液３种不同流动相进行比较ꎬ结果表明ꎬ人参皂苷在低波长范围内检测时ꎬ乙腈比甲醇背景噪音低ꎬ可获得较好的分离效果ꎬ并且乙腈与水混合黏度小ꎬ可以有效降低系统压力ꎬ而加入磷酸对整体分离情况没有明显改善且磷酸盐对色谱柱损耗大ꎬ最终选择乙腈－水作为最佳流动相ꎮ１０种人参皂苷中Ｒｇ１和ＲｅꎬＲｂ２和Ｒｂ３较难分离ꎮ人参皂苷Ｒｇ１和Ｒｅ极性非常相似ꎬ较难分离ꎬ且供试品在人参皂苷Ｒｇ１和Ｒｅ附近有杂质干扰ꎬ最终选择合适梯度ꎬ在４５ｍｉｎ左右达到基线分离ꎮＲｂ２和Ｒｂ３是同分异构体ꎬ并且两者含量很低ꎬ容易包裹在杂质峰中ꎬ本试验在保证峰形和柱效的前提下完成了两种皂苷的基线分离ꎮ故最终采用梯度洗脱使每种皂苷达到较好分离效果ꎮ３.３㊀样品测定结果分析㊀由表５可见ꎬ１２批供试品１０种皂苷含量之和差异很大ꎬ含量最高的为硬胶囊ꎬ片剂和软胶囊次之ꎬ口服溶液最低ꎮ每批供试品中ꎬ单种人参皂苷占１０种皂苷比例各不相同ꎬ经过分析发现ꎬＲｂ１㊁Ｒｃ㊁Ｒｄ㊁Ｒｅ４种所占比例最大ꎬ７批供试品含这４种皂苷比例为６７.０％~８８.５％ꎬ４批供试品的比例为３９.０％~５３.８％ꎬ１种供试品(Ｓ０４)比例为０ꎮ对于供试品(Ｓ０４)ꎬ根据«保健食品检验与评价技术规范»(２００３年版)中规定的紫外分光光度法进行总皂苷检测ꎬ得到总皂苷含量为８０ｍｇ １００ｍＬ－１ꎮ本文建立的ＨＰＬＣ－ＰＡＤ法可对西洋参类保健食品中皂苷成分进行初步鉴定ꎬ最终用紫外分光光度法进行总皂苷检测ꎮ４ 结论本文共收集口服溶液㊁片剂和胶囊剂１２批西洋参类保健食品ꎬ通过测定其线性范围㊁系统适用性㊁重复性㊁精密度㊁稳定性㊁检出限㊁定量限和回收率试验ꎬ结果令人满意ꎮ试验表明ꎬ在本文供试品制备方法和色谱条件下ꎬ人参皂苷Ｒｇ３㊁Ｒｇ１㊁Ｒｅ㊁Ｒｆ㊁Ｒｇ２㊁Ｒｂ１㊁Ｒｃ㊁Ｒｂ２㊁Ｒｂ３㊁Ｒｄ能够达到完全分离ꎬ所建立的方法操作简便ꎬ重复性好ꎬ可以用来对以西洋参为原料的保健食品进行质量控制ꎮ参考文献:[１]㊀尚金燕ꎬ李桂荣ꎬ邵明辉ꎬ等.西洋参的药理作用研究进展[Ｊ].人参研究ꎬ２０１６ꎬ２８(６):４９－５１.[２]杜金凤ꎬ宋鉴达ꎬ朱传翔ꎬ等.比色法测定人参保健饮料中人参总皂苷含量[Ｊ].现代食品ꎬ２０１７ꎬ６(１１):７９－８０. 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反相高效液相色谱法测定人参皂甙Compound-K的含量
反相高效液相色谱法测定人参皂甙Compound-K的含量周伟;罗振时;周珮【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2005(023)003【摘要】人参皂甙compound-K(C-K)在人参中的含量极低,但它是其他含量较高的人参皂甙Rb1和Rb2等在人体肠道内的主要降解产物和最终吸收形式,具有很高的生物活性.采用反相高效液相色谱法测定了人参总皂甙发酵液中C-K的含量.色谱条件为:反相C18柱;乙腈-水(体积比为48∶52)溶液为流动相,流速1.0 mL/min;紫外检测波长203 nm;柱温35 ℃;外标法定量.结果表明:C-K的质量浓度为0.05～0.8 g/L时,其峰面积与质量浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.9998.方法的检测限(S/N=3)为2.5 mg/L,峰面积测定值的相对标准偏差(n=6)为2.20%.测定栽培人参总皂甙及三七茎叶总皂甙微生物发酵液中C-K的平均加标回收率(n=3)分别为98.6%和99.7% .该方法快速简便,准确可靠,可用于C-K的制备研究及药物开发.【总页数】3页(P270-272)【作者】周伟;罗振时;周珮【作者单位】复旦大学药学院生物合成教研室,上海,200032;复旦大学药学院生物合成教研室,上海,200032;复旦大学药学院生物合成教研室,上海,200032【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.RP-HPLC测定洋参二醇皂甙注射液中人参皂甙Rb3的含量 [J], 秦桂莲;徐飞;赵雪梅;崔道云;陈燕萍2.反相高效液相色谱法测定三七伤药片中人参皂甙Rg1的含量 [J], 陈承英3.反相高效液相色谱法测定人参固体发酵产物三种人参皂苷含量 [J], 王睿;邱智东;石薇;赵红迪;董雪莲4.反相高效液相色谱法测定三七伤药片中人参皂甙Rg1的含量 [J], 陈承英5.反相高效液相色谱法测定益气强身胶囊中人参皂苷Re和人参皂苷Rg_1的含量[J], 肖金芳;周建红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法快速测定保健品中6种人参皂苷的含量
高效液相色谱法快速测定保健品中6种人参皂苷的含量居广琳（福建省产品质量检验研究院，福建福州 350002）摘 要：目的：快速高效检测非人参及其加工品为主要原料的保健品中6种人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re和Rg1的含量。
方法：以75%甲醇为提取剂超声提取，采用高效液相色谱法测定。
结果：6种人参皂苷在0.1～1.0 mg·mL-1线性关系良好；人参皂苷 Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re和Rg1在阿拉伯糖粉中的加标回收率分别为93.1%、95.3%、94.8%、94.1%、98.6%和93.9%；在力保健牛磺酸功能饮料中的加标回收率分别为90.8%、94.6%、93.0%、91.7%、98.0%和92.1%；在蜂胶软胶囊中的加标回收率分别为91.1%、95.0%、92.3%、92.7%、98.4%和92.5%。
结论：本法能快速高效提取并测定非人参及其加工制品为主要材料的保健品中6种人参皂苷的含量。
关键词：保健品；人参皂苷；液相色谱Rapid Determination of Six Ginsenosides in Health Productsby HPLCJU Guanglin(Fujian Inspection and Research Institute for Product Quality, Fuzhou 350002, China) Abstract: Objective: To quickly and efficiently detect the content of six ginsenosides Rb1, Rb2, Rc, Rd, Re, and Rg1 in health products mainly made from non ginseng and its processed products. Method: The extracts were ultrasonically extracted with 75% methanol as the extractant and determined by high performance liquid chromatography (HPLC). Result: The six ginsenosides exhibited good linear relationships within the range of 0.1 mg·mL-1 to 1.0 mg·mL-1; the recovery rates of ginsenosides Rb1, Rb2, Rc, Rd, Re, and Rg1 in arabinose powder were 93.1%, 95.3%, 94.8%, 94.1%, 98.6%, and 93.9%; the recovery rates of Lipovitan taurine functional beverages were 90.8%, 94.6%, 93.0%, 91.7%, 98.0%, and 92.1%; the recovery rates of propolis soft capsules were 91.1%, 95.0%, 92.3%, 92.7%, 98.4%, and 92.5%. Conclusion: This method can quickly and efficiently extract and determine the content of six ginsenosides in health products mainly made from non ginseng and its processed products the main materials.Keywords: health products; ginsenoside; high performance liquid chromatography人参皂苷是人参、西洋参等人参属植物中被证实具有增强体质、调节神经、延缓衰老及抗肿瘤等功效的有效成分[1-2]。
高效液相色谱法测定洋参虫草胶囊中人参皂苷Rb1的含量
内热消渴 ，口燥 咽 干。经现代科 学研究 ，西洋参 中含有
１ 仪器与试 药
Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｓ ５ １ ０ 高效液 相系统 ： Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｓ ２ ４ ８ ７双波长 紫外 检测 仪 ； 人参 皂苷 Ｒ ｂ ｌ（ 中 国药 品生物制 品检定所 ，批
Ｚ ＨＡＮＧ Ｚｈ ｅ ｎ ｇ ｙ ｉ ｎ ｇ ， ＤＵ Ｚｉ ｒ ｏ ｎ ｇ ， Ｚ ＨＯＵ Ｍｉ ｎ
（ Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ｚ ｈ ｏ ｎ ｇ ｈ ｕ ａ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ （ Ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ） Ｃ ｏ ． Ｌ ｔ ｄ ． ， ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ ０ ５ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） Ａ ＢＳ Ｔ Ｒ ＡＣ Ｔ Ｏｂ ｊ ｅ ｅ ｔ ｉ ｖ ｅ ： Ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ａ ｎ ＨＰ Ｌ Ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｆ ｏ ｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｇ ｉ ｎ ｓ ｅ ｎ ｏ ｓ ｉ ｄ ｅ Ｒ ｂ ｌ ｉ ｎ Ｙ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ｅ ｎ Ｃ ｈ ｏ ｎ ｇ ｃ ａ ｏ ｃ ａ ｐ ｓ ｕ ｌ ｅ ｓ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ： ＨＰ Ｌ Ｃ ｗａ ｓ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｍｅ ｒ ｄ ｂ ｙ ｕ ｓ ｅ ｏ ｆ Ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｓ ｉ ｌ Ｏ ＤＳ 一 ３ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ（ ４ ． ６ ｍｍ ｘ ２ ５ ０ ｍ ｉ ｌ ｌ ， ５ ｕ ｍ） ｗｉ ｔ ｈ ａ ｃ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ － ０ ． ０ １ ５ ％
HPLC法测定麦杞西洋参饮料中人参皂苷Rb1的含量3页
HPLC法测定麦杞西洋参饮料中人参皂苷Rb1的含量麦杞西洋参饮料以西洋参为主要原料，经过科学工艺制成，具有缓解体力疲劳的保健功能。
为更好地控制其内在质量，确保其质量稳定可靠，我们以HPLC法测定了本品中的主要有效成分西洋参中人参皂苷Rb1的含量，为控制其质量提供科学依据。
1 仪器与试药高效液相色谱仪：安捷伦1200高效液相色谱仪；天平：分析天平十万分之一XS-205；人参皂苷Rb1对照品：中国药品生物制品检定所；麦杞西洋参饮料样品：吉林省集安益盛药业股份有限公司。
所用试剂甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。
2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：安捷伦C18；流动相：乙腈-水-磷酸（28：72：0.1）；检测波长：203nm；柱温：40℃；流速：1ml/min；进样量：10ul；理论板数：理论板数按人参皂苷Rb1峰计算不应低于1800。
2.2 对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rb1对照品25mg，置于25ml量瓶中，加50%甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，作对照品液（每1ml中含人参皂苷Rb11mg）。
2.3 供试品溶液的制备精密量取本品50ml，加0.1mol/L氢氧化钠溶液调节PH值至12，用水饱和正丁醇溶液振摇提取3次，每次25ml，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣加50%甲醇溶解至5ml量瓶中并稀释至刻度，作为供试品溶液。
2.4 阴性对照溶液的制备按处方组成，取出西洋参外的其余药，按制备工艺要求，制成不含西洋参的阴性对照样品，再按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
2.5 空白试验按上述条件，分别吸取供试品溶液、对照品溶液，阴性对照品溶液适量，分别注入液相色谱仪测定，结果其它成分对人参皂苷Rb1的测定无干扰，符合测定要求，详细结果，见下图：2.6 线性关系考察精密称取人参皂苷Rb1对照品0.05869g，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作对照品溶液（每1ml中含人参皂苷Rb12mg）。
HPLC法测定西洋参中人参皂甙Rb_1的含量
份得Ⅰ,重结晶得针状晶31mg;从第5～8份得Ⅱ,重结晶得针状晶52mg;从9～11份得少量Ⅲ,无色棒状晶;从20～25份得Ⅳ,重结晶得粒状晶110mg。
3 鉴定化合物Ⅰ 无色针状晶[95%乙醇2正己烷(1∶1)],mp81～82℃,Liebermann2Burchar反应阴性。
IR(KRr)cm-1:3330,1130(OH), 2955,2916,,2872,2848,1417,720(CH3,CH2)。
EIMS m/z(%):424(M+),406(100,M+-H2O),297(95),157(80),139(29),125(46),97 (88),85(63),83(93),71(76),69(88),57(90), 55(78),43(78),41(63)。
1HNMR(CDCl3)δ:3.6 (1H,brs,CHOH),0.9(6H,t,J=8Hz,1,292 CH3)。
以上光谱数据与文献报道的二十九烷醇210一致[7]。
化合物Ⅱ 无色针晶(95%乙醇),mp118～120℃,Liebermann2Burchard反应呈阳性。
IR(K Br)cm-1:3065,1646,887(CH2),3026(环丙烷)。
EIMS m/z:440(M+)。
1HNMR(CDCl3)δ:4.71,4.66(2H,d,J=2.5Hz,242CH2),3.23 (1H,m,32OH),1.35(6H,d,J=6.9Hz),1.07, 1.06,0.99,0.91,0.87(s,CH3×5),0.96(CH3, d,J=5Hz),0.57(1H,d,J=4.5Hz),0.34(1H, d,J=4.5Hz环丙烷)。
13CNMR(CDCl3)δ: 31.96(C21),30.37(C22),78.83(C23),40.47 (C24),47.10(C25),21.12(C26),26.47(C27),47.98(C28),19.98(C29),26.06(C210),26.01 (C211),35.56(C212),45.29(C213),48.80(C2 14),32.89(C215),28.15(C216),52.26(C217), 18.03(C218),29.70(C219),36.11(C220), 18.30(C221),34.98(C222),31.31(C223), 156.88(C224),33.79(C225),21.86(C226), 21.99(C227),19.32(C228),25.43(C229), 14.00(C230),105.93(C231)。
14.高效液相色谱法鉴定人参原料041207
K S BIO资料高效液相色譜法鑒定人參原料湖南省疾病预防控制中心理化检验科赖天兵 (2003.03.01)在保健食品的报批检验工作中，曾遇到过这样一个产品，配方中注明有黄芪、人参等原料，用比色法测得该产品中人参皂甙的含量高达1.5%；但采用高效液相色谱法分析，并未检测出各人参皂甙单体的含量。
后经调查发现，厂家并未在产品中加入人参原料——人参皂甙作为人参类保健食品的功效成分已得到广泛的认同。
目前该类保健食品中主要添加的是白参粉、红参粉、西洋参、人参提取物及茎叶皂甙等。
茎叶皂甙与红参、白参、西洋参的功效相差甚远，但因其价格亦相差甚远，所以某些只考虑经济利益的生产厂家便在原料上以次充好，以茎叶皂甙或绞股蓝等代替人参。
而目前在人参类保健食品的检测中被普遍采用的比色法，往往会造成检测结果的假阳性，不能准确判别产品所用之原料。
另外，许多植物原料如三七、酸枣仁、黄芪、桔梗、柴胡等，均含有各种结构的皂甙，因此，采用比色法来检测产品、尤其是复配方产品中人参皂甙的含量是非常不妥当的。
采用高效液相色谱法（HPLC）可同时分析其中的人参二醇及人参三醇皂甙，并根据分析所得的皂甙图谱判别产品所用人参原料的种类。
例如，应用HPLC对红参、白参、西洋参及茎叶皂甙进行分析，在图谱上可明显看出各样品间的差异：红参与白参的6种皂甙图谱较为相似，但二者最大的差异在于R e与 R g1之间的比例——白参R e含量明显高于R g1，而红参则恰恰相反（这是由于白参在制成红参的加工过程中受热导致结构转化），这一含量特征可用于判别红参与白参；西洋参和茎叶皂甙的皂甙图谱与人参有着明显差异，特别是在人参二醇型皂甙部分（R b1，R b2，R c，R d）；白参、红参中均存在Rf，而西洋参中无此成分。
因此，采用HPLC鉴定人参原料，可有效控制人参类保健食品的产品质量，防止伪劣产品流入市场。
具体实验方法如下：一、试剂1.实验用水：去离子水。
2.乙腈：色谱纯，200nm，吸光度值为0.021。
HPLC法测定西洋参类保健食品中人参皂苷成分的含量
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａｎ ｈ ｕ ｉ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法测 定 西洋 参 类保 健 食 品 中人 参 皂苷 成分 的含 量
主要原 料 的保健 食 品的质 量控制 。
关键词 ： 西洋参 ； 保健食品 ； 人参皂苷 ； Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 中图分类 号 ： Ｒ ２ ８ ４ ． ２ ； Ｒ ９ ２ ７ ． ２ 文献标 识码 ： Ａ
文章编 号 ： １ ６ ７ ３— ８ ７ ７ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ １— ０ ０ ６ ８— ０ ４
＝０ ． ９ ９ ９ ９ ）ｆ ｏ ｒ ｇ ｉ ｎ ｓ ｅ ｎ ｏ ｓ ｉ ｄ ｅ Ｒ ｅ ａ ｎ ｄ ０ ． ６ ７ ４ ９ ８— ６ ． ７ ４ ９ ８ ￣ ｇ（ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ９ ）ｆ ｏ ｒ ￣ｎ ｓ ｅ ｎ ｏ ｓ ｉ ｄ ｅ Ｒ ｂ １ ．Ｔ ｈ ｅ ａ ｖ ｅ ｒ ａ ｇ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ —
高效液相 色谱法测 定。 色谱柱 ： 岛津 Ｃ １ ８柱， 流动相 ： 乙腈 一水 （ 梯度 ） ， 流速 ： １ ． ０ ｍ Ｉ ． ／ ｍ ｉ ｎ ， 检测 波长： ２ ０ ３ ｎ ｍ。结果 人参皂苷 Ｒ ｇ １ 在３ ６ ． １ ８—３ ６ １ ． ８ ｎ ｇ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ） ， 人参 皂苷 Ｒ ｅ 在０ ． ２ ２ ５ ４— ２ ． ２ ５ ４ ￣ ｇ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ９ ） ， 人参皂苷 Ｒ ｂ 在０ ． ６ ７ ４ ９ ８— ６ ． ７ ４ ９ ８ ｉ ｘ ｇ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ９ ） 之 间线性关系良好 ； 人参皂苷 Ｒ ｇ １ 的平均 回收率 为９ ９ ． ３ ％， Ｒ Ｓ Ｄ＝ ４ ． ６ ２ ％； 人参皂苷 Ｒ ｅ的平均回收率 １ ０ １ ． ７ ％， Ｒ Ｓ Ｄ＝ １ ． ６ ３ ％； 人参皂苷 Ｒ ｂ １ 的平均回收率 １ ０ ０ ． ３ ％， Ｒ Ｓ Ｄ＝１ ． ４ ９ ％ 。结论 试验 表 明 ， 该 方 法操 作 简单 ， 分 离效 果 好 ， 灵敏度高， 可 以用 于 以西 洋 参 为
保健食品中人参皂甙的测定(高效液相色谱法)
保健食品中人参皂甙的测定（高效液相色谱法）1 适用范围本方法规定了人参含片、人参冲剂、人参茶、人参胶囊等以人参为主要原料的保健食品中人参皂甙的含量的HPLC的测定方法。
本方法适用于人参含片、人参冲剂、人参茶、人参胶囊等以人参为主要原料的保健食品中人参皂甙的含量的HPLC的测定方法。
本方法的六种皂甙的最低检出量为：10mg/kg。
本方法的六种皂甙的最佳线性范围：0.1mg/mL～1mg/mL。
2 原理将试样中的人参皂甙溶解、提取、经净化处理后，使用梯度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器（UV）检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标定量，适用于保健食品中人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的同时定量分析。
3 试剂试验用水为去离子水。
3.1乙腈：色谱纯，200nm吸光度值为0.021。
3.2甲醇：分析纯。
3.3101大孔吸附树脂。
3.4高效液相色谱流动相：梯度淋洗A液为乙腈，B液为水。
3.5人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准品：含量大于98％（HPLC）。
3.6人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准溶液的配制：配制人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准储备液，浓度分别为10mg/mL；再以此储备液配制成混合标准系列溶液，浓度范围为0.1mg/mL～1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。
4 仪器设备4.1高效液相色谱仪：双高压输液泵，附紫外检测器。
4.2超声波清洗器。
4.3离心机。
4.4水浴锅。
5 分析步骤5.1固体试样处理取片剂或胶囊内容物研成粉末，并过20目筛；精确称取该粉末样适量于50mL具塞试管中，加水50mL于超声波清洗器中超声提取30min，取出，待溶液恢复常温后，准确取出10mL，通过D-101大孔吸附树脂净化柱（大孔吸附树脂使用前先经甲醇浸泡，水洗，装成10cm长小柱），小柱先用10mL水冲洗，弃去水液之后，用70％甲醇25mL洗脱皂甙，收集甲醇溶液，水浴上蒸干，残留以甲醇溶解并定容至5mL，该样液离心后过0.5µm 膜，滤液进行色谱分析。
HPLC法测定洋参口服液中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量
HPLC法测定洋参口服液中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量潘红玲【期刊名称】《海峡药学》【年(卷),期】2008(020)005【摘要】目的建立高效液相色谱法分离并测定洋参口服液人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量.方法采用Zobax SB C18色谱柱(4.6×150mm ,5μm),流动相为乙腈及水,采用梯度洗脱,柱温30℃,检测波长203nm,流速1.0mL.m in-1 .结果本法测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷 Rb1的线性范围分别为20μg～180μg·mL-1(r=0.9994),80～720μg·mL-1(r=0.9990),120μg～1080μg·mL-1(r=0.9995).平均回收率(n=5)人参皂苷Rg1为97.84%,RSD=1.4%;人参皂苷Re为96.43%,RSD=1.6%;人参皂苷Rb1为96. 55%,RSD=1.2%.结论方法简便,结果准确,重现性好,可用于洋参口服液的质量控制.【总页数】2页(P52-53)【作者】潘红玲【作者单位】浙江台州市药品检验所,台州,318000【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.HPLC法测定不同产地西洋参中人参皂苷Rb1、Re、Rg1的含量 [J], 张菊;陈茹;何鹏飞;李艳萍;郭世民2.HPLC法测定参茸口服液中人参皂苷Rg1和Rb1含量 [J], 刘晓兰;舒婧;陈衍中3.RP-HPLC法测定威斯康辛州产西洋参中人参皂苷Rg1、Rb1的含量 [J], 陈孔荣;潘爱娟;李兆翌4.HPLC法测定不同产地西洋参中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量 [J], 李岚;陈华5.HPLC法测定进口西洋参中人参皂苷Rb1、Re、Rg1的含量 [J], 王旭;邬国庆;张小茜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC法测定西洋参蜂王浆口服液中的人参皂甙与癸烯酸
表2 不同配比杜香萜烯和1,22丙二醇对复方丹参浸膏中丹参酮ⅡA透皮吸收的影响杜∶丙Q2t方程r 12h累积透过量nmol透过流量nmol・cm-2・h-1渗透比率0∶0Q=0.68t-0.820.9978.0±1.30.61±0.021.0 1∶3Q=9.3t-12.30.98593±129.4±0.811.7 1∶1Q=9.2t+7.80.976112±209.2±2.014.1 2∶1Q=17.3t-30.80.985166±517.4±0.620.9 4∶1Q=13.2t+14.20.998170±1413.5±1.921.4 10∶1Q=10.9t+9.70.982133±510.9±0.416.8 注:n=3并与之氢键结合,减少药物扩散阻力,此外1,22丙二醇又可延长月桂氮 酮和油酸在角质层的滞留时间,从而延长促渗时间[9]。
杜香萜烯和1,22丙二醇复合促进剂明显增加丹参酮ⅡA的透过量,说明上述规律同样适合于水中溶解度较低的杜香萜烯。
4.3 中药复方制剂在进行透皮吸收实验时,测定指标不易选择,因本方剂中丹参为君药,其中所含丹参酮ⅡA药理作用明确且与本方功能基本相符,故选择丹参酮ⅡA为指标,采用HPLC 法检测渗透量,无需分离组分,简便可靠,回收率高。
另外,孙氏等报道[10],3%月桂氮 酮和5%1,22丙二醇混合促进剂对丹参素和原儿茶醛透皮吸收具有显著的促进作用。
杜香萜烯对上述两个成分的促渗作用有待于进一步研究。
5 参考文献1 李凤龙,崔京浩,朱彩凤,等1Enhanching Effect of Lepaloine on Percuntaneous Absorption of Esoniazid and Fluocinonine inRats.第三届世界传统药物大会,北京,19941C292 李红,朱彩凤,崔京浩,等1盐酸普萘洛尔透皮吸收膜剂的研制1延边医学院学报,1995,18(3):1673 朱铉,金香花,崔哲1杜香萜烯对安定透皮吸收作用影响的研究1延边大学医学院学报,1998,21(1):294 杉林坚次,中山 悟,细谷健一,他1527 浓度および の皮肤透过性に及ばす 浓度と溶媒の影响.药剂学.1991,51(2):805 G odwin D A,Michniak B B,Creek K E.Evaluation of Trans2 dermal Penetration Enhancers Using a Novel Skin Alterna2 tive.J Pharm Sci,1997,86(9):10016 Okumura M,Sugibayashi K,Ogawa K,et al.Skin Permeabili2 ty of Watersoluble Drugs.Chem Pharm Bull,1989,37(4): 14047 Obata Y,Takayama K,Machida Y,et al.Effect of Pretreat2 ment of Skin with Cyclic Monoterpenes on Permestion of Di2 clofenac in Hirless Rat.Bil Pharm Bull,1993,16:3128 冀学芳,平其能,刘国杰1促进剂对马来酸噻马洛尔经皮渗透的影响.中国药科大学学报,1996,27(1):69 孙考祥,徐凯建,田辉凯1不同透皮促进剂对丹参贴膏离体透皮吸收的影响1中国药房,1998,9(2):581998205228收稿HPL C法测定西洋参蜂王浆口服液中的人参皂甙与癸烯酸杨枫 (中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所 北京100094)余晓 张蔚青 邹安庆 (北京医科大学药学院 北京100083) 摘要 目的:测定西洋参蜂王浆口服液中的人参皂甙和癸烯酸。
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·论著·高效液相色谱法鉴定西洋参保健食品中的人参皂甙周美玲(武进市卫生防疫站,江苏武进 213161) 【摘 要】 目的:探索一种分析西洋参总皂甙和绞股蓝总皂甙的实验方法,为鉴定西洋参类保健食品提供依据。
方法:采用高效液相色谱法对几种主要人参皂甙Rg1、Rb1、Re进行定位,并以西洋参总皂甙和绞股蓝总皂甙为标准品得出其峰谱图和有关实验数据,同时据此分析有关样品。
液相色谱条件是:Lichno spher-C18色谱柱,V W D-可变波长紫外检测器,波长为203nm,流速1.0ml/min,柱温40℃。
结果:人参皂甙Rg1、Rb1、Re是西洋参总甙中的主要成份,而绞股蓝总皂甙中不含人参皂甙Rg1。
对人参皂甙Rg1进行线性、回收率、精密度试验的结果表明,它可以作为特征组份,符合有关鉴定要求。
对几种市售西洋参类保健食品进行检测,结果有几种不含人参皂甙Rg1,从而鉴别出不含西洋参皂甙的样品。
结论:用本法通过测定西洋参类保健食品中的人参皂甙Rg1,可鉴定其中的总皂甙是否来源于西洋参。
该法简便、快速、灵敏、准确。
【关键词】 人参皂甙;西洋参保健食品;鉴定;高效液相色谱【中图分类号】 T S207.3 【文献标识码】 A 【文章编号】 1006-9070(2002)02-0007-03Identification of Ginsenoside in Panax-healthy f oods by H PLCZ HOU Mei-ling(Wujing Epidemic Prevention and Health Station,Changzhou213161,China)【Abstract】 Objectiv e:To study an ex perimenta l way o f analyzing Q uinqueno sides and Gy no s-temmo sides so as to prov ide scientific evidences fo r identifying the Pa nax-Healthy Fo ods.M etho d:Ado pt the me tho d of HP LC to analyze Ginseno side Rg1,Rb1,Re,Q uinquenosides and Gy no stemmo-sides,acquiring their HPL C pa tter ns and some ex pe rimental da ta based o n abov e mentio ned,ex am-ining so me local pr oduc ts of Pa nax-Healthy Fo ods.The co nditio ns o f HPL C w ere as fo llo ws:V W D-A detecto r with203nm wav e leng th,Lichr osph er C18Chro matog r aphy Co lumn,its tempera ture is40℃,the mo bile is pur e w ater-acetomitrile(70:30),its speed is1.0ml/min.Result:GinsenosideRg1,Rb1,Re w er e the main co nte nts o f Q uinqueno sides,the HPL C pa tterns o f Q uinqueno sides a ndGynostemmo sides wer e differ ent,th ere w as no Ginsenoside Rg1in Gynostemmo sides.Th e tests o fits linear、recov ery a nd pr ecisio n sh ow ed that Ginseno side Rg1could be rega rded as a char acteristicpar t to identify the Pana x-Healthy Foo ds,So me o f the local pro ducts wer e imitated.Conclusio n:By this metho d of measuring Ginseno side Rg1in Panax-Hea lthy Foo ds,the sa tisfacto ry r esults o fidentifica tion w ould be gained.It has the adv antag es o f simplicity,r epeata bility,a nd accuracy.【Key Words】 Ginseno side Rg1;Pa nax-Health y Foods;Identifica tio n;HP LC 近年来,高效液相色谱技术(HPLC)常用来分析人参和西洋参药材及其制剂品质[1-5],已报道的多以人参皂甙Rb1作为指示性成分来控制产品质量,同时以相对含量的大小来定性鉴别。
在保健食品中,因为人参作为国家药政管理部门批准的中成药,不可作为申报保健食品的原料,而从西洋参中提取得到的西洋参总皂甙则可作为功能成分加入食品中生产保健品。
随着新资源的开发研究,绞股蓝中的主要·7·江苏预防医学2002年6月第13卷第2期 J iangsu Prev M ed,June,2002,Vol13,No.2收稿日期:2002-01-20作者简介:周美玲(1967-),女,江苏南通人,主管技师。
药理成分绞股蓝总皂甙也正作为一种食品添加剂在保健食品中大量使用,所以区别这两种总皂甙是很重要的。
绞股蓝皂甙均属人参二醇组皂甙,其中Gy-npenoside-3,与人参皂甙Rb1完全相同,且含量也较高,而人参皂甙Rg1是一种三醇组皂甙,虽然在西洋参中含量不太高,但在绞股蓝中却不含有人参皂甙Rg1。
本文正是基于这一点,采用HPLC技术,探索了一种鉴别西洋参皂甙和绞股蓝皂甙的方法。
1 材料和方法1.1 材料(1)仪器与设备:Aginlent-1100高效液相色谱仪(配自动进样器),VWD-可变波长紫外检测仪,Sep-Pak C18-Ca rtridge制备柱(美国Waters 进口填料),电热恒温水浴锅,索氏回流装置。
(2)试剂:浓硫酸、无水甲醇、无水乙醇均为分析纯,人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1、人参皂甙Re (对照品,由中国药品生物制品检定所提供),西洋参总皂甙、绞股蓝总皂甙(食品添加剂,购于广东惠州)。
(3)样品及其来源:西洋参珍珠含片、胶囊、西洋参晶、洋参冲剂、西洋参滋补液等均为市售或地产。
1.2 方法(1)样液制备:固体样品,精密称取0.5g用70%的乙醇溶液80m l在沸水浴上回流2h,挥干乙醇残渣用水定容到100m l,备用;冲剂、补膏、口服液等精密称取 1.0g或吸取10.0ml,用80ml水溶解,再定容到100ml,摇均备用。
(2)阴性样品模型的建立及其供试液制备:根据各种样品的企业标准中的配方,去掉待测成分皂甙,制成与样品基质完全相同的阴性样品,并按与样品相同的操作进行供试液的制备。
(3)样液过柱的预处理:精密吸取以上各样液1.0ml,全部通过Sep-Pak C18Ca rtridg e小柱,先后用10m l水、10ml30%甲醇、10ml无水甲醇进行洗脱,弃去10m l水和10m l30%甲醇这两段洗脱液,收集10ml无水甲醇部分于10ml的容量瓶中。
(4)对照品溶液制备:对各种人参皂甙对照品,用HPLC的流动相(乙腈:水=30:70)制备浓度为25μg/m l的工作液。
(5)色谱条件:美国Aginlent-1100高效液相色谱仪,Lichropher-C18色谱柱(4.6×250mm, 5um粒径);VW D-可变波长紫外检测器,检测波长为203nm;以乙腈+水=30+70为流动相,流速为1.0ml/min;柱温40℃,自动进样量为20μl。
按上述条件,对各样液进行HPLC分析,同时采用外标法,以保留时间定性,检测其中的人参皂甙Rg1。
2 结果2.1 主要人参皂甙单体标准品定位 先选择进样溶剂,通过试验用流动相进样,溶剂峰谱较理想。
本法色谱条件下,先对人参皂甙Rb1、Re、Rg13种主要成分进行定位,再配成混标进样,它们能在较短的时间内达到基线分离,其中特征组分人参皂甙Rg1的保留时间为 4.78min,较文献报道[2]用糖专用柱法时间缩短。
2.2 西洋参总甙和绞股蓝总皂甙HPLC分析 将样品用流动相溶解配成一定浓度的供试液后进样。
试验图谱显示:在西洋参总皂甙中,人参皂甙Rg1、Rb1、Re是主要的成分,它们的相对含量有一定的差异;而在绞股蓝总皂甙的图谱上却不含有人参皂甙Rg1。
重复性进样(n=6),加大进样浓度均未见特征组分人参皂甙Rg1出峰。
当在绞股蓝总皂甙中加入不同浓度的人参皂甙Rg1(3μg/m l、6μg/m l),样液中其他组分的峰高没有变化,而在Tr= 4.78minr 的位置上出峰,且峰高与标准品Rg1的浓度成比例。
2.3 阴性样品模型的建立 使用C18制备型层析柱对样液进行预处理,该小柱的直径在1～3cm,结果发现处理后的阴性样品供试液在相同的色谱条件下进样,出峰情况同溶剂峰。
可见,它能有效地洗脱糖份等亲水性杂质,为HPLC分析提供了较好的阴性样品模型。
2.4 线性、回收率及精密度 用本法测定人参皂甙Rg1的线性试验结果如表1,回归方程为y= 8.53412X+ 4.97522,相关系数r=0.99952。
表1 线性实验结果(进样体积20μl)浓度(μg/ml) 3.125 6.25012.5025.0050.00峰面积(m AU)40.9356.66112.01214.17433.33 当样品的取样量为0.5g时,同时在相同的条件下,对具有一定浓度的样液进行连续稀释后进样,据2倍噪音的峰响应值和取样量计算出最低检出浓度为6μg/g。
精密度和回收率试验结果见表2、3。
表2 用西洋参冲剂作重现性试验的结果测定序号123456平均值S RSD(%)浓度(mg/100g)26.827.326.527.526.827.327.00.43 1.59·8·江苏预防医学2002年6月第13卷第2期 J iang su Prev M ed,June,2002,Vol13,No.2表3 样品中人参皂甙R g1的回收率试验(mg/100g)样品本底值加标量测得值回收率27.015.041.093.027.030.056.096.7027.045.069.895.102.5样品鉴定结果 将各类样品的供试液在本方法下进行HPLC分析(n=6)。