乳酸菌得分离、纯化与鉴定
酸奶中乳酸菌的分离检测及纯化
（4）、乳酸菌的检测、纯化培养
(1)、初步检测
恒温培养48小时过后，取出培养平板；选择菌落分布 较好的平板，先对其菌落形态进行观察，初步找出乳酸菌 菌落。乳酸菌的菌落很小，圆形隆起，表面光滑或稍粗糙， 在产酸菌落周围还能产生CaCO3的溶解圈，如出现圆形稍扁 平的黄色菌落及其周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。
2、革兰氏染色结果
革兰氏染色结果为蓝紫色，证乳酸菌为革兰氏阳性菌
3、脱脂乳试管检测乳酸杆菌
试管中脱脂牛乳凝固，证为乳酸杆菌
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
另留一管不稀释留作对照（CK）
（2）、分离方法
A．平板划线 接种环挑取10-1菌液，按无菌操作对标有”10-1”的3个平板进
行划操作；划线完毕后，盖上皿盖，倒置放在40℃恒温培养箱中培 养48小时。
B．平板涂布 用无菌移液管分别吸取10-5、10-6、10-7和无菌生理
将7只装9ml无菌水的无菌试管，依次编号1--7，再用无菌移液管 吸10-1的菌悬液1ml放入依次装有9ml无菌水的试管1--6中，稀释混匀 便得到10-2～10-7的稀释液。
酸奶菌悬液的配制
10ml
1.0ml
1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水
（2）、乳酸菌的分离纯化培养
选取乳酸菌典型菌落转至脱脂乳试管中，40℃ 培养8-24h若牛乳出现凝固，无气泡，显酸性，涂 片镜检细胞杆状或链球状，革兰氏染色显阳性， 则可将其连续传代3次，最终选择出在3-6h能凝固 的牛乳管，作菌种待用。
乳酸菌的分离与纯化实验报告
乳酸菌的分离与纯化实验报告一、实验目的：1. 掌握乳酸菌的分离与纯化方法；2. 学习乳酸菌的形态特征及生长特性；3. 熟悉微生物实验室操作规范和安全注意事项。
二、实验原理：乳酸菌属于革兰氏阳性细菌，可以利用革兰染色方法进行初步鉴定。
乳酸菌的形态特征有很大差异，有的呈短杆状、短圆柱状，有的呈梭形或球形。
乳酸菌的培养基选择要根据实验目的而定，一般常用的是MRS培养基。
常规乳酸菌分离方法有两种：血漂白法和渐进稀释法。
血漂白法是用过氧化氢或次氯酸钠等对血液进行漂白处理后加入培养基进行分离，由于血液中含有多种抑菌物质，故需漂白处理后方能使用。
渐进稀释法则是将混菌液逐步稀释后按一定比例接种于选定的培养基上，经过多次传代，可得到单一的菌落。
三、实验步骤：1. 取适量样品加入1ml生理盐水中，充分摇匀。
2. 再从上述稀释液中取出1ml加入9ml生理盐水中，得到10-2悬液。
3. 再抽取1ml悬液加入9ml生理盐水中，得到10-3悬液。
4. 分别取适量的10-2和10-3悬液接种于MRS培养基上，并分别转移多次，培养时间一般为24-48小时，必要时可延长到72小时。
5. 分离菌落后进行鉴定。
四、结果及分析：实验结果显示，经过分离培养，从10-2和10-3悬液中分别分离出了多个菌落，经过重复转移，逐步稀释，最终获得了单一的菌落，可见分离培养方法的有效性和行之有效的可行性。
鉴定乳酸菌的一般方法包括形态学鉴定、生化特性鉴定和分子生物学鉴定等。
形态学鉴定包括形态、大小、形状和染色等方面；生化特性鉴定则主要包括代谢途径、酸产生量和果糖发酵能力等；分子生物学鉴定则是通过特异性引物扩增菌株中的核酸，进行分子水平鉴定。
五、实验心得：本次实验通过乳酸菌分离、培养和鉴定的过程，使我对乳酸菌的形态特征、生长特性和鉴定方法有了更深入的了解。
同时，要时刻注意实验室的操作规范和安全问题，确保实验顺利进行。
在今后的实验中，我将更加重视实验操作的规范性和安全性。
酸奶菌种的分离及鉴定（5篇）
酸奶菌种的分离及鉴定（5篇）第一篇：酸奶菌种的分离及鉴定酸奶菌种的分离及鉴定乳酸菌是指一群通过发酵糖类，产生大量乳酸的细菌总称。
乳酸从形态上可分为球菌和杆菌，并且均为革兰氏染色阳性、在缺少氧气的环境中生长良好的兼性厌氧性或厌氧性细菌。
目前，对乳酸菌的应用研究，着重于食品（如发酵乳制品、发酵肉制品和泡菜）和医药工业等人类生活密切相关的领域。
目前市售的各种酸奶制品中, 作为发酵剂的乳酸菌, 通常为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌这两株菌。
用嗜热链球菌和保加利亚乳酸杆菌混合培养发酵的乳酸饮品能补充人体肠道内的有益菌，维持肠道的微生态平衡，且含有易于吸收的营养素，具有抑制腐败菌、提高消化率、防癌及预防一些传染病等功效，并能为食品提供芳香风味，使食品拥有良好的质地。
保加利亚乳杆菌（L.Bulgarius）:长杆形，直径1-3mm左右,能产生大量的乳酸。
酸碱度方面,为耐酸或嗜酸性,因低pH能防止一些微生物的生长;温度方面,为嗜温至少许嗜热,最适生长温度在37-45℃之间,对低温非常敏感。
嗜热链球菌（S.thermophilus）：卵圆形，直径0.7－0.9微米，呈对或链状排列，无运动性。
为健康人肠道正常菌群，可在人体肠道中生长、繁殖。
可直接补充人体正常生理细菌，调整肠道菌群平衡，抑制并清除肠道中对人具有潜在危害的细菌。
本研究对市售主要品牌酸奶中（河南花花乳业生产的酸奶）乳酸菌进行了分离鉴定，并进一步探讨制备酸奶条件（温度、时间等），以达到最佳的天然酸奶质量效果。
一、实验内容（1）乳酸菌的分离纯化1．无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养2．菌落观察与镜检 3．筛选生产用菌株（2）优化酸奶制作条件1．制备发酵液2．不同条件下，接种发酵菌剂并发酵生产 3．观察发酵情况4．品尝发酵产品，进行质量评价 5．记录结果二、实验器材1）菌种：新鲜乳酸饮料（标记只含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）2）试剂：脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml浓HCL(分析纯)、20gCaCO3固体、酵母膏20g、琼脂30g香柏油、脱脂奶粉100g、蔗糖10g；3）仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针（环）、擦镜纸四、实验方法4.1乳酸菌的分离纯化 4.1.1分离(1)配制BCG牛乳培养基，分装三角瓶，包扎，灭菌备用。
乳酸菌的分离鉴定方法和功能研究
乳酸菌的分离鉴定方法和功能研究摘要:乳酸菌是一类具有多种生理功能的细菌，本文通过阐述乳酸菌不同来源的分离鉴定方式，探讨了乳酸菌的部分主要生理功能。
关键词:乳酸菌分离鉴定功能Abstract: Lactic acid bacteria are a kind of many physiological functions of bacteria, this paper explains the separated and identified from different sources of lactic acid bacteria, and probes into the way of its part main physiological function.Keywords: lactic acid bacteria separated and identified function乳酸菌是一类广泛分布于自然界、与人类生活密切相关、可发酵碳水化合物、产生乳酸的细菌，然而，乳酸菌的许多特性是由其基因编码决定的【1】，利用这一特性，人们可以用乳酸菌作为载体，在食品及医药领域中构建表达系统。
乳酸菌具有控制肠道感染，改善乳糖代谢，增加某些食物的营养价值，诱导体内特异性及非特异性免疫等作用。
乳酸菌为革兰氏阳性菌，细胞形态为杆状或球状，生殖方式为裂殖，消耗葡萄糖50％以上，产生乳酸分解蛋白质，但不产生腐败产物，不形成内生孢子，无运动性或极少运动，目前己发现的乳酸菌在细菌分类学上有18个属【2】。
通过对乳酸菌分离鉴定，可测定其生理功能。
一、乳酸菌的分离鉴定乳酸菌的来源广泛，腌菜、发酵肉制品、腐乳、酱醅、牛乳等食物中乳酸菌的含量极其丰富。
（一）腌菜盐水中乳酸菌的分离与鉴定乳酸菌广泛存在于泡菜和腌菜等食品中，此类乳酸菌较耐盐，因此，以腌菜为样品，分离优良乳酸菌株，将其应用到含盐量较大的食品中，可以改善食品的风味，提高食品的质量。
乳酸菌的分离鉴定及其抗菌肽与发酵性能研究
乳酸菌的分离鉴定及其抗菌肽与发酵性能研究一、本文概述本文旨在对乳酸菌的分离鉴定进行深入研究，并探讨其抗菌肽与发酵性能。
乳酸菌是一类重要的微生物，广泛存在于自然界中，包括人类肠道、乳制品、植物表面等。
它们具有多种生理功能，如促进消化、增强免疫力、改善肠道微生物平衡等，因此在食品、医药和农业等领域具有广泛的应用前景。
本研究首先通过适当的分离方法从各种样品中分离出乳酸菌，并运用分子生物学技术对其进行鉴定，明确其种类和遗传背景。
随后，对分离得到的乳酸菌进行抗菌肽的提取和纯化，通过生物活性测定等方法，研究其抗菌肽的抗菌效果和作用机制。
还将对乳酸菌的发酵性能进行评估，包括其在不同条件下的生长情况、发酵产物的种类和产量等，以期为乳酸菌在食品和生物制品生产中的应用提供理论依据和技术支持。
本研究的意义在于，一方面，通过深入了解乳酸菌的生物学特性，为乳酸菌的开发和利用提供科学依据；另一方面，通过研究乳酸菌的抗菌肽和发酵性能，为开发新型抗菌药物和生物制品提供候选菌株和活性物质。
本研究也有助于推动微生物学、生物化学和发酵工程等相关领域的发展，为相关领域的研究人员提供有价值的参考和借鉴。
二、乳酸菌的分离与鉴定乳酸菌的分离是本研究的基础工作，我们采用了严格的无菌操作技术，从多种自然发酵食品中，如酸奶、泡菜、乳酪等，采集乳酸菌样本。
通过选择性培养基，如MRS培养基，在厌氧条件下进行乳酸菌的初步分离。
随后，对分离得到的菌落进行形态学观察，如菌落颜色、形状、边缘整齐度等特征，初步筛选出具有乳酸发酵特性的菌株。
为了对分离得到的乳酸菌进行精确鉴定，我们采用了分子生物学方法。
提取各菌株的基因组DNA，利用PCR技术扩增其16S rRNA基因序列。
通过对扩增得到的序列进行测序和比对分析，我们确定了各菌株的种属信息。
我们还利用生理生化试验，如糖发酵试验、明胶液化试验等，对分离得到的乳酸菌进行了进一步的鉴定和特性分析。
经过上述步骤，我们成功从自然发酵食品中分离并鉴定了多株乳酸菌。
《抗真菌乳酸菌的抗菌成分分离鉴定及在奶酪保鲜中的应用》范文
《抗真菌乳酸菌的抗菌成分分离鉴定及在奶酪保鲜中的应用》篇一一、引言近年来，食品安全和质量控制一直是国内外食品行业的重要关注点。
乳酸菌因其在食物保鲜及食品生物防护上的潜力而被广泛研究。
尤其在奶酪等发酵食品中，其作为防腐剂的天然替代品，具有显著的优势。
本文旨在研究抗真菌乳酸菌的抗菌成分的分离与鉴定，并探讨其在奶酪保鲜中的应用。
二、材料与方法1. 材料本实验所需材料包括：不同种类的乳酸菌、奶酪样品、培养基等。
2. 方法（1）乳酸菌的分离与筛选：从奶酪样品中分离出乳酸菌，筛选出具有抗真菌特性的菌株。
（2）抗菌成分的提取与分离：通过不同的提取方法，如溶剂萃取、超声波辅助提取等，对筛选出的乳酸菌进行抗菌成分的提取与分离。
（3）抗菌成分的鉴定：采用质谱、光谱等分析方法对提取的抗菌成分进行结构鉴定。
（4）在奶酪保鲜中的应用：通过添加分离出的抗菌成分，研究其对奶酪保鲜效果的影响。
三、实验结果与分析1. 乳酸菌的分离与筛选结果通过不同的方法，我们从奶酪样品中成功分离出多种乳酸菌。
经过筛选，我们得到了一株具有明显抗真菌特性的乳酸菌，命名为Lactobacillus sp. A。
2. 抗菌成分的提取与分离结果通过溶剂萃取和超声波辅助提取等方法，我们成功从Lactobacillus sp. A中提取出抗菌成分。
经过分析，该成分主要由多种有机酸和多肽组成。
3. 抗菌成分的鉴定结果通过质谱和光谱分析，我们确定了该抗菌成分的主要成分为多种有机酸和多肽类物质。
这些物质在之前的文献中已有报道，具有明显的抗真菌活性。
4. 在奶酪保鲜中的应用效果分析将该抗菌成分添加到奶酪中，我们发现其对奶酪的保鲜效果有显著影响。
添加了该抗菌成分的奶酪在保存过程中，其微生物生长得到了有效控制，延长了奶酪的保质期。
同时，该抗菌成分并未对奶酪的风味和口感产生明显影响。
四、讨论本研究成功地从奶酪中分离出具有抗真菌特性的乳酸菌，并对其抗菌成分进行了提取与鉴定。
乳酸细菌分类鉴定及实验方法
乳酸细菌分类鉴定及实验方法乳酸细菌是一类可以发酵果糖或蔗糖产生乳酸的革兰氏阳性细菌。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、动物肠道、植物表面等环境中，并且在食品加工、乳制品、膳食补充剂等领域具有重要的应用价值。
分类鉴定乳酸细菌的方法主要包括传统分离鉴定和分子生物学方法，而实验方法主要包括培养、生理生化鉴定和分子鉴定等。
1.传统分离鉴定传统分离鉴定是通过培养、生理生化特性的观察和细菌形态学特征的分析来进行分类鉴定的方法。
一般的步骤包括：1.2分离：采用适当的培养基，如MRS培养基等，在适当条件下进行分离培养。
可以采用不同的稀释度和培养温度来增加分离率和适应性。
1.3纯化：从培养出的菌落中选择纯净的菌落进行纯化。
1.4形态学观察：观察细菌的形态学特征，如菌落形态、细胞形态、孢子形态等。
1.5生理生化特性鉴定：通过生理生化实验，如氧需氧性、产气、产酸、碱性产蛋白酶等特性的鉴定来进一步确定细菌的分类。
1.6比较分析：将鉴定结果与已知的乳酸菌进行比较分析，以确定菌株的分类。
2.分子生物学方法分子生物学方法是一种快速、准确的分类鉴定方法，可以通过检测细菌的DNA序列来进行鉴定。
常用的分子生物学方法包括PCR、16SrRNA测序和随机扩增多态性DNA(RAPD)等。
2.1PCR：PCR是通过扩增细菌DNA的特定区域来进行鉴定的方法。
首先，从培养的细菌中提取DNA。
然后，使用特定引物扩增目标区域的DNA，并通过凝胶电泳分析PCR产物的大小。
比较PCR产物的片段大小和带型模式，可以确定乳酸菌的分类。
2.216SrRNA测序：细菌的16SrRNA序列是一个高度保守的基因序列，可以用来进行细菌分类鉴定。
通过提取DNA，扩增16SrRNA基因片段，并进行测序，然后将测序结果与已知的乳酸菌序列比对，可以确定细菌的分类。
2.3RAPD：RAPD是一种无须事先了解目标序列的技术，它利用随机引物扩增细菌DNA的多态位点，通过凝胶电泳分析不同样品间的DNA带型模式，来进行菌株分类。
乳酸菌的分离纯化与鉴定
乳酸菌的分离、纯化与鉴定第一部分:乳酸菌的分离、纯化一、实验器材:1、实验药品新鲜乳酸饮料(市售)、脱脂奶粉、蔗糖、1、6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄)、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙;0、4gNaOH固体、4、2ml浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g;2、仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿(φ9或φ12)、试管、300ml三角瓶(带玻珠)、移液管、天平、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯。
二、实验步骤:1、培养基配制(BCG牛乳培养基):(A)溶液:取脱脂乳粉100g,水500ml,加入1、6%溴甲酚氯乙醇溶液1ml,混合均匀后分装入三角瓶于高压蒸汽灭菌锅80℃灭菌20 min;(1、6%溴甲苯酚绿(BCG)乙醇溶液用1、6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中,再加水至100ml制成)(B)溶液:酵母膏10g,水500ml,CaCO3 10g,琼脂20g,加热溶解,用精密pH试纸调节pH到6、8,分装入三角瓶后在103kPa 121℃高压蒸汽灭菌20Min。
以无菌操作趁热将(A)(B)溶液均匀混合。
2、药品配制2、1 结晶紫:结晶紫乙醇饱与液(结晶紫2g溶于20ml 95%乙醇中)20ml,1%草酸氨水溶液80ml。
将两液混匀,放置24小时后过滤即可。
2、2 卢哥氏碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加入蒸馏水300ml即成。
2、3 蕃红溶液:番红2、5g,95%乙醇100ml,溶解后存于密闭的棕色瓶中。
用时取20ml与80ml蒸馏水混匀即可。
2、4 0、1%的吕氏美蓝染液:A液:美蓝0、3g,95%乙醇300ml;B液:0、01% KOH 100ml。
酸奶中乳酸菌的分离检测及纯化ppt课件
【实验材料、仪器与试剂】
实验材料：市售乳酸饮料或酸奶。 实验仪器：保温箱、高压蒸汽灭菌锅、水浴锅、 培养皿、试管、涂布器、酒精灯等。 实验试剂：脱脂乳试管、脱脂奶粉、5%蔗糖水、 1.6%溴甲酚紫、95%乙醇溶液、酵母膏、 琼脂、无菌水
【实验步骤】
1、1.6%溴钾酚紫牛乳培养基的制备
2、脱脂乳试管的制备
3、酸奶中乳酸菌的分离 4、乳酸菌的检测、纯化培养
（1）、1.6%溴甲酚紫牛乳培养基的制备
配料： （A）液：脱脂奶粉100g，水500ml，加入1.6%溴甲酚紫、乙醇溶液1ml， 80℃灭菌20min。 （B）液：酵母膏10g，水500ml，琼脂20g ，pH6.8， 121℃湿热灭菌20min。 操作： （1）、按照配方正确称取所需药品放于烧杯中，在搪瓷杯中加入所需水 量，玻棒搅匀，加热溶解，用1N NaOH或1N HCl调pH，加琼脂溶化，加 热过程要不断搅拌，可适当补水。琼脂完全溶解后 倒入250mL的锥形 瓶中，贴上标签，在高压锅中灭菌20min。 （2）、灭好菌的A液和B液趁热充分混合，并在酒精灯的附近趁热倒平板 。
10ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml
10-1
花园酸奶 90ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
另留一管不稀释留作对照（CK）
（2）、分离方法
A．平板划线 接种环挑取10-1菌液，按无菌操作对标有”10-1”的3个平板进 行划操作；划线完毕后，盖上皿盖，倒置放在40℃恒温培养箱中培 养48小时。
B．平板涂布
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌分离鉴定及试验方法一、引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有重要的生物学功能和应用价值。
乳酸菌可以通过发酵作用，将葡萄糖、果糖等碳源转化为乳酸和其他有机酸，同时还会产生一些对人体有益的物质，如维生素、酶、抗生素等。
乳酸菌在食品工业、医药工业、农业等领域具有重要的应用前景。
乳酸菌的分离鉴定及试验方法对于深入研究乳酸菌菌种的特性、功能以及在不同领域中的应用具有重要意义。
本文将介绍乳酸菌的分离鉴定及试验方法，旨在为相关研究人员提供参考和指导。
二、乳酸菌分离方法1. 采样乳酸菌的分离首先需要进行采样工作。
可以从发酵食品、乳制品、蔬菜、水果、土壤、肠道等多种来源进行采样。
在采样过程中应注意样品的新鲜性和卫生性，避免外部污染对实验结果造成影响。
2. 培养基的选择乳酸菌可以利用多种培养基进行分离和培养，常用的培养基有MRS培养基、乳清培养基等。
根据具体的分离目的和需求选择适合的培养基。
3. 分离将采样得到的样品进行系列稀释，取适量的稀释液均匀涂布在含有适当培养基的琼脂平板上，培养温度一般在30-37摄氏度之间，培养时间约48-72小时。
4. 纯化观察培养基上的菌落形态，选择典型的菌落进行分离单菌培养，通过多次传代稀释可以纯化获得纯种的乳酸菌。
5. 形态观察利用显微镜对分离得到的菌株进行形态学观察，包括细胞形状、大小、排列方式等。
三、乳酸菌鉴定方法1. 生理生化鉴定通过对分离得到的菌株进行生理生化特性的研究，包括乳酸发酵能力、氧耐受性、温度、pH值的适应能力等，可以初步判断乳酸菌的种属。
2. 生化试剂法利用生化试剂对乳酸菌进行鉴定，如气体发生试验、氧化还原酶试验、酶活性试验等。
3. 分子生物学鉴定通过PCR扩增乳酸菌的16S rRNA基因序列，测序后与数据库比对，确定乳酸菌的种属分类。
四、乳酸菌试验方法1. 发酵活性测定通过测定菌株在不同条件下的发酵活性，如发酵速率、产酸速率、产酶能力等。
2. 抗菌活性测定测定乳酸菌对一些有害菌的抑菌作用，判断其在抗菌方面的潜力。
藏灵菇发酵乳中乳酸菌的分离纯化与鉴定
落继续 在原 培养 基上 划 线 纯 化 ， 复 ２—３次 ， 至 重 直
Ｃｈｎ ＪＩ 唧 ， ｒ ，０１ Ｖｏ ４， ． ｉ ｚｂ Ｄｉ Ａｐｉ ２ ０， ｌ１ Ｎｏ４ ｌ
镜 检为 纯培 养物 止 。纯 化后 的菌株 接 种 至 Ｍ Ｓ斜 Ｒ 面上培 养 ， 后至 ４ 冰箱 中保 存备用 。 培养 ℃
ｂｃｌｓ ｔ ｉ ｅｅｉｌ ｅ ｏ ｉ ｔ ｅ ｒｔ ｎｓ ｊｃ ｄｔ ｐｙｉｏ ｃｌ ｄｂｏｈｍｃ ｅｔ ｃｔｎａ ｅ ６ Ｎ ｅ ａｉｕ ｓａ ｓ ｒ ｓ ａ ｄｆ ｍ Ｔｂ ｆ ， ｅ ｕ ｅｔ ｈｓ ｌ ａ ａ ｉ ｅ ｉ ｉ ｎｆ ａｏ ｓｗｌａ １ＳＲ Ａ ｓ— ｌ ｒｎ ｗ ｏｔ ｒ ｅ ｋｉ ｈ ｂ ｅ ｏ ｏｇ ｉ ｎ ｃ ｌ ａｄ ｉ ｉ ｉ ｌ ｓ
板 ， 用 Ｔｑ酶 及 １Ｓ通 用 引 物 进 行 Ｐ Ｒ 扩 增 。 利 ａ ６ Ｃ
Ｐ Ｒ反应条 件 为 ：５ ５ｒ ｎ ９ ℃ ３ ，０Ｃ ３ ， Ｃ ９ ％ ｉ； ４ ａ ０Ｓ５ ￣ ０ｓ ７ ℃ １ｍ ｎ ３ 个 循 环 ；２ １ ｉ；０Ｃ ５ｍ ｎ ４Ｃ ２ ｉ，０ ７ ℃ ５ ｍｎ １ ｏ ｉ； ｑ 保存 。 １２ ５ １Ｓｒ Ｎ ．． ６ Ａ序列 测 定 与分 析 Ｒ Ｐ Ｒ扩 增 产物 Ｃ 经 １ ％琼 脂 糖 凝 胶 电泳 检 测 后 送 上 海 生 工 公 司测
乳酸菌的生产工艺流程
乳酸菌的生产工艺流程
乳酸菌是一种对人体非常有益的微生物，它可以调节肠道菌群平衡，增强人体免疫力，促进消化吸收等。
乳酸菌的生产工艺流程主要包括菌种选育、发酵培养、分离纯化和产品加工等环节。
首先是菌种选育。
在乳酸菌的生产过程中，选择合适的菌种是非常关键的。
一般采用从天然源中分离获得的优良乳酸菌菌株，经过菌种培养和筛选，选取具有较强活性、抗菌能力以及耐酸能力的菌株作为乳酸菌的菌种。
接下来是发酵培养。
将选育好的乳酸菌菌种接种到合适的培养基中，提供适宜的温度、湿度、营养物质等条件，使菌种能够快速繁殖和发酵产酸。
发酵过程中要进行适时的监控和调控，确保菌体数量的增长和发酵产酸过程的顺利进行。
随后是分离纯化。
经过一段时间的发酵，乳酸菌培养液成熟后，要进行菌体的分离纯化。
首先采用离心法将菌体与培养液分离开，然后通过洗涤、稀释和接种等步骤，筛选出高活性的乳酸菌细胞。
纯化后的菌体进行冷冻保存，以备后续的大规模生产使用。
最后是产品加工。
分离纯化后的乳酸菌菌体可用于生产各类乳酸菌制品，如乳酸菌饮料、乳酸菌发酵乳、乳酸菌奶粉等。
在产品加工过程中，需要将乳酸菌菌体与其他配料进行混合，调整口味，并控制好发酵的时间和温度，使乳酸菌发酵产酸的过程能够达到最佳效果。
总体而言，乳酸菌的生产工艺流程包括菌种选育、发酵培养、分离纯化和产品加工等环节。
通过科学合理的操作和控制，可以保证乳酸菌制品的质量和口感，满足人们对健康食品的需求。
乳酸菌的生产工艺流程已经得到了广泛应用，并取得了良好的经济效益和社会效益。
《抗真菌乳酸菌的抗菌成分分离鉴定及在奶酪保鲜中的应用》范文
《抗真菌乳酸菌的抗菌成分分离鉴定及在奶酪保鲜中的应用》篇一一、引言随着食品工业的快速发展，食品安全与保鲜技术成为研究的热点。
乳酸菌作为一种益生菌，在食品工业中有着广泛的应用。
而抗真菌乳酸菌在奶酪等食品的保鲜方面更是备受关注。
本文旨在对抗真菌乳酸菌的抗菌成分进行分离鉴定，并探讨其在奶酪保鲜中的应用。
二、材料与方法1. 材料（1）乳酸菌菌种：从不同来源的乳酸菌中筛选出具有抗真菌活性的菌种。
（2）培养基：营养琼脂、MRS培养基等。
（3）奶酪样品：市售各类奶酪。
2. 方法（1）抗真菌乳酸菌的筛选与纯化：通过平板划线法对乳酸菌进行分离纯化。
（2）抗菌成分的分离与鉴定：采用生物化学方法、分子生物学技术等手段对抗菌成分进行分离与鉴定。
（3）奶酪保鲜实验：将鉴定出的抗真菌乳酸菌添加到奶酪中，观察其保鲜效果。
三、结果与分析1. 抗真菌乳酸菌的筛选与纯化通过平板划线法，我们从不同来源的乳酸菌中筛选出具有抗真菌活性的菌种。
经过多次纯化，得到纯度较高的抗真菌乳酸菌。
2. 抗菌成分的分离与鉴定通过生物化学方法和分子生物学技术，我们成功分离出抗真菌乳酸菌的抗菌成分。
经鉴定，该成分主要为某种肽类物质和有机酸。
这些成分具有广谱抗菌活性，对多种真菌有抑制作用。
3. 奶酪保鲜实验将鉴定出的抗真菌乳酸菌添加到奶酪中，我们发现其具有显著的保鲜效果。
添加了抗真菌乳酸菌的奶酪在贮藏期间，霉菌和酵母菌的生长得到有效抑制，延长了奶酪的保质期。
同时，奶酪的口感、色泽和香气等品质指标也得到了改善。
四、讨论抗真菌乳酸菌的抗菌成分主要为肽类物质和有机酸，这些成分具有广谱抗菌活性，对多种真菌有抑制作用。
将其应用于奶酪等食品的保鲜中，可以有效延长食品的保质期，改善食品的品质。
此外，抗真菌乳酸菌还可作为益生菌，对人体健康有益。
因此，抗真菌乳酸菌在食品工业中具有广泛的应用前景。
在奶酪保鲜中，除了添加抗真菌乳酸菌外，还可采用其他保鲜技术，如真空包装、高温短时处理等。
乳酸菌的分离纯化
分离纯化的方法
•制备乳酸菌素Lactocin-J23的发酵液 •(NH4)2SO4盐析法沉淀乳酸菌素 •菌体细胞吸附纯化乳酸菌素 •阳离子交换法分离纯化乳酸菌素 •疏水层析法分离纯化乳酸菌素 •乳酸菌素纯度的测定
(NH4)2SO4盐析法原理是根据蛋白质在水溶 液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水 形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电 荷的情况决定的。当(NH4)2SO4加入蛋白质 溶液，(NH4)2SO4对水分子的亲和力大于蛋 白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱 乃至消失。同时，(NH4)2SO4加入蛋白质溶 液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面 电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低， 使蛋白质分子之间聚集而沉淀。
实验步骤：1.乳酸菌发酵液在70℃水浴加热25min后调 至吸附适宜pH，同时Bradford法和琼脂扩散法分别测定 发酵液蛋白含量和抗菌活力； 2.置于磁力搅拌器上室温搅拌30min，使细菌素充分吸 附在细胞上； 3.离心收集细胞，4℃于8000rpm/min离心30min，同时 测定离心上清液中蛋白含量和抗菌活力； 4.收集沉淀用与吸pH值相同的5mmol/L磷酸钠缓冲液洗 涤细胞1-2次； 离心30min收集沉淀悬浮于100mmo1/L NaC1溶液，用 5%磷酸调至最佳解吸pH； 6.4℃磁力搅拌12h， 4℃于10000r/min离心30min，收集 上清液0.22um无菌滤膜过滤,上清液即为细菌素提取物； 同时测定离心沉淀中蛋白含量和抗菌活力，以便计算抗 菌肽损失率。
图2菌株J23 与指示菌对细菌素Lactocin－J23的吸附率
从图2中可知，不同pH对J23菌体和指示菌细胞吸附 Lactocin- J23的能力有很大的影响。对产生菌J23来说， 在pH6.0时吸附率最大，达到80%；当pH低于3.0或大 于8.0时吸附率基本为0。对革兰氏阳性指示菌（枯草 芽孢杆菌）来说，在pH为2-9之间均能吸附上目标细 菌素，在酸性条件下其吸附能力较碱性条件下强，最 大吸附率为55%，低于J23菌体的最高吸附率。因此 在后续实验中确定在pH 6.0时吸附Lactocin-J23,在pH 2.0时从细胞表面解吸附。 2.2产生菌J23细胞吸附纯化Lactocin-J23 将活化的菌株J23接种到1000ml MRS液体培养基中， 37℃培养24h，70℃水浴加热25min，待冷却后根据 上述研究结果调节发酵液pH至6.0，在室温缓慢搅拌 2h，调节pH至2.0，分离纯化目标细菌素Lactocin J23 ，结果如表所示。
乳酸菌的生产工艺流程
乳酸菌的生产工艺流程
《乳酸菌的生产工艺流程》
乳酸菌是一种对人体健康有益的微生物，其生产工艺流程通常包括以下几个步骤：
1. 培养种子菌株
首先，需要选择一种高效的乳酸菌菌种，并进行培养。
在一个无菌条件下的培养基中，将乳酸菌菌种接种并进行培养，直至菌种数量达到一定的规模。
2. 发酵
接下来，将培养好的种子菌株转移到发酵罐中，加入适量的发酵基质，如牛奶或果汁。
然后，进行发酵过程。
在适当的温度和pH值下，乳酸菌会利用发酵基质中的糖类进行呼吸代谢，产生乳酸等有益物质。
3. 分离纯化
发酵结束后，将发酵液进行分离，并将乳酸菌分离出来。
这一步是为了获取高纯度的乳酸菌产品。
4. 冻干
最后，将得到的乳酸菌产品进行冻干处理，以提高其保存时间和稳定性。
冻干后的乳酸菌产品可以以粉末或胶囊的形式进行包装和销售。
同时，也可以根据实际需要，添加其他营养成分或调节剂，使乳酸菌产品更具有营养和功能性。
通过以上工艺流程，可以生产出高质量的乳酸菌产品，为人们的健康提供良好的保障。
同时也为乳酸菌在食品、保健品等领域的广泛应用奠定了基础。
乳酸菌的分离、纯化与鉴定
乳酸菌的分离、纯化与鉴定第一部分：乳酸菌的分离、纯化一、实验器材:1.实验药品新鲜乳酸饮料（市售）、脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g；2.仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、500ml 锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯。
二、实验步骤：1.培养基配制（BCG牛乳培养基）：（A）溶液：取脱脂乳粉100g，水500ml，加入1.6%溴甲酚氯乙醇溶液1ml，混合均匀后分装入三角瓶于高压蒸汽灭菌锅80℃灭菌20 min；（1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液用1.6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中，再加水至100ml制成）（B）溶液：酵母膏10g，水500ml，CaCO3 10g，琼脂20g，加热溶解，用精密pH试纸调节pH到6.8，分装入三角瓶后在103kPa 121℃高压蒸汽灭菌20Min。
以无菌操作趁热将(A)(B)溶液均匀混合。
2.药品配制2.1 结晶紫：结晶紫乙醇饱和液（结晶紫2g溶于20ml 95%乙醇中）20ml，1%草酸氨水溶液80ml。
将两液混匀，放置24小时后过滤即可。
2.2 卢哥氏碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml。
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加入蒸馏水300ml即成。
2.3 蕃红溶液：番红2.5g，95%乙醇100ml，溶解后存于密闭的棕色瓶中。
用时取20ml与80ml蒸馏水混匀即可。
2.4 0.1%的吕氏美蓝染液：A液：美蓝0.3g，95%乙醇300ml；B液：0.01% KOH 100ml。
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌的分离鉴定主要包括以下步骤：
1. 菌落筛选：根据菌落的颜色、大小、光泽度和透明程度，挑取含溶钙圈的单菌落。
2. 分离纯化：在MRS或Elliker固体培养基上反复划线分离，直到分离到纯的单一菌落。
3. 革兰氏染色：镜检观察菌体颜色、大小、形状和排列方式。
4. 过氧化氢酶实验：将革兰氏染色阳性、过氧化氢酶阴性的菌株初步认定为乳酸菌。
5. 保藏：用终浓度为25%甘油冻存管进行菌株的保藏，置于-80℃冰箱中保存备用。
乳酸菌的试验方法主要包括以下步骤：
1. 耐酸性优良菌株筛选试验：将分离纯化的乳酸菌和实验室耐酸性较好的WHH544接种到MRS液体培养基中，接种量为2%，于37℃培养箱中培养24小时，连续活化2代后，以6000r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀菌体用灭菌生理盐水洗涤、离心2次后，通过麦氏比浊法调整菌悬液浓度为×108CFU/mL。
2. 其他试验：根据具体研究需求进行相关试验，例如通过不同条件培养，观察菌株生长情况；或通过发酵实验，测定乳酸菌的产酸能力等。
以上内容仅供参考，建议查阅专业微生物学书籍或文献获取更全面和准确的信息。
乳酸菌的分离
乳酸菌的分离一、实验目的: (1)了解乳酸菌的菌落特征及细胞形态；(2)了解乳酸菌的分离及鉴定原理。
二、实验内容: 酸乳中乳酸菌的分离及初步鉴定(1)从酸乳中分离乳酸菌；(2)对乳酸菌进行初步鉴定。
三、实验器材:样品：含乳酸菌的酸奶；培养基：BCG牛乳培养基；设备：高压蒸汽灭菌锅，电磁炉，恒温培养箱；仪器用品：1000ml烧杯一个，500ml量筒一个, 无菌培养皿12个, 500ml容量三角瓶2个，25ml无菌移液管1只，20ml无菌试管7只，1ml无菌移液管6只，培养基分装器一个，玻棒2根, 无菌涂布器3只，酒精灯一盏，接种环一个，天平，牛角匙，漏斗，漏斗架，载玻片，盖玻片，pH试纸若干，液体石蜡，棉塞，吸管，牛皮纸，线绳、标签等。
药品：结晶紫，乙醇，草酸氨，碘，碘化钾，番红，番红，NaOH，NaCl。
三、实验原理:自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质,用以培养,分离,鉴定,保存各种微生物和代谢产物。
此次分离纯化乳酸菌采用BCG牛乳培养基[3]。
乳酸菌分离目的是要在培养基上出现乳酸菌的单个菌落，为此我们采用以下两种方法：平板划线法：平板划线分离法是将混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后繁殖成单菌落；从而得到待分离菌种的纯种。
其原理是将微生物在固体培养基表面多次做”由点到线”稀释而达到分离的目的。
平板涂布法：平板涂布法是将样品经稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单个细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个但菌落代表原样品中的一个单细胞。
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乳酸菌得分离、纯化与鉴定第一部分:乳酸菌得分离、纯化一、实验器材:1、实验药品新鲜乳酸饮料(市售)、脱脂奶粉、蔗糖、1、6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄)、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙;0、4gNaOH固体、4、2ml浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g;2、仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿(φ9或φ12)、试管、300ml三角瓶(带玻珠)、移液管、天平、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯。
二、实验步骤:1、培养基配制(BCG牛乳培养基):(A)溶液:取脱脂乳粉100g,水500ml,加入1、6%溴甲酚氯乙醇溶液1ml,混合均匀后分装入三角瓶于高压蒸汽灭菌锅80℃灭菌20 min;(1、6%溴甲苯酚绿(BCG)乙醇溶液用1、6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中,再加水至100ml制成)(B)溶液:酵母膏10g,水500ml,CaCO3 10g,琼脂20g,加热溶解,用精密pH试纸调节pH到6、8,分装入三角瓶后在103kPa 121℃高压蒸汽灭菌20Min。
以无菌操作趁热将(A)(B)溶液均匀混合。
2、药品配制2、1 结晶紫:结晶紫乙醇饱与液(结晶紫2g溶于20ml 95%乙醇中)20ml,1%草酸氨水溶液80ml。
将两液混匀,放置24小时后过滤即可。
2、2 卢哥氏碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加入蒸馏水300ml即成。
2、3 蕃红溶液:番红2、5g,95%乙醇100ml,溶解后存于密闭得棕色瓶中。
用时取20ml与80ml蒸馏水混匀即可。
2、4 0、1%得吕氏美蓝染液:A液:美蓝0、3g,95%乙醇300ml;B液:0、01% KOH 100ml。
混合A与B液即成,按1:100稀释即可。
2、4 生理盐水:称取9g氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到1000毫升。
3、菌悬液得配制取1洁净三角瓶,盛以225ml生理盐水;7只洁净试管,各盛9ml得生理盐水;加塞包扎于在103kPa 121℃高压蒸汽灭菌20Min,得到无菌生理盐水。
将酸奶样品搅拌均匀,用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌生理盐水得三角瓶中,在旋涡均匀器上充分振摇,使样品均匀分散,即为10-1得样品稀释液;将7只装9ml生理盐水得无菌试管,依次标记 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7,再用无菌移液管吸10-1得菌悬液1ml放入依次装有9ml无菌水得试管中,稀释混匀便得到10-2稀释液,如此重复依次制得10-3～10-7得稀释液。
4、倒平板取无菌平板12个,编号标明10-1、10-5、10-6、10-7各三套;将经高温消毒得培养基冷却到50℃左右,按无菌操作法倒12只平板,每皿约15ml;平置使培养基均匀分布在皿底,待凝固。
5、分离方法A.平板划线接种环挑取10-1菌液,按无菌操作对标有”10-1”得3个平板进行划操作;划线完毕后,盖上皿盖,倒置放在40℃恒温培养箱中培养48小时。
B.平板涂布用三支1ml无菌移液管分别吸取10-5、10-6与10-7得稀释菌悬液各1ml,对号接种于与之对应得3个无菌平板中,每个平皿放0、1ml;尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀,平放于试验台上20 Min;然后倒置于40℃恒温箱中培养48小时。
6、脱脂乳试管得配制与灭菌直接选用脱脂乳液或按脱脂奶粉10克与蔗糖5克,水95克(蔗糖与水得比例在1:10得范围内)得比例配制,装量以试管得1/3为宜,115℃灭菌15min。
7、菌落观察恒温培养48小时过后,取出培养平板;选择菌落分布较好得平板,先对其菌落形态进行观察,初步找出乳酸菌菌落。
乳酸菌得菌落很小,大约1~3 mm,园形隆起,表面光滑或稍粗糙,呈乳白色、灰白色或暗黄色;在产酸菌落周围还能产生CaCO3得溶解圈。
40℃培养48h,如出现圆形稍扁平得黄色菌落及其周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。
8、乳酸菌得分离纯化选取乳酸菌典型菌落转致脱脂乳试管中,40℃培养8~24h若牛乳出现凝固,无气泡,显酸性,涂片镜检细胞杆状或链球状,革兰氏染色显阳性,则可将其连续传代3次,最终选择出在3~6h能凝固得牛乳管,作菌种待用。
9、乳酸发酵及检查发酵:观察BCG培养基中乳酸菌菌落特征,选取长势比较好得菌落无菌操作下将乳酸菌接种于装有脱脂乳得试管中,40～42℃静止培养。
取干净载玻片一块,在载玻片中央加一滴生理盐水,无菌操作法取少量菌体涂片;结晶紫初染→碘液媒染→乙醇脱色→番红复染,干燥后用油镜观察,菌体被染成蓝紫色得就是乳酸菌;其中保加利亚乳杆菌呈杆状,成单杆、双杆或长丝状;嗜热链球菌,呈球状,成对或短链或长链状。
革兰氏阳性,无芽胞得球菌或杆菌可定为乳酸菌,记录测定结果。
第二部分:乳酸菌鉴定一、实验器材1、蛋白胨水培养基:蛋白胨 10 g , 氯化钠 5 g , 水 1000 ml , PH : 7、2 ~ 7、4121 摄氏度湿热灭菌 20 min2、糖发酵培养基:蛋白胨水培养基 1000 ml , 1、6%溴甲酚紫乙醇溶液 1~2 ml ,PH : 7、6 , 另配 20%糖溶液(葡萄糖,蔗糖)各 10 ml、3.有关试剂1、6 % 溴甲酚紫乙醇溶液 :溴甲酚紫 1、6 g 溶于100 ml 乙醇中,贮存于棕色瓶中保存备用。
吲哚试剂:对二甲基氨基苯甲醛 8 g , 95 % 乙醇 760 ml , 浓盐酸 160 ml、10 % 硫酸,2 % 高锰酸钾含氨得硝酸盐溶液 : 称取硝酸银 2 g , 蒸馏水 100 ml ,待硝酸银溶解后,取出10 ml 备用,向其余得90 ml 硝酸银中滴加氨水,即可形成很厚得沉淀,继续滴加氨水至沉淀刚刚溶解成为澄清溶液为止,再将备用得硝酸银慢慢滴入,则溶液出现薄雾,但轻轻摇动后,薄雾状得沉淀又消失,继续滴入硝酸银,直到摇动后仍呈现轻微而稳定得薄雾状沉淀为止。
二、鉴定试验1、形态与培养特征观察采用牛肉膏蛋白胨培养基,将已纯化后得甘油菌种活化后于37℃下培养20～24h ,并进行革兰氏染色及菌体形态与菌落特征得观察。
染色方法:涂片固定;草酸铵结晶紫染1分钟;自来水冲洗;加碘液覆盖涂面染约1分钟;水洗,用吸水纸吸去水分;加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分;蕃红染色液(稀)染2分钟后,自来水冲洗。
干燥,镜检。
2、生长条件试验(1)耐盐性试验(NaCl 浓度:0、 85 、1、 20 与1、 71) (mol/ L) ;(2)耐酸碱试验(p H :4、 3 、5、 7 、6、 8 、8、 4 、8、 6 与8、 7) ;(3)温度梯度试验(温度: 10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃与65℃) 。
分别将参试菌接种于以上处理得液体培养基中培养48 h ,记录生长状况。
3、厌氧生长测定将菌种接入营养肉汤平板后,用密封带包好放入CO2培养箱37℃培养2天后,观察生长情况,生长则为阳性。
含硝酸钾得营养肉汤加入2g硝酸钾入营养肉汤4、生理生化试验⑴过氧化氢酶测定将实验菌接种于PGY培养基斜面上,37℃培养20h—24h,取一环接种得培养物,涂于干净得载玻片上,然后在其上滴加3%－—15%得过氧化氢,有气泡则为阳性反应,无气泡为阴性反应。
蛋白胨、酵母膏、葡萄糖(PGY)培养基:蛋白胨10g,酵母膏5g ,葡萄糖1g,蒸馏水1L 。
(2)甲基红(M、R)试验接种实验细菌于PYG培养基,于37℃培养2天后,于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液,如呈红色,表示阳性。
(3)吲哚试验1)、试管标记:取装有蛋白胨水培养基得试管2支,分别标记乳酸菌与空白对照。
2)、接种培养:以无菌操作分别接种少量菌苔到标记乳酸菌得试管中,标记有空白对照得不接种,置37摄氏度恒温箱中培养24~48小时。
3)、观察记录:在培养基中加入乙醚1~2 ml ,经充分振荡,使吲哚萃取至乙醚中,静置片刻后乙醚层浮于培养液得上面,此时沿管壁缓慢加入5~10滴吲哚试剂,如有吲哚存在,乙醚层呈玫瑰色,此为吲哚试验阳性反应,否则为阴性反应。
(4)、糖发酵试验1)、试管标记:取分别装有葡萄糖,蔗糖发酵培养液试管各2支,每种糖发酵试管中分别标记乳酸菌与空白对照。
2)、接种培养:以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中,每种糖发酵培养液得空白对照均不接菌。
将装有培养液得杜氏小管倒置试管中,置37摄氏度恒温培养箱中培养24小时,观察结果。
3)、观察记录:与对照管比较,若接种培养液保持原由颜色,其反映结果为阴性;如果培养液呈黄色,反映结果为阳性。
培养液中得杜氏小管内有气泡为阳性反应,杜氏小管内没有气泡为阴性反应。
(5)、乳酸得检测选用已经分离得菌种做小型发酵实验,取发酵液得上清液约10 ml于试管中,加入10%硫酸1 ml ,再加2%高锰酸钾 1 ml ,此时乳酸转化为乙醛,把事先在含氨得硝酸银溶液中侵泡得滤纸条搭在试管口中,微火加热试管至沸,观察滤纸变化。
(6)乙酰甲基甲醇试验(V-P试验)接种新鲜得实验菌种于培养基中, 37℃培养2天后,取葡萄糖蛋白胨培养液1mL在其中加入1ml 10％得NaOH,混匀,再加入3－4滴2%氯化铁溶液。
数小时后,培养基表面得下层出现红色者,为阳性、(7)明胶液化实验将实验菌接种于明胶基础培养基中,置37℃培养,以一支未接种得试管作为对照。
将接种得与未接种得对照管置于冰箱或冷水中,等待对照管凝固后记录实验结果,反复观察对比多次。
如对照管凝固时,接种管液化为阳性反应,凝固为阴性反应明胶培养基成分:NaCl 5g,蛋白胨10g,牛肉膏3g,明胶120g,蒸馏水1000mL。
制法:在水浴锅中将上述成分溶化,不断搅拌。
溶化后调pH 7、2~7、4,121°C 灭菌30min。
(8)石蕊牛奶得反应牛奶中主要含有乳糖与酪蛋白,在牛奶中加入石蕊就是作为酸碱指示剂与氧化还原指示剂。
石蕊在中性时呈淡紫色,酸性时呈粉红色,碱性呈蓝色,还原时则自上而下地褪色变白。
观察其产酸、产碱、胨化、酸凝固、凝乳酶凝固、还原情况。