黑曲霉生产糖化酶及酶活测定_单海艳
黑曲霉产糖化酶液态发酵条件研究
黑曲霉产糖化酶液态发酵条件研究孙继祥【摘要】The effects of additives,feeding time and feeding quantity on Saccharifying enzyme production by Aspergillus niger fermentation were investigated throug single factor test with the activity of Saccharifying enzyme as indicator.Then the effects of fermentation conditions on Saccharifying enzyme production were investigated by orthogonal experiments.The results suggested that the addition of（NH4） 2SO4 could enhance 17 % enzyme activity,the optimum feeding time was 48h,the best feeding quantity was 6 mL,feeding could prolong fermenting cycle from previous 96 h to 120 h,and the optimum fermentation conditions were 15 % inoculating quantity,50 mL liquid-filling in 250 mL triangle flask,and initial pH value as 4.5.%以糖化酶活力为指标,通过单因素实验,分别考察了添加物、补料时间和补料量对黑曲霉发酵产糖化酶的影响。
通过正交实验,考察了发酵条件对黑曲霉发酵产酶的影响。
两种曲霉糖化性质的比较
两种曲酶糖化性质的比较研究在国内传统的制酒行业中，由于黑曲霉含有丰富的酶系如液化酶、糖化酶、纤维素酶和蛋白酶等，自70年代大多都由米曲霉改为黑曲霉作糖化用菌种。
但在日本迄今仍在采用米曲霉做糖化菌，说明其中必有原因。
鉴于此，本实验以黑曲霉和米曲霉为研究对象，研究比较它们的液化酶和糖化酶（葡萄糖淀粉酶）生产性质。
黑曲霉是一种常见的真菌, 属于半知菌类曲霉属。
黑曲霉对营养要求较低, 只要培养基中含有碳源、氮源及磷、钾、镁、硫等元素即能生长良好。
黑曲霉可以产生许多种酶, 现已成为工业应用常见的菌种之一。
根据bigelis1989年的统计, 25种主要商品酶制剂中就有15种来源于黑曲霉仁, 。
它们分别是α-淀粉酶、过氧化氢酶、纤维素酶、葡萄糖酶、糖化酶、葡萄糖氧化酶、半纤维素酶、橙皮昔酶、脂肪酶、果胶酶、蛋白酶、单宁酶。
美国准许使用的食品工业用酶生产菌种只有黑曲霉、酵母、枯草杆菌等约20种, 其中以黑曲霉所产酶类最多。
我国酶制剂工业生产用菌种中, 黑曲霉占了17种中3种, 即黑曲霉变异株和,它们分别用于糖化酶、果胶酶和酸性蛋白酶的生产[1]。
黑曲霉酶类在工业上具有重要的作用, 例如, 柠檬酸等有机酸的发酵生产、食品及饮料加工以及用于轻化工业、纺织工业、饲料加工和废物的处理等等。
总之, 黑曲霉生产的酶制剂具有用量大、应用范围广、安全性好的特点, 已愈来愈受到人们的重视。
米曲霉的菌丝由多细胞组成，是一类产复合酶的菌株，除产蛋白酶外，还可产淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶等。
在淀粉酶的作用下，将原料中的直链、支链淀粉降解为糊精及各种低分子糖类，如麦芽糖、葡萄糖等；在蛋白酶的作用下，将不易消化的大分子蛋白质降解为蛋白胨、多肽及各种氨基酸，而且可以使辅料中粗纤维、植酸等难吸收的物质降解，提高营养价值、保健功效和消化率，广泛应用于食品、饲料、生产曲酸、酿酒等发酵工业。
1 材料与方法1．1材料菌种：黑曲霉UV-48；米曲霉-41．2培养基种子培养基（土豆汁培养基；察式培养基）；发酵培养基（麸皮培养基；液体深层发酵液）1．3试剂1．33%可溶性淀粉；碘液；0.01MNacl-HAC缓冲液；6NHCL；DNS试剂；葡萄糖标准溶液1．4实验仪器电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司，DK-8D）；721型分光光度计（上海欣茂仪器有限公司，2C409035）；立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂，LDZX-75KB)；恒温培养箱(上海实验仪器厂有限公司，DHP060)；气浴恒温摇床（太仓市实验设备厂，TCYQ）。
黑曲霉F5产高温α-糖化酶酶学性质及产酒精能力研究
黑曲霉F5产高温α-糖化酶酶学性质及产酒精能力研究常吕珍;杨云娟;张润美;李万军;牟兴玲;黄遵锡;唐湘华【摘要】α-glucoamylase, the metabolite of Aspergillus niger F5, its enzymatic properties were investigated in this study. The experimental re-sults showed that, its optimum reaction temperature was 65℃, its best reaction pH was 5.0, the half-life of enzymatic thermal stability was 2.67 min at 80℃;in enzymatic kinetics, Km value was 0.836 mg/mL, and Vmax value was 2.255 mmoL/L·min. Saccharification experiments showed that saccharification rate was 67.5%for 1%starch concentration in optimum reaction conditions after 55 min. In alcohol-producing ca-pacity test, the ratio of sorghum material to water was 1∶3, 30 IU/g glucoamylase was added at 65℃and pH 5.0. After 20 h hydrolysis and cooling, 1%liquidS.cerevis iae was inoculated, and then cultivated for 9 d at 28℃. Finally, the alcohol concentration was 19.6%vol/60 g (dry substance), and liquor yieldof sorghum materials reached up to 32.2%(v/w).%通过对黑曲霉F5的代谢产物糖化酶进行了酶学性质的研究，实验结果表明，该酶的最适反应温度为65℃，最适反应pH值为5.0。
黑曲霉β-甘露聚糖酶的纯化和活力测定试验指导
黑曲霉β-甘露聚糖酶的纯化和活力测定实验指导（综设实验）一．实验目的及要求1、掌握黑曲霉ASP.Niger的固体发酵工艺2、掌握粗酶浸提、硫酸铵分级沉淀的原理和操作3、掌握透析原理、脱盐及透析袋的处理方法和使用4、掌握β-甘露聚糖水解各种甘露聚糖之间β-糖苷键的机制和理论5、掌握以魔芋精粉为底物DNS光度法（3,5－二硝基水杨酸法）测定发酵制品中β-甘露聚糖酶活力的操作方法二．实验原理1、微生物的β-甘露聚糖酶都是诱导酶，只有在培养基中含有β-甘露聚糖时才进行β-甘露聚糖酶的合成，产酶最适培养基除需要一定的碳氮源，还加入一定诱导物魔芋粉。
2、硫酸铵分级沉淀（盐析）原理中性盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化层逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出。
3、透析原理、脱盐：酸性β-甘露聚糖酶相对分子质量为39000和40000，选择MWCO（切割分子量或截留分子量）14000的透析袋，透过掉分子量小于10000的蛋白质；并借助分子扩散脱盐。
4、DNS光度法测定还原糖：β-甘露聚糖酶能水解含β-1，4甘露糖苷键的甘露多糖（包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡萄甘露聚糖等），以魔芋精粉为底物主要得到含还原性端基的甘露寡糖，还原性端基与DNS试剂共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈棕（桔）红色，在520nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量，由此测定出酶的活力。
三．实验试剂和器材菌种：黑曲霉(Aspergillus niger)JXW12-1，生物工程发酵实验室保藏。
斜面培养基:马铃薯20.0%，蔗糖2.0%，琼脂 2.0%，pH自然，此培养基用于菌种保藏、斜面种子和平板分离。
二级种子培养基：250 mL三角瓶装麸皮10g，水12mL，121℃灭菌30 min；接种一菌耳斜面种子，32±1℃静置培养96h，其间翻曲2～3次。
黑曲霉糖化酶热稳定性的研究
黑曲霉糖化酶热稳定性的研究
陈冠军;罗贵民
【期刊名称】《生物工程进展》
【年(卷),期】1990(010)003
【摘要】本文报导了黑曲霉糖化酶三种同工酶的相似的热稳定性。
活力测定表明,糖化酶在60℃时易失活,三个同工酶的半衰期分别是GⅠ30’,GⅡ48.,GⅢ80’;而对40℃和50℃则有较强的抗性,但其活力曲线呈现复杂的变化,显示出在一定时间内,温热可以诱导酶活提高。
紫外吸收及紫外差示光谱表明,在热处理过程中引起了
酶分子的构象变化。
本文还对酶分子的构象及活力变化的关系进行了探讨。
糖化
酶(glucoamylase EC.3.2.1.3)水解淀粉为葡萄糖,是食品酿造工业的重要用酶之一。
我们已经从黑曲霉AS.3.4.309变异株B-11发酵液中分离提纯了三种糖化酶的同
工酶(1),并对其基本性质进行了研究。
本文主要对黑曲霉糖化酶的热稳定性作了进
一步的探讨。
【总页数】6页(P29-33,16)
【作者】陈冠军;罗贵民
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】Q81
【相关文献】
1.响应面法优化高产糖化酶的黑曲霉突变菌株制备糯米酒酒曲工艺研究 [J], 崔敬爱;邵智韬;徐岩;戴碧玮;庄若岩;曹勇;陈海燕;陈晓平
2.黑曲霉高产糖化酶的分子水平研究方法概论 [J], 杨丽娟;余少文
3.产高活性糖化酶黑曲霉的筛选工艺研究 [J], 沈奕
4.黑曲霉液态发酵产糖化酶条件的研究 [J], 梁绍勋;梁金辉;蒋军;王录
5.黑曲霉糖化酶基因表达调控的研究：I.高产及低产菌株糖化酶表达… [J], 乔殿华;唐国敏
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黑曲霉发酵产β-糖苷酶培养基的优化
黑曲霉发酵产β-糖苷酶培养基的优化唐开宇;张全;尹佩林;佟明友【期刊名称】《造纸科学与技术》【年(卷),期】2009(28)1【摘要】本实验采用黑曲霉发酵产β-糖苷酶。
应用单因素实验确定最佳碳源为玉米芯,最佳氮源为酵母粉.然后用Plackett—Burman实验设计,筛选出两个显著影响的因素:玉米芯,酵母粉。
再用响应曲面法对主要影响因子进行各因子水平及其交互作用优化与评价,并利用SAS软件对该模型进行求解。
当各因素分别为玉米芯21.35g/L,酵母粉12.5g/L,pH5.0,KH2PO42g/L,MgSO40.3g/L,CaCl20.3g/L,微量元素:FeSO45mg/L,MnSO41.6mg/L,ZnSO41.0mg/L,发酵液酶活为2.46 U/mL,比原来提高50.92%。
【总页数】4页(P28-31)【关键词】β-葡萄糖苷酶;黑曲霉;Plackett-Burman法;响应面法;优化【作者】唐开宇;张全;尹佩林;佟明友【作者单位】中国石油化工股份有限公司抚顺石油化工研究院【正文语种】中文【中图分类】Q814【相关文献】1.培养基组成及发酵条件对黑曲霉变种产α-半乳糖苷酶的影响 [J], 许尧兴;李艳丽;许少春;柳永;姚晓红2.黑曲霉液体发酵产α-半乳糖苷酶发酵条件优化 [J], 曾庆华;陈利梅;李德茂3.航天诱变黑曲霉ZM-8发酵玉米秸秆粉产β-葡萄糖苷酶的培养基组分优化 [J], 马旭光;张宗舟;霍建泰;赵国婵;柳芸4.黑曲霉ZJUQH产α-半乳糖苷酶的固体发酵培养基优化研究 [J], 徐腾洋;方若思;董亚晨;陈启和5.黑曲霉产β-葡萄糖苷酶发酵培养基的优化研究 [J], 朱凤妹;李军;杜彬;刘长江因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
两种曲霉糖化性子的比较
两种曲酶糖化性质的比较研究在国内传统的制酒行业中，由于黑曲霉含有丰富的酶系如液化酶、糖化酶、纤维素酶和蛋白酶等，自70年代大多都由米曲霉改为黑曲霉作糖化用菌种。
但在日本迄今仍在采用米曲霉做糖化菌，说明其中必有原因。
鉴于此，本实验以黑曲霉和米曲霉为研究对象，研究比较它们的液化酶和糖化酶（葡萄糖淀粉酶）生产性质。
黑曲霉是一种常见的真菌, 属于半知菌类曲霉属。
黑曲霉对营养要求较低, 只要培养基中含有碳源、氮源及磷、钾、镁、硫等元素即能生长良好。
黑曲霉可以产生许多种酶, 现已成为工业应用常见的菌种之一。
根据bigelis1989年的统计, 25种主要商品酶制剂中就有15种来源于黑曲霉仁, 。
它们分别是α-淀粉酶、过氧化氢酶、纤维素酶、葡萄糖酶、糖化酶、葡萄糖氧化酶、半纤维素酶、橙皮昔酶、脂肪酶、果胶酶、蛋白酶、单宁酶。
美国准许使用的食品工业用酶生产菌种只有黑曲霉、酵母、枯草杆菌等约20种, 其中以黑曲霉所产酶类最多。
我国酶制剂工业生产用菌种中, 黑曲霉占了17种中3种, 即黑曲霉变异株和,它们分别用于糖化酶、果胶酶和酸性蛋白酶的生产[1]。
黑曲霉酶类在工业上具有重要的作用, 例如, 柠檬酸等有机酸的发酵生产、食品及饮料加工以及用于轻化工业、纺织工业、饲料加工和废物的处理等等。
总之, 黑曲霉生产的酶制剂具有用量大、应用范围广、安全性好的特点, 已愈来愈受到人们的重视。
米曲霉的菌丝由多细胞组成，是一类产复合酶的菌株，除产蛋白酶外，还可产淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶等。
在淀粉酶的作用下，将原料中的直链、支链淀粉降解为糊精及各种低分子糖类，如麦芽糖、葡萄糖等；在蛋白酶的作用下，将不易消化的大分子蛋白质降解为蛋白胨、多肽及各种氨基酸，而且可以使辅料中粗纤维、植酸等难吸收的物质降解，提高营养价值、保健功效和消化率，广泛应用于食品、饲料、生产曲酸、酿酒等发酵工业。
1 材料与方法1．1材料菌种：黑曲霉UV-48；米曲霉-41．2培养基种子培养基（土豆汁培养基；察式培养基）；发酵培养基（麸皮培养基；液体深层发酵液）1．3试剂1．33%可溶性淀粉；碘液；0.01MNacl-HAC缓冲液；6NHCL；DNS试剂；葡萄糖标准溶液1．4实验仪器电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司，DK-8D）；721型分光光度计（上海欣茂仪器有限公司，2C409035）；立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂，LDZX-75KB)；恒温培养箱(上海实验仪器厂有限公司，DHP060)；气浴恒温摇床（太仓市实验设备厂，TCYQ）。
黑曲霉生产糖化酶及酶活测定
第19卷 第7期 牡丹江大学学报 Vol.19 No.7 2010年7月 Journal of Mudanjiang University Jul. 201092 文章编号：1008-8717（2010）07-0092-03黑曲霉生产糖化酶及酶活测定单 海 艳（牡丹江大学，黑龙江 牡丹江 157000）摘 要：本文对黑曲霉突变株Uv11－48生产糖化酶液体深层发酵进行了全程生产工艺的研究，证实了黑曲霉突变株是一种产孢力强、抗污染能力强、易培养的糖化酶生产菌，经液体深层通风发酵可得出：只要充分利用突变株的有利条件，掌握好菌种特性，合理配制营养，控制好发酵条件，便可获得高酶活力的高产糖化酶。
本实验还运用了几种酶活力测定方法，以资进行优劣探讨。
关键词：黑曲霉；液体通风发酵；糖化酶；酶活力 中图分类号：Q-331 文献标识码：B 一、前言（一）黑曲霉菌种特性 1．黑曲霉的分类地位黑曲霉在分类学上处于：真菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丛梗孢科、曲霉属、黑曲霉群，拉丁学名：Aspergillus niger 。
2．黑曲霉形态、生理、生态特性孢子头呈暗黑色，菌丝体由具横隔的分枝菌丝构成，菌丝黑褐色，顶囊球形，小梗双层，分生孢子球形，平滑或粗糙。
一般进行无性生殖，其可育细胞称足细胞。
3．黑曲霉突变株的形态、生理、生态、特征 在查氏培养基上菌落曲型为炭黑色，有辐射沟纹，从菌落边缘向中心，分化为伸长部位，活性部位，成熟部位，老化部位几个区域即孢子萌发最早出现于中心部位是伸展部位，并逐渐形成密生部位，分生孢子部位，最后在中心出现的是成熟部位，菌落背面无色或稍黄。
（二）糖化酶的分类、地位、性质及用途 1．糖化酶在国际酶学委员会，在系统命名法中的地位糖化酶是淀粉酶，在系统命名法中属水解酶类。
2．糖化酶的性质糖化酶（glucamylase ）又名糖化型淀粉酶（glueoamylase ）或淀粉葡萄糖苷酶。
其系统名称为淀粉α1.4-葡萄聚糖水解酶。
黑曲霉诱变产糖化酶
诱变黑曲霉提高糖化酶的生物合成摘要现今，筛选黑曲霉主要通过物理和化学突变。
用溴化乙錠和甲基磺酸乙脂（EMS）轮流处理亲代菌株。
这株突变菌株M4能产生更多的糖化酶。
简介糖化酶时淀粉工业中最重要的一种酶。
它能将淀粉水解成葡萄糖。
葡萄糖在各种食品行业中是一种必要的合成原料。
糖化酶广泛地应用于酿造，造纸，食品，制药，纺织行业中。
黑曲霉通过液态或固态发酵生产糖化酶中，食物残渣也能被利用到。
同时，食物残渣也能用于葡萄糖和啤酒行业中。
糖化酶是一种微生物的胞外酶，并且，它典型的性质是水解a-1，4和a-1，6糖苷键，通过其他酶作用于淀粉合成糖类。
糖化酶能水解非还原端的a-1，4葡萄糖苷键。
糖化酶能被成倍的生成，通过引起野生菌株突变。
据报道，黑曲霉的突变菌株能更好地生产糖化酶。
这种黑曲霉菌株能被紫外线照射或者化学的方法诸如N-甲基，N-硝基，N-亚硝基胍，硫酸二甲脂，甲基磺酸乙脂，溴化乙錠和亚硝酸来引诱突变，提高糖化酶产量。
突变菌株产糖化酶的特性能更好地影响对生淀粉的处理。
生产糖化酶的突变菌株在r-射线的处理下，亲代菌株的特性被改善并且产物乙醇的产量也被提高了。
这个突变黑曲霉是用联合诱变处理的，它产的糖化酶能将麦芽糊精转变为葡萄糖。
多重的轮流突变对葡萄糖的生成有着很好的影响。
糖化酶的比活度和它的热稳定性被提高。
并且，结果通常是提高葡萄糖产量。
对比几种黑曲霉突变株的酶产量和它们的特性，相比于野生株，突变株能更高水平地生产糖化酶。
但是，不管使用怎样的菌株，对所有糖化酶来说，酶的组成和特性都是类似的。
Britly进行本研究的目的是为了证明以小颗粒的形式增长有利于糖化酶生产，而大颗粒的形式则降低了糖化酶的生产量，导致结果不匹配。
现今研究这些的目的是为了激发菌株的潜能，通过化学或者无力突变来增加糖化酶的产量。
原料和方法改善菌株：黑曲霉能通过紫外线和诱变剂得以改善。
用溴化乙錠和甲基磺酸乙脂轮流处理亲代菌株。
两种诱变剂同时使用。
黑曲霉糖化酶和木聚糖酶基因在工业用酿酒酵母中的共表达
黑曲霉糖化酶和木聚糖酶基因在工业用酿酒酵母中的共表达李海燕;毛爱军;何永志;董志扬
【期刊名称】《菌物学报》
【年(卷),期】2004(23)4
【摘要】构建了黑曲霉糖化酶、木聚糖酶基因双表达的酵母YIp型载体pNEW4,通过与G418抗性质粒共转化,将糖化酶和木聚糖酶基因表达元件整合到多倍体酒精生产用酵母S.cerevisiae2.346染色体上,获得了整合型分泌表达这两种酶的工业酿酒酵母工程菌株GX11,研究了重组糖化酶和木聚糖酶在酵母工程菌中的表达及性质.
【总页数】8页(P494-501)
【作者】李海燕;毛爱军;何永志;董志扬
【作者单位】中国科学院微生物所,北京,100080;中国科学院微生物所,北
京,100080;中国科学院微生物所,北京,100080;中国科学院微生物所,北京,100080【正文语种】中文
【中图分类】Q939.97
【相关文献】
1.黑曲霉糖化酶基因克隆及在酿酒酵母中的表达 [J], 刘加爱;陈蕾;林元山;张小鹃;邹洪彬;张学文
2.黑曲霉糖化酶基因在酿酒酵母基因组中的整合及其在整合子中的稳… [J], 唐国敏;杨开宇
3.黑曲霉酸性α-淀粉酶基因和糖化酶基因对工业酒精酵母的整合及其共表达 [J],
王海燕;秦浚川;王敖全;唐国敏
4.黑曲霉糖化酶基因在酿酒酵母中的表达 [J], 钱鹏;汤斌
5.黑曲霉糖化酶基因在酿酒酵母中的表达 [J], 钱鹏;汤斌
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黑曲霉固态发酵产糖化酶的研究
产高活性糖化酶黑曲霉的筛选工艺研究
1 实验材料
1.1 实验原料及试剂
本实验室保藏的菌株；试剂均为分 析纯，由中科生物工程有限公司提供。 1.2 培养基
筛选培养基：硝酸钠 0.3%、硫酸 亚铁 0.001%、硫酸镁 0.05%、磷酸氢 二钾 0.1%、氯化钾 0.05%、蔗糖 3%、 玉 米 淀 粉 1.0%、 琼 脂 1.5% ～ 2%， 自然 pH。
关键词：突变株；酶活力；筛选
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
黑曲霉（Aspergillus niger）属于 子囊菌门，散囊菌纲，散囊菌目，发 菌科，曲霉属的一种丝状真菌，由于 其强大的蛋白分泌能力，已被广泛应 用于发酵工业中 [1]。
糖 化 酶 属 于 糖 苷 水 解 酶 类 蛋 白， 大多数动植物以及微生物都能在细胞中 合成糖化酶，其中真核微生物如丝状真 菌和酵母菌由于在生产和分泌方面的优 势使其成为微生物生产糖化酶的重要来 源 [2]。从 20 世纪 50 年代开始，已有大 量关于黑曲霉产糖化酶的研究 [3]。
子都已死亡。 选取透明圈 / 菌株比值直接最大
的 菌 株（ 紫 外 线 照 射 11 min）， 保 存，命名为 SK-2。与最初菌株进行摇 瓶对照实验，结果表明 SK-2 比原菌株 的产酶能力提高 10.8%，摇瓶活力达 2 604.2 U/mL。
3.2.2 DES 诱变 测 量 后， 计 算 比 值。 诱 变 0~ 15 min 时，随时间的增加，致死率上升； 在 20 min 以后，致死率达到 87% 左 右。选取致死率在 70%~80%、透明圈 / 菌株比值直接最大的菌株（DES 诱变 处理 15min），说明诱变效果最好， 突 变 菌 株 产 酶 最 多， 保 存， 命 名 为 SK-3。与最初菌株进行摇瓶对照实验， 结果表明 SK-3 比原菌株的产酶能力提 高 9%，摇瓶活力达 2 562.0 U/mL。 3.2.3 遗传稳定性实验 由测定结果可知，经过 8 次传代实 验以后，突变菌株的 8 代所表现的产酶 能力较为稳定，测得的酶活在 2 336~ 2 773 U/mL。其中第 6 代菌株的酶活最 高，为 2 773 U/mL，与最初菌株进行 摇瓶对照实验，结果表明比原菌株的产 酶能力提高 17.98%，命名为 SK-4。
黑曲霉诱变产糖化酶
诱变黑曲霉提高糖化酶的生物合成摘要现今，筛选黑曲霉主要通过物理和化学突变。
用溴化乙錠和甲基磺酸乙脂（EMS）轮流处理亲代菌株。
这株突变菌株M4能产生更多的糖化酶。
简介糖化酶时淀粉工业中最重要的一种酶。
它能将淀粉水解成葡萄糖。
葡萄糖在各种食品行业中是一种必要的合成原料。
糖化酶广泛地应用于酿造，造纸，食品，制药，纺织行业中。
黑曲霉通过液态或固态发酵生产糖化酶中，食物残渣也能被利用到。
同时，食物残渣也能用于葡萄糖和啤酒行业中。
糖化酶是一种微生物的胞外酶，并且，它典型的性质是水解a-1，4和a-1，6糖苷键，通过其他酶作用于淀粉合成糖类。
糖化酶能水解非还原端的a-1，4葡萄糖苷键。
糖化酶能被成倍的生成，通过引起野生菌株突变。
据报道，黑曲霉的突变菌株能更好地生产糖化酶。
这种黑曲霉菌株能被紫外线照射或者化学的方法诸如N-甲基，N-硝基，N-亚硝基胍，硫酸二甲脂，甲基磺酸乙脂，溴化乙錠和亚硝酸来引诱突变，提高糖化酶产量。
突变菌株产糖化酶的特性能更好地影响对生淀粉的处理。
生产糖化酶的突变菌株在r-射线的处理下，亲代菌株的特性被改善并且产物乙醇的产量也被提高了。
这个突变黑曲霉是用联合诱变处理的，它产的糖化酶能将麦芽糊精转变为葡萄糖。
多重的轮流突变对葡萄糖的生成有着很好的影响。
糖化酶的比活度和它的热稳定性被提高。
并且，结果通常是提高葡萄糖产量。
对比几种黑曲霉突变株的酶产量和它们的特性，相比于野生株，突变株能更高水平地生产糖化酶。
但是，不管使用怎样的菌株，对所有糖化酶来说，酶的组成和特性都是类似的。
Britly进行本研究的目的是为了证明以小颗粒的形式增长有利于糖化酶生产，而大颗粒的形式则降低了糖化酶的生产量，导致结果不匹配。
现今研究这些的目的是为了激发菌株的潜能，通过化学或者无力突变来增加糖化酶的产量。
原料和方法改善菌株：黑曲霉能通过紫外线和诱变剂得以改善。
用溴化乙錠和甲基磺酸乙脂轮流处理亲代菌株。
两种诱变剂同时使用。
黑曲霉产β-葡萄糖苷酶培养基的优化研究
黑曲霉产β-葡萄糖苷酶培养基的优化研究
田毅红;张鑫;李德莹;龚大春
【期刊名称】《酿酒科技》
【年(卷),期】2010(000)003
【摘要】利用黑曲霉(Aspergillus Niger)固态发酵生产β-葡萄糖苷酶,采用单因素实验对发酵培养基进行初步优化.结果表明,麦麸与稻草粉比例为1:1,固体(麸皮稻草粉)与液体(营养液)比例为1:2,营养液pH值是自然值(4.44),氮源为2%硫酸铵,表面活性剂为0.1%吐温80,金属离子为1 μmo1 Mn2+,诱导物为0.1%鼠李糖,此条件下β-葡萄糖苷酶酶活较高.
【总页数】4页(P20-23)
【作者】田毅红;张鑫;李德莹;龚大春
【作者单位】三峡大学化学与生命科学院,湖北,宜昌,443003;三峡大学化学与生命科学院,湖北,宜昌,443003;三峡大学化学与生命科学院,湖北,宜昌,443003;三峡大学化学与生命科学院,湖北,宜昌,443003
【正文语种】中文
【中图分类】Q93-3;TQ925;Q814
【相关文献】
1.黑曲霉ZJUQH产α-半乳糖苷酶的固体发酵培养基优化研究 [J], 徐腾洋;方若思;董亚晨;陈启和
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黑曲霉液态发酵产糖化酶条件的研究
３ ． Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ Ｓ ｏ ｌ ｉ ｄ － ｓ ｔ ａ ｔ ｅ ｆ ｅ ｒ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｉ ｒ ｎ ｇ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｙ ｇ Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ， Ｂ ｏ ｚ ｈ ｏ ｕ ， Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ ２ ３ ６ ８ ２ ０ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
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葡 萄糖 淀 粉 酶简 称 糖化 酶 ， 可 水 解 淀粉 、 糊精 、
黑 曲霉 。 １ ． １ ． ２ 实验 试剂 可 溶 性 淀粉 、 葡 萄糖 、 酵母 膏 、 琼脂 、 蛋 白胨 、 硫 酸铜 、 次 甲基蓝 、 亚铁 氰 化钾 、 氢 氧 化钠 、 硫 酸亚 铁 、
１ ． １ － ３实验 主要 仪 器 恒 温培 养箱 、 立 式 自动 电热压力 蒸 气灭 菌 锅 、 数
糖原等物质 ， 产物为葡萄糖 。 在工业发酵生产酒精、 有机酸 、 氨基酸等过程中淀粉液化后 的糖化酶作用
黑曲霉葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究
黑曲霉葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究常军;周斌;胡娜【摘要】[ Objective ] The study aimed to isolate the exocellular β-glucosidase from Aspergillus niger that could hydrolyze the swertiamarin and research its molecular weight, optimal catalytic temperature, optimal pH, stability and catalytic characteristics. [ Method ] The A. niger liquid was fermented for 3 d and then its culture liquid was collected. After the culture liquid was made through the salting out and column separation, a β-glucosidase was gained. [ Result] The β-glucosidase had the molecular weight of 86 kD, the optimal pH of 5.0 -6.0, the optimal reaction temperature of 50 -60 ℃ and showed stable at below 60 ℃. TheCa2+ ,Zn2+ , Fe3+ and Cu2+ could restrain the activity of the βglucosidase and the Mg2+ and Mn2+ could activate its activity. Cellobiose was the optimal catalytic substrate of β-glucosidase. [ Conclusion] This enzyme, similar to the most A. niger from the fungi, showed the weak affinity to the swertiamarin and the strong affinity to p-NPG.%[目的]分离能水解獐牙菜苦苷的胞外β-葡萄糖苷酶,并研究其分子量、最适催化温度、最适pH、稳定性及催化特征.[方法]黑曲霉液体发酵3 d,收集培养液,培养液经盐析、柱分离得到1个β-葡萄糖苷酶.[结果]该β-葡萄糖苷酶的分子量的86 kD,最适pH为5.0～6.0,最适反应温度为50～60℃,在60℃以下时酶稳定;Ca2+、Zn2+、Fe3+和Cu2+能抑制β-葡萄糖苷酶的活性,而Mg2+和Mn2+能够激活β-葡萄糖苷酶的活性;纤维二糖是该β-葡萄糖苷酶的最适催化底物.[结论]该酶和大多数真菌来源黑曲霉相似,对獐牙菜苦苷的亲和性弱,对p-NPG的亲和力强.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)019【总页数】4页(P11374-11376,11379)【关键词】黑曲霉;β-葡萄糖苷酶;分离;纯化【作者】常军;周斌;胡娜【作者单位】江西科技师范学院生命科学学院,江西,南昌,330038;江西科技师范学院药学院,江西,南昌,330038;江西科技师范学院生命科学学院,江西,南昌,330038【正文语种】中文【中图分类】S188β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase，EC3.2.2.21)又称β-D-葡萄糖苷酶，属于纤维素酶类。
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第19卷 第7期 牡丹江大学学报 Vol.19 No.7 2010年7月 Journal of Mudanjiang University Jul. 201092 文章编号：1008-8717（2010）07-0092-03黑曲霉生产糖化酶及酶活测定单 海 艳（牡丹江大学，黑龙江 牡丹江 157000）摘 要：本文对黑曲霉突变株Uv11－48生产糖化酶液体深层发酵进行了全程生产工艺的研究，证实了黑曲霉突变株是一种产孢力强、抗污染能力强、易培养的糖化酶生产菌，经液体深层通风发酵可得出：只要充分利用突变株的有利条件，掌握好菌种特性，合理配制营养，控制好发酵条件，便可获得高酶活力的高产糖化酶。
本实验还运用了几种酶活力测定方法，以资进行优劣探讨。
关键词：黑曲霉；液体通风发酵；糖化酶；酶活力 中图分类号：Q-331 文献标识码：B 一、前言（一）黑曲霉菌种特性 1．黑曲霉的分类地位黑曲霉在分类学上处于：真菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丛梗孢科、曲霉属、黑曲霉群，拉丁学名：Aspergillus niger 。
2．黑曲霉形态、生理、生态特性孢子头呈暗黑色，菌丝体由具横隔的分枝菌丝构成，菌丝黑褐色，顶囊球形，小梗双层，分生孢子球形，平滑或粗糙。
一般进行无性生殖，其可育细胞称足细胞。
3．黑曲霉突变株的形态、生理、生态、特征 在查氏培养基上菌落曲型为炭黑色，有辐射沟纹，从菌落边缘向中心，分化为伸长部位，活性部位，成熟部位，老化部位几个区域即孢子萌发最早出现于中心部位是伸展部位，并逐渐形成密生部位，分生孢子部位，最后在中心出现的是成熟部位，菌落背面无色或稍黄。
（二）糖化酶的分类、地位、性质及用途 1．糖化酶在国际酶学委员会，在系统命名法中的地位糖化酶是淀粉酶，在系统命名法中属水解酶类。
2．糖化酶的性质糖化酶（glucamylase ）又名糖化型淀粉酶（glueoamylase ）或淀粉葡萄糖苷酶。
其系统名称为淀粉α1.4-葡萄聚糖水解酶。
糖化酶是一种胞外外切酶，但其专一性低，主要是从淀粉链的非还原性末端切开α-1.4-键。
一般淀粉水解程度达80％。
（1）糖化酶中糖和蛋白组成糖化酶是一种糖蛋白，通常碳水化合物占4%-18％，这些碳水化合物主要是半乳糖、葡萄糖、葡萄糖胺和甘露糖，糖化酶残基的排列在其热和酸碱稳定性上有特殊意义。
（2）糖化酶组分多型性真菌产生的糖化酶组分多型性是常见的，市售的糖化酶中可分离出葡萄糖酶І和葡萄糖酶И两种组分。
而市售黑曲霉生产的糖化酶曾分离出六种活性组分，每种均可从可溶性淀粉中释放出单一的β-D-葡萄糖。
这六种组分的分子量，沉淀系数，化学组分，等电点，酶的动力学及其它性质各异。
培养基成分和的生产条件对糖化酶组分多型性也有影响，天然糖化酶在微生物培养或酶的制备过程中可能受葡萄糖苷酶和蛋白酶的作用而成多型性的酶类。
（3）糖化酶的热稳性工业用的糖化酶都是利用它的热稳性，α-环状糊精可提高糖化酶的热稳性，最适温度范围一般为50℃～60℃。
（4）从酶PH 稳定性上看： 糖化酶具较宽的PH 值适应范围，但最适PH 为4-5。
（5）Ca 离子与酶结合后可使结构变得松散些，更有利于催化反应。
（6）糖化酶与底物亲和性收稿日期：2009-11-26作者简介：单海艳（1977—），女，牡丹江大学化工系讲师，研究方向：生物教学。
DOI:10.15907/ki.23-1450.2010.07.036糖化酶是将麦芽糖糊精转化为D-葡萄糖，底物水解速度主要受底物分子的大小及结构影响。
同时也受水解碳链序列中F一个键的影响，碳链越来越大。
其最大反应速度随底物碳链的增长而增加，呈线性变化。
3．糖化酶的用途主要用途是作淀粉糖化剂。
在食品工业制造葡萄糖、麦芽糖、糊精糖浆和直链淀粉薄膜，改善面色质地，加工蔬菜、制造菜汁、菜泥。
在发酵工业方面与α-淀粉一起还广泛用在谷氨酸、柠檬酸发酵生产中，作为淀粉原料，代替了麦芽和液体，提高了淀粉利用率。
在我国，糖化酶还用于处理原理，水解棉中的低聚糖，减少棉纤维的粘缠以利于纺纱。
二、材料与方法（一）材料：菌种：黑曲霉仪器：恒温培养箱 离心机 水浴锅恒温液体振荡培养器小型液体发酵罐分光光度计等试剂：链霉素 0.1%苯甲酸钠乳酸氢氧化钠硫酸铵等（二）方法液体深层发酵工艺流程：试管斜面菌种→种子扩大培养→液体深层通风发酵→过滤→离心→干燥→粗酶制剂→酶活测定配方：斜面种子培养基：蔗糖30g 硫酸铵3g 磷酸氢钾1g 硫酸镁0.5g 硫酸铁0.01g 水 1000 ml 琼脂2% 液体摇瓶扩大培养基：玉米面4％，豆饼粉3％麦麸1% Kcl 0.5g 水1000ml自然PH通风恒温液体深层通风发酵培养基：玉米粉10% 豆饼粉4%麦麸1%水1000ml PH 4.51．粗酶提取发酵液→过滤→盐析→固形物→烘干→加入淀粉添充剂→磨粉→粗酶制剂。
2．酶活力测定酶活力测定方法（一）钢圈法：5ml3%琼脂倒皿 →再加5ml 可溶性淀粉与3% 琼脂→放入三个灭过菌的钢圈 分别滴入不同浓度的酶液→定期测定透明圈直径。
（二）比色法：10ml 20%可溶性淀粉 5ml柠檬酸 PH4.8（对照不加酶液，处理加1ml） 加1ml 10%NaOH终止反应，对照补加1ml酶液→滤纸过渡→比色。
三、结果与讨论（一）结果1．钢圈实验结果如下表：糖化酶钢圈测试时间 编号 1cm 2cm 3cm 平均值23日8：101号（原液） 1.365 1.365 1.340 1.35723日8：102号（稀释1倍） 1.320 1.290 1.270 1.29023日8：103号（稀释2倍） 1.170 1.165 1.165 1.16723日11：101号（原液） 1.4555 1.475 1.475 1.46323日11：102号（稀释1倍） 1.340 1.380 1.380 1035523日11：103号（稀释2倍） 1.315 1.365 1.325 1.33523日16：001号（原液） 1.460 1.525 1.500 1.49523日16：002号（稀释1倍） 1.365 1.370 1.385 1.37323日16：003号（稀释2倍） 1.220 1.26.0 1.255 1.24524日8：301号（原液） 1.760 1.765 1.760 1.76224日8：302号（稀释1倍） 1.375 1.470 1.400 1.41224日8：303号（稀释2倍） 1.300 1.350 1.325 1.3262．DNS测定结果如下表糖化酶酶活测定反应时间含糖酶解产糖 CK 处理 CK 处理比色反应 Ehr 10 min 0.094 0.25 0.480 1.219 0.738 8.368 50.21 30min 0.041 0.338 0.229 1.635 1.406 23.89 47.79 平 均49（二）分析本实验得到酶活性一般，分析原因如下：1．发酵当中，基质粘度过大，菌丝发生球结，这是通气不足的原因，因通气不足，氧的含量较低，造成代谢不彻底，有机酸积累，PH始终降低，正常发酵，应是PH先下降然后开始回升，结束发酵。
932．原材料当中的玉米粉可能染有杂菌，原材料的营养成份肯定有一定变化，杂生产过程中所产生的代谢物对发酵可能有一定的影响，本实验没有做检测，在此提出有待于进一步探讨。
3．糖化酶是诱导酶。
淀粉能诱导酶的形成，培养基中淀粉浓度与糖化酶的酶活及糖化酶的mRNA含量成正相关，在培养基中适当提高培养基中淀粉含量，可以增加产酶的量，酶活也有所提高。
本实验没有添加任何诱导物。
4．适当浓度的钙离子对加强酶活力，保护酶有一定的作用，在发酵过程中加产酶促进剂，如：吐温-80与可促进产酶。
5．在发酵过程中有杂菌污染，曾用链霉素加以控制。
以上几项对酶活力和酶量有着直接或间接的影响，当然在实验操作过程中，一些人为的因素，人为的误差对实验也有一定影响。
四、小结用液体深层发酵生产糖化酶，由于黑曲霉具很强的抗污染力，生产力强，易培养，所以菌种培养条件一般很好控制，不会受到污染，而发酵条件难以控制。
这正是提高酶活的关键。
据中科院研究认为，酶的形成时刻与培养时间无关，而与培养基的PH变化有关，只有当PH从3.0回升时才能开始检测出酶活力，PH回升到4.5以后酶开始大量形成。
参考文献：[1]郭勇.酶工程.科学出版社，2004.[2]尹光琳.发酵工业全书.中国医药科技出版社，1992.（上接77页）这套理论，运用了早期转换生成语法中的“核心句”的概念，打破了传统句法的束缚，使用更能反映词与词深层关系的分词法，彻底抛弃了传统语法中词性（parts of speech）对译者的禁锢，使用符合同构现象翻译中表面的差异可能恰恰是深层的一致。
换句话说，一个符号从一个体系中搬到另一个体系中保留原来的面貌虽然在表面看是忠于原有的符号，但实际上可能恰恰背叛了原来的符号。
将2从2-4-8这一体系中拿出来，放到16-32-64这个体系中，就应该将2改成16；因为在后面一体系中能真实反映2在原来体系中价值的恰恰是16。
这样奈达建立起了一套强调目的语或者叫做强调“归化”译法的理论。
只要在20世纪80年代关注过翻译研究的人一定会发现，奈达这个名字几乎是翻译研究人员挂在嘴边的常用词，讨论翻译几乎到了言必称奈达的地步。
我们比较一下“功能对等”和“信达雅”等中国翻译标准，就会发现它们从本质上有殊途同归之妙。
尽管奈达长篇大论，引经据典，使用了语言学、符号学等概念，他得出的结论和“信达雅”、“神似”、“化境”有很多相似之处。
两者表达的角度和方法上完全不同，一个客观把握，一个微观求证，但在指导翻译实践中，基本上都是把译者往相同的方向引导。
由于奈达的理论有其不严密的地方，所以后来招来了不少批评，主要认为他的理论太宽松，容易忽略原文语言文化的特色。
如根据奈达的理论，有些文化中男子见面时要亲面颊，但西方文化在同样的场合都是握手。
因此可以说，亲面颊这一符号的功能对等物就是握手。
这一下，反对的人一定就多了，因为显然在握手和亲面颊之间存在着极大的文化差异，这么一对等，不就抹掉了原文的文化特色吗？（叶子南，2004：261）结束语：说到翻译标准，最具代表性和权威性的，莫过于严复的“信达雅”与奈达的“功能对等”了。
然而，这两个标准都有其自身的不足，不足以作为“翻译标准”的承担者。
“翻译标准”在哪里？谁能找到呢？我们期待着。
参考文献：[1]黄忠廉,李亚舒.科学翻译学[M].北京：中国对外翻译出版公司，2004.[2]刘扬,王佳娣.信达雅——箴言化高层级的翻译标准[J].湘潭大学学报，2007,(5).[3]沈云龙.梁任公近著.佛典之翻译：中卷[C].台北：文海出版社，1985.[4]叶子南.英汉翻译对话录[M].北京：北京大学出版社，2004.[5]郁达夫.读了珰生的译诗而论及于翻译[J].论语，1933, (8).[6]张培基等.英汉翻译教程[M].上海：外语教育出版社，2007.94。