乙肝疫苗的生产工艺ppt课件

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疫苗生产流程(ppt文档)

疫苗生产流程(ppt文档)

疫苗生产项目简介
一. 生产过程举例1:
发酵
纯化Ⅰ
纯化Ⅱ
灭活吸附
疫苗生产项目简介
二、生产过程举例2:
发酵 收集/灭活
加工
配制和灌装
安全/抑制有效病原体
安全/尤其产生不稳定病毒
去除杂质及所需产物特性相近 的外来物质
在辅助剂帮助下完成对大疫苗颗粒 的灭菌过滤滤
疫苗生产项目简介
• 无论一种疫苗在试验阶段是多么有效,但
点位布置:
理瓶1#;
B
灌装头2#
压塞3#;
冻干机4~5#;
0.5μ+5μ二通道, 28.3L/min,激光在线粒子计数.
采样头的安装方式
空调自控原理图
1.房间温度控制 2.房间湿度控制 3.房间压差监测 4.系统风量控制 5.高效压差报警 6.灭菌器\分装烘
洗线运行状态
FFU控制(群控方式)
连接方式:1台FFU控制器,分路网线连接现场FFU。 工作站在值班室实现控制每组FFU的启/停,无级调速,显示FFU的 运行状态及故障报警
疫苗车间自控组成
• 洁净空调自控系统 • 冷冻站自控系统 • 纯水自控系统 • 注射用水自控系统 • 在线粒子检测系统 • FFU控制系统 • 门禁监控系统 • 系统集成
自控框架图
自控网络结构
• INTERNET互联网 • 企业管理网(局域网LAN) • 工业控制网(单环工业以太网) • 现场总线(双DP,RS485 总线等型式)
如果其最终产品悬液不能稳定地储存和运 输,那么它的商业价值就会受限,面对这 一问题,人们开发了各种剂型,但目前常 用的,也是最有效的方法还是冻干,制药 企业可以将其运用到那些昂贵的、不稳定 的疫苗生物制品的生产中。

基因工程方法生产乙肝疫苗(详细参考)

基因工程方法生产乙肝疫苗(详细参考)

重组乙肝疫苗的研制生产过程、理化性质、生物学活性、临床应用国际上先后研制出了第一代血源性乙肝疫苗和第二代基因工程乙肝疫苗。

第一代乙肝疫苗主要运用乙肝病毒携带者血清中提取纯化出的的乙肝病毒表面抗原,先后经过减毒处理和添加佐剂后注入人体预防接种。

但是由于对血源性疫苗安全性存在顾虑,人们进一步着手开发第二代乙肝疫苗,也就是基因重组疫苗。

第一步是分离目的基因,获得目的DNA片段的方法主要有两种,一是直接从细胞基因组中分离,二是人工合成。

第二步是将DNA片段和载体在体外连接重组,成为重组DNA分子,多采用连接酶的方法连接。

第三步是基因克隆,即将重组体DNA分子,引进合适的宿主细胞(大肠杆菌、酵母)中增殖。

根据所用载体的不同,可选用转化(以质粒作载体时,重组体DNA分子以此种方式进入感受态的宿主细胞,以获得转化子菌落)、转染(λ噬菌体作载体时,构成的重组体DNA分子,以此种方式进入宿主细胞,可转染得到噬菌斑)、转导(λ噬菌体DNA与外源DNA组成的重组体DNA分子,与噬菌体蛋白组装成具有感染力的噬菌体颗粒,即人工包装的噬菌体颗粒,引入宿主细胞)的方法,往宿主细胞引入重组体DNA分子。

第四步是目的基因克隆的筛选与鉴定,即从大量携带重组体DNA分子的细胞中分离出带目的基因的细胞。

因为不是所有的细胞都能获得重组体DNA分子,为了获得摄取了重组体DNA分子细胞,需经筛选,才能将其与未摄取重组体DNA分子的细胞区别开来,并作进一步鉴定。

筛选含有重组体DNA分子细胞的方法,一般都是以载体DNA 及目的基因的遗传标记及分子特征为依据,并结合受体细胞的基因表型而建立起来的。

由于许多质粒都具有抗生素等药物的抗性标记,因此,在含有一定浓度抗生素的选择培养基上,可以很容易地把摄取了重组体DNA分子,因同时也获得了抗生素抗性的细胞辨认出来。

但药物筛选只是一个方面,依据它只能判断质粒载体是否进入了受体细胞,还不能确定受体细胞是否摄取了含有目的基因的重组体DNA分子。

乙肝疫苗生物制品产品制备工艺流程

乙肝疫苗生物制品产品制备工艺流程

乙肝疫苗生物制品产品制备工艺流程英文回答:Production Process of Hepatitis B Vaccine Biologics.The production process of hepatitis B vaccine biologics involves several key steps to ensure the safety, efficacy, and quality of the final product.1. Cell Culture:Yeast cells (Saccharomyces cerevisiae) are used to produce the hepatitis B surface antigen (HBsAg), which is the main component of the vaccine.The yeast cells are genetically engineered to express the HBsAg protein.The cells are cultured in a bioreactor under controlled conditions to optimize HBsAg production.2. Purification:The culture broth containing HBsAg is harvested and purified through various steps, such as:Centrifugation to remove impurities.Ultrafiltration to concentrate the HBsAg.Chromatography to separate HBsAg from other proteins.3. Inactivation (for Inactivated Vaccines):For inactivated vaccines, the purified HBsAg is chemically inactivated using formaldehyde.Inactivation ensures that the virus is not capable of causing infection while retaining its immunogenic properties.4. Adjuvantion (Optional):Adjuvants can be added to enhance the immuneresponse to the vaccine.Common adjuvants used in hepatitis B vaccinesinclude aluminum hydroxide or AS04.5. Formulation:The purified HBsAg or inactivated HBsAg isformulated into the final vaccine product.Other components, such as preservatives, stabilizers, and buffers, are added to maintain the stability andefficacy of the vaccine.6. Filling and Packaging:The formulated vaccine is filled into sterile vials, prefilled syringes, or other appropriate containers.The containers are sealed and labeled with product information.7. Quality Control:Extensive quality control tests are performed throughout the production process to ensure that the vaccine meets the required standards of safety and potency.Tests include sterility testing, potency assays, and evaluation of physical and chemical properties.中文回答:乙肝疫苗生物制品生产工艺流程。

乙肝疫苗生产发展简介 ppt课件

乙肝疫苗生产发展简介 ppt课件

低于20%
新乡华兰 少
高于20%
乙肝疫苗生产发展简介
乙肝疫苗生产发展简介
•甲基营养型酵母:以甲醇为唯一能源和
炭源的酵母。
1,多个HBsAg基因拷贝被整合到染色体中,遗 传稳定性好。
2,发酵过程中不产生乙醇,黏度小,可实现高 密度培养。
乙肝疫苗生产发展简介
乙肝疫苗生产发展简介
菌种 小三角瓶 大三角瓶 种子发酵罐 生产发酵罐 细胞破碎
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
乙肝疫苗生产发展简介
• 北京天坛的 弱项和不足:表达水平低,
抗原数量少,每剂疫苗只含5微克或 10微克的抗原,比华兰疫苗抗原含量 少一倍,所以抗体滴度低和抗体持续 时间较短。
乙肝疫苗生产发展简介
特异性乙肝免疫球蛋白(HBIG)
特异性乙肝免疫球蛋白是将anti-HBs 阳性供血者的血液经低温乙醇分段法而 制成,其中anti—HBs的含量是确定的, 所以对乙肝病毒暴露后的预防作用也是 确定的。经低温乙醇分段法而制备的特 异性乙肝免疫球蛋白是安全的,没有证 据表明它会传播AIDS。
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低,1-3mg/L,
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
厂家
疫苗
美国默克公司 Merck
重组酿酒酵 kline
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
法国巴斯德研究所 重组CHO细胞乙肝 Pasteur Merieux 疫苗
2,5 (ug) 0,5 10,0 (ug) 0,5

乙肝疫苗生产发展简介PPT

乙肝疫苗生产发展简介PPT

基因工程技术
01
利用基因工程技术,提高疫苗的产量和纯度。
新型佐剂的研发
02
开发新型佐剂,增强疫苗的免疫原性。
细胞培养技术
03
利用细胞培养技术,实现疫苗的连续生产。
疫苗生产的国际化合作与交流
国际合作项目
参与国际合作项目,共 同研发和推广乙肝疫苗 。
技术交流与转让
加强技术交流与转让, 促进疫苗生产的国际合 作。
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
新疫苗的研发方向
1 2
新型疫苗的研发
针对乙肝病毒变异株,研发更有效、更安全的疫 苗。
联合疫苗的研发
将乙肝疫苗与其他疫苗结合,减少接种次数,提 高接种率。
3
免疫策略的优化
研究更合理的免疫接种程序,提高疫苗的保护效 果。
疫苗生产技术的创新与突破
乙肝疫苗的重要性
控制乙肝传播
乙肝疫苗是预防HBV感染的最有 效方法,通过接种疫苗可以降低 感染风险,控制乙肝的传播。
预防慢性肝炎
接种乙肝疫苗可以预防慢性肝炎 的发生,避免因感染HBV而导致 的长期健康问题。
提高人口素质
乙肝疫苗的接种可以保护广大人 群,特别是儿童和青少年,提高 人口素质和健康水平。
乙肝疫苗生产发展简介
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
汇报人:可编辑 2024-01-11
• 乙肝疫苗的起源与背景 • 乙肝疫苗的生产技术 • 乙肝疫苗的生产现状 • 乙肝疫苗的未来发展 • 乙肝疫苗的安全性与监管
目录
CONTENTS
01
乙肝疫苗的起源与背景
中国疫苗生产现状

疫苗生产流程(PPT53页)

疫苗生产流程(PPT53页)

疫苗生产项目简介
• 生产过程举例1:
发酵
纯化Ⅰ
纯化Ⅱ
灭活吸附
疫苗生产项目简介 二、生产过程举例2:
发酵 收集/灭活
加工
配制和灌装
安全/抑制有效病原体
安全/尤其产生不稳定病毒
去除杂质及所需产物特性相近 的外来物质
在辅助剂帮助下完成对大疫苗颗粒 的灭菌过滤滤
疫苗生产项目简介
• 无论一种疫苗在试验阶段是多么有效
疫苗生产项目简介
当我们拿到一个工程项目时,首先要做 的就是明确设计的依据,这个依据应该 包括:工艺技术、设备及公用辅助设施 等有关基础资料、生产规模、生产方式 、生产班制, 国家及行业主要有关规范和 规定等,只有有了这些依据,我们下一 步的工作才能做到有的放矢。然后就是 确定工程范围,明确我们要做的工作。
疫苗生产项目简介
• 经过机组处理过的洁净空气通过风管送到
各个洁净区域,再经过高效过滤器送到室 内,这与普通的空调送风没有太大的区别 ,不同之处在于疫苗生产车间有消毒杀菌 的需求,是生产过程中的重要一环,所以 选择一个好的杀菌方式是相当重要的,目 前常用的就是用外置臭氧发生器消毒,可 以满足一般的消毒杀菌的要求,但对于部 分有防爆要求的全新风房间,怎要根据具 体的情况选择合适的杀菌方式。
疫苗生产项目简介
生物医药厂房建筑必须针对生物医药工程存在的气溶胶泄露的 可能发生环节进行全面考虑,在产生安全隐患的地方进行彻底的 密封处理。生物医药厂房的维护结构的密封性能和平整度性能主 要体现在以下几个方面:
1、双圆弧天轨;
疫苗生产项目简介
2、圆弧转角;
疫苗生产项目简介
3、单圆弧收边;
疫苗生产项目简介
疫苗生产项目简介

乙肝疫苗的生产工艺

乙肝疫苗的生产工艺

市场需求与前景展望
01
随着人们对乙型肝炎认识的不断提高,乙肝疫苗的市场需求不 断增加。
02
同时,随着全球卫生事业的发展,乙肝疫苗的市场前景广阔,
具有巨大的发展潜力。
未来,乙肝疫苗将继续发挥重要作用,为人类健康事业做出更
03
大贡献。
02 生产工艺流程概述
原料选择与预处理
原料种类
选用高纯度、高效价的乙肝病毒表 面抗原(HBsAg)基因工程细胞株 或酵母菌作为生产原料。
数据统计与分析
对稳定性研究过程中产生的数据进行统计和分析, 评估成品的稳定性表现,为制定成品的储存和运 输方案提供依据。
05 设备选型和操作优化建议
关键设备选型依据和建议
疫苗生产工艺需求
根据乙肝疫苗的生产工艺流程,选 择能够满足工艺需求的设备,如发
酵罐、离心机、纯化设备等。
设备性能参数
考虑设备的生产能力、处理效率、 操作便捷性、自动化程度等性能参 数,确保设备能够满足生产要求。
开展资源回收利用
对生产过程中产生的可再生资源进行回收利 用,提高资源利用效率。
法规符合性检查清单
遵守国家法律法规和标准
确保乙肝疫苗生产过程符合国家相关法律法规和标准要求。
定期开展法规符合性检查
对生产过程进行全面检查,确保各项法规要求得到有效执行 。
及时整改不符合项
针对检查中发现的不符合项,制定整改措施并及时进行整改 ,确保生产过程的法规符合性。
原材料检验
对每批次的原材料进行检验,包括外观、纯度、微生物限度等指标, 确保原材料符合生产要求。
储存条件控制
对原材料的储存条件进行严格控制,避免潮湿、高温等不利因素对 原材料质量的影响。
生产过程监控指标设置

基因工程乙肝疫苗ppt课件

基因工程乙肝疫苗ppt课件

接种第三针。为达到最佳的效果,应按时全程接种。
接种乙肝疫苗的人群
• 处于HBV感染高度危险状态的易感者(未 感染过HBV的人)应接种乙肝疫苗。主要 包括: ①全部新生儿及幼儿园未接种过 乙肝疫苗的孩子; ②传染科、口腔科、 血液室、透析室和经常接触血液的工作 人员; ③新加入某一群体的人员,如新 入伍的战士、新入学的大学生; ④从事 食品服务行业者及保育工作人员; ⑤发 育障碍者,收容所中的患者和工作人员 ; ⑥血液透析患者; ⑦使用血液制品 者; ⑧器官移植前的患者;需长期应用 免疫抑制剂者; ⑨乙肝病毒携带者的家 庭接触者; ⑩注射毒品成瘾者;长期教 养机构中的犯人。
Bye bye~
部专门下发57号文件,具体部署用基因工程乙肝疫苗取代血源乙肝疫
苗事宜。
乙肝疫苗的制备
目的基因的获取
编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取
一般的目的基因的获取方法有:
反转录法 化学合成法
反转录—聚合酶链反应法
工程菌的构建
CHO(中国仓鼠卵巢)细胞的特点 ①具有准确的转录后修饰功能 ,表达的糖基化药 物蛋白在分子结构、 理化特性和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分子 ②具有产物胞外分泌功 能 ,便于下游产物分离纯化; ③具有重组基因的高效 扩增和表达能力; ④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可以进行 悬浮培养 ,表达fibrob2last) ,很少分泌自身的内源蛋白 ,利 于外源蛋白的后分离
自身无法克服的缺点:

其一,乙肝表面抗原携带者由于已感染乙肝病毒,在此情况下,
再抽取其血浆作为乙肝疫苗原料,对携带者的身体健康有损害;

其二,疫苗的生产受到乙肝病毒表面抗原携带者血浆来源和质量

乙肝疫苗制备.

乙肝疫苗制备.

1、发酵液的预处理连续高速离心,除去细胞残片,再超滤浓缩
2、疏水柱层析介质: Butyl S Sepharose FF 加入适量硫酸铵,调节电导率与柱层析平衡液电导率相等按照平衡柱床、上样吸附、平衡液洗柱、降低硫酸铵浓度解析、清柱再生程序层析
3、阴离子交换柱层析介质:DEAE Sepharose FF HBsAg活性蛋白经Sephadex G-25柱脱盐换液,使缓冲盐系统的PH、离子强度和 IEC平衡液一致按照平衡柱床、丄样吸附、氯化钠浓度梯度分段洗脱、清柱再生程序层析
4、凝胶过滤柱层析介质:Sepharose 4 FF 超滤浓缩到适当体积按照平衡柱床、丄样、洗脱程序层析
5、除菌收取到的HBsAg除菌过滤,即为纯品。

乙肝疫苗课件

乙肝疫苗课件

免疫效果

母婴阻断

未同时使用HBIG,保护效果为95% 同时使用HBIG,保护效果达98%

青少年和成人

大于95%受种者
无应答和低应答 是否加强免疫 是否要筛查 孕妇 早产儿 意外暴露后
参考文献

夏宪照 罗会明. 《实用预防接种手册》.
谢谢!
接种部位为上臂三角肌肌内注射 不同国家生产的疫苗对注射对象的年龄要求不同
接种对象
免疫程序

3剂(第0、1、6个月) 血液透析者4剂(第0、1、2、6个月) 16岁以上人群有HepB接种史



≤10mlIU/ml 全程基础免疫 10~100mlIU/ml 加强1剂20ug ≥100mlIU/ml 不接种
国产HepB 啤酒酵母 CHO 汉逊酵母
进口HepB 啤酒酵母(安在时) 汉逊酵母(益可欣)
剂量和用法
啤酒酵母 CHO 汉逊酵母 进口HepB

新生儿和<19岁 ≥19岁每次1.0ml 每次0.5ml(5ug) (10ug) ≤15岁每次1ml >15岁每次1ml (10ug) (20ug) 婴儿和成人每次均为0.5ml(10ug) ≤15岁每次0.5ml (10ug) >15岁每次1.0ml (20ug)
禁忌症

患急性或慢性严重疾病者 对疫苗已知的任何成分过敏者 发热暂缓接种
接种反应

一过性疼痛10%-20% 低热1.8% 上呼吸道症状1-2% 胃肠道症状1% 偶合晚发性维生素K缺乏 症(2周-3月龄新生儿)
注意事项

HepB不应皮下或皮内注射 HIV感染、血透和免疫缺陷的患者,初种后要 追加接种

乙肝疫苗生产发展简介 PPT

乙肝疫苗生产发展简介 PPT
苗)。1995年停产。
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗(第二代乙肝
疫苗)。包括:
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗,表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低,抗体滴度 偏低。
• 重组CHO细胞乙肝疫苗,表达水平低,2-5mg/L,
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低,1-3mg/L,
大家有疑问的,可以询问和交流
可以互相讨论下,但要小声点
9
• 10, 大连高新(汉信)生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 , 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” , 在 2003 年 开始商业化生产。
母总蛋白)
• 纯化收率:20% • 发酵罐工作体积:500L • 一次发酵所得抗原量:
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 (甲基营养型酵母)
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
• 华兰:菌种好,表达水平高,纯化
收率高,所以,总体而言,华兰公 司的技术更为先进。
• 基本技术资料: • 菌种:重组酿酒酵母 • 表达水平:50mg/L • 表达效率:1,35%(表面抗原蛋白/酵
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与

乙肝疫苗生产流程和使用工艺

乙肝疫苗生产流程和使用工艺

乙肝疫苗生产流程和使用工艺《乙肝疫苗生产流程和使用工艺》
嘿,朋友们!今天咱就来好好聊聊乙肝疫苗的生产流程和使用工艺。

你们知道吗,我有个亲戚家的小孩,那时候刚生下来不久,医生就说要打乙肝疫苗。

我就特别好奇,这乙肝疫苗到底是咋生产出来的呢?后来我专门去了解了一番。

先来说说生产流程吧。

乙肝疫苗的生产那可是个复杂又精细的过程。

得先筛选合适的菌种,这就像是挑选优秀的“种子选手”一样。

然后把这些菌种放到特定的环境中培养,让它们大量繁殖。

这就好比给这些“种子选手”提供良好的训练条件,让它们茁壮成长。

接着,要对培养出来的东西进行提取和纯化,把杂质啥的都去掉,留下最精华的部分,这一步就像是在提炼珍贵的宝物一样。

再讲讲使用工艺。

医生把乙肝疫苗准备好后,就会给需要的人注射啦。

就像我亲戚家小孩,护士姐姐轻轻一针下去,就把疫苗注射进去了。

这看似简单的一针,里面可包含着这么多复杂的生产过程呢。

总之,乙肝疫苗的生产流程和使用工艺真的很神奇。

通过这么一系列的操作,我们就能得到有效的疫苗来保护我们免受乙肝的侵害啦。

真的很感谢那些在背后默默努力的科研人员和医护人员,是他们让我们的健康有了更好的保障呀!
希望大家都能重视乙肝疫苗,都能健健康康的!这就是我对乙肝疫苗生产流程和使用工艺的一些了解和看法啦。

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2
• 基因工程乙肝疫苗是乙肝表面抗原 (HbsAg)亚单位疫苗,它系采用现代生 物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基因进 行质粒构建,克隆进入啤酒酵母菌或CHO 细胞(中国仓鼠卵巢细胞)中,通过培养 这种重组酵母菌或CHO细胞来表达乙肝表 面抗原亚单位。发酵后经过细胞破碎和一 系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等工序, 再经过疏水层析,可使产品抗原蛋白纯度 达99%以上。
乙肝疫苗的制备
1
• 乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫 苗接种后,可刺激免疫系统产生保护性抗 体,这种抗体存在于人的体液之中,乙肝 病毒一旦出现,抗体会立即作用,将其清 除,阻止感染,并不会伤害肝脏,从而使 人体具有了预防乙肝的免疫力,从而达到 预防乙肝感染的目的。接种乙肝疫苗是预 防乙肝病毒感染的最有效方法。
阴离子交换柱层析 介质:DEAE Sepharose FF HBsAg活性蛋白经Sephadex G-25柱脱盐换液,使缓冲盐系 统的PH、离子强度和IEC平衡液一致 按照平衡柱床、丄样吸附、氯化钠浓度梯度分段洗脱、清柱 再生程序层析
凝胶过滤柱层析 介质:Sepharose 4 FF 超滤浓缩到适当体积 按照平衡柱床、丄样、洗脱程序层析
3
乙肝疫苗的制造工艺
• 1.目的基因的获取 • 2.工程菌的构建 • 3.目的基因的表达 • 4. 蛋白质的分离纯化
4
目的基因的获取
编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取
一般的目的基因的获取方法有:
反转录法 化学合成法
反转录—聚合酶链反应法
工程菌的构建
CHO(中国仓鼠卵巢)细胞的特点
①具有准确的转录后修饰功能 ,表达的糖基化药 物蛋白在分子结构、 理化特性和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分子
11

9
无菌过滤
收取到的HBsAg除菌过滤, 即为纯品
氢氧化铝共沉淀
纯化后的抗原再与氢氧化铝共 沉淀,在共沉淀时,抗原吸附 在氢氧化铝上。
分装
疫苗的稳定性较差,一般在2~8℃下能保存 12个月,但当温度升高后,效力很快降低。 在37℃下,许多疫苗只能稳定几天或者几 个小时,非常不利于在室温下运输。为了
使疫苗的稳定性提高,可用冻干的方法使
蛋白质的分离纯化
细胞破碎→固液分离→浓缩与初步纯化→高度纯化→成品加工
5
生产工艺控制
• 基因工程乙肝疫苗的生产工艺包括发酵、提取、 纯化、吸附、配制、分装等工序。
• 生产工艺中采用世界一流的发酵罐,通过全自动 控制,提供酵母菌最优生长条件,发酵后经过细 胞破碎和一系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等 工序,再经过疏水层析,可使产品抗原蛋白纯度 达99%以上
• 所有工艺设备可自动清洗、自动灭菌,有效地减 少了种种人为因素的干扰,确保生产稳定和质量 一致性。
6
蛋白质的分离纯化
7
细胞破碎 微滤 超滤
发酵结束后,通过过滤或离心,使酵母与发酵 液分离,然后细胞通过高压匀浆机破碎,释放 出抗原。酵母的细胞壁较厚,比大肠杆菌难破 碎,可在高压匀浆机内施加几千个大气压力, 通过针形阀突然降压到零,使细胞破碎。在细 胞破碎前加入蛋白酶抑制剂以防抗原被分解。
之干燥。
10
临床应用
• 乙肝疫苗自1979年问世以来,经过20多年的大规 模应用和观察,至今尚未见到有关注射后引起严 重不良反应的报道,只有少数人出现接种部位红 肿、硬结、疼痛、手臂酸重或发热、恶心、呕吐、 乏力、皮疹等与一般疫苗接种大致相仿的轻微反 应,多于1-3天内不治自愈。 由于乙肝疫苗属血 源性的,在制备过程中纯化与灭活程序十分严密, 故不会产生像破伤风等动物血清疫苗可能造成的 过敏反应,也不会感染上乙肝、艾滋病及其他传 染性疾病。与其他疫苗同时接种亦未出现相互干 扰作用。因此,可以说,乙肝疫苗是安全可靠的 预防疫苗,注射前也不必皮试。
细胞破碎后加入表面活性剂使抗原溶解。粗 细胞裂解物用0.2um中空纤维柱进行微滤。抗 原和大部分低分子量宿主细胞内含物通过滤 膜,细胞碎片被膜拦截。
滤液再进行超滤,此时抗原被膜拦截而低分 子量宿主细胞内含物通过滤膜除去。
8
疏水柱层析 介质: Butyl S Sepharose FF 加入适量硫酸铵,调节电导率与柱层析平衡液电导率相 等 按照平衡柱床、上样吸附、平衡液洗柱、降低硫酸铵浓 度解析、清柱再生程序层析
②具有产物胞外分泌功 能 ,便于下游产物分离纯化;
③具有重组基因的高效 扩增和表达能力;
④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可以进 行悬浮培养 ,表达 水平较高;
⑤CHO 细胞属于成纤维细胞 (fibrob2last) ,很少分泌自身的内源蛋 白 ,利于外源蛋白的后分离
目的基因的表达
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