C18色谱柱维护 常识
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意:每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书色谱柱维护保养是很重要的,关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性,所以任何人用过色谱柱之后,一定要对色谱柱进行保养,管理人员和使用者互相监督。
总的原则是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料;另外没有使用的情况下,一定要保证两端的堵头封好。
对于具体的色谱柱,下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项,以便使用者参考。
对于未启用的新的色谱柱,先用甲醇或乙腈以小流速(0.2ml/min缓慢升高到0.5ml/min )不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上,流速调为1.0 ml/min冲洗色谱柱60分钟,然后不断降低有机相的比例(如80%、50%、 10%甲醇或乙腈)各冲洗至少 30分钟。
若色谱柱暂时不用,则将色谱柱保存在高比例有机相中(如80%甲醇或乙腈,或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中);色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂(将缓冲盐溶液换成水)冲洗色谱柱15分钟,然后再换成流动相进行样品分析。
样品分析完后,色谱柱维护与保养方法:流动相中若含酸、碱、盐类物质,则要先用10%甲醇或乙腈冲洗,1.0ml/min 的流速冲洗至少30min,再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min,柱子保存在80% 甲醇或乙腈里(具体问题具体分析,洗脱程序可以是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保存的是高有机相,第二天用之前一定要用高水相过渡一下,再换成流动相)。
如柱子长时间未用,则柱子保存在 100%的甲醇或乙腈里。
对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等,柱子应采用梯度洗脱,一般用乙腈-水系统(水:90-10;乙腈:10-90)冲洗时间要稍长些,然后保存于90%乙腈。
需要特别强调的是,目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间(1小时以上)冲洗,除非有专门耐水的专用柱,否则,用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷,损坏色谱柱。
【色谱柱】色谱柱使用维护 色谱柱维护和修理保养
【色谱柱】色谱柱使用维护色谱柱维护和修理保养1、色谱柱的使用说明:(1)色谱柱使用前注意事项:色谱柱的储存液无特别说明,均为评价报告所示的流动相。
在使用前,确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中,如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出,堵塞色谱柱。
(2)流动相:流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯,配流动相的水可以是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好,尤其是含盐的流动相。
另外,装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0,BDSC18适合于碱性化合物,PH值适用范围为 2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时,每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗,并完全置换掉原来所使用的流动相。
(3)样品:样品也要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;若样品不便处理,要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时,全部的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存:(1)反相色谱柱每天试验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。
注意:不能用纯水冲洗柱子,应当在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。
(2)长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度可以是室温。
3、色谱柱的再生:由于色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的加添,会显现色谱峰高降低,峰宽加大或显现肩峰的现象,一般来说可能是柱效下降。
c18色谱柱保养方法
C18色谱柱的保养方法C18色谱柱的保养方法主要包括以下几个方面:1.保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。
绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
2.每次新买的色谱柱虽然是经厂家测试过并密封好的,可是有的色谱柱到达手中时已经过很长的时间了,因此,每次拿到一根新的色谱柱都必须要对柱子进行处理。
首先,配制好65%的乙腈/水,再把色谱柱正确的连接在色谱仪上,出口放空(注意:出口端切不可连上检测器,以免污染了检测器),以低流速0.1ml/min~0.5ml/min(如果是LC/MC柱子,则应以0.3ml/min进行),不可以高流速进行,等看见柱子出口有液体流出后,过20分钟后再接上检测器,以循序渐进的方法将流速调至 1.0ml/min (如果是LC/MC柱子则应以0.3ml/min进行),继续冲洗2~8小时。
3.色谱柱的存储:在不使用色谱柱时,应将其存储在恒温箱或冰箱中,避免暴露在阳光下或高温环境中。
同时,要注意避免色谱柱的震动和振荡,以防止填料团聚或变形。
4.色谱柱的洗脱条件:为了避免填料的污染和附着物的积累,使用完毕后应进行适当的洗脱。
常用的洗脱方法包括使用pH2-3的酸性溶液,有机溶剂和水的混合溶液,或者乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脱能除去蛋白质污染。
阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗,阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗,除去交换性能强的盐,然后用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有机物)、甲醇、水依次冲洗。
5.定期进行清洗:使用HPLC级溶剂配制流动相,使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命,提高柱性能。
同时要定期用甲醇或丙酮冲洗色谱柱,保持色谱柱的清洁。
以上就是C18色谱柱保养的主要步骤和注意事项,遵循这些步骤可以有效延长色谱柱的使用寿命并保证实验结果的准确性。
色谱柱的维护与保养
色谱柱的维护与保养一、C8及C18反相色谱柱(新的色谱柱)应该在自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
使用前应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。
具体步骤如下:(1)准备新鲜超纯水及色谱级乙腈或甲醇,冲洗色谱仪器系统,保证仪器系统管路干净。
(新柱老化前,此步决不可忽略)(2)将色谱柱反向连接,不接检测器。
用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗20~30min。
(目的是冲洗出柱入口端无机杂物与筛板孔杂物,使筛板正常)(3)再将色谱柱正向连接,不接检测器。
用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗20~30min。
(目的是冲洗出柱出口端无机杂物与筛板孔杂物,使筛板正常)(4)连接检测器,开启柱温达30℃~40℃,用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗4h以上。
(目的是充饱和色谱柱,去除柱内空气)(5)用水-有机相(10:90~5:95),以0.3~0.6ml/min流速冲洗2h以上[或在120min内以水-有机相(95:5→0:100)梯度变化,以0.3~0.6ml/min流速冲洗]→再用100%有机溶剂,以0.3~0.6ml/min流速冲洗1h以上→最后用100%有机溶剂,以1ml/min流速冲洗1h以上。
(目的是老化色谱柱)(6)在平衡前根据水相-有机相的比例,首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例,以1ml/min流速冲洗30左右(目的是相平衡过渡)。
如果流动相中含有缓冲盐,决不可在柱老化后立即用流动相平衡,必需先用90%以上水进行预平衡30min以上,否则,会导致缓冲盐在柱内析出结晶,严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
(7)然后更换成新制并经0.45um滤膜过滤,超声脱气后的流动相,按检测方法平衡至少1h,待基线稳定后,开始进样检测。
色谱柱使用维护及解决方案
色谱柱使用维护及解决方案色谱柱使用维护1、色谱柱的使用说明:(1)色谱柱使用前注意事项:色谱柱的储存液无特别说明,均为评价报告所示的流动相。
在使用前,确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中,如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出,堵塞色谱柱。
(2)流动相:流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯,配流动相的水可以是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好,尤其是含盐的流动相。
另外,装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0,BDSC18适合于碱性化合物,PH值适用范围为 2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时,每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗,并完全置换掉原来所使用的流动相。
(3)样品:样品也要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;若样品不便处理,要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时,全部的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存:(1)反相色谱柱每天试验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。
注意:不能用纯水冲洗柱子,应当在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。
(2)长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度可以是室温。
3、色谱柱的再生:由于色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的加添,会显现色谱峰高降低,峰宽加大或显现肩峰的现象,一般来说可能是柱效下降。
C18液相色谱柱基础维护常识
C18液相色谱柱基础维护常识液相色谱柱中使用较多的就是C18色谱柱了,下面整理的有关C18液相色谱柱的基本维护,希望能给大家一些帮助。
1、色谱柱的流向不能改变在我们常规思维中,色谱柱上标示的流向是不可改变的,每次使用都要遵循。
可是,大家有没有想过这个方向的作用是什么呢?为什么要标示一个使用方向呢?其实色谱柱前后端的填料及填装工艺都是一样的,标示方向的目的就是让我们在使用中记住流动相从哪个方向流入色谱柱,那么这个流入段就是最先污染端。
这样就为我们日后维护或再生色谱柱做了准备,而我们需要遵循这个规定应该在色谱柱开始做样后。
我曾将已经污染过的色谱柱反方向来使用,如果保留时间不是很长,而色谱柱足够长,还是能使用一段时间的。
2、看清色谱柱说明书后再上机使用色谱柱内部保存着什么溶剂一定要看清楚,因此色谱柱的说明书一定要看清楚,当然也包括说明书上建议的维护保养规定,对我们都非常的有用。
对于反相柱来说,溶剂基本就是乙腈或甲醇。
但正相柱就不同了,因为正相柱除了可以适用正相系统,也可以适用反相系统,因此一定要看清楚,对于你的方法来说是否需要置换色谱柱内部保存溶剂。
3、用纯水冲洗色谱柱才能把缓冲液冲洗干净使用强溶剂冲洗色谱柱对内部填料的损伤是最大的,尤其是纯水,除非你的色谱柱是耐水的。
冲洗色谱柱可以的方法是用流动相比例的水系和有机系来冲洗。
如果你认为流动相比例无法把色谱柱冲洗干净或者此比例中有机系占有比例过大,你可以使用内含10%左右的纯水来冲洗。
4、保存在乙腈或甲醇中的新色谱柱可以直接使用理论上液相色谱柱不同于气相色谱柱需要活化,但是由于液相色谱柱内部保存的有机系具有挥发性,因此在使用前还是应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。
可以是0.5ml/min,120min,但可以咨询厂家,根据色谱柱参数设定。
5、色谱柱应该保存在纯乙腈或甲醇中根据第4条,色谱柱内部保存液具有挥发性,因此为了减少其挥发速度,可以添加5%-10%的水,这样的话可以在一定程度上减少一些有机系的挥发。
c18色谱柱的使用及维护
c18色谱柱的使用及维护
C18色谱柱是一种常用的反相色谱柱,广泛应用于药物分析、
环境监测等领域。
下面是关于C18色谱柱的使用和维护的一
些建议:
1. 使用前注意:
- 检查色谱柱是否有损坏或污染,如果有,应更换色谱柱。
- 预处理色谱柱:通过一定条件下的溶剂流动,去除色谱柱
中的杂质和气泡,一般使用一种使色谱柱略干的有机溶剂,如甲醇或乙醇。
- 将色谱柱连接到色谱仪装置上,根据操作手册设置适当的
条件。
2. 使用过程中的注意事项:
- 避免使用过高或过低的流速,以免损坏色谱柱。
- 避免溶剂温度过高,应控制在色谱柱规定的温度范围内。
- 避免使用有机溶剂或样品溶液中有大量盐类。
- 避免样品浓度过高,以免柱子内超出静电容量发生电吸附。
3. 维护:
- 使用后,应用适当的溶剂清洗色谱柱,去除残留的样品和
溶剂,一般使用纯水或略带酸性的溶液。
- 在使用中,避免发生气泡堵塞现象,如有气泡,可进行紧
急处理。
- 定期检查色谱柱的性能和状态,如柱效、重复性和分离度等,根据需要更换或维修色谱柱。
- 注意避免色谱柱与空气长时间接触。
总的来说,使用C18色谱柱时要注意合理设置条件,避免过高的流速和温度,以及样品浓度过高。
使用后要及时清洗,并定期检查和维护色谱柱的性能,以确保分析结果的准确性和稳定性。
c18柱色谱填料使用
c18柱色谱填料使用
C18色谱柱是一种常用的色谱柱,其填料具有亲脂性,常用于反相色谱中。
以下是使用C18色谱柱的注意事项:
1. 流动相的选择:C18色谱柱通常使用正己烷和甲醇作为流动相。
正己烷可以增加分离物与固定相的相互作用力,甲醇则有助于溶解非极性溶剂。
根据分析需要,可以调整正己烷和甲醇的比例。
2. 预处理:在使用C18色谱柱之前,需要进行预处理以去除可能存在的杂质和保证柱子的稳定性。
常见的预处理方法包括使用高压液相系统进行洗脱、使用有机溶剂或酸碱溶液进行洗脱等。
应避免用过酸性或过碱性的洗脱剂,以免对C18柱填料造成损害。
3. 样品准备:样品的溶解度和纯度对分离效果有很大影响,因此在分析前需要充分溶解样品,并通过滤器除去杂质。
4. 色谱柱平衡:在使用C18色谱柱之前,需要将其平衡至最佳状态。
可以通过逐步增加流动相的流速并监测基线来找到最佳流速。
在达到最佳流速之前,应缓慢增加流速以避免对色谱柱造成过度压力。
5. 柱效测定:在使用C18色谱柱之前,需要测定其柱效。
可以通过使用标准品进行测定,并比较标准品和样品的保留时间和峰形来进行评估。
6. 清洗和维护:在使用C18色谱柱过程中,需要定期清洗和维护以保持其性能和寿命。
需要定期更换流动相、清洗柱子并检查其性能。
总之,使用C18色谱柱需要了解其特点和注意事项,并进行充分的预处理、样品准备、色谱柱平衡、柱效测定以及清洗和维护。
这些步骤对于获得准确、可靠的色谱结果非常重要。
色谱柱维护保养方法
色谱柱维护保养方法色谱柱维护保养非常重要,可以延长其使用寿命,并确保分离效果和分析结果的准确性。
以下是常见的色谱柱维护保养方法:1. 色谱柱的储存:如果打算长时间不使用色谱柱,可以将其封装,并储存在干燥、避光和温度适宜的地方,以防止柱内填料受潮、变质或分层。
2. 柱前保护:可以在色谱柱前端安装一个柱前保护器,以延长色谱柱的使用寿命。
柱前保护器可以过滤掉样品中的大颗粒物质,防止其对色谱柱造成损害,并保护柱后的检测器。
3. 样品预处理:对样品进行合适的前处理,如过滤、稀释、净化等,可以减少对色谱柱的损害,减轻色谱柱的负担。
4. 样品pH调节:合适的pH值可以增强样品的溶解性,降低颗粒物质的沉淀和析出,从而延长色谱柱的使用寿命。
但要注意不要超出色谱柱的pH范围限制。
5. 洗脱溶剂选择:选择适合的洗脱溶剂可以有效地清洗色谱柱,去除残留物质,恢复柱性能。
常用的洗脱溶剂包括纯水、有机溶剂、缓冲液等。
选择洗脱溶剂时,要注意其对色谱柱填料的溶解性以及对分离结果的影响。
6. 色谱柱的受控使用:在使用色谱柱进行分析时,要注意避免超过柱压和最大样品容量的限制,避免样品直接接触到填料床层面,避免样品中含有腐蚀性物质等。
7. 定期检查:可以定期检查色谱柱的性能,如检查柱背压、峰形、峰对称性、分辨率等。
8. 色谱柱的再生:当色谱柱分离效果下降时,可以尝试使用一些再生方法,如洗脱溶剂冲洗、温度升高、pH调节等,以恢复色谱柱的分离能力。
以上是色谱柱维护保养的一些常见方法,实际操作时应根据具体的色谱柱类型和样品特性进行调整。
此外,根据色谱柱供应商的建议和操作手册,进行正确的操作和保养也是非常重要的。
C18色谱柱维护 常识
【讨论】高效液相色谱柱的保护各位同仁,为保证我们的分析效果,延长色谱柱的使用寿命,大家一起来贡献一下自己在色谱柱使用过程中的护柱秘诀吧。
我先来聊聊,算是抛砖引玉了1、最好用预柱。
(但要注意,若有时出峰异常,要先看看是不是它有问题了)2、每次做完分析,都要进行冲洗,分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质,建议用90%甲醇冲洗30~60min;若分析用流动相中含以上物质,要先用10%甲醇(或用与分析用流动相同比例,把含酸、碱、盐溶液换成水)冲洗1小时左右,再梯度走到90%甲醇冲洗30~60min(若用多元泵)。
有必要时再循环几次,可以适当缩短时间。
若长时间不用该色谱柱,要冲洗好后,用纯甲醇或乙腈封存。
3、若流动相中用到离子对试剂,更应该好好冲洗,且该色谱柱最好作为专用,不能再做其它物质分析用。
因色谱柱填料性质已与原来所不同,在该柱上所摸索的色谱条件,可能在其它同类柱子上得不到重现。
4、尽量避免反冲,除非该色谱柱厂家明确说明允许。
5、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。
6、定期测柱效,有下降,可以用10%异丙醇甲醇冲洗色谱柱。
若柱效还没有改善,可以再生,甲醇-二氯甲烷-甲醇。
呵呵,还有的一时想不起来了,各位有经验的战友请发表高见!1.样品要采用或μm滤膜过滤,流动相采用μm滤膜过滤并脱气。
2.2.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-,尽量不超过该色谱柱的pH范围3.3.避免流动相组成及极性的剧烈变化。
4. 4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。
5.5.每次测试完毕,要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱(分析色谱柱250×4.6mm柱体积)。
如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净,并保存于乙腈中。
6.6.压力升高是需要更换预柱的信号。
1:溶剂中的不溶物—应使用色谱纯溶剂,膜过滤(孔径不超过μm)2:样品中的不溶物—应对样品进行膜过滤(孔径不超过μm)3:泵,进样器等中的不溶物—在泵和进样器之间安装内置过滤器,在进样器和柱之间安装预过滤器4:柱内不溶物的形成:由于溶剂的不互溶而产生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱;在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀—检查样品液和流动相是否互溶;由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀—将色谱柱密封紧,并保持室温恒定!还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生:1 平衡色谱柱:反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。
C18柱日常所需注意问题
C18柱日常所需注意问题总结如下,如有遗漏之处或对某项内容有不同看法来电讨论。
1、新柱在使用前需用纯有机试剂(如甲醇、乙腈)低流速冲洗,冲洗体积以20倍柱体积为宜,以便固定相能充分润湿、碳链舒展彻底,使色谱柱的性能达到巅峰状态;
2、使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱,尤其是流动相中含有酸或盐时,需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净,通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积;
3、长期保存前要将色谱柱彻底冲洗,建议冲洗3-4小时以上,最后保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液(如90%甲醇水)中;
4、日常保存溶剂(即第二天需继续使用)尽量与3中相同;
5、由于C18柱(极性改性处理的除外)的固定相疏水性较强,在使用过程中尽量不要使用高水相条件,若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷,引起柱效迅速下降,甚至造成不可逆的负面影响,Diamonsil(2)由于碳载量高,表现尤为明显,建议使用过程中水相比例不超过90%;
6、色谱柱压力升高、柱性能下降:通常为色谱柱被污染,对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效;
7、色谱柱压力骤升:通常由盐析出或筛板堵塞引起,若是盐析出,用10%甲醇水低流速冲洗至压力恢复即可;若判断并非盐析出,以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱(将色谱柱反接,不接检测器),若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效,需寻找其他原因。
色谱柱再生程序:
按照下列次序冲洗色谱柱,冲洗体积均为20倍柱体积:
10%甲醇水→甲醇→异丙醇(或氯仿)→甲醇→10%甲醇水
(步骤3选用异丙醇时,由于异丙醇粘度较大,需适当降低流速,建议流速设为0.2-0.3ml/min)。
C18色谱柱
在用的最多的就是反相C18色谱柱,在平时的工作中,个人积累了一些小经验,很管用的,在此与大家分享1、新柱的处理:我们每次新买的柱子虽然是经厂家测试过并密封好的,可是有的柱子到达手中时已经过很长的时间了,因此,我们每拿到一根新的色谱柱都必须要对柱子进行处理。
首先,是配制好65%的乙腈/水,再把色谱柱正确的连接在色谱仪上,出口放空(注意:出口端切不可连上检测器,以免污染了检测器),以低流速0.1ml/min~0.5ml/min(如果是LC/MC 柱子,则应以0.3ml/min进行)均可,不可以高流速进行,等看见柱子出口有液体流出后,过20分钟后再接上检测器,以循序渐进的方法将流速调至1.0ml/min(如果是LC/MC柱子则应以0.3ml/min进行),继续冲洗2~8小时。
2、新柱的使用:首先我们确认所分析样品流动相的PH是不是在色谱柱PH的耐受范围之内,以免损伤柱子!如果,确认在柱子的使用范围之内,就用做样品的流动相平衡柱子(如果流动相中含用缓冲盐溶液,在平衡柱子之前务必要先用5%甲醇或5%乙腈去过渡30分钟以上。
再用带盐的流动相去平衡色谱柱。
)当色谱柱平衡了足够时间,基线非常平稳的时候,方可进样分析。
不管是分析什么样的产品,由于各种各样的因素,样品中总有杂质。
因此,最好在色谱柱前端加上保护柱。
以增加色谱柱的使用寿命!3、色谱柱清洗:①如果样品分析中只用到一般的乙腈、甲醇和水的流动相,在做完样品之后可直接用55%~65%乙腈/水或者用55%~65%甲醇/水冲洗色谱柱40~80分钟,然后以纯甲醇或乙腈冲洗30分钟,即可保存;②如果样品分中流动相里含用缓冲液或酸或离子对试剂的流动相,在做完样品之后的清洗必须按照如下步骤进行清洗柱子:先用5%的甲醇/水或5%的乙腈/水,以1ml/min,冲洗1.5小时以上(如果色谱柱更长,则还需要增加适当时间);然后用55%甲醇/~水65%/水冲洗色谱柱30~60分钟.最后用甲醇或乙腈以1ml/min冲洗30分钟。
C18色谱柱的选用、保养与维修要点
C18色谱柱的选用、保养与维修要点一、C18的选用 C18的选用主要考虑2个问题,即柱填料和柱规格对色谱柱的影响 1.1C18柱的填料对色谱柱的影响柱填料的物理性能对填料色谱行为有重要影响。
填料主要的物理性能包括如下:颗粒度、孔径、孔体积、键合相化学、含碳量及烷基化处理。
(1)颗粒度是指柱填料的颗粒直径的大小。
事实上色谱柱上所标的粒径是一个平均值。
如粒径“5μm”并不是柱中填料全部的颗粒直径都是5μm,事实上有一个颗粒分布度。
这种分布度对柱反压及柱效有重要作用。
普通来说,平均颗粒度越小,颗粒分布度越小,色谱柱效越高,反压亦越高。
目前C18柱填料粒径在4~10μm之间。
(2)孔径是指填料颗粒间的孔间隙。
普通所说的孔径是指填料的平均孔径。
球形填料装柱后平均孔径分布比较窄,柱床结构匀称,柱效高,重临性好;无定形填料平均孔径分布较宽,柱床结构不匀称,流淌相线性速度不匀称,谱带扩宽。
平均孔径的大小对分别大分子化合物有较大的影响,在分别含有较大分子的样品时可能会有分子排阻效应,或产生吸附效应从而影响定量的回收率及精确度。
因而在用反相色谱分别诸如蛋白或多肽样品时应考虑选用大孔径(如30nm)的反相柱填料。
孔体积作为硅胶多孔性的参数,在分别分析较大分子化合物时可作参考,选用较大孔体积的反相柱填料。
(3)化学键合相填料在高效液相色谱法中占有极重要的地位。
它可以键合极性较大的有机基团,采纳极性较小的溶剂作流淌相。
亦可键合极性较小的有机基团,选用极性较大的溶剂作流淌相。
C18色谱柱是以硅烷化键合型(Si-O-Si-C)存在的,这类键合反应目前应用最为普遍。
如以十八烷基三氯硅烷与全多孔型硅胶M-Porasil-C18反应生成烷基化学键合相,商品名为M-Bondapak-C18。
(4)碳含量即填料中的含碳量。
传统的测量技术是将填料加热到碳氢键断裂,然后通过测定损失的分量或形成的二氧化碳来计算碳含量。
可以通过增强碳键的长度或增强键合密度来增强碳含量。
依利特色谱柱的c18柱子
依利特色谱柱的c18柱依利特色谱柱的C18柱是一种在色谱分析中广泛应用的色谱柱。
C18柱是指柱内填充物为十八烷基硅烷(C18)的色谱柱,因其具有良好的疏水性能,所以主要用于分离和分析非极性或弱极性的化合物。
以下将从多个方面详细介绍依利特色谱柱的C18柱。
1. C18柱的原理和特点C18柱的填充物为十八烷基硅烷,其表面具有较强的疏水性。
在色谱分析中,样品中的化合物在流动相和固定相(色谱柱填充物)之间进行分配,非极性或弱极性的化合物会在C18柱上停留较长时间,从而实现与其他极性化合物的分离。
C18柱具有较好的稳定性和重复性,广泛应用于各种色谱分析。
2. 依利特色谱柱的C18柱依利特色谱柱是一种高品质的色谱柱品牌,其C18柱采用优质的十八烷基硅烷填充物,具有良好的柱效、稳定性和重复性。
依利特色谱柱的C18柱在制药、化工、环保、食品等多个领域的色谱分析中得到了广泛应用。
3. C18柱的适用范围C18柱主要适用于分离和分析非极性或弱极性的化合物,如烃类、脂肪烃、醇类、酯类、胺类等。
在制药行业中,C18柱可用于药物分析、质量控制、药效研究等;在化工行业中,可用于产品纯度分析、杂质检测等;在环保和食品行业中,可用于检测和分析环境污染物、食品安全指标等。
4. C18柱的使用和维护在使用C18柱进行色谱分析时,需要根据样品的特性和分析要求选择合适的流动相和色谱柱。
同时,要严格按照操作规程进行操作,确保色谱柱的稳定性和重复性。
在色谱分析过程中,要注意观察柱压、流量等参数的变化,及时调整流动相的组成和比例。
色谱柱使用完毕后,要进行正确的清洗和保养,以延长色谱柱的使用寿命。
5. C18柱的常见问题及解决方法在使用C18柱进行色谱分析时,可能会遇到一些常见问题,如柱压升高、柱效下降、峰形异常等。
这些问题可能是由于色谱柱污染、填充物破损、操作不当等原因引起的。
针对这些问题,可以采取相应的解决方法,如更换色谱柱、清洗柱子、优化操作条件等。
C18色谱柱维护常识要点
C18色谱柱维护常识要点1.色谱柱的存储:在不使用色谱柱时,应将其存储在恒温箱或冰箱中,避免暴露在阳光下或高温环境中。
同时,要注意避免色谱柱的震动和振荡,以防止填料团聚或变形。
2.色谱柱的洗脱条件:为了避免填料的污染和附着物的积累,使用完毕后应进行适当的洗脱。
常用的洗脱方法包括使用pH2-3的酸性溶液,有机溶剂和水的混合溶液,或者乙腈/甲醇和水的混合溶液。
洗脱条件可根据具体实验需求进行调整。
3.色谱柱的保养:在每次使用之前,可以采用反向流动的方式,用纯溶剂(如甲醇或乙腈)冲洗色谱柱,以去除悬浮物和固体颗粒。
此外,还可以使用纯溶剂进行适当的冲洗,以除去柱底的附着物。
4. 色谱柱的压力限制:为了避免色谱柱的损坏和破裂,应注意限制色谱柱的最大操作压力。
一般来说,C18色谱柱的最大操作压力为400-600 bar,具体压力限制应视柱子型号而定。
5.色谱柱的管线连接:在连接色谱柱和管线时,应注意连接的紧密性。
确保连接口无泄漏,避免溶剂泄漏造成的柱底液滴,以免影响分离效果。
6.色谱柱的pH范围:C18色谱柱主要用于中性和弱酸性化合物的分离,不适用于酸性和碱性化合物。
一般来说,C18色谱柱的pH工作范围为2-8,超过此范围会影响柱子的稳定性和寿命。
7.色谱柱的再生和保养周期:根据柱子使用情况和样品类型的不同,可以适当延长色谱柱的使用寿命。
通常情况下,C18色谱柱的寿命在100-200次左右。
超过这个次数后,可以考虑对柱子进行再生,使用适当的再生溶剂(如甲醇/乙腈和酸性溶液)进行再生处理。
8.色谱柱的操作温度:C18色谱柱的操作温度范围通常在室温到50℃之间。
在操作过程中,应注意温度的控制,避免温度过高或过低对柱子的影响。
9.色谱柱的保健:在柱子存放和使用期间,应注意避免强烈的酸碱溶液的接触。
柱底的固相填料可以通过适当的保护剂(如硅胶)进行保护,以延长柱子的使用寿命。
总之,C18色谱柱的维护对于保证色谱技术的准确性和可靠性非常重要。
色谱柱的维护与保养
色谱柱的维护与保养一、C8及C18反相色谱柱(新的色谱柱)应该在自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
使用前应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。
具体步骤如下:(1)准备新鲜超纯水及色谱级乙腈或甲醇,冲洗色谱仪器系统,保证仪器系统管路干净。
(新柱老化前,此步决不可忽略)(2)将色谱柱反向连接,不接检测器。
用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗20~30min。
(目的是冲洗出柱入口端无机杂物与筛板孔杂物,使筛板正常)(3)再将色谱柱正向连接,不接检测器。
用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗20~30min。
(目的是冲洗出柱出口端无机杂物与筛板孔杂物,使筛板正常)(4)连接检测器,开启柱温达30℃~40℃,用水-有机相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速冲洗4h以上。
(目的是充饱和色谱柱,去除柱内空气)(5)用水-有机相(10:90~5:95),以0.3~0.6ml/min流速冲洗2h以上[或在120min内以水-有机相(95:5→0:100)梯度变化,以0.3~0.6ml/min流速冲洗]→再用100%有机溶剂,以0.3~0.6ml/min流速冲洗1h以上→最后用100%有机溶剂,以1ml/min流速冲洗1h以上。
(目的是老化色谱柱)(6)在平衡前根据水相-有机相的比例,首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例,以1ml/min流速冲洗30左右(目的是相平衡过渡)。
如果流动相中含有缓冲盐,决不可在柱老化后立即用流动相平衡,必需先用90%以上水进行预平衡30min以上,否则,会导致缓冲盐在柱内析出结晶,严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
(7)然后更换成新制并经0.45um滤膜过滤,超声脱气后的流动相,按检测方法平衡至少1h,待基线稳定后,开始进样检测。
色谱柱的使用注意事项及维护
色谱柱的使用注意事项及维护在日常分离分析工作中,色谱柱的正确使用和维护十分重要,色谱柱使用是否得当,直接影响色谱柱的寿命,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。
(1)柱子在装卸、更换时,动作要轻,接头拧紧要适度。
必须防止较强的机械振动,以免柱床产生空隙。
(2)如果仪器用来做仪器分析,样品种类有限,但分析次数多,则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱,这样有助于延长柱子的寿命。
(3)避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓。
(4)应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然。
(5)如使用柱温控制装置时,应注意在通人流动相后才能升温。
(6)一般说来色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会迅速降低柱效。
(7)选择使用适宜的流动相,以避免固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一个预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
(8)避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内,需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。
保护柱一般是填有相似固定相的短柱。
保护柱可以而且应该经常更换。
(9)经常用强溶剂冲洗色谱柱,清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右,即常规分析需要50-75mL。
(10)保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。
绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
(11)色谱柱使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进人柱内,使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷,死体积增大。
c18色谱柱 保存 步骤
C18色谱柱的保存步骤如下:
保存前的处理
1. 清洗:使用适当的流动相(例如甲醇-水混合物)以低流速冲洗色谱柱,以去除残留在柱内的样品和杂质。
2. 脱气:如果可能,使用氮气或其他惰性气体吹扫色谱柱内部,以去除残留的溶剂蒸汽。
3. 保护液填充:用适合的保护液充满色谱柱。
对于反相C18色谱柱,通常推荐使用甲醇:水=50:50(v/v)的溶液作为保护液。
存放条件
1. 温度:将色谱柱存放在室温(大约15-25℃)下,避免极端的温度变化。
2. 湿度:防止色谱柱受潮,如果可能的话,可以将其储存在干燥箱中。
3. 避光:色谱柱应存放在避光的地方,因为紫外线可能会导致固定相的降解。
长期不使用时的注意事项
1. 定期检查:即使色谱柱未在使用,也应定期检查其是否保持良好状态,并根据需要重新平衡或更换保护液。
2. 重新启用:在重新使用长期存放的色谱柱之前,最好先进行一次温和的清洗和再生过程。
c18色谱柱使用注意事项
c18色谱柱使用注意事项
以下是关于《c18 色谱柱使用注意事项》的文章:
哎呀呀,朋友们!当我们涉及到化学分析领域,c18 色谱柱的使用那可是至关重要的哟!
首先呀,安装c18 色谱柱可得小心翼翼,就像呵护珍贵的宝贝一样!在安装过程中,要确保操作环境的洁净,千万别让灰尘杂质啥的跑进去啦!这就好比给一辆顶级跑车注入了劣质的燃油,能跑得顺畅吗?
使用之前,一定要对色谱柱进行充分的平衡哟!这个步骤可不能马虎,就像运动员在比赛前的热身一样重要!要是平衡不充分,那得出的数据能准确吗?哎呀,想都不敢想!
还有呀,流动相的选择也是关键!不能随便乱选哟,要根据样品的性质和分析的要求来精心挑选。
这就好像给病人开药方,得对症下药才行呀!而且,流动相的pH 值也要控制好,不然会损害色谱柱的性能,那可就糟糕啦!
在使用过程中,注意压力的变化可重要了呢!如果压力突然升高,那得赶紧排查原因,是不是有堵塞啦?是不是流速太快啦?这就像汽车仪表盘上的故障灯亮起,必须得重视呀!
样品的处理也不能疏忽哟!要保证样品的纯度和浓度合适,不然会污染色谱柱的,这多可怕呀!就像往干净的池塘里倒入污水,后果不堪设想!
使用完毕后,也要对色谱柱进行妥善的保存。
不能随便一放就不
管啦,要按照规定的条件存放,就像把珍贵的文物放在合适的展柜里一样。
总之呀,c18 色谱柱的使用是一项非常严谨和细致的工作,每一个环节都要用心对待,才能保证分析结果的准确性和可靠性,才能让我们的实验和研究顺利进行呀!。
C18色谱柱的选用、保养与维修知识汇总!
C18色谱柱的选用、保养与维修知识汇总!一、C18柱的选用1.1C1.2C1.3C二、C18柱的日常使用和维护在日常分别分析工作中,色谱柱使用是否得当,直接影响色谱柱的寿命。
下面介绍C18柱在日常使用过程中应留意的事项。
(1)柱子在装卸、更换时,动作要轻,接头拧紧要适度。
必需防止较强的机械振动,以免柱床产生空隙。
(2)假如仪器用来做常规分析,样品种类有限,但分析次数多,则不妨为每一类常规分析配置1根专用柱,这样有助于延长柱子的寿命。
(3)如使用柱温掌握装置时,应留意在通入流淌相后才能升温。
(4)流淌相使用前需进行脱气处理,以免降低柱效和影响检测等。
样品溶液需经适当的前处理及过滤,以削减柱污染和堵塞。
(5)在更换流淌相种类时,应留意溶剂的互溶性,防止发生盐析现象。
(6)柱子的实际操作压力应低于填装时的最高压力,最好在最高压力一半以下。
一般不超过20 593.965~29 419.95 kPa。
在低压力(14 709.975 kPa)的范围使用,可使柱保持长时期的高柱效。
(7)C18色谱柱属非极性键合相色谱柱,流淌相的pH值应严格掌握在2~7之间,以免损坏柱子。
(8)在完成分别分析工作之后,不应马上停机,需准时对色谱分析系统进行冲洗,一般0.5 h以上,以除去色谱柱内的杂质。
(9)假如流淌相中有盐类,首先用水充分清洗。
假如是胺类(如三甲胺类或四丁基胺类)添加到流淌相中,要用50%甲醇和0.05%磷酸溶液混合溶剂冲洗,不要只用水冲洗。
(10)C18一般用100%甲醇作为保存溶剂,以防柱子干裂而损坏。
严禁水或缓冲溶液长时间在色谱流路中保留。
(11)选用合适的C18爱护柱,以爱护分析柱免受杂质颗粒及不行逆吸附的干扰物的影响。
爱护柱内装填料颗粒度应与分析柱填料的颗粒度尽量全都。
(12)柱的保存期不宜太长。
短期不用的C18柱,用甲醇冲洗30~60 min,然后将柱两端密封。
较长期不用的柱子,一是实行定期冲洗,再密封的方法;二是在冲洗后,柱两端各装1只有肯定容量的灌满甲醇的容器(只装一端也可),以补充在较长存放期间柱内溶剂的蒸发。
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【讨论】高效液相色谱柱的保护各位同仁,为保证我们的分析效果,延长色谱柱的使用寿命,大家一起来贡献一下自己在色谱柱使用过程中的护柱秘诀吧。
我先来聊聊,算是抛砖引玉了1、最好用预柱。
(但要注意,若有时出峰异常,要先看看是不是它有问题了)2、每次做完分析,都要进行冲洗,分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质,建议用90%甲醇冲洗30~60min;若分析用流动相中含以上物质,要先用10%甲醇(或用与分析用流动相同比例,把含酸、碱、盐溶液换成水)冲洗1小时左右,再梯度走到90%甲醇冲洗30~60min(若用多元泵)。
有必要时再循环几次,可以适当缩短时间。
若长时间不用该色谱柱,要冲洗好后,用纯甲醇或乙腈封存。
3、若流动相中用到离子对试剂,更应该好好冲洗,且该色谱柱最好作为专用,不能再做其它物质分析用。
因色谱柱填料性质已与原来所不同,在该柱上所摸索的色谱条件,可能在其它同类柱子上得不到重现。
4、尽量避免反冲,除非该色谱柱厂家明确说明允许。
5、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。
6、定期测柱效,有下降,可以用10%异丙醇甲醇冲洗色谱柱。
若柱效还没有改善,可以再生,甲醇-二氯甲烷-甲醇。
呵呵,还有的一时想不起来了,各位有经验的战友请发表高见!1.样品要采用0.22或0.45μm滤膜过滤,流动相采用0.45μm滤膜过滤并脱气。
2.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围3.避免流动相组成及极性的剧烈变化。
4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。
5.每次测试完毕,要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱(分析色谱柱250×4.6mm柱体积3.2ml)。
如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净,并保存于乙腈中。
6.压力升高是需要更换预柱的信号。
1:溶剂中的不溶物—应使用色谱纯溶剂,膜过滤(孔径不超过0.45μm)2:样品中的不溶物—应对样品进行膜过滤(孔径不超过0.45μm)3:泵,进样器等中的不溶物—在泵和进样器之间安装内置过滤器,在进样器和柱之间安装预过滤器4:柱内不溶物的形成:由于溶剂的不互溶而产生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱;在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀—检查样品液和流动相是否互溶;由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀—将色谱柱密封紧,并保持室温恒定!还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生:1 平衡色谱柱:反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。
请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。
由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"。
硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。
如果该色谱柱需要使用含水的流动相,请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡如何平衡色谱柱?平衡过程中,将流速缓慢地提高;用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低,则需要较长的时间来平衡)2 色谱柱的再生:进行色谱柱再生时,应使用一个谦价的泵,最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。
0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱!偶也来参与一下,谈一点拙见1.对于一些特殊型号的柱子,例如不同型号的手性柱应严格按照柱子的相应说明书所要求的进行维护,并按照其规定的范围选择试剂的种类,比例,PH ,等等;2.尽量避免柱子进气泡的现象出现,如在实验过程中留心流动相的体积,同时对所需体积进行大概的估计,以免吸空,气泡进柱,尽管有多种排气泡的方法,但毕竟影响柱子的性能,尤其是比较“娇贵”的柱子;每天用足够的时间来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得最大的"补偿",而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!------ 一定得做!新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
并且,在以后的使用中,应时常对色谱柱进行测试。
卡套柱的安装(不加预柱)1.将卡套架套入柱芯2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使柱芯高于夹套(见左图)3.将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片4.将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧5.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端6.连接到液相色谱仪,PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手注意:使用卡套柱时,两端的卡套应时刻连接在柱芯上。
不管您是平衡色谱柱或是清洗,任何时候都不能将卡套取下来,否则会造成填料的流失。
卡套柱的安装(加预柱)1.将卡套架套入柱芯2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使夹套高于柱芯(见左图)3.将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片4.将"子弹头"预柱放入卡套片内5.将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧6.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端7.连接到液相色谱仪,PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片(同时可以修补色谱柱)注意:在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前,应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗,而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈,以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。
1.将修补工具中的2套入柱芯的顶端2.将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中,并顺时针方向旋转到旋紧3.一手握柱芯,另一只手轻轻地向外拉3,取出柱芯顶端的滤网4.用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料5.将新的填料用甲醇润湿,然后填入挖去的部位,压平6.照(左图)装上新的玻璃棉滤网,并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端7.柱芯顶端套上2,然后参照(左图)将滤网放入8.压紧,然后取下2,再用4将滤网的边缘压平平衡色谱柱反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。
请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。
由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"。
硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。
如果该色谱柱需要使用含水的流动相,请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡如何平衡色谱柱?平衡过程中,将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低,则需要较长的时间来平衡)色谱柱的再生进行色谱柱再生时,应使用一个谦价的泵,我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。
表1建议用来冲洗的溶剂体积色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积125-4 1.6ml 30ml250-4 3.2ml 60ml250-10 -20ml 400ml请根据下表选择您的再生方法:极性固定相(如Si,NH2*,DIOL基色谱填料)的再生:正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**非极性固定相(如反相色谱填料RP-18,RP-8,CN等)的再生:水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱注意:在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能成铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
色谱柱的维护1.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)2.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围3.避免流动相组成及极性的剧烈变化4.流动相使用前必须经脱气和过滤处理5.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存大乙腈中6.压力升高是需要更换预柱的信号对于高效液相色谱柱的保护我也来谈谈吧。
1.首先,溶剂、样品要前处理,溶剂要用色谱级别的并用0.45um的滤膜过滤并脱气,样品要用0.22um的滤膜过滤。
2.做样前,柱子要平衡一段时间,先用甲醇平衡30-60分钟,再用纯化水平衡30-60分钟,然后用流动相平衡,直到基线走平时,再进样。
3.做样结束后,柱子要用甲醇和水冲洗,冲洗顺序与2步相反,最后柱子用甲醇(95%)保存。
4.如果柱子里东西太多,可以用甲醇,乙腈,水反复冲洗。
谈谈关于启用新柱子(C18)的注意事项:1、首先应检查一下,看是否为原装产品和外观完好情况。
2、保存好供应商随柱提供的“关于柱性能测试报告”,其中包含了新柱子的最佳性能指标,如在某预定色谱条件下的柱压、柱效等。
3、重现流动相条件,主要观察柱压的变化(100%甲醇、100%乙腈、50%甲醇-50%水等),并将数据记录在“性能报告上”,以便今后对照。
4、启用新柱子时的流动相流速应慢一点,如0.3-0.5ml/min,经过10-15min后可以加快。
5、对于25cm柱子,流速一般不超过1.0ml/min,能用慢速流量时尽量使用慢一点,当然要考虑分离效果和分析时间。
加预柱喽!以上大家都说了很多柱子保护方面的内容,已经很全了,但我想补充一个方面:用离子对色谱法时柱子使用的一个问题.我们知道,一般我们分析样品时,常采用有机相(甲醇,乙腈)-水体系作为流动相,对于大部分的分析工作,这个体系就能胜任了,但是,当我们遇到弱酸碱时,比如生物碱,容易拖尾,这时候我们可以采用离子对色谱法进行分离,常用的离子对试剂有庚烷磺酸肭和十二烷基磺酸钠,这时候,我们常采用pH3-5的缓冲盐体系,我们在采用离子对色谱进行分离时,该怎么保护色谱柱呢?一个很重要的问题是,当我们冲柱子的时候,应该先采用有机相-水体系冲,再用水冲,然后用有机相冲,比如我们的流动想是甲醇-0.5%的庚烷磺酸钠(pH3.3)(50:50),我们在冲柱子的时候,应该先用50%的甲醇水冲柱子,然后用水冲,然后用甲醇冲,这是为什么呢?我们知道,通常的洗衣粉的主要有效成分是十二烷基硫酸钠(表面活性剂),它可以把一些脂肪油洗下来(烷烃及其衍生物),庚烷磺酸纳也是表面活性剂,如果先用水冲洗,会产生用洗衣粉洗衣服时的效果(ODS的固定相是长链烷烃),会造成固定相的损失,如果我们采用有机相-水体系先冲柱子,由于表面活性剂在有机相中有一定的溶解度,并且流动相的量比较大(相对于固定相,因为流动相是在不停的流动嘛)会使表面活性剂逐渐溶解在流动相中而被冲出,当表面活性剂被冲干净之侯,我们就可以采用水冲,然后采用有机相保存柱子了.我也说说色谱柱的保护首先要看清楚说明书,是属于何种色谱柱,楼上各位所说都是集中在反相柱上,而正相色谱柱的保护和处理则有很大不同其次,色谱柱优良好坏的指标有柱效、柱压等如果在实验的某一天突然发现柱压升高,或者峰形脱尾等现象,则有必要对色谱柱进行处理。