植物生理学实验叶绿体色素的提取、分离

3 铜代反应
取上述色素乙醇提取液少许于试管中，1 滴1滴加入浓盐酸，观察颜色变化。然后加醋 酸铜晶体少许，酒精灯上慢慢加热溶液，观察 色素颜色的变化。
叶绿素的提取
叶绿素是一种酯，因此不 溶于水。通常用含有少量水的 有机溶剂如80％的丙酮，或 者95%乙醇，或丙酮∶乙醇∶ 水＝4.5∶4.5∶1的混合液来 提取叶片中的叶绿素，用于测 定叶绿素含量。 之所以要用 含有水的有机溶剂提取叶绿素， 这是因为叶绿素与蛋白质结合 牢，需要经过水解作用才能被 提取出来。
（直径11cm）：酒精灯 （三）试剂： 95％乙醇；石英砂；盐酸；醋酸铜 推动剂：按石油醚；丙酮：苯（10:2:1）比例配 制（V／V）。
三、实验步骤
1. 叶绿体色素的提取 （1）称取菠菜新鲜叶片2g，洗净，擦干，去掉中脉剪
碎，放入研钵中。 （2）研钵中加2～3ml 95％乙醇，研磨至糊状，再加
10～15ml 95％乙醇，提取35min，上清液过滤于三 角瓶中（试管中）。 （3）在光源下观察荧光现象：在直射光下观察溶液的颜 色，比较透射光及反射光下的颜色有何不同？试述其 原因。
提取液的分离：因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适 当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流 动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过 一定时间后，可将各种色素分开。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：常春藤叶 （二）仪器设备： 研钵；漏斗；三角瓶或试管；剪刀；滴管；玻棒；圆形滤纸
实验6 叶绿体色素的提取、分离
实验目的
了解叶绿体色素提取与分离的原理，掌握叶绿 体色素提取方法，学会纸层析法分离色素。观 察叶绿素的荧光现象，观察铜代反应现象。
一、原理Hale Waihona Puke Baidu
叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素 （包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。
这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙 酮等有机溶剂提取。
提取方法
研磨法 浸提法
0.1g叶+10ml混合液浸 提
研磨法提取 光合色素
铜代叶绿素反应
❖ 卟啉环中的镁可被H+所 置换。当为H＋所置换后， 即形成褐色的去镁叶绿素。 ❖ 去镁叶绿素中的H＋再被 Cu2+取代，就形成铜代叶绿 素，颜色比原来的叶绿素更 鲜艳稳定。 ❖ 根据这一原理可用醋酸 铜处理来保存绿色标本。
2. 叶绿体色素的分离
（1）取圆形定性滤纸一张（直径11cm），用毛细滴管 吸取或玻棒蘸取乙醇叶绿体色素提取液点于滤纸中心， 使色素扩散，风干后，再重复操作数次。
（2）用吸管吸取推动剂滴在滤纸中间，当推动剂前沿接 近滤纸边缘时，即可看到分离的各种色素。风干滤纸， 剪取一条分开的色素带，标明各种色素的位置及颜色， 作为结果贴于实验报告上。
制作绿色标本方法：
用50%醋酸溶液配制的饱 和醋酸铜溶液浸渍植物标 本(处理时可加热)
当溶液变褐 色后，投入 醋酸铜粉末， 微微加热， 形成铜代叶
绿素
向叶绿素溶液 中放入两滴5 ％盐酸摇匀， 溶液颜色的变 为褐色，形成
去镁叶绿素。