植物生理学实验叶绿体色素的提取、分离
植物生理学实验叶绿体色素的提取、分离
2. 叶绿体色素的分离
（1）取圆形定性滤纸一张（直径11cm），用毛细滴管 吸取或玻棒蘸取乙醇叶绿体色素提取液点于滤纸中心， 使色素扩散，风干后，再重复操作数次。
（2）用吸管吸取推动剂滴在滤纸中间，当推动剂前沿接 近滤纸边缘时，即可看到分离的各种色素。风干滤纸， 剪取一条分开的色素带，标明各种色素的位置及颜色， 作为结果贴于实验报告上。
3 铜代反应
取上述色素乙醇提取液少许于试管中，1 滴1滴加入浓盐酸，观察颜色变化。然后加醋 酸铜晶体少许，酒精灯上慢慢加热溶液，观察 色素颜色的变化。
叶绿素的提取
叶绿素是一种酯，因此不 溶于水。通常用含有少量水的 有机溶剂如80％的丙酮，或 者95%乙醇，或丙酮∶乙醇∶ 水＝4.5∶4.5∶1的混合液来 提取叶片中的叶绿素，用于测 定叶绿素含量。 之所以要用 含有水的有机溶剂提取叶绿素， 这是因为叶绿素与蛋白质结合 牢，需要经过水解作用才能被 提取出来。
提取液的分离：因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适 当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流 动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过 一定时间后，可将各种色素分开。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：常春藤叶 （二）仪器设备： 研钵；漏斗；三角瓶或试管；剪刀；滴管；玻棒；圆形滤纸
（直径11cm）：酒精灯 （三）试剂： 95％乙醇；石英砂；盐酸；醋酸铜 推动剂：按石油醚；丙酮：苯（10:2:1）比例配 制（V／V）。
三、实验步骤
1. 叶绿体色素的提取 （1）称取菠菜新鲜叶片2g，洗净，擦干，去掉中脉剪
碎，放入研钵中。 （2）研钵中加2～3ml 95％乙醇，研磨至糊状，再加
10～15ml 95％乙醇，提取35min，上清液过滤于三 角瓶中（试管中）。 （3）在光源下观察荧光现象：在直射光下观察溶液的颜 色，比较透射光及反射光下的颜色有何不同？试述其 原因。
《叶绿体色素的提取和分离》 实验报告
《叶绿体色素的提取和分离》实验报告实验目的1. 学习叶绿体色素的提取、分离方法。
2. 通过叶绿体色素提取、分离方法的学习了解叶绿体色素的相关理化性质。
3. 为进一步研究各叶绿体色素性质、功能等奠定基础。
实验原理叶绿体色素包括绿色的叶绿素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色的类胡萝卜素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类，它们均以色素蛋白复合体形式存在于类囊体膜上。
两类色素均不溶于水而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。
由于提取液中不同色素在固定相和流动相中的分配系数不同，所以可借助分配层析方法将其分离。
实验仪器与药品1. 绿色植物如菠菜等的叶片。
2. 研钵、漏斗、三角瓶、剪刀、滴管、康维皿、圆形滤纸（直径11cm）。
3. 95％乙醇、石英砂、碳酸钙、展层剂。
展层剂按石油醚：丙酮：苯10:2:1的比例配制（V／V）。
实验步骤1. 叶绿体色素的提取（1）取菠菜或其它新鲜植物叶片4～5片（4g左右），将其洗净、擦干并去掉中脉，剪碎后置入研钵中。
（2）研钵中加入95％乙醇2～3 ml及少许石英砂、碳酸钙研磨至匀浆，再加95％乙醇5ml，然后以漏斗过滤之，即为色素提取液。
2. 叶绿体色素的分离（1）取圆形定性滤纸一张（直径应小于康维皿直径）于其中心扎一圆形小孔（直径约3mm），另取长方形滤纸条一张（5cm×1.5cm），用滴管吸取乙醇叶绿体色素提取液沿滤纸条的长度方向涂抹，注意涂抹色素扩散宽度应限制在0.5cm以内，风干后再重复操作数次。
然后沿长度方向将滤纸条卷成纸捻，使涂抹过叶绿体色素溶液的一侧恰在纸捻的一端。
（2）将纸捻带有色素的一端插入圆形滤纸的小孔中，使与滤纸刚刚平齐（勿突出）。
（3）在康维皿中央小室中加入适量的展层剂，把带有纸捻的圆形滤纸平放在康维皿中央小室上，使纸捻下端浸入展层剂中，迅速盖好培养皿。
展层剂将借助毛细管作用顺纸捻扩散至圆形滤纸上，使叶绿体色素在固定相（滤纸中吸附有水分的纤维素）和流动相（展层剂）间反复分配，从而使不同色素得到分离，分离结果为滤纸上可见到各种色素的同心圆环。
浅谈叶绿体色素的提取,分离实验的基本原理
浅谈叶绿体色素的提取,分离实验的基本原理叶绿体色素是植物共同的分子，是植物叶片绿色色素的主要成分，在植物的基因组中占有非常重要的地位。
叶绿体色素的提取和分离实验是植物生理学研究中常见实验，它们的研究对于深入解析植物叶片绿色色素的组成、形成机制以及植物的适应和演化有重要的意义。
本文简要介绍叶绿体色素提取、分离实验的基本原理以及实验步骤。
一、叶绿体色素的提取1.提取用植物组织植物细胞是由多种组织结构的嵌套形式组成的，而叶绿体这种特殊的细胞构造，它们除了在细胞质和细胞核里贮存着叶绿素外，还处于细胞子室内、细胞膜之间，因此叶绿体色素的提取，必须从整个植物细胞体内提取。
2.提取步骤a)取植物组织消化，加入蛋白酶消化液，消化温度保持在37℃，消化完成后，用离心机将悬浮液离心分离；b)将悬浮液和脉粗滤；c)用离心机将滤液离心，并将残留物清除；d)用硫酸钠缓冲液将离心液中的叶绿体色素进行沉淀分离；e)最后，用离心机将沉淀液离心，取得叶绿体色素提取液。
二、叶绿体色素分离实验叶绿体色素分离实验是以“四维定律”为基础的，四维定律指的是溶解物的溶解度与温度、酸度、配体浓度等四个维度的变化而发生变化。
以下是叶绿体色素分离实验的实验步骤：1.温度调节将叶绿体色素提取液加入50mL的萃取液中，将温度调节到10°C，保持温度稳定后，用离心机将其离心十分钟；2.酸度调整将离心液加入室温的硫酸铵溶液中，搅拌均匀，然后再次利用离心机离心，将叶绿体色素沉淀出来；3.配体浓度调整将离心液和硫酸铵溶液加入50mL的氯化钠溶液中搅拌均匀，然后将其再次离心，至此叶绿体色素被沉淀出来，即可获得叶绿体色素的分离液；最后，用离心机离心冷却至温度达到最低，来增强叶绿体色素的沉淀，以达到纯度高的目的。
综上所述，叶绿体色素的提取、分离实验步骤比较复杂，从植物组织的提取、细胞色素的悬浮液提取、细胞色素的滤液提取、通过改变温度、酸度、配体浓度的方法对叶绿体色素的分离实验，至此，叶绿体色素的提取和分离实验基本原理就介绍完了。
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定摘自王尊本主编,综合化学实验(第二版),第226-244页,北京:科学出版社,2007年9月。
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定[1-27]一、叶绿体色素的提取(一) 实验目的1)掌握有机溶剂提取叶绿体色素等天然化合物的原理和实验方法。
2)了解皂化-萃取提取胡萝卜素的原理。
3)了解1,4-二氧六环沉淀法提取叶绿素的原理。
(二) 实验原理植物光合作用是自然界最重要的现象,它是人类所利用能量的主要来源。
在把光能转化为化学能的光合作用过程中,叶绿体色素起着重要的作用。
高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类,主要包括叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素四种。
它们所呈现的颜色和在叶绿体中含量大约比例见表34.1。
表34.1 高等植物体内叶绿体色素的种类、颜色及含量项目叶绿素类胡萝卜素叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜素叶黄素颜色蓝绿色黄绿色橙黄色黄色在叶绿体内各色素含量比例 3 1 2 13 1 叶绿素chlorophylls是叶绿酸的酯,它在植物进行光合作用中吸收可见光,并将光能转变为化学能。
叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂。
在绿色植物中叶绿素主要以叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)两种结构相似的形式存在,其差别仅是叶绿素a中一个甲基被叶绿素b中的甲酰基所取代。
叶绿素的基本结构见图34.1。
在叶绿素分子结构中含有四个吡咯环,它们由四个甲烯基联结成卟啉环,在卟啉环中央有一个镁原子,它以两个共价键和两个配位键与4个吡咯环的氮原子结合成内配盐,形成镁卟啉。
在叶绿素分子中还有两个羧基,其中一个与甲醇酯化成COOCH3,另一个与叶绿醇酯化成COOC20H39长链。
类胡萝卜素carotenoids是一类不饱和的四萜类碳氢化合物(例如胡萝卜素,carotenes,或它们的氧化衍生物(例如叶黄素类,xanthophylls。
叶绿体色素的提取和分离实验步骤
叶绿体色素的提取和分离实验步骤一、实验前的准备首先呢，咱们得把材料都准备好。
新鲜的绿叶是必须的啦，像菠菜叶就很不错哦。
还有要准备好研钵、漏斗、滤纸、层析液、无水乙醇这些东西。
这一步看起来很平常，但可千万别小瞧它，要是少了啥东西，实验过程中再去找就麻烦啦！我就有过一次，忘记准备滤纸了，当时那个手忙脚乱所以大家一定要仔细检查材料是否齐全哦！二、叶绿体色素的提取1. 取几片新鲜的绿叶，把它们剪碎放在研钵里。
这里呢，叶子不用太多，适量就好，大概四五片大菠菜叶就差不多了。
然后加入少许的二氧化硅和碳酸钙。
二氧化硅有助于研磨得更充分，碳酸钙呢，可以防止叶绿素被破坏。
这一步很关键哦！我每次都会多检查一遍有没有加这两样东西，真的很重要呢！2. 接着倒入适量的无水乙醇。
无水乙醇的量啊，大概能把叶子都浸湿就可以了。
然后就开始研磨啦。
研磨的时候要用力均匀，慢慢磨，别太着急。
这一步虽然不难，但也需要点耐心。
我通常会在这个环节花多一些时间，确保研磨得足够细。
你看，如果研磨不充分，可能就会影响后面色素的提取量呢，是不是？3. 研磨好之后，咱们就用漏斗和滤纸进行过滤，把研磨液过滤到一个小试管里。
这时候要注意，滤纸要折叠好放在漏斗里，不要有缝隙，不然过滤的时候就会漏得到处都是，那就糟糕了！三、叶绿体色素的分离1. 准备好一个滤纸，把它剪成一个长条形，并且一端要剪去两角。
为啥要剪去两角呢？嘿嘿，这是个小技巧，可以让色素在滤纸上跑得更整齐哦。
然后用铅笔在距离剪去两角那端大概一厘米的地方画一条细线，这条细线就是用来蘸取我们前面提取出来的色素滤液的。
这一步可不能画得太粗啦，不然色素带就会重叠在一起，那就分不清啦。
2. 用毛细吸管吸取少量的色素滤液，轻轻地沿着铅笔线涂抹。
注意哦，不要涂太多，一点点就好。
如果涂多了，色素就会扩散得乱七八糟的。
这一点真的很重要，我通常会再检查一次，真的，确认无误是关键。
3. 把这个滤纸条放进装有层析液的层析装置里。
叶绿体色素的提取与分离
叶绿体色素的提取与分离
叶绿体色素是存在于植物细胞叶绿体中的一种色素类物质，包括叶绿素、类胡萝卜素等。
它们对光的吸收起着关键作用，是光合作用的必需物质。
叶绿体色素的提取与分离是研究植物生理学、植物生态学、农业及环境科学的重要手段。
常用的提取方法包括溶剂提取法、酸碱提取法、离子交换纯化法等。
其中溶剂提取法最为常用，它可利用叶绿体色素对溶剂的亲和力，将其从叶绿体中提取出来。
叶绿体色素的分离方法主要包括色谱法、电泳法等。
其中色谱法是一种高效、快速、准确的分离方法，常用的色谱包括薄层色谱、纸层色谱、高效液相色谱等。
电泳法则可根据叶绿体色素的电性差异进行分离，常用的有等电聚焦电泳、SDS-PAGE等。
叶绿体色素的提取与分离技术的发展，为研究植物生理生态学、食品营养学、农业生产等领域提供了重要的技术支持。
- 1 -。
叶绿体色素提取与分离实验
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能的色素和结构
（一）捕获光能的色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素的提取和分离实验中在滤纸条上扩散速度 最快的色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
4、在圆形滤纸的中央点上，对叶绿体的色素进行色素分析， 会得到近似，同心的四个色素环，排到在最里圈的色素是 （） A、橙黄色 B、蓝绿色 C、黄色 D、黄绿色
练习
1、在植物实验室的暗室内，为了尽可能地降
低植物光合作用的强度，最好安装（ B）
A、红光灯 B、绿光灯 C、白炽灯 D、蓝光灯
2、为提高大棚蔬菜的产量，哪项措施更有效
5、下图是叶绿体色素的提取与分离实验中所用的材料与用具。请回答： 分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色的溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表示加，“—”表示不加。
处理 二氧化硅（少量） 碳酸钙（少量） 95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
C、安装绿色透光薄膜 D、安装无色透光薄膜
练习
3．在圆形滤纸的中央点上粘叶绿体的色素滤液， 进行色素分析，会得到近似同心环状的四个色素圈，
排在外圈的色素呈 [ A]
植物生理学实验报告叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定
植物生理学实验报告叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定引言：叶绿体是植物细胞中的一个重要细胞器，其中主要存在着叶绿素等色素，它们在光合作用中起着重要的作用。
研究叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定，对于了解光合作用的机理以及研究植物生理生化过程具有重要意义。
本实验旨在通过实验手段提取叶绿体色素，进行色素的分离、理化性质的研究和叶绿素含量的测定。
材料与方法：材料：菠菜叶片、研钵、磨杵、丙酮、乙醇、石油醚、叶绿素提取液、测色皿、高锰酸钾溶液、浓硫酸。
方法：1.取适量菠菜叶片放入研钵中，加入适量丙酮，用磨杵捣碎成糊状。
2.将捣碎的菠菜糊状物转移到玻璃漏斗中，用石油醚冲洗3次，使叶绿体附着物进一步析出。
3.将漏斗中的上清液收集，并加入适量乙醇，振摇混合，使叶绿素慢慢析出。
4.将释放出的叶绿体颗粒通过离心机离心沉淀10分钟，收集沉淀。
5.取收集到的叶绿体沉淀，加入适量叶绿素提取液，用乳钙酸钠解离剂进行叶绿素含量的测定。
6.将其中一部分叶绿体溶液加入高锰酸钾溶液，观察颜色变化。
7.将其余叶绿体溶液与浓硫酸混合，观察颜色变化。
结果与讨论：通过上述方法，我们成功地提取并分离出菠菜叶片中的叶绿体色素。
加入石油醚可以去除一部分杂质，使叶绿体进一步纯化。
加入乙醇可以使叶绿素从叶绿体中溶出。
通过离心沉淀，我们收集到了叶绿体的沉淀物。
叶绿体的提取液与高锰酸钾溶液反应后呈现蓝色或紫色，这是由于高锰酸钾通过氧化反应将一些具有现菌酮结构的物质氧化为合成叶绿素的前体物质所引起的。
这种反应也证实了叶绿体的存在。
叶绿体溶液与浓硫酸混合后呈现蓝绿色，这是由于浓硫酸通过剥离叶绿体周围的蛋白质和其他有机物质，将叶绿素分子释放出来，产生颜色变化。
叶绿素的含量测定是通过与乳钙酸钠解离剂反应来进行的。
乳钙酸钠解离剂能够与叶绿体中的叶绿素结合，并形成稳定的叶绿素-乳钙酸钠络合物。
这种络合物通过光密度的测定，可以根据比色法来测量叶绿素的含量。
叶绿体色素的提取与分离实验
3、用纸层析法将色素进行分离，在滤纸条上出现最宽旳一 条色素带旳颜色是（ ） A、橙黄色 B、黄色 C、蓝绿色 D、黄绿色
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能旳色素和构造
（一）捕获光能旳色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占1/4
吸收可见 旳太阳光
类胡萝卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素旳提取和分离试验中在滤纸条上扩散速度 最快旳色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色旳溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表达加，“—”表达不加。
处理
二氧化硅（少许） 碳酸钙（少许）
95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（1）A处理得到旳溶液颜色是 黄绿色 ，原因是__叶__绿__素_被__破__坏__________
（6）色素分离旳成果：相邻色素带间距最宽旳是 他们旳颜色是 橙黄色 和 黄色 ，主要吸收 蓝紫
胡萝卜素 和 叶黄素 ， 光。
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
实验3叶绿体色素的提取、分离及理化性质的测定
实验3叶绿体⾊素的提取、分离及理化性质的测定实验三叶绿体⾊素的提取、分离及理化性质的测定【实验原理】叶绿体⾊素⼜称光合⾊素，在⾼等植物中可分为叶绿素和类胡萝⼘素两⼤类，前者包括叶绿素a（蓝绿⾊）和叶绿素b（黄绿⾊），后们类囊体膜上的蛋者包括胡萝⼘素（橙⾊）和叶黄素（黄⾊），它与⽩质结合形成⾊素蛋⽩复合体，不溶于⽔，易溶于酯，因此可⽤丙酮、⼄醇、⽯油醚等有机溶剂进⾏提取。
叶绿体⾊素的分离有多种⽅法，本实验仅介绍纸层析法。
层析的基本原理：在分离过程中，由⼀种流动相（即⼀种液体或⽓体）带动着试样经过固定相（⼀种⽀持物，如纸）向外扩散，由于试样在两相中的溶解度不同和固定相对试样中不同成分的吸附程度有别，当⽤适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过⼀定时间层析后，可使试样中的各种组分得到分离，在做纸层析时，由于纸对光合⾊素中各种⾊素分⼦的吸附程度不同，以及这些⾊素分⼦在溶剂四氯化碳（推进剂）中溶解度也有差异，以致溶剂带动⾊素分⼦向四周移动时，各种⾊素分⼦沿纸扩散的速度也就不同，使混合⾊素分离，出现不同颜⾊的环。
将提取的叶绿素溶液置于光下，在透射光呈绿⾊，在反射光下呈这现象称为荧光现象。
在反射光下叶绿素溶液之所以呈樱桃红⾊，种发态，激发态的叶樱桃红⾊，是因为叶绿⾊分⼦吸收光能后处于激状绿素分⼦很不稳定，当它回到基态时，将所获得的能量以辐射能的形式发射出红光量⼦。
叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光、⾼温等的破坏，特别是当叶绿素与蛋⽩质分离以后，破坏更快，⽽类胡萝⼘素则较稳定。
叶绿素中的镁可以被H＋所取代⽽成褐⾊的去镁叶绿素，后者遇铜后，其中的氢（H＋）⼜被铜（Cu2＋）取代，形成了铜代叶绿素，便由褐⾊转变成蓝绿⾊，铜代叶绿素很稳定，且⽐原来的绿⾊还要稳定些，在光下也不易被破坏。
设备试剂】【材料、与1. 材料新鲜的菠菜或⼩⽩菜等其他绿⾊植物叶⽚。
2. 设备电⼦天平、研钵、烧杯、量筒、培养⽫、刻度试管、试管夹、试管架、酒精灯、剪⼑、圆形滤纸、⼩漏⽃等。
叶绿体色素的提取和分离
⑵、分离色素 制备滤纸条：剪去两角－使扩散均匀，防止边
缘毛细现象
画滤液细线：直、细、浓(风干后重复数次）
层析液不能没及滤液细线：防止色素 溶于层析液 层析分离 加盖：防止挥发 洗手：丙酮有毒
类 胡 萝 卜 素
叶 绿 素
叶绿素 色素
叶绿素a
叶绿素b 叶黄素
（蓝绿色）
（黄绿色）
（黄色）
含量约占3/4 含量约占1/4
（3）细胞的代谢
——进行叶绿体色素的提取和分离
1、实验原理 提取：色素能溶解在有机溶剂中，不溶于水 如：丙酮溶液 无水乙醇 分离：色素在层析液中溶解度不同，使四种色素 随层析液在滤纸上扩散的速度不同而分离
2、实验用：称取
5g左右的鲜叶，剪碎，放 入研钵中。加少许的石英 砂（充分研磨）和碳酸钙 (保护叶绿素)与丙酮溶液。 在研钵中快速研磨。将研 磨液进行过滤。
类胡萝卜素 胡萝卜素 （橙黄色）
吸收可见 的太阳光 叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
类胡萝卜素主 要吸收蓝紫光
植物生理学实验4叶绿体色素的提取、分离及理化性质(纸层析法)
结果分析
1. 仔细观察和记录实验结果。 2. 画图说明叶绿体色素纸层析结果，并
解释原因。 3. 解释叶绿素的荧光现象。 4. 解释叶绿体色素分子的替代作用现象。
思考题
1. 研磨提取叶绿素时，为何要加入 CaCO3？
2. 铜在叶绿素分子中具有替代镁的作用， 这有何实用意义？
实验试剂：丙酮、碳酸钙、石英砂、四 氯化碳、无水硫酸钠、浓盐酸、醋酸铜 晶体。
叶绿素的提取
称取新鲜菠菜叶片2g，剪碎放入研钵中，加入 丙酮5 ml、少许CaCO3(中和细胞中的酸防止 Mg2+从叶绿素中心释放)和石英砂，研磨成匀浆， 再加入适量的丙酮（5 ml），然后用漏斗过滤， 即得叶绿体色素液。
铜代叶绿素很稳定，在光下不易被破坏， 故常用此法制做植物的原色标本。
实验目的
掌握叶绿体色素的提取方法。 掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和
步骤。 掌握叶绿体色素的部分理化性质。
实验器材和试剂
植物材料: 菠菜叶片
实验器材：试管25 ml量筒、软木塞、 台式天平、研钵、10 ml量筒、试管、 酒精灯、毛细滴管、滤纸、剪刀（自 备）。
3. 在量筒中加入四氯化碳3-5毫升及少量硫酸钠，将滤纸悬 于塞子上。扦入试管，使窄端浸入溶剂中，立于暗处层 析0.5-1小时后观察分层现象。
4. 注意：要求每个同学做一份。
胡萝卜素
最上端橙黄色 的是胡萝卜素， 其次为叶黄素， 于下面蓝绿色 为叶绿素a，最 后的黄绿色为 叶绿素b.
叶黄素
叶绿素a
叶绿素b
韩山师范学院生物系
植物生理学实验
实验四 叶绿体色素的提取、分离及理化 性质（纸层析法)
实验原理
叶绿体色素的提取和分离
(4) 待汽油将要到达滤纸边缘时，取出滤纸，待汽油挥发后， 用铅笔标出各种色素的位置和名称。
3、 叶绿体色素的其他理化性质
将本实验步骤1中提取的叶绿体色素溶液用95％乙醇 稀释一倍，进行以下实验：
(1)皂化作用（叶绿素与类胡萝卜素的分离）
用移液管吸取叶绿体色素提取液5mL于试管中，加入 1.5mL20％氢氧化钾甲醇溶液，充分摇匀。片刻后，加入 5mL苯，摇匀，再沿试管壁慢慢加入1.5mL蒸馏水，轻轻 混匀（不要激烈摇荡），静置在试管架上，可看到溶液逐 渐分为两层，下层是稀乙醇的溶液，其中溶有皂化叶绿素 a和b,上层是苯溶液，其中溶有胡萝卜素和叶黄素。
一、实验目的
1、进一步理解叶绿体色素的提取、分离的原理、 方法；
2、了解叶绿素的光学特性在光合作用中的意义；
二、实验原理
叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要 物质，主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。 它们与类囊体膜相结合成为色素蛋白复合体。这两类色素 都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机 溶剂提取。提取液可用色谱分析的原理加以分离。因吸附 剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混 合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的 分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各 种色素分开。
当叶绿素分子吸收光量子而转变成激发态时，分子很 不稳定，当它变回到基态时发射出红光量子，称为萤光现 象。叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成 的复杂酯，因而可与碱起皂化作用，产生的盐可溶于水中， 利用此法可将叶绿素与类胡萝卜素分开。
叶绿素分子中的镁可被 H + 所取代而形成褐色的去镁 叶绿素。后者遇铜则形成绿色的铜代叶绿素很稳定，在光 下不易被破坏，故常用此法制做标本；叶绿素分子的化学 性质也很不稳定，易受强光破坏，特别是当叶绿素与蛋白 质分离后，破坏更快。
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》实验报告
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》实验报告实验目的：1. 学习叶绿体色素的提取和分离方法。
2. 了解叶绿体中色素的组成和结构。
实验原理：叶绿体是植物和藻类细胞中含有叶绿素的细胞器。
叶绿体中有多种不同类型的色素，包括叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素等。
这些色素通过吸收太阳光能量进行光合作用。
提取叶绿体中的色素可以使用酒精提取法。
酒精可以溶解叶绿体膜，使色素溶解到酒精中。
然后，使用色谱技术可以将不同类型的色素分离出来。
实验材料：1. 鲜叶样品2. 酒精3. 氯仿4. 丙酮实验步骤：1. 将鲜叶样品切碎并置于研钵中。
2. 加入足够量的酒精，用研钵研磨混合，直到叶碎细胞完全破裂。
3. 使用滤纸过滤混合物，得到澄清的叶绿体提取物。
4. 将叶绿体提取物转移到试管中，加入少量氯仿。
5. 等待一段时间，观察到叶绿体提取物分为两个层次：上层为酒精层，下层为氯仿层。
6. 使用滴管将上层的酒精取出，置于干燥的容器中保存。
7. 将下层的氯仿层转移至另一个试管中。
8. 加入适量的丙酮，轻轻摇匀，观察色素在丙酮中溶解。
9. 使用滤纸过滤丙酮溶液，得到单一色素溶液。
实验结果：从叶绿体提取物中分离出不同类型的色素，如叶绿素a、叶绿素b等。
通过色素的溶解性质和色谱技术，可以将这些色素分离出来。
实验总结：通过本次实验，我们学习了叶绿体中色素的提取和分离方法。
了解了叶绿体中的色素组成和结构。
同时，也掌握了使用色谱技术进行色素分离的基本步骤。
这对于进一步研究叶绿体的功能和光合作用具有重要意义。
《植物生理学实验》实验02 叶绿体色素的提取、分离及理化性质的鉴定
• 分子式: Chla C55H72O5N4Mg / Chlb C55H70O6N4Mg • 结构式: 卟啉环化合物 四个吡咯环与四个=CH-组成一个大环,共轭双键形
成一个大π键,环中央有一个镁原子,卟啉环决定叶绿素颜色,也是吸收可见光, 并以诱导共振方式传递光能的根本所在,叶醇尾是由四个异戊二烯单位组成 的双萜; 卟啉环头部呈极性, 具亲水性; 叶醇尾部具亲脂性
长（10-2秒——10-3秒）（无法观察到）
• 化学特性：皂化反应 • 叶绿素是一种双羧酸的酯，可与碱发生皂化作用，产生的盐能溶于水，而
叶黄素不能发生皂化反应，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开
• 化学特性：光不稳定性 • 叶绿素在叶绿体中与蛋白质及酶形成复合物，具有稳定性，但在分离出来
后，在光下会发生氧化作用,被光解为一系列小分子物质而褪色.
• 化学特性：镁的置换反应 • 叶绿素中的镁可被H+取代而生成褐色的去镁叶绿素；加人铜盐作用，后者
则成为绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用 此法制作绿色植物的浸渍标本
实验用品
材料：新鲜植物叶片 仪器：大试管或展层缸，天平，研钵，量筒，烧杯，
漏斗，软木塞，滤纸，毛细滴管，剪刀，分液漏斗， 移液管，分光计 试剂：丙酮，甲醇，醋酸酮，盐酸，氢氧化钾，石英 砂，碳酸钙，无水硫酸钠，四氯化碳，乙醚
02 叶绿素的荧光现象 取上述色素丙酮提取液少许于试管中，分别观察在反 射光和透射光一侧，提取液的颜色有无不同：反射光侧观察到的血红色，即为 叶绿素产生的荧光颜色
03 叶绿素的光不稳定性 取上述色素丙酮提取液少许分装于2支试管中，1支试 管放在黑暗处(或用黑纸包裹)，另一支试管放在强光下，经2—3h后，观察两 支试管中溶液的颜色有何不同。
植物生理学实验报告叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定
实验报告课程名称：植物生理学及实验实验类型：探索、综合或验证实验项目名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定一、实验目的和要求掌握植物中叶绿体色素的提取分离和性质鉴定、定量分析的原理和方法二、实验内容和原理以青菜为材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。
原理如下：1.叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂.常用95%的乙醇或80%的丙酮提取。
2.皂化反应。
叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应，形成绿色的可溶性叶绿素盐，就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。
3.取代反应。
在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的Mg2+可依次被H+和Cu2+取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。
H+取代Mg2+, Cu2+ (Zn2+)取代H+。
4.叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。
透射光下呈绿色，反射光下呈红色。
5.光谱分析。
叶绿素吸收红光和兰紫光，红光区可用于定量分析，其中645和663用于定量叶绿素a,b及总量，而652可直接用于总量分析。
三、主要仪器设备1.天平（万分之一）、可扫描分光光度计（UV-1240）、离心机2.研具、各种容（量）器、酒精灯等四、操作方法与实验步骤1.定性分析a)称取鲜叶3-5g，并逐步加入乙醇15ml，磨成匀浆取匀浆过滤，并倒入三角瓶中，同时观察荧光现象。
b)取三角瓶中约1ml溶液于小试管。
加KOH数片剧烈摇均，加石油醚1ml和HO 1ml分层后观察。
2c)取代反应：加醋酸约1ml，取1/2加醋酸铜粉加热。
观察颜色变化。
2. 叶绿素和类胡萝卜素的吸收光谱测定：a) 取皂化反应的上层黄色石油醚溶液→稀释（470nm OD 0.5-1） b) 取下层绿色溶液（留1/3），反复用石油醚粹取,直到无类胡萝卜素,离心得叶绿素(盐)→稀释（663nm OD 0.5-1）c) 两者在400-700nm 处扫描光谱，分别测定类胡萝卜素和叶绿素的吸收峰3. 叶绿素定量分析：鲜叶0.1g ，加1.9mlH 2O ，磨成匀浆，取2份0.2ml 加95%酒精4.8ml,摇匀，8000转离心5min,上清液在645，652，663测定OD ，计算Chla,Chlb 和Chl 总量的值。
叶绿体色素的提取和分离
叶绿体色素的提取和分离
叶绿体色素是位于植物叶绿体中的一类有机化合物，包括叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素等。
提取和分离叶绿体色素的方法如下：
1. 手工研磨法：将植物叶片取出后，加入适量的减水醇（如乙醇或甲醇），用研钵或机械研磨器搅拌研磨，使细胞破碎释放叶绿体色素。
然后通过离心将悬液离心分离出叶绿体色素。
2. 酒精沉淀法：将植物叶片切碎后加入适量的酒精溶液，用撇去悬浮物，然后再用滤纸滤除酒精中的杂质。
过滤后的溶液可以进行酒精沉淀，即加入适量的酒精悬浮叶绿体色素，并通过离心分离出沉淀。
3. 层析法：将植物叶片经过研磨和过滤后得到的色素溶液，可以通过色谱柱层析进行分离。
常用的色谱柱包括硅胶柱、纸层析柱和高效液相色谱柱等。
通过向色谱柱中加入适当的溶剂系统，可以将叶绿体色素按照其亲水性和亲油性进行分离。
4. 液-液萃取法：将植物叶片研磨并与适量的有机溶剂（如二氯甲烷、苯或正己烷）混合，通过摇晃、振荡或搅拌等方法，使叶绿体色素在有机相和水相之间分配。
随后，分离有机相并蒸干，即可得到叶绿体色素。
这些方法可以根据实验需求和设备条件选择使用，提取和分离叶绿体色素可以用于进一步的分析和研究。
叶绿体中色素的提取和分离
叶绿体中色素的提取和分离
叶绿体色素提取和分离是一种应用生物技术进行生物分子分析和
实验的重要方法。
最近几年，越来越多的研究表明在分子生物学实验中，叶绿体色素提取和分离具有十分重要的意义和必要性。
叶绿体色
素提取及其分离也成为Molecular Biologists在生物分子实验研究中
广泛应用的重要技术。
通过实验研究，叶绿体色素可以从叶绿体杂质中提取和分离出来，其过程一般分为三个步骤：破坏叶绿体的结构，分离色素和其他物质，并重新形成叶绿体结构。
第一步要使用一种有效的抗菌剂中和叶绿体
结构，为色素的提取提供有利的条件。
第二步就是要使用一种有效的
溶剂去沉淀提取的色素，可以在避免损害和损失色素的情况下实现色
素分离。
最后一步就是要重新形成叶绿体细胞结构，以恢复其正常功能。
如今，叶绿体色素提取和分离技术已经成为应用于众多实验的重
要工具，其中的方法正在被不断改进，在帮助分子生物学实验取得最
佳结果方面发挥着重要作用。
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》在日常生活和工作中，我们都不可避免地要接触到报告，报告中涉及到专业性术语要解释清楚。
你还在对写报告感到一筹莫展吗？下面是我为大家收集的生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》，仅供参考，大家一起来看看吧。
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》1一、实验目的1.学会提取和分离叶绿体中色素的方法。
2.比较、观察叶绿体中四种色素：理解它们的’特点及与光合作用的关系二、实验原理光合色素主要存在于高等植物叶绿体的基粒片层上，而叶绿体中的色素能溶于有机溶剂中。
故要提取色素，要破坏细胞结构，破坏叶绿体膜，使基粒片层结构直接与有机溶剂接触，使色素溶解在有机溶剂中。
叶绿体中的色素有四种，不同色素在层析液(脂溶性强的有机溶剂)中的溶解度不同，因而随层析液的扩散速度也不同。
三、材料用具取新鲜的绿色叶片、定性滤纸、烧杯、研钵、漏斗、纱布、剪刀、小试管、培养皿、毛细吸管、量筒、有机溶剂、层析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸钙。
四、实验过程（见书Ｐ54）1.提取色素：2.制备滤纸条：3.色素分离，纸层析法。
（不要让滤液细线触及层析液）4.观察：层析后，取出滤纸，在通风处吹干。
观察滤纸条上出现色素带的数目、颜色、位置和宽窄。
结果是：4条色素带从上而下依次是：胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)、叶绿素a(蓝绿色)、叶绿素b(黄绿色)。
五、讨论1.滤纸条上的滤液细线为什么不能接触到层析液？2．提取和分离叶绿体中色素的关键是什么？生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》2一、实验目的1.学会提取和分离叶绿体中色素的方法。
2.比较、观察叶绿体中四种色素：理解它们的特点及与光合作用的关系二、实验原理光合色素主要存在于高等植物叶绿体的基粒片层上，而叶绿体中的色素能溶于有机溶剂中。
故要提取色素，要破坏细胞结构，破坏叶绿体膜，使基粒片层结构直接与有机溶剂接触，使色素溶解在有机溶剂中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：常春藤叶 （二）仪器设备： 研钵；漏斗；三角瓶或试管；剪刀；滴管；玻棒；圆形滤纸
2. 叶绿体色素的分离
（1）取圆形定性滤纸体色素提取液点于滤纸中心， 使色素扩散，风干后，再重复操作数次。
（2）用吸管吸取推动剂滴在滤纸中间，当推动剂前沿接 近滤纸边缘时，即可看到分离的各种色素。风干滤纸， 剪取一条分开的色素带，标明各种色素的位置及颜色， 作为结果贴于实验报告上。
3 铜代反应
取上述色素乙醇提取液少许于试管中，1 滴1滴加入浓盐酸，观察颜色变化。然后加醋 酸铜晶体少许，酒精灯上慢慢加热溶液，观察 色素颜色的变化。
叶绿素的提取
叶绿素是一种酯，因此不 溶于水。通常用含有少量水的 有机溶剂如80％的丙酮，或 者95%乙醇，或丙酮∶乙醇∶ 水＝4.5∶4.5∶1的混合液来 提取叶片中的叶绿素，用于测 定叶绿素含量。 之所以要用 含有水的有机溶剂提取叶绿素， 这是因为叶绿素与蛋白质结合 牢，需要经过水解作用才能被 提取出来。
（直径11cm）：酒精灯 （三）试剂： 95％乙醇；石英砂；盐酸；醋酸铜 推动剂：按石油醚；丙酮：苯（10:2:1）比例配 制（V／V）。
三、实验步骤
1. 叶绿体色素的提取 （1）称取菠菜新鲜叶片2g，洗净，擦干，去掉中脉剪
碎，放入研钵中。 （2）研钵中加2～3ml 95％乙醇，研磨至糊状，再加
10～15ml 95％乙醇，提取35min，上清液过滤于三 角瓶中（试管中）。 （3）在光源下观察荧光现象：在直射光下观察溶液的颜 色，比较透射光及反射光下的颜色有何不同？试述其 原因。
实验6 叶绿体色素的提取、分离
实验目的
了解叶绿体色素提取与分离的原理，掌握叶绿 体色素提取方法，学会纸层析法分离色素。观 察叶绿素的荧光现象，观察铜代反应现象。
一、原理
叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素 （包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。
这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙 酮等有机溶剂提取。
制作绿色标本方法：
用50%醋酸溶液配制的饱 和醋酸铜溶液浸渍植物标 本(处理时可加热)
当溶液变褐 色后，投入 醋酸铜粉末， 微微加热， 形成铜代叶
绿素
向叶绿素溶液 中放入两滴5 ％盐酸摇匀， 溶液颜色的变 为褐色，形成
去镁叶绿素。
提取方法
研磨法 浸提法
0.1g叶+10ml混合液浸 提
研磨法提取 光合色素
铜代叶绿素反应
❖ 卟啉环中的镁可被H+所 置换。当为H＋所置换后， 即形成褐色的去镁叶绿素。 ❖ 去镁叶绿素中的H＋再被 Cu2+取代，就形成铜代叶绿 素，颜色比原来的叶绿素更 鲜艳稳定。 ❖ 根据这一原理可用醋酸 铜处理来保存绿色标本。