实用组织化学技术-常规病理组织学和组织化学(研究生)
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3．取材大小，一般长l-3厘米，宽1-2厘米，厚度 为0.3-0.5厘米。科研用光镜标本不超过1cm× 1cm× 1cm，电镜标本直径约0.5mm。过大材料在短时间内不 易固定透，影响效果。
4 ．要兼顾病变部位与正常部位。 5 ．尽可能在低温条件下操作，0～4℃。
各器官取材方法：
脑：取材应能反应出脑各部位的变化，一般采用 冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓颈 段及脉络丛）。
pH7.2～7.4 90ml中。 固定时间为60min, 0～4℃。
主要用于科研组织标本的固定，尤其用于电镜超 薄切片的小组织块标本的初固定。
取材部位如下：
⑴额极； ⑵中央前后回；⑶海马；
⑷内囊； ⑸丘脑；
⑹枕叶；
⑺脉络丛；⑻中脑；
⑼桥脑；
⑽ 延髓； ⑾小脑；
⑿脊髓颈段。
取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜（刀要锋 利）。
垂体：取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都要 兼顾，从前向后矢状切。
心：一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。 也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取 心室肌，乳突肌组织。
①具有强的穿透力，固定均匀，能迅速渗透组织 内部，使组织细胞结构保持生活时期的相仿状态。
②不使组织过度收缩与膨胀而变形。
③能迅速使组织中的蛋白质，糖、脂肪等物质凝 固而成为不溶性物质。
④使组织达到一定的硬度，便于切片制作、染色。 X⑤价格便宜，容易买到，同时要配制方便。
常用的单纯固定液
乙醇（酒精）alcohol 甲醛（福尔马林）（缓冲液配制） formalin 重铬酸钾 potassium bichromate 苦味酸 picric acid 锇酸 osmic acid 丙酮 acetone 冰醋酸 glacial acetic acid 多聚甲醛缓冲固定液 paraformaldehyde 戊二醛磷酸缓冲固定液 glutaric dialdehyde
实用组织化学技术
中国医科大学法医学院 张国华
细胞和组织化学方法研究的范围
1. 组织细胞中的无机物质：主要包括钾、钙、 锌、铜、汞等金属；氯化物、磷酸盐等盐类；以及 各种无机放射性物质等。
2. 组织细胞中的有机物质：主要包括中性脂肪、 磷脂类、胆固醇、中性和酸性粘多糖类、糖原、粘 液蛋白、淀粉、类淀粉物质、黑色素、脂褐素、胆 色素、氨基酸、肽、蛋白质、DNA、RNA、各种维生 素等。
5. 多聚甲醛缓冲固定液 paraformaldehyde
多聚甲醛 4g，加入0.1mol/L磷酸缓冲液 pH7.2 100ml中，加热60～80℃溶解。
固定15min～24h,0～4℃。
主要用于科研组织标本的固定，尤其用于免疫组 织化学染色的组织固定，保护抗原决定簇不被封闭。
6.戊二醛磷酸缓冲固定液 glutaric dialdehyde 25%戊二醛10ml，加入0.1mol/L磷酸缓冲液
肺：常规取材应包括左、右两肺（五个肺叶）， 可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在 哪个肺叶上取的材可用形状做标志，在记录时记清楚。
肾：取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，并要求 区别左、右肾。
胰：常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、 胰尾。
肝：取长方形或三Baidu Nhomakorabea形均可，带被膜。
脾：取材带被膜。
管腔脏器：取材时注意方向
取材 固定 水洗 脱水 透明 浸蜡与包埋 切片 染色:脱蜡、脱苯、水化、染色、脱水、透明 封片
一、取材
基本要求：取材是否正确、恰当，直接影响切片 的制作及正确诊断。
1．取材越快越新鲜越好，防止组织自溶、腐败。 2．取材刀要锋利，切取时刀口垂直地切取；严禁 挤压，严禁用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造成 人为的损伤。
组织固定的目的：
⑴ 阻止死后变化，防止组织的自溶与腐 败。
⑵ 使组织的结构保存下来，如蛋白质， 脂肪、糖元、酶等各种成份与生活时的形态 相仿。
⑶ 便于染色，同时对组织有媒染作用， 使不同的组织成份对染料有不同的亲和力， 使细胞各部易于受色。
⑷ 能使组织硬化，为做薄切片打下基础。
组织固定的注意事项：
组织固定的意义： 组织固定是做好切片的重要步骤之一，如果首次固 定失败，再重新固定也不如一次固定成功好，无法补 救。 迅速将检材固定能有效地防止组织及细胞发生死后 的一系列变化。 固定的关键在于取材后尽可能地及时地将取到的材 料进行固定，抑制其死后变化的进展，尽力使组织接 近于生前状态。 另外，在标本制做过程中经过许多步骤，为了防止 组织成份的溶解消失，有必要及时转变为不溶性物质， 从而有利于保存。
3. 必须掌握被检测的化学物质特性，如水溶性、脂溶性、 溶解度及特异反应等；
4. 必须掌握被检测各种酶的特性，如酶的功能、酶存在的 特定部位、酶反应的适宜温度和酸碱度、酶的特异激活剂和 抑制剂、影响酶活性的因素等；
5. 必须做对照实验，借助阳性和阴性对照，正确分析实验 结果，注意识别假阳性结果。
细胞和组织化学方法的基本技术
⑴ 检材、标本：①材料块不能过大； ② 固定器皿不易过小； ③固定液量不易过少， 大约是固定材料体积的20～40倍。
⑵固定液：根据检验目的不同选择不同固 定液，如做糖元检查就不能用含水的固定液， 做电镜检查就必须用锇酸固定液等。
固定液：用以固定组织的药剂。 固定液分为两大类：
单纯固定液：仅由一种药剂组成。 混合固定液（或复合固定液）：由二种以上的 药剂组成的固定液。 固定液选择标准：
3. 组织细胞中各种酶类：如碱性磷酸酶、酸性 磷酸酶、胆碱酯酶、细胞色素氧化酶、琥珀酸脱氢 酶、乳酸脱氢酶等--蛋白质。
细胞和组织化学方法的设计要求:
1. 必须最大限度地保存细胞和组织中各种化学成分和/或 酶的活性，以保证定性、定量研究；
2. 必须最有效地保持细胞组织固有的形态结构，以保证化 学成分和各种酶在细胞组织中的定位；
大、小肠：考虑环行肌肉，沿肠管的长轴取 （纵切）；
食管：以横切面为宜；
胃：常规取材以胃底为好；
气管：横切、纵切均要有。
总之管腔脏器的各层构造都要取到。
为了防止标本入固定液后变形，将材料取下后 （如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸 上，然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压 变形与收缩。
二、组织固定
4 ．要兼顾病变部位与正常部位。 5 ．尽可能在低温条件下操作，0～4℃。
各器官取材方法：
脑：取材应能反应出脑各部位的变化，一般采用 冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓颈 段及脉络丛）。
pH7.2～7.4 90ml中。 固定时间为60min, 0～4℃。
主要用于科研组织标本的固定，尤其用于电镜超 薄切片的小组织块标本的初固定。
取材部位如下：
⑴额极； ⑵中央前后回；⑶海马；
⑷内囊； ⑸丘脑；
⑹枕叶；
⑺脉络丛；⑻中脑；
⑼桥脑；
⑽ 延髓； ⑾小脑；
⑿脊髓颈段。
取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜（刀要锋 利）。
垂体：取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都要 兼顾，从前向后矢状切。
心：一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。 也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取 心室肌，乳突肌组织。
①具有强的穿透力，固定均匀，能迅速渗透组织 内部，使组织细胞结构保持生活时期的相仿状态。
②不使组织过度收缩与膨胀而变形。
③能迅速使组织中的蛋白质，糖、脂肪等物质凝 固而成为不溶性物质。
④使组织达到一定的硬度，便于切片制作、染色。 X⑤价格便宜，容易买到，同时要配制方便。
常用的单纯固定液
乙醇（酒精）alcohol 甲醛（福尔马林）（缓冲液配制） formalin 重铬酸钾 potassium bichromate 苦味酸 picric acid 锇酸 osmic acid 丙酮 acetone 冰醋酸 glacial acetic acid 多聚甲醛缓冲固定液 paraformaldehyde 戊二醛磷酸缓冲固定液 glutaric dialdehyde
实用组织化学技术
中国医科大学法医学院 张国华
细胞和组织化学方法研究的范围
1. 组织细胞中的无机物质：主要包括钾、钙、 锌、铜、汞等金属；氯化物、磷酸盐等盐类；以及 各种无机放射性物质等。
2. 组织细胞中的有机物质：主要包括中性脂肪、 磷脂类、胆固醇、中性和酸性粘多糖类、糖原、粘 液蛋白、淀粉、类淀粉物质、黑色素、脂褐素、胆 色素、氨基酸、肽、蛋白质、DNA、RNA、各种维生 素等。
5. 多聚甲醛缓冲固定液 paraformaldehyde
多聚甲醛 4g，加入0.1mol/L磷酸缓冲液 pH7.2 100ml中，加热60～80℃溶解。
固定15min～24h,0～4℃。
主要用于科研组织标本的固定，尤其用于免疫组 织化学染色的组织固定，保护抗原决定簇不被封闭。
6.戊二醛磷酸缓冲固定液 glutaric dialdehyde 25%戊二醛10ml，加入0.1mol/L磷酸缓冲液
肺：常规取材应包括左、右两肺（五个肺叶）， 可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在 哪个肺叶上取的材可用形状做标志，在记录时记清楚。
肾：取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，并要求 区别左、右肾。
胰：常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、 胰尾。
肝：取长方形或三Baidu Nhomakorabea形均可，带被膜。
脾：取材带被膜。
管腔脏器：取材时注意方向
取材 固定 水洗 脱水 透明 浸蜡与包埋 切片 染色:脱蜡、脱苯、水化、染色、脱水、透明 封片
一、取材
基本要求：取材是否正确、恰当，直接影响切片 的制作及正确诊断。
1．取材越快越新鲜越好，防止组织自溶、腐败。 2．取材刀要锋利，切取时刀口垂直地切取；严禁 挤压，严禁用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造成 人为的损伤。
组织固定的目的：
⑴ 阻止死后变化，防止组织的自溶与腐 败。
⑵ 使组织的结构保存下来，如蛋白质， 脂肪、糖元、酶等各种成份与生活时的形态 相仿。
⑶ 便于染色，同时对组织有媒染作用， 使不同的组织成份对染料有不同的亲和力， 使细胞各部易于受色。
⑷ 能使组织硬化，为做薄切片打下基础。
组织固定的注意事项：
组织固定的意义： 组织固定是做好切片的重要步骤之一，如果首次固 定失败，再重新固定也不如一次固定成功好，无法补 救。 迅速将检材固定能有效地防止组织及细胞发生死后 的一系列变化。 固定的关键在于取材后尽可能地及时地将取到的材 料进行固定，抑制其死后变化的进展，尽力使组织接 近于生前状态。 另外，在标本制做过程中经过许多步骤，为了防止 组织成份的溶解消失，有必要及时转变为不溶性物质， 从而有利于保存。
3. 必须掌握被检测的化学物质特性，如水溶性、脂溶性、 溶解度及特异反应等；
4. 必须掌握被检测各种酶的特性，如酶的功能、酶存在的 特定部位、酶反应的适宜温度和酸碱度、酶的特异激活剂和 抑制剂、影响酶活性的因素等；
5. 必须做对照实验，借助阳性和阴性对照，正确分析实验 结果，注意识别假阳性结果。
细胞和组织化学方法的基本技术
⑴ 检材、标本：①材料块不能过大； ② 固定器皿不易过小； ③固定液量不易过少， 大约是固定材料体积的20～40倍。
⑵固定液：根据检验目的不同选择不同固 定液，如做糖元检查就不能用含水的固定液， 做电镜检查就必须用锇酸固定液等。
固定液：用以固定组织的药剂。 固定液分为两大类：
单纯固定液：仅由一种药剂组成。 混合固定液（或复合固定液）：由二种以上的 药剂组成的固定液。 固定液选择标准：
3. 组织细胞中各种酶类：如碱性磷酸酶、酸性 磷酸酶、胆碱酯酶、细胞色素氧化酶、琥珀酸脱氢 酶、乳酸脱氢酶等--蛋白质。
细胞和组织化学方法的设计要求:
1. 必须最大限度地保存细胞和组织中各种化学成分和/或 酶的活性，以保证定性、定量研究；
2. 必须最有效地保持细胞组织固有的形态结构，以保证化 学成分和各种酶在细胞组织中的定位；
大、小肠：考虑环行肌肉，沿肠管的长轴取 （纵切）；
食管：以横切面为宜；
胃：常规取材以胃底为好；
气管：横切、纵切均要有。
总之管腔脏器的各层构造都要取到。
为了防止标本入固定液后变形，将材料取下后 （如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸 上，然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压 变形与收缩。
二、组织固定