琼脂糖凝胶电泳实验
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤DNA的琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术，用于分析DNA 的大小和纯度，以及进行DNA分子的分离和纯化。
凝胶电泳实验可以帮助我们确定DNA样本的大小和获得纯化的DNA片段供进一步研究使用。
下面是DNA琼脂糖凝胶电泳实验的原理和操作步骤。
【原理】DNA琼脂糖凝胶电泳是根据DNA分子在电场中的不同迁移速率来分离大小不同的DNA片段。
琼脂糖凝胶是一种凝胶状物质，其孔隙大小能够将DNA分子限制在一定范围内，较大的DNA分子迁移速率较慢，而较小的DNA分子迁移速率较快。
琼脂糖凝胶通常是在平均浓度为1%至2%之间的范围内制备，以便在不同大小的DNA分子之间提供适当的分辨率。
实验中，DNA样品通过切割酶或PCR等方法获得，样品经过核酸电泳缓冲液稀释，并在琼脂糖凝胶板上进行电泳。
凝胶板两侧连接电源，DNA 的带电粒子将在电场的作用下从负极迁移到正极，迁移过程中形成DNA的“条带”，条带的位置和长度反映了DNA的大小。
通常，DNA条带由荧光染料或核酸染料标记，以便在电泳结束后进行可视化。
【操作步骤】以下是DNA琼脂糖凝胶电泳实验的一般操作步骤：1.制备琼脂糖凝胶板：a.准备琼脂糖粉末和核酸电泳缓冲液（通常为TAE或TBE缓冲液）。
b.按照说明书将琼脂糖粉末溶解于核酸电泳缓冲液中。
c.将溶液加热至沸腾并搅拌，使琼脂糖完全溶解。
d.将溶液倒入预先准备好的电泳仓中，插入梳子或制备好的孔板，使其凝固。
2.样品制备：a.提取DNA样品并测定其浓度。
b. 将DNA样品稀释到适当浓度，通常为10-50 ng/μL。
c. 添加适当的加载缓冲液，通常是一些染料和甘胺酸（glycine）或其他添加剂。
3.DNA加载和电泳：a.打开琼脂糖凝胶仓盖，将DNA样品负载于凝胶孔内。
b.将DNA负载区域和样品标注在电泳仓中，以便在电泳结束后可以准确识别DNA带。
c.关闭盖子，将电泳仓放入电泳设备中。
琼脂糖凝胶电泳-完整整理
基因组分析
分子诊断
用于分离和鉴定基因组DNA片段，如限制 性片段长度多态性分析、基因突变检测等 。
用于检测和鉴定基因突变、病原微生物DNA 等，如聚合酶链式反应（PCR）产物电泳、 单链构象多态性分析等。
基因克隆
测序
用于分离和纯化目的基模板，如末端测 序、全基因组测序等。
达差异。
04 琼脂糖凝胶电泳实验问题 与解决
常见问题
条带弥散
由于点样量过多或电压过高，导致条带弥散。
条带过宽
由于凝胶浓度不合适或样品浓度过高，导致 条带过宽。
条带拖尾
样品中蛋白质降解或核酸酶污染，导致条带 拖尾。
条带不亮
由于染料浓度过低或曝光时间过短，导致条 带不亮。
问题分析
条带弥散
可能是由于点样量过多或电压过高， 导致DNA在凝胶中扩散。
琼脂糖凝胶电泳-完 整整理
目录
CONTENTS
• 琼脂糖凝胶电泳介绍 • 琼脂糖凝胶电泳实验操作 • 琼脂糖凝胶电泳结果分析 • 琼脂糖凝胶电泳实验问题与解决 •凝胶电泳的定义
01
琼脂糖凝胶电泳是指在琼脂糖凝 胶中进行的电泳技术，主要用于 分离、鉴定和纯化DNA片段。
浓度比较
通过条带亮度，比较不同 样品中目标DNA片段的浓 度。
纯度评估
根据条带的亮度与背景噪 音的比例，评估DNA片段 的纯度。
结果应用
基因克隆
01
通过琼脂糖凝胶电泳检测目的基因是否被正确克隆到载体中。
突变分析
02
利用电泳结果判断是否存在基因突变或点突变。
基因表达分析
03
通过比较不同组织或细胞系中目的基因的表达水平，分析其表
01
条带分析
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告引言琼脂糖凝胶电泳是一种重要的实验技术，广泛应用于生物学、医学、食品科学等领域。
本文将介绍琼脂糖凝胶电泳的原理、实验步骤和结果分析，并探讨其在蛋白质分离与分析中的应用。
正文一、原理琼脂糖凝胶电泳是一种基于电荷与尺寸的分离技术。
琼脂糖是一种天然多糖，在适当条件下能形成渗透性较小的凝胶状。
当电场施加在凝胶上时，电荷带负的样品分子会被推向正电极，电荷带正的样品分子则被推向负电极，从而实现了分离。
二、实验步骤1. 准备样品：将待分离的蛋白质样品加入一定体积的载体溶液中，混合均匀。
2. 制备琼脂糖凝胶：根据需要分离的蛋白质的大小范围选择不同浓度的琼脂糖制备凝胶。
3. 装置电泳槽：将琼脂糖凝胶放置在电泳槽中，注入足够的电泳缓冲液，以确保电泳过程中的稳定性。
4. 分析样品：将样品加入琼脂糖凝胶槽中的孔上，并施加适当电压，使样品分子在凝胶中迁移。
5. 染色与可视化：电泳结束后，可以使用染料对凝胶进行染色，以可视化待分析的蛋白质条带。
6. 结果分析：根据蛋白质条带的迁移距离和形态，进行结果的解读和分析。
三、实验结果在本次实验中，我们使用琼脂糖凝胶电泳技术分离了不同分子量的蛋白质样品。
结果显示，随着样品分子量的增大，迁移距离逐渐增加，形成了不同大小的蛋白质条带。
通过与已知分子量的标准品进行对比，我们可以确定待分析样品的分子量范围。
四、讨论与应用琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术，在蛋白质分离与分析中具有广泛的应用。
它可以用于研究蛋白质的结构、功能和相互作用关系。
同时，琼脂糖凝胶电泳还可以检测蛋白质的表达水平和纯度，并在生物医药领域中寻找新药靶点、分析疾病标志物等方面起到重要作用。
然而，琼脂糖凝胶电泳也存在一些局限性，如无法分离分子量较大的蛋白质，分辨率相对较低等。
因此，研究人员在分离与分析蛋白质时还需综合考虑实验目的和样本特点，选择合适的方法和技术。
总结琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离与分析蛋白质的技术。
dna琼脂糖凝胶电泳实验报告
dna琼脂糖凝胶电泳实验报告DNA琼脂糖凝胶电泳实验报告引言：DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学实验技术，用于分离和分析DNA 分子。
本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术，对DNA分子进行分离和鉴定，以便更好地了解DNA的结构和功能。
实验材料和方法：实验所需的材料包括琼脂糖凝胶、DNA标准品、DNA样品、缓冲液和电泳仪等。
首先，我们制备了琼脂糖凝胶，然后将DNA标准品和待测DNA样品与DNA加载缓冲液混合。
接下来，将混合液注入琼脂糖凝胶槽中，并进行电泳。
实验结果：经过电泳后，我们观察到琼脂糖凝胶上出现了一系列DNA条带。
根据标准品的条带迁移距离，我们可以推断出待测DNA样品的分子大小。
通过比较待测样品与标准品的条带迁移距离，我们可以进一步确定待测样品中的DNA分子的大小。
讨论：琼脂糖凝胶电泳是一种基于DNA分子大小的分离技术。
在琼脂糖凝胶中，DNA 分子会受到凝胶孔隙的阻碍，较大的DNA分子迁移速度较慢，而较小的DNA分子则迁移速度较快。
通过测量DNA分子的迁移距离，我们可以推断出其分子大小。
在实验中，我们使用了DNA标准品作为参照物，通过标准品的迁移距离，我们可以建立一个标准曲线，从而对待测样品中的DNA分子大小进行估计。
这种方法可以应用于DNA样品的定性和定量分析。
需要注意的是，琼脂糖凝胶电泳实验的结果受到多种因素的影响，如琼脂糖凝胶浓度、电场强度和电泳时间等。
因此，在进行实验时，我们需要控制这些因素，以确保实验结果的准确性和可靠性。
结论：通过DNA琼脂糖凝胶电泳实验，我们成功地分离和鉴定了DNA分子。
这项实验为我们进一步研究DNA的结构和功能提供了基础。
同时，琼脂糖凝胶电泳技术也广泛应用于生物医学研究、法医学和遗传学等领域，为科学研究和医学诊断提供了重要的工具和方法。
总结：DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分离和鉴定技术。
通过电泳实验，我们可以分离不同大小的DNA分子，并通过测量其迁移距离来推断其分子大小。
琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法
琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法[实验原理]电泳是现在用于分离和纯化DNA片段的最常用技术。
包含电解质的多孔支持介质----“胶”并把它置于静电场中。
则DNA分子将向阳极移动，这是因为DNA分子沿其双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基。
当DNA长度增加时，来自电场的驱动力和来自凝胶的阻力之间的比率就会降低，不同长度的DNA片段就会表现出不同的迁移率。
因而就可依据DNA分子的大小来使其分离。
该过程通过把示踪染料（Purple Loading Dye）或分子量标准参照物(Ladder)和样品(DNA&RNA)一起进行电泳而得到检测。
分子量标准参照物也可以提供一个用于确定DNA片段大小的标准。
琼脂糖凝胶适用于分离大小在0.2-50Kb范围内的DNA片段。
[实验用品]1.琼脂糖 1.0%1.0g琼脂糖+100ml电泳缓冲液(TAE),微波炉中火30秒至沸腾,熔化的琼脂物冷却至60℃时可加入10mg/ml溴化乙锭10μl,充分混匀,将温热的凝胶倒入已置好梳子(鉴定胶用细密点的梳子；回收胶用粗稀的梳子）的胶膜中在室温下放置30-45min后现进行电泳。
1.5%:琼脂糖1.5g。
2.电泳缓冲液50×TAE Tris 乙酸 Tris 242g 终2 mol/L乙酸57.1ml 终1mol/L0.5M EDTA200ml pH8.0 终100mmol/LdH2O 补足至1000ml使用时稀释1×TAE。
5×TBE Tris 硼酸 Tris 54g 终445mmol/L硼酸27.5g 终445mmol/L0.5M EDTA20ml pH8.0 终10mmol/LdH2O 补足至1000ml使用时稀释10倍成0.5倍如50ml贮存液+450ml水→500ml工作液。
[实验内容与方法]1.移取适量的琼脂糖(如制备1%的琼脂糖胶液就移1g的琼脂糖溶于100ml TAE缓冲液中)微波炉加热使其溶于TAE缓冲液中。
琼脂凝胶实验报告
实验名称：DNA琼脂糖凝胶电泳实验日期：2023年10月25日实验目的：1. 学习并掌握DNA琼脂糖凝胶电泳的基本原理和操作步骤。
2. 通过电泳分离不同分子量的DNA片段，观察并分析实验结果。
3. 了解DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移规律，并探讨影响迁移速度的因素。
实验原理：DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术，用于分离、鉴定和定量DNA片段。
DNA分子在电场中带有负电荷，在琼脂糖凝胶的筛分作用下，根据分子大小和构型不同，迁移速度不同，从而实现分离。
溴化乙锭（EB）作为一种荧光染料，可以嵌入DNA分子中，在紫外光照射下发出橙红色荧光，便于观察DNA片段的位置和大小。
实验材料与仪器：- 仪器：电泳仪、紫外检测仪、水平电泳槽、移液器、一次性手套等。
- 试剂：琼脂糖、EB溶液、Tris-硼酸-EDTA缓冲液、加样缓冲液等。
- 材料：分子量不同的DNA片段。
实验步骤：1. 琼脂糖凝胶的制备：- 称取1g琼脂糖，加入10ml电泳缓冲液，再加入90ml蒸馏水，在电炉上加热溶解，配制成1%琼脂糖凝胶。
- 待凝胶冷却至60-70℃时，加入数滴EB溶液，混匀。
2. DNA样品的制备：- 将DNA片段用Tris-硼酸-EDTA缓冲液稀释至适当浓度。
3. 加样：- 将制备好的琼脂糖凝胶倒入电泳槽中，插入电泳梳子。
- 使用移液器将DNA样品加至凝胶孔中。
4. 电泳：- 将电泳槽放入电泳仪中，设定合适的电压和时间进行电泳。
5. 观察与分析：- 电泳完成后，取出凝胶，用紫外检测仪观察DNA片段的迁移情况。
- 比较不同分子量DNA片段的迁移速度，分析实验结果。
实验结果：- 通过电泳观察到，不同分子量的DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移速度不同，分子量越小，迁移速度越快。
- EB染料嵌入DNA分子后，在紫外光照射下呈现橙红色荧光，便于观察DNA片段的位置和大小。
讨论：1. 影响DNA分子迁移速度的因素主要有：分子大小、构型、电场强度、凝胶浓度等。
琼脂糖凝胶电泳实验
琼脂糖凝胶电泳实验⼀、实验原理：琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA ⽚段的常⽤技术。
把DNA样品加⼊到⼀块包含电解质的多孔⽀持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，并置于静电场上。
由于DNA分⼦的双螺旋⾻架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。
在⼀定的电场强度下，DNA分⼦的迁移速度取决于分⼦筛效应。
具有不同的相对分⼦质量的DNA⽚段泳动速度不⼀样，因⽽可依据DNA分⼦的⼤⼩来使其分离。
凝胶电泳不仅可分离不同分⼦质量的DNA，也可以分离相对分⼦质量相同，⽽构型不同的DNA分⼦。
在电泳过程中可以通过⽰踪染料或相对分⼦质量标准参照物和样品⼀起进⾏电泳⽽得到检测。
相对分⼦质量标准参照物相对可以提供⼀个⽤于确定DNA⽚段⼤⼩的标准。
在凝胶中加⼊少量溴化⼄锭(ethidium bromide, EB)或者ＥＢ类似物，其分⼦可插⼊DNA的碱基之间，形成⼀种络合物，在254～365nm波长紫外光照射下，呈桔红⾊荧光，因此也可对分离的DNA进⾏检测。
⼀般琼脂糖凝胶电泳适⽤于⼤⼩在0.2kb～50kb范围内的DNA⽚段。
三种不同构型分⼦进⾏电泳时的迁移速度⼤⼩顺序为：超螺旋DNA>线性DNA>开环DNA正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的⽤来进⾏⼤⽚段核酸的电泳，⾼浓度的⽤来进⾏⼩⽚段分析。
低浓度胶易碎，⼩⼼操作和使⽤质量好的琼脂糖是解决办法。
注意⾼浓度的胶可能使分⼦⼤⼩相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
适合的电泳缓冲液常⽤的缓冲液有TAE和TBE，⽽TBE⽐TAE有着更好的缓冲能⼒。
电泳时使⽤新制的缓冲液可以明显提⾼电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使⽤后，离⼦强度降低，PH 值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产⽣条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
Marker的选择DNA电泳⼀定要使⽤DNA Marker或已知⼤⼩的正对照DNA来估计DNA⽚段⼤⼩。
琼脂糖凝胶电泳检测实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测实验报告一、实验目的本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳检测方法，对DNA分子进行分离和检测，掌握琼脂糖凝胶电泳技术的操作步骤和原理，并了解其在生物学领域中的应用。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离DNA分子的方法。
其原理是利用电场作用力将DNA分子从样品中移动到凝胶中，并根据DNA分子大小不同，在凝胶中形成不同迁移距离的带状图案。
根据带状图案可以得到DNA片段大小及其相对含量。
三、实验步骤1.制备琼脂糖凝胶：将1g琼脂糖加入100ml TAE缓冲液中，加热搅拌至溶解，冷却至60℃左右时倒入模具中，待冷却成固体后取出。
2.制备DNA样品：将待检测DNA样品加入适量TAE缓冲液中，使其浓度为50ng/ul。
3.装载样品：取出制备好的琼脂糖凝胶，将其置于电泳槽中，加入适量TAE缓冲液，然后将DNA样品注入琼脂糖凝胶孔中。
4.进行电泳：将电泳槽盖好，接通电源，设定电压和时间，进行电泳。
5.染色和成像：取出琼脂糖凝胶，进行染色处理，然后用成像仪拍摄带状图案。
四、实验结果通过琼脂糖凝胶电泳检测方法，成功分离出待检测DNA样品中的DNA分子，并形成了带状图案。
根据带状图案可以看出不同大小的DNA片段在凝胶中形成了不同迁移距离的带状图案。
五、实验分析1.影响DNA迁移距离的因素：DNA片段大小、琼脂糖浓度、电场强度等因素都会影响DNA分子在凝胶中的迁移距离。
一般来说，较小的DNA片段在相同条件下迁移距离较大。
2.应用领域：琼脂糖凝胶电泳技术广泛应用于生物学领域中对DNA分子的检测和分析。
例如，可以用于分析DNA序列、检测基因突变等。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了琼脂糖凝胶电泳技术的操作步骤和原理，并了解了其在生物学领域中的应用。
同时，我们也发现琼脂糖凝胶电泳技术具有操作简单、成本低廉、结果可靠等优点，是一种常用的DNA分子检测方法。
实验二 琼脂糖凝胶电泳实验
实验二琼脂糖凝胶电泳实验【实验目的】（1）学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；（2）掌握使用水平式电泳仪的方法；（3）学习在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳的方法。
【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法。
核酸是两性电解质，其等电点为pH2-2.5，在常规的电泳缓冲液中（pH约8.5），核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。
核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时，具有电荷效应和分子筛效应，但主要为分子筛效应。
因此，核酸分子的迁移率由下列几种因素决定：（1）DNA的分子大小。
线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中移动，因而迁移得越慢。
（2）DNA分子的构象。
当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。
相同分子量的线状、开环和超螺旋质粒DNA在琼脂糖凝胶中移动的速度是不一样的，超螺旋DNA移动得最快，而开环状DNA移动最慢。
如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时，可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收，用同一种限制性内切酶分别水解，然后电泳，如在凝胶上出现相同的DNA图谱，则为同一种DNA。
（3）电源电压。
在低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。
但是随着电场强度的增加，不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，片段越大，因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大，因此电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。
要使大于2kb 的DNA 片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。
（4）离子强度影响。
电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。
在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶），电导率最小，DNA几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤琼脂糖凝胶电泳是一种常用的蛋白质和核酸分析方法。
本文将介绍琼脂糖凝胶电泳的具体操作步骤，帮助读者更好地理解和掌握这一实验技术。
材料准备1.琼脂糖凝胶：根据需要选择合适的琼脂糖凝胶，通常有0.8%、1%和1.5%等不同浓度的琼脂糖凝胶可供选择。
2.海藻酸缓冲液：配制1×TAE缓冲液，将适量的氨基乙酸和琼脂糖溶解在去离子水中，并调整pH值至7.5。
样品制备1.样品处理：将待分析的蛋白质或核酸样品按照实验要求进行处理，例如进行裂解、消化等。
2.加载缓冲液：将样品与适量的样品加载缓冲液混合均匀，通常加载缓冲液中含有甘氨酸、溴酚蓝等成分，有利于负载样品。
凝胶制备1.琼脂糖溶液的制备：将适量的琼脂糖粉末加入到海藻酸缓冲液中，用力搅拌使其充分溶解。
2.加入染色剂：在溶解的琼脂糖溶液中加入适量的染色剂，如溴酚蓝，以便观察凝胶的迁移情况和样品带。
3.准备载玻片：在凝胶电泳槽的两侧放置两块玻璃板，用胶条固定，形成一个长方形的凝胶槽。
4.倒制凝胶：将制备好的琼脂糖溶液倒入凝胶槽中，并用打孔器在凝胶上打孔，用来加载样品。
电泳过程1.样品加载：将经过处理的样品加载到凝胶孔洞中，注意不要溢出或漏掉。
2.正常电泳：将凝胶槽放入电泳槽中，使凝胶完全浸泡在TAE缓冲液中，注意缓冲液的量要覆盖凝胶槽。
3.开启电源：将凝胶槽连接到电源上，并设定合适的电流和电压，开始电泳过程。
4.电泳时间：根据实验需要设定合适的电泳时间，通常为30分钟到数小时不等。
5.关闭电源：在电泳结束后，关闭电源，取出凝胶槽。
凝胶染色和成像1.染色凝胶：将电泳结束的凝胶浸泡在适量的染色液中，常用的染色剂有共染剂、Coomassie蓝等。
2.染色时间：根据染色剂的要求和实验需要，将凝胶浸泡在染色液中一定时间，以达到理想的染色效果。
3.洗涤凝胶：将染色液倒掉，用去离子水洗涤凝胶，去除多余的染色剂。
4.成像和分析：将凝胶放入凝胶成像系统中进行成像，根据需要可进行图像分析和数据提取。
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告。
实验目的，通过琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA分子的大小和数量，以验证DNA的提取和纯度。
实验材料与方法：1. 实验材料，琼脂糖凝胶、TAE缓冲液、DNA样品、DNA分子量标准品、电泳槽、电泳仪等。
2. 实验步骤：a. 制备琼脂糖凝胶，按照比例将琼脂糖和TAE缓冲液混合煮沸后倒入电泳槽中，待凝固后形成琼脂糖凝胶。
b. 样品处理，将待测DNA样品加入适量的载体溶液，并在65°C水浴中恒温30分钟。
c. 电泳操作，将处理后的DNA样品和DNA分子量标准品加载至琼脂糖凝胶孔中，进行电泳操作。
实验结果与分析：经过琼脂糖凝胶电泳检测，观察到DNA样品在电场作用下向阳极迁移，形成明显的DNA条带。
通过对DNA条带的位置和长度进行分析，可以初步判断DNA的大小和纯度。
同时，与DNA分子量标准品进行比对，可以更准确地确定DNA的分子量。
实验结论：本次实验通过琼脂糖凝胶电泳技术成功检测了DNA样品的大小和纯度，验证了DNA的提取和纯度。
实验结果为后续的分子生物学研究提供了重要的数据支持。
实验注意事项：1. 实验过程中需注意琼脂糖凝胶的制备和电泳操作的细节，保证实验结果的准确性。
2. 实验后要及时清洗和消毒实验器材，保持实验环境的整洁和卫生。
实验改进方向：1. 可以尝试不同浓度的琼脂糖凝胶和不同电泳条件，寻找更适合本实验的操作参数。
2. 可以尝试其他DNA检测技术，与琼脂糖凝胶电泳技术进行对比，寻找更准确、高效的检测方法。
总结：琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验是分子生物学实验中常用的技术手段，通过本次实验的学习和实践，对该技术有了更深入的了解，并为今后的科研工作打下了坚实的基础。
希望通过不断的实验探索和改进，能够为科学研究做出更大的贡献。
以上为琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告内容，如有不足之处，欢迎指正。
实验15 琼脂糖凝胶电泳的原理和方法
溴化乙锭（EB）为扁平状分子，在紫外光照射下发射 荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其荧光强度 与DNA的含量成正比。据此可粗略估计样品DNA浓度。
注意事项：
EB是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染环境。 实验过程中操作要保持安静、镇定，注意样品不能混样，
5
琼脂糖凝胶电泳的缺点： 1) 机械强度差，易破碎，浓度不能太低； 2) 易被细菌污染，不易保存，临用前配制； 3) 琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后
必须立即固定染色； 4) 与PAGE相比，分子筛作用小，区带少。
6
三、琼脂糖凝胶电泳的应用
目前，琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定核酸，如 DNA鉴定、DNA限制性内切酶图谱制作等。由于这种方法操 作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基 因工程研究中常用实验方法之一。
常用荧光染料溴乙锭(EB)染色，在紫外光下观察D NA条带，用紫外分析仪拍照，或用凝胶成像系统输出 照片，并进行有关的数据分析。
16
五、琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
原理 血浆脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼
脂糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液 中电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状 分离成不同区带。
HDL 少 少 多 多
小 高 快
pH 8.6 > pI ，各种脂蛋白均带负电，电泳时由 负极到正极；VLDL为圆形，受阻力小，LDL形态 不规则，受阻力大，所以VLDL跑在前。
CM
LDL
VLDL HDL
—
+
加样槽
β
前β
α
临床应用：高脂蛋白血症的分型 CM β 前β α
正常 Ⅰ型 Ⅱa型 Ⅱb型 Ⅲ型 Ⅳ型 Ⅴ型
琼脂糖凝胶电泳 实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告琼脂糖凝胶电泳实验报告引言：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和分析生物大分子的方法。
它基于琼脂糖凝胶的孔隙大小，通过电场作用下分离样品中的不同分子。
本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术，分离并分析DNA样品中的不同片段。
实验材料与方法：1. 实验材料：-琼脂糖凝胶：用于制备凝胶基质，提供分离分子的孔隙。
-缓冲液：用于维持凝胶的pH值和离子浓度稳定。
-DNA样品：包含待分离的DNA片段，可通过PCR扩增获得。
2. 实验步骤：（1）制备琼脂糖凝胶：将适量琼脂糖加入缓冲液中，加热搅拌至溶解，待冷却至大约60℃时，倒入凝胶模具中，插入梳子，待凝胶完全固化后，取出梳子。
（2）样品处理：将待分离的DNA样品与DNA加载缓冲液混合，加热至95℃，使DNA变性，然后迅速冷却至室温。
（3）电泳分离：将凝胶模具放入电泳槽中，加入足够的缓冲液，将DNA样品加入凝胶孔中，连接电源，施加适当电压，进行电泳分离。
结果与讨论：经过电泳分离后，我们观察到琼脂糖凝胶上出现了一系列DNA条带。
这些条带的迁移距离与DNA片段的大小成反比，即较小的片段迁移距离较远，较大的片段迁移距离较短。
实验结果的解释可以通过琼脂糖凝胶电泳的原理来理解。
琼脂糖凝胶的孔隙大小决定了不同大小的DNA片段在凝胶中的迁移速度。
较小的DNA片段能够更容易通过凝胶孔隙，因此迁移距离较远；而较大的DNA片段则受到凝胶孔隙的限制，迁移距离较短。
通过对DNA条带的大小和形状进行分析，我们可以获得关于DNA样品的重要信息。
例如，我们可以确定样品中是否存在特定的DNA片段，或者在PCR扩增中是否成功地放大了目标片段。
总结：琼脂糖凝胶电泳是一种简单而有效的生物大分子分离和分析方法。
通过电泳分离DNA样品，我们可以快速获得关于样品中DNA片段的信息。
这种技术在分子生物学、遗传学等领域有着广泛的应用，对于研究和诊断基因相关的疾病具有重要意义。
在今后的研究中，我们可以进一步探索琼脂糖凝胶电泳的应用，并结合其他分析技术，提高实验的准确性和灵敏度。
dna琼脂糖凝胶电泳
DNA琼脂糖凝胶电泳介绍DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生物技术实验方法，用于分离DNA分子并确定其大小。
它基于DNA分子的电荷和大小不同，通过应用电场使DNA分子在琼脂糖凝胶中迁移，从而实现分离。
原理DNA琼脂糖凝胶电泳的基本原理是：DNA分子带负电荷，当置于电场中后，电场将使DNA分子向正电极移动。
然而，DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速度取决于它的大小。
较长的DNA分子由于受阻力较大，迁移速度较慢，而较短的DNA分子迁移速度较快。
因此，琼脂糖凝胶电泳可以将DNA分子根据大小进行分离。
实验步骤1. 样品处理将待测DNA样品与凝胶电泳缓冲溶液混合，并加入负荷样品的染料来增加样品的重量和使其可见。
一般使用表现著名的溴化乙锭（Ethidium Bromide）来染色DNA分子。
2. 准备琼脂糖凝胶制备琼脂糖凝胶液，并根据实验需要将其倒入电泳槽中，并形成一个凝胶。
此过程需要使用琼脂糖凝胶制备缓冲液，一般为Tris–醋酸–EDTA缓冲液，简称TAE缓冲液。
3. 样品加载使用微量吸管或特殊的样品加载微孔将样品加载到琼脂糖凝胶上。
每个微孔能够承载一定量的样品，因此要根据样品的数量进行安排。
通常还会在凝胶上加载一个DNA分子大小标记（Marker）作为参考，以便确定未知样品的大小。
4. 电泳将凝胶放入电泳槽中，并将正负电极接入电源。
通过给定的电流和时间来进行电泳实验。
电流的选择取决于琼脂糖凝胶的密度和样品的大小范围。
5. 可视化和分析凝胶电泳完成后，通过紫外线照射或荧光成像系统来观察结果。
DNA分子在凝胶上能够与染料结合产生发光，从而可在琼脂糖凝胶上看到DNA分子的大小分布。
通过与已知DNA分子大小标记的对比，可以确定未知样品DNA分子的大小。
应用领域1. 分子生物学在分子生物学研究中，DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的手段。
它可以用于检测DNA分子的大小、评估PCR反应的效果、验证基因敲除和插入等分子操作的成功性等。
琼脂糖凝胶电泳
分辨率与凝胶浓度的关系？ 3、DNA荧光染料的发光原理？
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分 子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分 子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。 琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子 量的对数值成反比关系。
溴化乙锭(EB)为扁平状分子，在紫外光照射下发射荧光。EB可与DNA分 子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度 大10倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可检测到5 ng以上的DNA。
（一）制胶
1、称取1.5g琼脂糖加入盛有100 ml 0.5TAE电泳缓冲液的250 ml三角瓶中， 摇匀，在微波炉上加热至琼脂糖完全溶 解。冷却到约60℃后，加入10 l的EB， 并摇匀。
2、将溶解的琼脂糖（约50℃）倒入制胶模 具中，直至厚度为4-6 mm，插入适当的 梳子，在室温下冷却凝固。
五、实验用具
移液器 吸管头若干 加样板 量筒100 ml1 三角瓶500 ml1
六、试剂
琼脂糖 50TAE电泳缓冲液 6 载样缓冲液 （loading buffer） 溴化乙锭(EB) DNA分子量标准（DNA marker）：Marker III
七、实验步骤
（一）制胶（1% agarose gel） （二）点样 （三）电泳 （四）观察
实验三、琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是分子克隆的核心技术之一，用于分 离、鉴定和纯化DNA片段。凝胶中DNA的位置可以用 低浓度的荧光插入染料染色直接观察。
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告引言：DNA是生物体中的重要遗传物质，通过检测和分析DNA可以揭示生物体的遗传信息。
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分析方法，本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA样品的大小和纯度。
实验材料与方法：1. 实验材料：- DNA样品- DNA标准品- TBE缓冲液- 碱基对应的引物- DNA扩增反应体系- 琼脂糖凝胶- DNA电泳仪2. 实验方法：1) 准备琼脂糖凝胶：a. 取适量琼脂糖粉末加入TBE缓冲液中，搅拌均匀。
b. 将混合液加热至溶解，然后冷却至室温。
c. 将琼脂糖凝胶液倒入电泳槽中，插入梳子，待凝固。
2) 准备DNA样品：a. 取DNA样品，加入适量的DNA扩增反应体系。
b. 在PCR仪中进行DNA扩增反应，得到待检测的DNA样品。
3) 进行电泳检测：a. 取一定量的DNA样品和DNA标准品，加入电泳槽中的样品槽。
b. 打开电泳仪，设定适当的电压和时间。
c. 开始电泳，观察DNA在琼脂糖凝胶中的迁移情况。
结果与讨论：通过琼脂糖凝胶电泳检测，我们可以观察到DNA样品在电场作用下在琼脂糖凝胶中的迁移情况。
根据DNA片段的大小，我们可以通过比较DNA样品与DNA标准品的迁移距离，确定DNA样品的大小。
在实验中，我们发现不同大小的DNA片段会以不同的速度迁移，较小的DNA片段迁移速度较快，较大的DNA片段迁移速度较慢。
这是因为琼脂糖凝胶的孔径大小会影响DNA片段的迁移速度，较小的孔径会使DNA片段迁移速度变慢。
此外，我们还可以通过观察琼脂糖凝胶中DNA样品的带状图案来评估DNA样品的纯度。
如果带状图案清晰且无杂带，说明DNA样品较纯；而如果带状图案模糊或有多个杂带，说明DNA样品可能存在杂质或降解。
总结：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分析技术，通过观察DNA片段在琼脂糖凝胶中的迁移情况，我们可以确定DNA样品的大小和纯度。
这种技术在生物学研究和医学诊断中具有重要意义，可以帮助科学家们更好地理解生物体的遗传信息。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是分子生物学实验中常用的技术之一，其目的主要包括以下几个方面：1、分离和鉴定 DNA 片段：通过电泳可以将不同大小的 DNA 片段在琼脂糖凝胶中按照分子量大小进行分离，从而能够直观地观察到DNA 样品的组成和纯度。
2、检测 DNA 的质量：通过观察电泳图谱中 DNA 条带的亮度、清晰度和完整性，可以评估 DNA 样品的质量，判断是否存在降解、杂质污染等情况。
3、定量分析 DNA 浓度：结合已知浓度的 DNA 标准品，通过比较样品条带与标准品条带的亮度，可以对 DNA 样品的浓度进行大致的估算。
二、实验原理琼脂糖是一种从海藻中提取的线性多糖聚合物。
当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固，会形成网状的凝胶结构。
由于琼脂糖凝胶具有分子筛效应，DNA 分子在电场中会向正极移动，其迁移速度取决于 DNA 分子的大小和构象。
较小的 DNA 分子在凝胶中受到的阻力较小，迁移速度较快；较大的 DNA 分子受到的阻力较大，迁移速度较慢。
因此，不同大小的 DNA 分子在琼脂糖凝胶中会被分离成不同的条带。
在电泳过程中，通常使用溴化乙锭（EB）等荧光染料对 DNA 进行染色。
EB 能嵌入DNA 分子的碱基对之间，在紫外线照射下发出荧光，从而使 DNA 条带得以显现。
三、实验材料与设备1、实验材料DNA 样品：本次实验使用的是经过提取和纯化的λDNA 样品。
琼脂糖：选用高纯度的琼脂糖粉末。
电泳缓冲液：5×TBE 缓冲液（Tris硼酸EDTA），使用时稀释至1×TBE 工作液。
上样缓冲液（Loading Buffer）：含有甘油、溴酚蓝等成分，用于增加样品密度，便于样品沉入加样孔，并指示电泳进程。
核酸染料：溴化乙锭（EB）溶液。
2、实验设备电泳仪：提供稳定的直流电源，用于产生电场。
水平电泳槽：放置琼脂糖凝胶，容纳电泳缓冲液。
凝胶成像系统：用于观察和拍摄电泳结果。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告琼脂糖凝胶电泳实验报告引言：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和分析生物大分子的方法，它基于分子在凝胶孔隙中的迁移速率差异，从而实现分离和测定目标分子的目的。
本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术，对DNA分子进行分离和测定，以加深对琼脂糖凝胶电泳原理和操作流程的理解。
材料与方法：实验所需材料包括琼脂糖凝胶、DNA样品、TAE缓冲液、电泳仪等。
首先，将琼脂糖凝胶加入适量的TAE缓冲液中，加热溶解后冷却至室温，并倒入电泳槽中。
接下来，将DNA样品与DNA标记物混合，加入琼脂糖凝胶槽中的孔隙中，然后将电泳槽置于电泳仪中，连接电源，设定合适的电压和时间，开始电泳。
结果与分析：经过一段时间的电泳，我们观察到琼脂糖凝胶中DNA分子的迁移情况。
根据DNA分子的大小，我们可以看到在凝胶中形成了一系列的DNA带。
较大的DNA分子迁移速度较慢，位于凝胶的起点附近，而较小的DNA分子则迁移速度较快，位于凝胶的末端。
通过比较目标DNA样品与DNA标记物的迁移距离，我们可以估算出目标DNA的大小。
讨论：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和测定DNA分子的方法。
琼脂糖凝胶具有较好的孔隙结构，能够根据DNA分子的大小将其分离开来。
在电泳过程中，电场作用下，DNA分子向阳极迁移，较大的DNA分子受到凝胶孔隙的阻碍，迁移速度较慢，而较小的DNA分子则能够较快地穿过凝胶孔隙，迁移到凝胶的末端。
通过观察电泳结果，我们可以对DNA分子的大小进行初步估算。
然而，需要注意的是，琼脂糖凝胶电泳只能提供DNA分子的相对大小，而无法提供精确的分子量。
这是因为琼脂糖凝胶中的孔隙大小并非恒定不变，而是受到多种因素的影响，如凝胶浓度、电泳时间等。
因此，为了更准确地确定DNA分子的分子量，我们需要在实验中加入DNA分子的标准品，以便进行比较和推断。
此外，琼脂糖凝胶电泳还可用于检测DNA分子的纯度和杂质。
通过在电泳过程中加入DNA染料或核酸探针，可以使DNA分子在凝胶上呈现出特定的颜色或荧光，从而判断样品中是否存在杂质或其他DNA序列。
琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物实验报告引言PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，可用于扩增目标DNA序列。
在PCR步骤完成后，需要通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的大小和纯度。
本实验旨在使用琼脂糖凝胶电泳技术检测PCR产物。
材料与方法材料•PCR反应体系：包括模板DNA，引物，dNTPs，聚合酶等•1×TAE缓冲液：含有0.04 M醋酸，0.001 M EDTA，pH 8.0•琼脂糖：用于制备琼脂糖凝胶•DNA分子量标记物：用于确定PCR产物的大小•Agarose：用于制备琼脂糖凝胶•紫外透射仪：用于检测琼脂糖凝胶电泳结果方法1.准备琼脂糖凝胶：–在适当容器中加入适量的1×TAE缓冲液。
–加入适量的琼脂糖粉末，充分搅拌溶解。
–将溶液加热至高温，直到琼脂糖完全溶解。
–待溶液温度降至50°C左右时，将其倒入凝胶模具中。
–待凝胶完全凝固后，将模具固定在琼脂糖凝胶槽中。
2.准备PCR产物样品：–将PCR反应管中的产物转移到无菌离心管中。
–根据需要，将样品进行浓缩或稀释，以保证电泳结果的准确性。
3.加载样品和DNA分子量标记物：–在琼脂糖凝胶上刻槽，使其能够容纳样品和DNA分子量标记物。
–将PCR产物样品与适量的DNA分子量标记物混合，加入刻槽中。
–加入适量的1×TAE缓冲液，以保证样品完全浸泡在缓冲液中。
4.进行电泳：–将琼脂糖凝胶槽连接至电源，并设置合适的电压和时间。
–经过适当时间后，关闭电源，取出琼脂糖凝胶。
5.检测结果：–将琼脂糖凝胶置于紫外透射仪下，观察DNA条带的迁移情况。
–根据DNA分子量标记物的迁移情况，估计PCR产物的大小。
结果与讨论经过琼脂糖凝胶电泳检测，我们成功地获得了PCR产物的电泳图。
根据DNA分子量标记物的迁移情况，我们可以初步估计PCR产物的大小。
在实验过程中，我们发现PCR反应的特定引物和模板DNA的选择对于产物大小的确定非常重要。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告
实验目的：
本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术对DNA分子进行分离和检测，以便进一步研究DNA的结构和功能。
实验原理：
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分离和检测方法，其原理是利用DNA分子在电场中的迁移速度差异，通过琼脂糖凝胶的孔隙大小和DNA分子的大小来实现分离。
DNA分子在电场中迁移的速度与其分子大小成反比，因此较小的DNA片段会迁移得更快，而较大的DNA片段会迁移得更慢。
实验步骤：
1. 制备琼脂糖凝胶，按照实验指导书上的配方将琼脂糖加入缓冲液中，混合均匀后倒入凝胶板中，待其凝固成凝胶后形成孔隙结构。
2. 样品处理，将待检测的DNA样品加入负电荷的染料，使其在电场中迁移时能够被可视化。
3. 电泳操作，将样品加载到凝胶槽中，接通电源，让DNA在电场中迁移。
4. 结果分析，观察凝胶板上的DNA条带，根据迁移距离和大小，分析DNA
片段的大小和数量。
实验结果：
经过电泳分离，观察到了DNA条带在凝胶板上的分布情况。
根据条带的迁移距离和大小，我们成功地分离出了不同大小的DNA片段，并且可以进一步对其进行分析和检测。
实验结论：
通过琼脂糖凝胶电泳实验，我们成功地实现了对DNA分子的分离和检测。
这项技术在生物学和遗传学研究中具有重要意义，可以帮助科研人员更好地理解DNA的结构和功能，为进一步的研究奠定基础。
总结：
琼脂糖凝胶电泳是一种简单而有效的DNA分离和检测方法，通过本次实验，我们深入了解了其原理和操作步骤，并取得了令人满意的实验结果。
希望通过今后的实验实践和学习，能够更好地掌握这一技术，为科学研究做出更多的贡献。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
琼脂糖凝胶电泳实验2011-11-03 09:43:56 来源：生物秀评论：0 我要评论实验二琼脂糖凝胶电泳实验【实验目的】(1)学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；(2)掌握使用水平式电泳仪的方法；(3)学习在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳的方法。
【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法。
核酸是两性电解质，其等电点为pH2-2.5，在常规的…实验二琼脂糖凝胶电泳实验【实验目的】(1)学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；(2)掌握使用水平式电泳仪的方法；(3)学习在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳的方法。
【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法。
核酸是两性电解质，其等电点为pH2-2.5，在常规的电泳缓冲液中(pH约8.5),核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。
核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时，具有电荷效应和分子筛效应，但主要为分子筛效应。
因此，核酸分子的迁移率由下列几种因素决定：(1)DNA的分子大小。
线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中移动，因而迁移得越慢。
(2)DNA分子的构象。
当DNA分子处于不同构象时，它在电场中移动距离不仅和分子量有关，还和它本身构象有关。
相同分子量的线状、开环和超螺旋质粒DNA在琼脂糖凝胶中移动的速度是不一样的，超螺旋DNA移动得最快，而开环状DNA移动最慢。
如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时，可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收，用同一种限制性内切酶分别水解，然后电泳，如在凝胶上出现相同的DNA图谱，则为同一种DNA。
(3)电源电压。
在低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。
但是随着电场强度的增加，不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，片段越大，因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大，因此电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。
要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。
(4)离子强度影响。
电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。
在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶)，电导率最小，DNA几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中(如误加10 X 电泳缓冲液)，则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。
溴化乙啶(Ethidium bromide, EB) (1) 能插入DNA分子中形成复合物，在波长为254nm紫外光照射下EB能发射荧光，而且荧光的强度正比于核酸的含量，如将已知浓度的标准样品作电泳对照，就可估算出待测样品的浓度。
由于溴化乙啶有致癌的嫌疑，所以现在也开发出了安全的染料，女口Sybergreen。
常规的水平式琼脂糖凝胶电泳适合于DNA和RNA的分离鉴定；但经甲醛进行变性处理的琼脂糖电泳更适用于RNA的分离鉴定和Northern杂交，因为变性后的RNA是单链，其泳动速度与相同大小的DNA分子量一样，因而可以进行RNA分子大小的测定，而且染色后条带更为锐利，也更牢固结合于硝酸纤维素膜上，与放射性或非放射性标记的探针发生高效杂交。
【试剂与器材】 （一） 材料电泳仪、水平电泳槽、样品梳子、琼脂糖等 （二） 试剂1、 50?TAE （1000mL ） : 242g Tris, 57.1mL 冰醋酸， 18.6g EDTA 。
2、 EB 溶液：100mL 水中加入1g 溴化乙啶，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，分装，室温 避光保存。
3、 DNA 加样缓冲液：0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青，50%甘油（w/v ）。
4、 RNA 甲醛变性胶上样缓冲液：0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青，1mM EDTA （PH8.0），50% 甘油（w/v ），用DEPC 水配制，高压灭菌备用。
5、 5?甲醛变性胶电泳缓冲液： 0.1m MOPS （PH7.0），40mM 醋酸钠，5mM EDTA （PH8.0），用 DEPC 水配制，过滤除菌，室温避光保存。
淡黄色缓冲液可正常使用，深黄色应弃用。
【操作方法】（一）常规的水平式琼脂糖电泳 制备琼脂糖凝胶：按照被分离 DNA 分子的大小，决定凝胶中琼脂糖的百分含量；一般情况下，可参考下表：琼脂糖的含量（%）分离线状DNA 分子的有效范围（Kb ） 0.3 60-5 0.6 20-1 0.7 10-0.8 0.9 7-0.51.2 6-0.4 1.5 4-0.22.0 3-0.11 •制备琼脂糖凝胶：称取琼脂糖，加入 糖融化均匀。
在加热过程中要不时摇动 口膜,以减少水份蒸发。
2 •胶板的制备：将胶槽置于制胶板上 1mm 左右的间隙，待胶溶液冷却至 EB 加入凝胶中，而是电泳后再用0.5 胶板上，除掉气泡；待凝胶冷却凝固后，垂直轻拔梳子；将凝胶放入电泳槽内，加入 冲液，使电泳缓冲液液面刚高出琼脂糖凝胶面；3 •加样：点样板或薄膜上混合 DNA 样品和上样缓冲液，上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于 1X 。
用10 pL 微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内，每加完一个样品，应更换一个加 样头，以防污染，加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面。
（注意：加样前要先记下加样的顺序和点1x 电泳缓冲液，待水合数分钟后，置微波炉中将琼脂 ,使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液；加热时应盖上封,插上样品梳子，注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持 50 C 左右时，加入最终浓度为 0.5微克/毫升的EB （也可不把⑷/ml 的EB 溶液浸泡染色15分钟），摇匀，轻轻倒入电泳制1x 电泳缓样量）。
4 .电泳：加样后的凝胶板立即通电进行电泳，DNA的迁移速度与电压成正比，最高电压不超过5V/cm。
当琼脂糖浓度低于0.5%，电泳温度不能太高。
样品由负极（黑色）向正极（红色）方向移动。
电压升高，琼脂糖凝胶的有效分离范围降低。
当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm 处时，停止电泳。
（2）5 •观察和拍照：电泳完毕，取出凝胶。
在波长为254nm的紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。
DNA存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带。
于凝胶成像系统中拍照并保存之。
（二）在含有甲醛的凝胶上进行的RNA电泳（选做）配制23 mL甲醛电泳胶：0.336g琼脂糖溶于20mL DEPC水中，冷却至60?C，加入5mL的5x甲醛变性胶电泳缓冲液和 5.5mL的甲醛，在通风橱内倒胶，冷却30分钟后使用。
甲醛变性胶RNA样品的制备：1山RNA,5?甲醛变性胶电泳缓冲液0.5丄，甲醛0.7山，甲酰胺2此,65O C加热15min，迅速冰浴，加1此上样缓冲液和0.2山的EB。
步骤：1 •用3%过氧化氢浸泡电泳槽、胶板、梳子30分钟以上。
2 •胶板的制备：按常规琼脂糖电泳法。
3• 预电泳：1X甲醛变性胶电泳缓冲液，预电泳10 min。
电压为5V/cm。
4 •小心地进行点样，记录样品次序与点样量；然后开始电泳，电压为3-4V/cm。
5 •观察和拍照：在波长为254nm的紫外灯下观察电泳胶板并拍照保存图片。
【注意事项与提示】（1）EB是强诱变剂并有中等毒性，易挥发，配制和使用时都应戴手套，并且不要把EB洒到桌面或地面上。
凡是沾污了EB的容器或物品必须经专门处理后才能清洗或丢弃。
简单处理方法为：加入大量的水进行稀释（达到0.5mg/mL以下），然后加入0.2倍体积新鲜配制的5%次磷酸（由50%次磷酸配制而成）和0.12倍体积新鲜配制的0.5mol/L的亚硝酸钠，混匀，放置1天后，加入过量的1mol/L碳酸氢钠。
如此处理后的EB的诱变活性可降至原来的1/200左右。
（2）由于EB会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA，使DNA迁移率降低。
因此，如果要准确地测定DNA的分子量，应该采用跑完电泳后再用0.5用/ml的EB溶液浸泡染色的方法。
（3）总RNA的分析：哺乳动物的RNA由28S rRNA、18S rRNA和mRNA以及其它小分子RNA组成，28S和18S rRNA处为明显的亮带（相当于 4.5kb和1.9kb ）, 28S/18S应为1.5-2.5/1 ;植物、昆虫、酵母和两栖动物的RNA带分布较小，约为0.5-3.0kb左右；假如28S/18S小于1/1 ,或者出现拖带，说明RNA已经有部分降解，如果28S和18S rRNA大部分已降解，则需重新制备。
【实验安排】只需一天：上午配试剂倒胶，下午跑电泳并观察拍照。
【实验报告要求与思考题】1、附上电泳结果的图片并进行正确的标注（如下图）M : 1Kb DNA ladder ; 1 :质粒DNA2、琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？3、如果样品电泳后很久都没有跑出点样孔，你认为有哪几方面的原因? 电泳流程图：凝胶加样缓冲液使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。
以0.5采BF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。
在琼脂糖浓度为0.5%〜1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。
但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。