土壤铵态氮等测定

方法原理:

用2mol/L KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH+4及水溶性NH+4浸提出来。土壤浸出液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氮0.05~0.5mg/L的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。

实验步骤：

（1）称取10.00g新鲜土样（精确到0.01g），置于200ml三角瓶中，加入KCl 溶液100ml，在摇床里振荡30min，取出静置后，取上清液过滤；

（2）吸取浸提液5ml放入50ml容量瓶中，后加入KCl溶液10ml、苯酚溶液5ml、次氯酸钠碱性溶液5ml,摇匀；

（3）在25℃左右室温下放置1小时后，加入掩蔽剂1ml,然后用水定容至刻度，在625nm波长处进行比色。

工作曲线绘制：

分别取0.00 ，0.50 ，1.00 ，2.00 ，3.00 ，4.00 ，5.00ml铵态氮标准溶液于50ml容量瓶中，各加入10ml KCl溶液,然后同(2) (3)步骤进行。

试剂配制：

【2mol/L KCl溶液】: 称取149.1g KCl(分析纯)溶入水中，稀释至1L。

【苯酚溶液】：称取苯酚（分析纯）10g、NaOH（分析纯）5g和消极铁氰化钠(分析纯)0.1g稀释至1L。（此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在冰箱中4℃保存，使用时用酸调节PH酸性）

【次氯酸钠碱性溶液】：称取NaOH（分析纯）10g、磷酸氢二钠（分析纯）7.06g、磷酸钠（分析纯）31.8g和52.5g/L次氯酸钠（分析纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液）10mL溶于水中，稀释至1L.(贮于棕色瓶中，在冰箱中4℃保存，使用时放置至室温)

【掩蔽剂】: 将400g/L的酒石酸钾钠（分析纯）与100g/L的EDTA二钠盐溶液等体积混合。每100ml混合液中加入10mol/L NaOH溶液0.5ml。

【铵态氮标准溶液】：称取0.4717g于105℃烘2小时的(NH4)2SO4(分析纯)溶于水，定容至1L。（使用时将标准液稀释20倍即ρ（N）=5ug/mL）

一、方法原理

土壤铵态氮是土壤速效氮的重要组成部分，测定土壤NH4+-N 的方法主要有直接蒸馏法和浸提法两类，直接蒸馏法是在氧化镁的存在下直接蒸馏土壤，但此法在弱碱性蒸馏时仍可能使一些简单的有机氮微弱水解有NH3蒸出，易使结果偏高，同时该法操作复杂，不适合大批量分析。故在ASI法中采用氯化钾溶液提取土壤中的NH4+，提取液中的NH4+用靛酚蓝比色法，靛酚蓝比色法的灵敏度高，准确度也较高，适合于大批量样品的自动化分析。

靛酚蓝比色法的基本原理是：土壤胶体上的NH4+被K+交换下来后，在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚反应，生成水溶性染料靛酚蓝，其深浅与溶液中的NH4+-N含量呈正比，线性范围为0.05～0.5mg/L之间。

二、试剂配制

1. NaOH溶液

将6.75g NaOH、0.75g EDTA二钠、1.25g 醋酸钠溶解于250ml水中，储存于250ml 的容量瓶中。其中EDTA二钠作为金属离子的掩蔽剂，防止干扰。醋酸钠可增强颜色的稳定性。

2. 90%苯酚溶液

将45g 苯酚溶解于50ml水中，注意苯酚易结块，可加热到60-70℃。

3. 碱性苯酚溶液

测定当天，将36ml 90%苯酚溶液加到250ml 溶液中，摇匀。

4. 次氯酸钠溶液

在400ml 的水中加入100ml 的NaClO溶液即可。

5. NH4+-N 标准溶液的配制(改进的地方)

称取1.9105g NH4Cl（65℃烘4h），于500ml的容量瓶中，加水定容至刻度。该溶液的浓度为1000mg/L.

用移液管吸取1ml于100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，此时容量瓶中溶液浓度为10mg/ml。再对该溶液分别取0，0.5，1，2，4，8ml于25ml 的比色皿中，，对应的浓度为0.0，0.2，0.4, 0.8, 1.6，3.2 ppm(mg/L).

6. 浸提剂KCl溶液的配制

称取74.5g KCl 溶解于500ml 水中，并加0.25g 聚丙烯酰胺至1000ml 容量瓶中。为1mol/L的溶液。

三、操作步骤

1. 样品的处理：用电子分析天平称取约为

2.000g土样于锥形瓶中，加入40ml 的KCl 溶液，放于振荡机上，振荡1h，将其过滤于50ml的容量瓶中，同时做空白试验。

2. 向有一定量的NH4+-N溶液中加入4ml碱性苯酚溶液，再用加液器加入10ml 次氯酸钠溶液，用KCl滴至刻度线，摇匀，放置1h后，用分光光度计在630nm 处比色，读取吸光度A。

3. 标准曲线的绘制：从浓度为0.0， 5.0，10.0, 20.0, 40.0 ppm(ug/mL)的NH4+-N标准溶液中各取1.0ml 的溶液于25ml的比色管中，补加KCl溶液至10.0ml,然后按步骤2进行操作。

四、比色条件：

（1）碱性介质中反应，要求pH 10.5-11.7。

（2）显色和稳定时间：

在室温下（20︒C）一般显色时间约为1小时，但要完全显色约需2-3小时，所以加入试剂后静置1小时即可比色。

稳定时间为24小时，或24小时以上。为加速显色，也可在40︒C下加热，半小时即可显色。

（3）干扰离子：

因在碱性下显色，很多金属离子都有干扰，可用EDTA等螯合剂来掩蔽。（4）测定范围：0.05-0.5mg/L；

（5）比色波长：625nm。

五、评价

优点：兰色稳定，比色液为真溶液，灵敏度高；准确度、精密度高；干扰离子可用EDTA掩蔽。

缺点：试剂不稳定，须冷藏，或当天配制；试剂有毒；显色时间稍长。