药物分析实验讲义-11药本

第三部分药物分析实验内容实验一葡萄糖的分析一、目的要求1. 掌握氯化物、铁盐、重金属限度检查的方法、原理、反应条件及其计算；2. 正确使用纳氏比色管。

二、方法原理1. 氯化物中国药典对氯化物的检查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。

2. 铁盐铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较，颜色不得更深。

3. 重金属硫代乙酰胺在弱酸性(pH3．5醋酸盐缓冲液)条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生(以pb2+为代表)生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较, 颜色不得更深。

三、操作步骤1. 氯化物取本品0.6g，置50ml纳氏比色管中，加水溶解使成25ml，再加稀硝酸10ml；加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。

另取标准氯化钠溶液（10µg Cl-/ml）6.00ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇匀，即得对照溶液。

于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1ml，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，观察比较，即得。

2. 铁盐取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，移至50ml纳氏比色管中，加水稀释使成45ml，加硫氰酸铵溶液（30→100）3ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液（10µgFe/ml）2.00ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。

3. 重金属取纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液（10µg Pb/ml）2.00ml与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml后，加水稀释使成25ml。

取本品4.0g，置于乙管，加水适量溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，加水稀释使成25ml；再在甲乙两管中分别加入硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深（含重金属不得过百万分之五）。

四、注意事项1. 限度检查应遵循平行操作原则，即供试管与对照管的实验条件应尽可能一致，包括实验用具的选择、试剂与试液的量取方法及加入顺序、反应时间的长短等。

2. 比色、比浊操作，一般均在纳氏比色管中进行，在选用比色管时，必须注意使管的大小相等，玻璃色质一致，最好不带任何颜色，管上的刻度高低一致，如有差别，不应超过2mm。

3. 在比色、比浊前应用旋摇的方法使比色管内试剂充分混匀。

比色方法是将两管同置于白色背景上，从侧面或自上而下观察；比浊方法是将两管同置于黑色背景上，从上向下垂直观察。

4. 比色管用后应立即冲洗，避免久置，注意不能用毛刷或去污粉等水中不溶物洗涤，以免划出条痕损伤比色管内壁而影响比色，最好用铬酸洗液洗涤，然后用自来水及纯化水依次冲洗干净。

5. 一般情况下可取1份供试品进行检查。

如结果不符合规定或在限度边缘时，应对供试品和对照品各复检2份，方可判定。

6. 重金属:硫代乙酰胺试液配制方法：临用前取自冰箱中保存的4％硫代乙酰胺液1ml，加混合溶液【由1mol/L氢氧化钠溶液15ml、水5ml及甘油20ml组成】5ml，置水浴上加热20秒钟，冷却，立即使用。

五、思考题1. 试计算本实验中氯化物、铁盐等一般杂质的限量是多少？2. 葡萄糖的检查项目中哪些属于一般杂质，哪些属于特殊杂质？试述它们的来源及检查意义。

3. 氯化物、重金属检查中的操作注意事项有哪些，氯化物比浊检查时为什么应将反应液稀释后再加沉淀剂？4. 如何正确选用各项实验中的用具及仪器？实验二 盐酸普鲁卡因注射液的含量测定一、目的要求掌握提取容量法的原理及方法。

二、方法原理（一）提取容量法提取容量法是根据有机碱盐类能溶于水而游离碱不溶于水的特性，采用碱化后有机溶剂提取分离的方法进行测定。

用反应式表示如下：NH 2 NH 2+ NH 3·H 2O ——→ + NH 4Cl + H 2O2 CH 2N （C 2H 5）2·HCl 2 CH 2N （C 2H 5）2NH 2 NH 2+ H 2SO 4——→ ·H 2SO 422 CH 2N （C 2H 5）2 2 CH 2N （C 2H 5）2Residual H 2SO 4 + 2NaOH −−−→−甲红指示剂Na 2SO 4 + 2H 2O 计算公式：％每毫升标示量标示量％样滴定液100)(0⨯⨯⨯-=V F T V V三、操作步骤药典规定，本品含盐酸普鲁卡因（C 13H 20N 2O 2·HCl）应为标示量的95.0~105.0%。

精密量取本品适量（约相当于盐酸普鲁卡因0.2g ）置分液漏斗中，加氨试液3ml 成碱性后，分次用氯仿（依次15，10，10ml ）振摇提取，使普鲁卡因均溶入氯仿中，每次提取液滤过，合并氯仿液，滤器用少量氯仿洗净，洗液与滤液合并后在水浴上蒸发至近干，加中性醇5ml 与硫酸滴定液（0.025mol/L ）25.00ml ，在水浴上加热至氯仿的臭气完全消失，放冷，加甲红指示液数滴（2～4滴），用氢氧化钠滴定液（0.05mol/L ）滴定剩余的硫酸，并将滴定的结果用空白试验校正。

每1ml 硫酸滴定液（0.025mol/L ）相当于13.64mg 的C 13H 20N 2O 2·HCl。

四、注意事项1. 提取容量法操作要点(1) 分液漏斗采用甘油-淀粉糊做润滑剂。

其配制方法为：取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，加热至140℃，保持30分钟并不断搅拌，放冷，即得。

(2) 样品液碱化前宜先加氯仿，以免游离基析出，沉淀于分液漏斗活塞部分，而在操作中损失。

(3) 提取液应用氯仿湿润的棉花滤过。

(4) 加入标准酸溶液前，氯仿液只能蒸至近干，而加入标准酸溶液后，必须完全蒸除氯仿，以免影响含量测定结果。

(5) 蒸干残余氯仿，只需在水浴上敞口除去，并时加振摇，使氯仿滴分散，便于除尽。

(6) 接触过氯仿提取液的容器，使用完毕后应先以醇荡洗，然后水洗，再以温热的清洁液处理，洗净备用。

实验三维生素B1的分析一、目的要求1. 掌握重量法、直接分光光度法的基本原理和方法；2. 比较两种含量测定方法的优缺点。

二、方法原理维生素B1在酸性溶液中和硅钨酸作用产生沉淀，根据沉淀的重量即可计算其含量。

维生素B1分子中具有共轭双键结构，故具紫外吸收，在一定波长下测定吸收度即可定量。

三、操作步骤药典规定，本品含维生素B1（C12H17ClN4OS·HCl）应为标示量的90.0~110.0%。

（一）重量法取本品15片（15mg）（或5mg的25片），精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素B150 mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（1→20）60ml，振摇，使维生素B1溶解并稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，弃去初滤液20ml，精密量取续滤液（需澄明）50ml，煮沸，立即滴加硅钨酸试液2ml，继续煮沸2分钟，用80℃恒重的垂熔坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液（1→20）20ml 分次洗涤，再用水10ml洗涤1次，最后用丙酮洗涤两次，每次5ml，沉淀在80℃干燥至恒重，精密称定，与0.1939相乘，即得供试量中含有C12H17ClN4OS·HCl的重量。

计算公式：％标示量标示量％样沉淀1001939.02⨯⨯⨯⨯⨯=W WM（二）直接分光光度法取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素B 125mg ），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml ，振摇15分钟使维生素B 1溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml ，置另一100ml 量瓶中，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246 nm 波长处测定吸收度，按C 12H 17ClN 4OS ·HCl的吸收系数（%11cm E ）为421计算，即得。

计算公式：％标示量标示量％样100100%11⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯=W l E W V n A cm 四、注意事项1. 重量法：(1) 实验前，首先将4号垂熔坩埚烘至恒重。

进行恒重操作时，必须注意干燥温度，冷却时间均应保持一致，并使用同一干燥器干燥，同一台天平称重。

(2) 掌握平行原则，即坩埚和样品沉淀的恒重操作均应在同一条件下进行。

(3) 沉淀具有吸湿性，称重应迅速，也可根据供试品重量，预先计算好沉淀重量，以加速称重速度。

(4) 过滤煮沸后，应立即并逐滴加入沉淀剂（尤其是最初几滴更应缓慢加入，以便得到颗粒较大的沉淀），边滴边搅拌，以防止共沉淀产生，同时注意勿使溶液溅出（用小火）。

(5) 加完沉淀剂，煮沸时间特别重要，煮沸时间不足，沉淀过细，容易穿过滤器，煮沸时间过长，沉淀会粘于壁上，造成转移困难，煮沸时间应不少于2分钟（煮沸5分钟也无影响）。

煮沸过程中蒸发的水分可随时补加。

(6) 以倾斜法趁热过滤，即使沉淀尽量留在烧杯中，溶液尽可能转入坩埚内，每次洗涤时应充分搅拌沉淀，直至洗涤接近结束，方将沉淀定量转移至已经恒重的垂熔坩埚中。

(7) 由于沉淀颗粒较细，易于沿壁“上行”而损失，建议在定量转移和洗涤时，溶液应通过玻璃棒并悬空注入坩埚体积的1/3。

同时，开始2～3次，抽滤力量不宜过猛，也不要抽得太干，以免沉淀漏掉。

若遇此现象，应将滤液反复抽滤至澄清。

(8) 实验完毕，应及时将沉淀用水刷洗干净。

必要时可用丙酮浸泡，然后用水抽洗至滤液澄清，最后用丙酮抽洗一次备用。

如不用，应将垂熔坩埚于10%HNO3中保存，以保持其平衡状态，当下次使用时，沉淀不易漏下来。

五、思考题1. 重量法实验的成败关键有哪些，为什么要趁热过滤？2. 什么是换算因数，重量法中的换算因数是怎样得来的？3. 试比较此实验中所用二种方法在准确性、方法选择性等方面有何不同？实验四复方磺胺甲恶唑片的质量分析一、目的要求1. 掌握双波长分光光度法的基本原理；2. 学会用单波长型分光光度法计进行双波长法测定；3. 熟悉复方制剂不经分离直接测定组分含量的方法。

二、方法原理双波长分光光度法消除干扰吸收的基本原理为：在干扰组分的吸收光谱上吸收系数相同的两个波长处，若被测组分的吸收系数有显著差异，则可用于消除干扰吸收，即直接测定混合物在此两波长处的吸收度之差值，该差值与待测物浓度成正比，而与干扰物浓度无关。

Anm）图5-1 SMZ、TMP在0.1mol/L氢氧化钠液中的吸收光谱图复方磺胺甲恶唑片是含磺胺甲基异恶唑（SMZ）及甲氧苄氨嘧啶（TMP）的复方制剂。

在0.1mol/L氢氧化钠溶液中，SMZ在257nm波长处有最大吸收；TMP在此波长吸收最小并在304nm波长附近有一等吸收点，而SMZ在这两波长处的吸收度差异大（见图5-1），故选257nm为测定波长，在304nm波长附近选择供测定的参比波长。