红细胞血型血清学技术

（二）红细胞悬液的配制
用于血型鉴定、配血等的红细胞至少要 用大量生理盐水洗一次，其目的是通过 洗涤可以去除红细胞表面的下列物质：
1) 少量的血浆 蛋白；如纤维 蛋白原等； 2)已溶解红细 胞的基质；他 们有竞争抗体 的作用。

3)可溶性的抑 制物质 ，如 A、 B、H、Lewis 等血型物质； 4)抗凝剂；他 们有抗补体作 用。

练习题：
1.用于抗人球蛋白试验的标本要抗凝，否则： A．C3b 容易致敏红细胞造成抗人球蛋白试验假 阳性。 B．C4b容易致敏红细胞造成抗人球蛋白试验假阳 性。 C．血型物质吸附于红细胞造成试验结果假阳性. D．血型抗体致敏红细胞造成抗人球蛋白试验假 阳性。 E．A和B。
2 ．血型血清学试验中，关于红细胞悬液使用 浓度正确的是： A．2%的红细胞悬液一般用于滴定抗体效价。 B．5%的红细胞悬液一般用于血型鉴定、配血 试验及抗人球蛋白试验等大多数血型血清学试 验。 C．10% 的红细胞悬液一般用于测定抗体的亲 和力试验。 D．血型血清学试验与红细胞悬液使用浓度无 关。 E．A、B及C均正确。
（一）标本采集 1．红细胞标本

★特殊情况： 用于抗球蛋试验（ Coomb’s 试验）的 标本要抗凝，否则，补体C3b、C4b容 易致敏红细胞造成抗球蛋试验 （Coomb’s试验）假阳性。 存在有受Ca2+抑制的自身抗体时，不 宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本。
（一）标本采集 2．血清标标本
盐水介质凝集试验
原 理
盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与 相应抗体分子上的抗原结合部位结合，交 叉连结形成肉眼可见的凝集块。
★用 途：
盐水介质凝集试验用于 IgM 抗体 的检出、鉴定、盐水配血试验。 盐水抗体鉴定的血型抗原 ，如 ABO、MN、P等血型系统的抗原。

例外情况：
在盐水介质中，凝集是IgM抗体的行 为。ABO血型系统中的A、B抗原位点多， 当IgG抗A、抗B的浓度足够大时，在盐水 介质里也能与相应的红细胞发生凝集反 应。
2．红细胞标本 一般试验用的在 4 ℃冰箱保存下的凝血标本 要在5天内使用，以不溶血为准。 ACD 保存液或其它特制的保存液可保存红细 胞3周。 盐水配制的红细胞悬液只能当天使用，不 宜保存。 应注意的问题： 用作交叉配血的供血者、病人标本（血清、 细胞）要放 4 ℃冰箱保存 1 周，以便在出 现输血反应时可备查。 各种保存的红细胞在使用前都要用盐 水洗一次以上。
★发生上述现象的原因：
反应强的抗A、抗B和抗原强度强的A、B抗原 作用时，补体C1在有Ca2+存在的条件下，固定到 红细胞膜上，妨碍了红细胞的凝集，进一步可能 引起溶血。心
•
•
用血浆或灭活的血清做试验。
用EDTA盐水配制红细胞悬液， 以消除这种现象。
• 稀释血清后再做试验可消除这 种现象，因而也称这种现象为前带 现象
★（三）标本的保存
1．血清标本 没有稀释过的血清如加有防腐剂可在 4℃冰箱保存数月；在-20℃以下可保存数 年而其抗体活性基本不变。 用白蛋白或无抗体活性的AB型血清作 稀释剂稀释血清后保存，效果和上述相同 。 用生理盐水稀释过的血清只限当天使 用，不能保存。 用大分子物质做稀释介质，其对抗体 活性不起保护作用。
红细胞血型血清学技术
标本 盐水介质凝集试验 酶处理细胞的凝集试验 抗球蛋白试验 聚凝胺的应用
标本
（一）标本采集 1．红细胞标本

采集方法：



针刺耳垂或指尖，直接用生理盐水配成红 细胞悬液待用。 静脉采血，用抗凝剂（ ACD、CPD、Na-EDTA 等）抗凝。 直接从血凝块（血柱）中洗脱游离的红细 胞。
盐水介质凝集试验

(一)方法 常用的方法有平板法和试管法。
盐水介质凝集试验
（二）、立即离心法：

用 途： 盐水法鉴定血型和交叉配血时，多 采用立即离心 (immediate spin) 法。正 确的操作是红细胞悬液加到血清中后立 即离心并观察结果。

★延迟立即离心的后果： 反应时间过长而延误立即离心的时间对 ABO 血 型系统的抗体检出影响较大。 如 果 在 室 温 放 置 2 分 钟后 离 心 ， 可 能 使 3+ ～ 4+ 的凝集减弱为 0 ～ 1+ ，并伴有溶血 现象。 如果在室温放置 5 分钟后离心，原有的凝 集可能消失，并有溶血。 有的标本在延迟离心后，本来应有的凝集 会变为既不凝集也不 溶血，因而难以发 现ABO血型的不配合，这多数发生在O型人 的血清抗体与A型、B型或AB型红细胞反应 的试验中，发生率为2%～3%。

★红细胞悬液的常用浓度

压积红细胞1滴加8滴生理盐水所配成的悬液约为10%， 按此比例配制其他所需浓度的红细胞悬液。 2%的红细胞悬液一般用于滴定抗体效价。 5%的红细胞悬液一般用于血型鉴定、配血试 验、及抗球蛋白试验等大多数血型血清学试验。 10% 的红细胞悬液一般用于测定抗体的亲和 力试验。
3．关于血清标本保存，以下表述不正确的是： A．没有稀释过的血清如加有防腐剂可在 4 ℃冰箱保 存数月；在-20℃以下可保存数年而其抗体活性基本 不变。 B．用白蛋白或无抗体活性的 AB 型血清作稀释剂稀 释血清后保存，效果与上述相同。 C．用生理盐水稀释过的血清只限当天使用，不宜保 存。 D．用大分子物质做稀释介质，其对抗体活性不起保 护作用。 E．用ACD保存液可保存血清3周。

采集方法： 取静脉血注入干燥试管内，放置 37 ℃水浴中，凝固后用玻璃棒搅动血块， 使之与试管壁剥离， 然 后 放 置 4 ℃ 冰 箱过夜，离心分离血清。 必要时，当血液凝固后即可离心分 离血清。
（一）标本采集 2．血清标标本
★需注意的问题： 血清如需于4℃冰箱保存，需加叠氮钠（NaN3） 防腐，叠氮钠（NaN3）终浓度0.1%。 血清如用于制备试剂（如抗A、抗B标 准 血 清 ） 要经过56℃灭活补体后才能使用。 一般实验避免使用血浆，防止纤维蛋白的干扰。