大肠杆菌的检测(最新知识点)
大肠菌群计数检验重点
第一法 大 肠菌群 MPN 计 数法
第二法 大 肠菌群平 板计数法
一．3、5、7小组： 使用第一法（附带做第二法中，两个平板接 种），以自来水为样品。
二．4、6小组： 使用第二法（附带做第一法中，3个试管初发酵 试验），以污水为样品。
第一法：检样稀释与初发酵试验
1
MPN：表示食品 中大肠菌群数是以 每100ML或克检 样内大肠菌群最大 可能数。一般采用 9管法.
3. 证实试验
○ 从VRBA 平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于 BGLB 肉汤管内，36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h，观察产气情况。凡 BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
原理
溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变 （呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说 明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群。
第一法 复发酵试验
用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中， 36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。
1. 第二法 平板菌落数的选择与证实试验
2. 平板菌落数的选择
○ 选取菌落数在15CFU～150CFU 之间的平板，分别计数平板上出现 的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色 的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm 或更大。
第二法：检样稀释与平板计数
检样稀释：同ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。 平板计数：
1. 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL稀释样品，另外一个平皿加1mL生理盐水作空白对照。 2. 及时将15—20mLVRBA（结晶紫中性红胆盐琼脂）倾注每个平皿中。 3. 待琼脂凝固后，再加3—4mLVRBA覆盖表层。翻转平板培养。
大肠杆菌的检测及原理
大肠杆菌的检测及原理1.检测原理：大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
2.仪器设备与器具：2.1 恒温培养箱：36±1℃。
2.2 1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。
2.3 接种针。
2.4 显微镜。
2.5 超净工作台。
2.6 玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。
2.7 天平：感量0.01g。
2.8 灭菌釜。
2.9 培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。
2.10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片3.培养基及试剂：3.1 乳糖胆盐发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.2 伊红美兰琼脂平板：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.3 乳糖发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.4 革兰氏染色液。
3.4.1 结晶紫染色液：结晶紫1g95%乙醇20ml1%草酸铵水溶液80ml将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
3.4.2 革兰氏碘液：碘1g碘化钾2g蒸馏水300ml将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300 ml。
3.4.3 沙黄复染液：沙黄0.25g95%乙醇10ml蒸馏水90ml将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
3.5 生理盐水。
4.检验程序：检样稀释↓乳糖胆盐发酵管，36±1℃，24±2hr ↓不产气产气↓大肠菌群阴性伊红美兰琼脂平板，36±1℃，24±2hr报告↓ ↓革兰氏染色乳糖发酵管，36±1℃，24±2hr ↓ ↓ ↓G+ G-，无芽孢杆菌产气不产气大肠菌群阴性大肠菌群阴性报告大肠菌群阳性报告5.测定方法：5.1 检样稀释：5.1.1 以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中，经充分振摇成1：10均匀稀释液。
微生物学理论指导：大肠杆菌的卫生细菌学检查
⼤肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和⽔源、⾷品等。
取样检查时，样品中⼤肠杆菌越多，表⽰样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越⼤。
故应对饮⽔、⾷品、饮料进⾏卫⽣细菌学检查。
1.细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采⽤倾注培养计算。
我国规定的卫⽣标准是每毫升饮⽔中细菌总数不得超过100个。
2.⼤肠菌数指数：指每⽴升中⼤肠菌群数，采⽤乳糖发酵法检测。
我国的卫⽣标准是每1000ml饮⽔中不得超过3个⼤肠菌群；瓶装汽⽔、果汁等每100ml⼤肠菌群不得超过5个。
大肠杆菌检测课件
感性高，特异性强。 PPT学习交流
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讨论与展望
近年来，世界各国针对水环境和食品中大肠杆菌的 快速检测技术展开了大量研究，在已知的检测方法中均 有自己的优势与不足。随着科学和生物生化技术的发展， 食品中大肠杆菌的检测计数也将趋于提高精度与速度， 不断改进与完善才能切实解决食品安全问题，为人品生 活提供保障。
将冷却至45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）
倾注于平皿内，混匀并凝固后加入3~4mL的VRBA-MUG
覆盖平板表层，36±1℃下培养18~24h，之后在紫外灯下
计数。该方法是将样本做一定比例的稀释，其中的微生物
被稀释后分散成单个细胞，然后在一定的条件下进行培养
一直到生长成能用肉眼观察的菌落，最后通过样本数量和
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检测原理
PCR检测技术是在1971年首先被Kleppe等提出， 1985年才作为一种检测方法获得认可。PCR检测技术是 一种聚合酶链反应，其采用变性—退火—延伸三个步骤 使DNA基因能够在体外实现解旋解链，类似于一种体外 增加、复制形式。史云等建立了用于肉及肉制品中大肠 杆菌的两重PCR检测方法，但该方法需要较长的时间的 样品纯化处理，且对操作人员的专业知识的要求也较高。
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检测原理
免疫磁珠技术是一种大肠杆菌的分离技术。其原理是 以磁珠为抗体载体，磁珠和大肠杆菌结合，通过磁力来实 现力学移动进而将大肠杆菌进行分离。与其他的细菌分离 方法相比，免疫磁珠技术在很大程度上提高了样本中病原 性副溶血性弧菌的检测效率。免疫磁珠技术可以快速地在 不同菌种的样本中处理不同的微生物，该方法可以大幅度 地提升检测效率。
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌(Escherichia coli)是一种革兰氏阴性的厌氧菌，常常被用作指示性微生物来评估食品和水源的卫生质量。
以下是常见的大肠杆菌检验方法：
1. 培养基方法：将样品接种在包含大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上，如大肠杆菌选择性琼脂培养基(MacConkey琼脂培养基)和EC培养基等。
大肠杆菌能够利用琼脂中的乳糖发酵产生酸，导致培养基呈现红色或粉红色。
此外，EC 培养基还包含了可以检测大肠杆菌β-葡萄糖苷酶的亚甲基红试剂，如果大肠杆菌存在，则培养基呈现金属光泽。
2. 确认方法：对落有培养基上的鲜艳深色菌落进行进一步确认。
典型的确认方法包括革兰染色、目测观察形态特征、氧化发酵试验和测试产气杆菌酶试验。
3. PCR检测方法：利用聚合酶链反应(PCR)技术，从样品中扩增大肠杆菌特异性基因片段（如16S rRNA基因），然后通过凝胶电泳检测扩增产物。
4. 快速方法：如免疫层析试纸法和光学组织测定法。
免疫层析试纸法利用抗大肠杆菌抗体与大肠杆菌特异性抗原结合生成可视化结果。
光学组织测定法利用大肠杆菌的β-葡萄糖苷酶水解比色底物产生颜色变化。
这些方法都可用于检测大肠杆菌在食品和水源中的存在及其数量。
在进行检验时，应严格遵守相关的操作规程和实验室操作规范，以确保结果的准确性和可靠性。
大肠杆菌菌落总数检测步骤
大肠杆菌及菌落总数检测方法为了对鸡精产品的微生物指标进行有效的控制，对微生物的检测就显的十分重要。
下面是鸡精产品的大肠杆菌及菌落总数实验检测方法。
一、大肠杆菌：1）培养基准备（以3.5g乳糖胆盐发酵琼脂为例）双料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。
B、用0.1g称量天平秤取7g乳糖。
C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入三根装有小导管的试管中（此三根为双料试管，即双倍原料）。
单料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。
B、用0.1g称量天平秤取3.5g乳糖。
C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入六根装有小导管的试管中（此六根为单料试管，即单倍原料）。
2）将配制好的试管放入灭菌锅进行115℃进行灭菌10min。
3）将灭菌过后的试管放置在无菌室，常温保存一周。
4）若要对生产的样品检测其大肠杆菌，其步骤如下：A、量取灭菌后的蒸馏水225ml加温后及25g样品混合均匀。
（样品需要在无菌室中，有封盖的塑料杯中进行混合）B、取三个玻璃培养皿，分别标上-1、-2、-3标记。
C、取两根新试管取9ml蒸馏水分别标为a、b。
D、用吸管吸取1ml样品液体，注入-1培养皿中，并盖上盖子。
E、用吸管吸取1ml样品液体，注入a试管中，记为-2培养基液。
F、用吸管吸取1ml a试管中的液体，注入到b试管中，记为-3培养基液。
G、用1ml吸管取样品液体分别注入3根单料试管中，用10ml吸管取样品液体分别注入双料试管中H、用1ml吸管取-2培养试管液体，分别注入到单料试管中。
I、装好液体的试管，用试管塞封好，放到36℃±1℃的恒温培养箱中24小时培养。
J、24小时培养后，取出并用肉眼观察试管的颜色及冒气泡情况，若有其中的任意状况，说明有大肠杆菌，需要通过美兰做进一步的检测。
大肠杆菌的检测方法
大肠杆菌的检测方法大肠杆菌（Escherichia coli，简称E. coli）是一种常见的细菌，它存在于人和动物的肠道中，同时也是一种重要的指示性微生物，可以用来评估环境和水源的卫生状况。
对大肠杆菌的检测具有重要的意义，可以帮助预防细菌感染和传播，保障公共卫生安全。
现在，我将详细介绍大肠杆菌的检测方法。
大肠杆菌的检测方法主要分为传统培养法和分子生物学方法两大类。
传统培养法是最常用的大肠杆菌检测方法之一。
其基本原理是将样品在含有大肠杆菌生长所需的培养基上孵育，然后观察培养基上是否有典型的大肠杆菌形态和生长特征。
具体步骤如下：1. 准备样品：样品可以是水、食品、环境表面等。
2. 分装样品：将样品分装到培养基培养皿或试管中。
3. 孵育培养：将分装好的样品在适当的温度和时间条件下进行培养，通常是在37摄氏度下孵育24小时，有时也需要采用其他不同的条件。
4. 观察结果：在培养基上观察是否有大肠杆菌形态和生长特征的典型菌落，如红色菌落、金属光泽等。
5. 进一步确认：对观察到的典型菌落进行进一步的生化和生理测试，如大肠杆菌产气试验、甲烷气生成试验等，以确认是否为大肠杆菌。
传统培养法有着较长的检测时间和较低的检测灵敏度，但由于其成本较低且操作简单，仍然是大肠杆菌检测的常用方法。
另一种常用的大肠杆菌检测方法是分子生物学方法。
相对于传统培养法，分子生物学方法具有更高的检测灵敏度和特异性，且检测速度更快。
以下是一些常用的分子生物学方法：1. PCR扩增法：该方法利用特异性引物和酶的作用，通过对大肠杆菌特定基因（如16S rRNA基因）进行扩增，可以检测到极少量的大肠杆菌DNA。
2. 实时荧光PCR法：该方法是PCR扩增法的改进，可以同时进行扩增和检测，通过实时监测荧光信号的产生来判断样品中是否存在大肠杆菌。
3. 基因芯片技术：这种技术利用微阵列芯片，含有大肠杆菌的特异性探针，可同时检测多个基因和多个大肠杆菌菌株。
大肠杆菌的测定(精)
水中总大肠杆菌的测定来源:加入时间:2010-3-30 12:15:511 原理总大肠杆菌群可用多管发酵法或滤膜法检测。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖,产酸产气以及具备革兰氏染色阴性,无芽孢,呈杆状等有关特性,通过三个步骤进行检验,求得水样中的总大肠菌群数,实验结果以最可能数(most probable number,简称 MPN 表示。
2仪器2.1 高压蒸汽灭菌器。
2.2 恒温培养箱,冰箱。
2.3 生物显微镜,载玻片。
2.4 酒精灯,镍铬丝接种棒。
2.5 培养皿 (直径 100mm ,试管(5×150mm,小倒管,吸管 (1, 5, 10ml ,烧杯 (200, 500, 2000ml , 锥形瓶 (500, 1000ml ,采样瓶。
3 培养基及染色剂的制备3.1 乳糖蛋白胨培养液:将 10g 蛋白胨、 3g 牛肉浸膏、 3g 乳糖和 5g 氯化钠加热溶于 1000mL 蒸馏水中,调节 pH 为 7.2-7.4, 再加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL ,充分混匀,分装于试管(内有倒管中,于 121℃高压灭菌器中灭菌 15min ,贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩蛋白胨溶液:按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法制备。
除蒸馏水外,各组分用量增加至三倍。
3.3 品红亚硫酸钠培养基3.3.1 贮备培养基的制备于 2000mL 烧杯中,先将 20-30g 琼脂加到 900mL 蒸馏水中,加热溶解,然后加入3.5g 磷酸氢二钾及 10g 蛋白胨,混匀,使其溶解,再用蒸馏水补充到 1000mL 调节溶液pH 至 7.2-7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加 10g 乳糖,混匀,定量分装于 250或500mL 锥形瓶内,置于高压灭菌器中,在 121℃灭菌 15min , 贮存与冷暗处备用。
3.3.2 平皿培养基的制备将上法制备的贮备培养基加热融化。
根据锥形瓶内培养基的容量,用灭菌吸管按 1:50比例吸取 5%碱性品红乙醇溶液,置于灭菌空试管中;再按 1:200比例称取无水亚硫酸钠,置于另一灭菌空试管内,加灭菌水少许使其溶解,再置于沸水浴中煮沸10min (灭菌。
中国药典大肠杆菌的检测方法
中国药典大肠杆菌的检测方法中国药典中关于大肠杆菌的检测方法主要包括传统培养方法和分子生物学方法。
下面将分别介绍这两种方法。
一、传统培养方法：1.外源菌培养基法：将待检样品接种于含有选择性培养基的平板上，培养一定时间后观察菌落形态。
通过形态特征、气味、色素等来初步判断是否为大肠杆菌。
常用的选择性培养基有VRB和EMB。
2.确认试验法：通过进行染色试验，如革兰氏染色和断杆试验，来判断菌体形态和结构。
可以进一步采用生化试验，如IMVIC试验（亮甲基绿青试验、分解氯化酪蛋白试验、甲酸氧化试验、酒石酸汞试验）来鉴定大肠杆菌。
3.基于生长特性的检测方法：通过观察大肠杆菌在特定培养条件下的生长特性来确定其存在。
如革兰氏正浓度法、大肠杆菌生长阳性试验法等。
二、分子生物学方法：1. PCR方法：通过引物设计，利用PCR扩增大肠杆菌特异性位点的DNA片段，再通过凝胶电泳检测。
PCR方法准确度高、灵敏度强，能够快速、准确地检测大肠杆菌。
2.实时荧光定量PCR法：利用特定引物和探针，对大肠杆菌特异性序列进行定量扩增，并实时监测荧光信号的增加。
这种方法能够自动化操作，结果可靠。
3.基于32P标记的杂交法：通过将亲和探针与32P标记进行杂交，通过放射性自显影来检测标本中特异结构。
该方法精确度高，但操作复杂。
4.基于质谱技术的检测方法：通过质谱技术检测大肠杆菌的代谢产物，如脂肪酸、糖代谢物等，来判断其存在。
该方法准确度高，且对菌落的生长条件要求不高。
以上是中国药典中常用的大肠杆菌检测方法。
根据实际需要，可选择合适的方法进行检测。
每种方法都有其优缺点，因此在应用时需要综合考虑实验条件、检测要求和经济成本，选择最合适的方法进行检测。
提高大肠杆菌检测的准确度和效率，对于保障药品质量和公共健康具有重要意义。
实验七大肠杆菌检测
目录
CONTENTS
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验总结与注意事项
01 实验目的
了解大肠杆菌的特性
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，通常与人类肠道共生，但在某些情况下也可能引 起食物中毒和肠道感染。
大肠杆菌有多种类型，其中一些类型对人体有害，如肠产毒素大肠杆菌（ETEC）和 肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）。
采集可能含有大肠杆菌的样品， 如食品、水、土壤等。
样品处理
将采集的样品进行稀释、过滤等 处理，以便后续的增菌培养。
增菌培养
01
将处理后的样品接种在含有选择 性培养基的试管中，进行增菌培 养。
02
在适宜的温度下培养一段时间， 使大肠杆菌得以增殖。
分离培养
将增菌培养后的培养基进行划线分离 ，得到单菌落。
大肠杆菌对热敏感，在适宜的温度下容易繁殖，因此是食品卫生检测的重要指标之 一。
学习并掌握大肠杆菌的检测方法
01
02
03
培养法
通过将样品接种到选择性 培养基上培养，观察菌落 形态和生化反应来鉴定大 肠杆菌。
免疫学方法
利用抗体和抗原的特异性 结合，通过免疫学技术检 测样品中的大肠杆菌抗原 或抗体。
分子生物学方法
对于易燃、易爆、有毒 有害的化学品应妥善保 管，避免发生意外事故。
感谢您的观看
THANKS
本实验包括样品采集、增菌培养、分离纯 化、生化鉴定和结果观察等步骤。
实验结果
实验意义
通过本实验，我们成功检测出样品中存在 大肠杆菌污染，并对其进行了分离纯化和 生化鉴定。
本实验对于保障食品安全和水质卫生具有 重要意义，为预防和控制食源性和水源性 疾病提供了科学依据。
大肠杆菌检测方法
大肠杆菌检测方法一：进入无菌室步骤1、进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。
5—1小时。
2、关灯后0•5小时后放可进入。
3、进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套。
二：实验步骤1、进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。
（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）。
2、准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。
3、直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）。
4、再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）。
5、再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）。
6、再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液。
7、更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）8、再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）9、再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀）。
10、把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H ＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）11、梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样。
12、如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。
（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。
所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）。
13、取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14、再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。
（方法见标准）。
大肠菌群的检测方法、仪器使用知识及注意事项
大肠菌群的检测方法、仪器使用知识及注意事项在现代医学领域中，大肠菌群的检测方法和仪器使用知识及注意事项成为了一个备受关注的话题。
大肠菌群是指寄生在人体消化道中的一类微生物群集，它们在人体内发挥着非常重要的作用，包括促进食物消化、合成维生素和抵御有害微生物等。
了解大肠菌群的检测方法以及仪器的使用知识和注意事项，对于维护人体健康具有重要意义。
要确定人体内大肠菌群的状况，通常会采用多种检测方法。
其中最常见的是通过实验室检测人体排泄物中的菌群成分来判断其种类和数量。
这种方法需要采集受检者的粪便样本，并通过特殊的培养基和培养条件来筛选出大肠菌群，再通过显微镜或分子生物学方法来鉴定其种类和数量。
另一种常见的检测方法是通过血清学检测，通过检测受检者血中抗原和抗体水平变化来间接推测大肠菌群的状况。
还有基于DNA 测序技术的高通量测序方法，可以更准确地识别大肠菌群的组成和数量，但是成本较高。
在具体操作时，使用检测大肠菌群的仪器需要特别注意一些事项。
首先是要做好实验室的无菌操作，确保样品不被外界环境中的杂菌污染。
其次是要熟练掌握各种仪器的使用方法，包括显微镜、培养皿和PCR仪等。
在使用时要严格遵守使用说明，避免因误操作导致结果的不准确。
另外，针对不同检测方法，抽取样本的部位和存储条件也有所不同，需要严格按照标准操作规程操作，以保证结果的准确性。
对于大肠菌群的检测方法和仪器使用知识及注意事项，我个人认为，这些知识的掌握对于医学研究和临床诊断具有十分重要的意义。
通过检测大肠菌群的种类和数量，可以更准确地了解人体内微生物群集的状况，为诊断和治疗提供更科学的依据。
仪器的正确使用和注意事项的遵守，可以有效避免误操作带来的不准确结果，保障医学研究和临床诊断的准确性和可靠性。
大肠菌群的检测方法、仪器使用知识及注意事项是一个十分广泛而且复杂的领域，在医学领域有着重要的应用价值。
只有深入了解这些知识，才能更好地发挥它们在医学研究和临床诊断中的作用。
大肠杆菌的检测
2、大肠杆菌的检测一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100 mI.(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
1、设备和材料冰箱:0℃~4℃恒温培养箱:36℃士1℃。
恒温水浴锅:46℃士1℃。
显微镜:10X~100X。
均质器或灭菌乳钵。
架盘药物天平:0 g~500g,精确至0.5 g。
灭菌吸管1mL(具0.01mL刻度)、10 mL.(具0.1mL刻度)。
灭菌锥形瓶:500 mL。
灭菌玻璃珠:直径约5 mn。
灭菌培养皿:直径90 mm。
灭菌试管:16 mmX160 mm。
灭菌刀.剪子.镊子等。
2、培养基和试剂乳糖胆盐发酵管:按GB/T 4789.28一2003 中4.9 规定。
伊红美蓝琼脂平板:按GB/T 4789.28一2003 中4.25 规定。
乳糖发酵管:按GB/T 4789.28- 2003 中4.10 规定。
EC 肉汤:按GB/T 4789.28-2003 中4.11规定。
磷酸盐缓冲液;按GB/T 4789.28一2003 中3.22 规定。
0.85%灭菌生理盐水。
革兰氏染色液:按GB/T 4789.28-2003 中2.2 规定。
3、检验程序大肠菌群检验程序见图1。
4、操作步骤7.1检样稀释7.1.1以无菌操作将检样25 g(mL)放于含有225 mI.灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做战1： 10 的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器,以8000 r/min~10 000 r/min的速度处理1min,做成1: 10的均匀稀释液。
7.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1; 10稀释液1mL,注人含有9 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
大肠杆菌检测方法[整理]
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大肠杆菌检测方法[整理]大肠杆菌是一种常见的肠道菌，在人和动物的肠道内常常存在。
然而，一些大肠杆菌菌株也可以引起人类疾病，如腹泻、细菌性肺炎和尿路感染等。
因此，对于食品、环境以及水源中的大肠杆菌的检测是很重要的。
目前常见的大肠杆菌检测方法包括宏域和微域方法。
下面我们分别介绍一下。
宏域方法：1. MPN法：MPN法（Most Probable Number）是微生物数量统计法中一个比较常用的方法，可以用于测定食品和水中大肠杆菌的数量。
它的原理是根据菌落形成的频率计算出样品中该菌的浓度。
这种方法通常需要更长时间，但其准确性较高。
2. 营养平板计数法：这种方法通过将样品表面原液（如，生牛肉）放置在固体培养基上，让其在37℃下培养24小时，经过染色后可以直接数出菌落，并通过菌落形状和生理生化特征鉴定出大肠杆菌。
这种方法简单，实验室易于操作，但需要更多的时间和更高的技能水平。
3. 膜过滤法：该方法将样品过滤到膜上，紫外线灭菌，然后将膜放置到富含营养成分的固体培养基上进行培养。
这个方法比较适合于检查食品或水样品中的低浓度大肠杆菌，但没有选择感染性的菌株的能力。
1. PCR (聚合酶链式反应)：PCR是一种高效的DNA增幅技术，可用于检测大肠杆菌DNA 的存在。
PCR方法的鉴定出现假阳性的可能性较低，但它不能鉴定出大肠杆菌的活性，仅能检测到细胞核酸。
2. ELISA (酶联免疫吸附法)：ELISA方法是用来检测食品和水中大肠杆菌的方法之一。
试剂盒中含有特定的抗体，它们与大肠杆菌的特定抗原结合。
这种方法速度快，准确率高，但可以只检测某一菌株。
3. 生物传感技术：生物传感技术是利用微生物的活性和生化反应来检测分子的技术。
它的优点是快速，准确，且对细胞造成的伤害较少。
大肠杆菌的测定方法
大肠杆菌的测定方法
致病性大肠杆菌是病原体，它的筛选、鉴定以及测定是病原微生物的重要步骤。
本文将介绍大肠杆菌测定的一般方法，其中包括细菌的培养、鉴定与测定流程。
一、细菌培养
大肠杆菌的培养，首先要选择利于细菌生长的培养基，培养基需要含有必须的养分和活性，具有适宜的pH值，用于维持细菌的生长。
常用的培养基包括牛油硫磺琼脂（MacConkey）、牛油硫磺琼脂（SS agar）、牛油硫磺琼脂棕榈酸（MSA）、牛油硫磺琼脂乳酸（MSL）以及甲氧苄啶琼脂（MMB）等。
培养的大肠杆菌会产生具有细胞膜抗原特性的抗原。
细胞膜抗原可以形成抗原抗体复合物，从而产生免疫反应。
将样本装置在具有合理浓度的抗原抗体复合液中，将有助于调节抗体与抗原的反应，使抗体与抗原之间形成稳定的结合，增强抗体的特异性，同时也可以提高测定的准确性，提高测试的灵敏度。
二、细菌鉴定
通过培养可以初步判断大肠杆菌的类型，但要确定其种类，可以采用血凝试验（血清凝集），该试验可用于识别各种凝集素。
另外，培养过程中产生的生化特性也可以帮助在识别大肠杆菌中发挥作用。
大肠杆菌的检测及原理
大肠杆菌的检测及原理大肠杆菌是一种常见的肠道菌群中的细菌，通常是无害的，但某些毒株可以引起食物中毒和其他健康问题。
因此，检测大肠杆菌在食品和水源中的存在非常重要，以确保公众的健康和安全。
大肠杆菌检测通常通过检测这种细菌的DNA或蛋白质来完成。
这些检测方法可以分为质量检测和定量检测两种方法。
1. 质量检测质量检测是检测大肠杆菌是否存在的一种简单方法。
常用的方法有：(1) 培养法培养法是一种直接检测大肠杆菌存在的方法。
在这个方法中，食品或水样本直接加入含有特定营养成分和染色剂的富营养基质中进行培养。
如果存在大肠杆菌，则可以观察到菌落，并且这些菌落通常呈现出淡粉红色或金属绿色。
(2) 葡萄糖发酵试验这是一种利用大肠杆菌对糖的发酵反应来检测其存在的方法。
在这种测试中，食品或水样本被添加到含有葡萄糖和试剂的培养基中，并在一段时间后观察产生的气体或酸度的变化。
大肠杆菌通常能够迅速发酵葡萄糖，所以如果存在大肠杆菌，则会导致培养基的酸度降低和气泡的产生。
(3) 快速测试条这是一种利用特殊的测试条来检测大肠杆菌存在的方法。
在这种测试中，食品或水样本被加入到测试条上，并观察测试条变色。
这种测试条通常采用专有的化学反应，可以针对大肠杆菌的生长特性进行设计。
(1)酶联免疫吸附测定法(ELISA)ELISA是一种高灵敏度、高特异性的定量检测方法。
这种方法是利用特异性抗体与大肠杆菌中的特定蛋白质结合，再结合酶进行检测，检测结果会显示大肠杆菌的数量。
(2)PCR检测法PCR检测法是一种用来扩增DNA段的方法，可以检测大肠杆菌的存在。
PCR检测法利用针对大肠杆菌特定的DNA序列的反应，通过扩增这些特定的DNA段，来检测大肠杆菌在食品和水源样本中的存在。
总的来说，检测大肠杆菌的存在非常重要，因为它可以导致许多健康问题。
以上列举的方法都有自己的优缺点，需要根据实际情况选择合适的方法进行检测。
大肠杆菌的检验注意事项
大肠杆菌的检验注意事项大肠杆菌是一种存在于人和动物的肠道中的细菌，虽然在正常情况下不会对人体造成危害，但一旦进入食物或饮水中，可能引起食源性疾病。
因此，对大肠杆菌的检验显得十分重要。
以下是大肠杆菌检验注意事项。
1. 检验标本的采集：大肠杆菌的检验通常需要使用粪便和食物等标本进行检测。
在采集粪便标本时，应避免混入尿液，最好在清洁的容器中收集。
而对于食物等标本，需要注意避免污染和保存合适。
2. 仪器与设备的维护：对于进行大肠杆菌检验的仪器和设备，需要定期进行维护和保养，以确保其准确性和可靠性。
在使用前需要对仪器进行校准，并在使用过程中进行质控检验。
3. 检验环境的清洁：在进行大肠杆菌检验时，需要确保检验环境的清洁和卫生。
避免交叉污染，减少误差的发生。
4. 检验人员的培训：进行大肠杆菌检验的人员需要接受专业的培训，掌握操作技能和检验流程，了解常见的检验误差和处理方法。
5. 检验流程的规范：在进行大肠杆菌检验时，需要按照标准的检验流程进行，严格遵守操作规程，确保检验结果的准确性和可靠性。
6. 质控的执行：在进行大肠杆菌检验时，需要执行严格的质控程序，包括使用质控品进行校准和验证，监测每一批检验样本的质量控制结果，以及对异常结果的处理和追踪。
7. 结果的解释：对于大肠杆菌检验结果的解释需要慎重，需要结合临床病史和其他相关检验结果进行综合分析，避免误诊或漏诊的发生。
8. 结果的报告：对于大肠杆菌检验结果的报告，需要确保结果准确、清晰、及时，帮助临床医生进行诊断和治疗决策。
综上所述，对大肠杆菌的检验需要严格遵守操作规程和质控要求，确保检验结果的准确性和可靠性，为临床诊断和治疗提供可靠的支持。
水中大肠杆菌的检测方法(最新知识点)
水中大肠杆菌的检测方法附件水中大肠杆菌群检测方法－多管发酵法ＮIEＡE２01．54B 一、方法概要本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生内生孢子之杆状好氧或兼性厌氧菌,且能在3５± 1 ℃、４8 ± 3小时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（Colｉｆorm groｕｐ）;在不同体积或不同稀释度之水样所产生之结果，以「1０0 mＬ水中最大可能数(MＰＮ/100 mＬ）」表示 1００ mL水中存在之大肠杆菌群数目....感谢聆听...二、适用范围本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样中大肠杆菌群之检验.三、ﻩ干扰（一）水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。
（二)ﻩ检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。
四、ﻩ设备(一) 量筒：100至1000 ｍL之量筒。
（二）吸管:有0.1刻度之10 ｍＬ灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管,或无菌微量吸管（ｍicropｉpet)。
(三）ﻩ试管:大小约１5０×１5 mm之试管或有盖螺旋试管.（四)ﻩ发酵管（feｒmenｔaｔiｏn tuｂe）：大小约２２×9 ｍm之玻璃管。
(五）稀释瓶：容量约１00 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。
（六）锥形瓶:200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品. (七) 采样容器：容量１２0 mＬ以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。
（八）ﻩ冰箱：温度能保持在4 ± 2℃者.(九）天平：待测物重量大于2 g时，须能精秤至0.０1 ｇ；待测物重量不大于2 ｇ时，须能精秤至０．０01 g。
（十) 培养箱：温度能保持在35 ±1℃者。
(十一）ﻩ高压灭菌釜:温度能维持在１２1℃（压力约15 l ｂ/in2或 1．1 Kｇ/cｍ２）灭菌１５分钟以上者。
（十二）高温干热烘箱:如用于玻璃器皿等用具之灭菌，温度须能保持在160℃达2小时或170℃达1小时以上者。
大肠菌群检测知识及MPN法检测的注意要点
大肠菌群检测知识及MPN法检测的注意要点一、大肠菌群的定义：1、指一群在36。
C条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2、该菌群主要来源于人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。
3、大肠菌群不是细菌学上分类命名，而是一组与粪便污染有关的细菌。
这群细菌包括：大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌。
4、生化特征及血清学反应并非完全一致。
5、典型大肠杆菌的IMVIC与硫化氢试验结果：++--。
二.分布：1广泛分布于自然环境。
2、来源于人和温血动物的粪便。
三.卫生学意义：1大肠菌群作为粪便污染的指标菌评价样品中是否受到粪便的污染。
2、大肠菌群计数的高低，直接反映了样品受粪便污染的程度。
3、表示对人体健康是否具有潜在的危险性。
大肠菌群是理想的粪便污染的指标菌4、是人类和温血动物肠道菌群，在数量上占优势。
5、随粪便排出体外后，在外界环境影响下，其存活时间应与肠道致病菌大致相似或稍长。
6、检验方法简便，易于检出与计数。
7、对消毒剂的抵抗力应不低于肠道致病菌。
四、大肠菌群在不同培养基上的形态：1大场菌群在1ST培养基里阳性结果2、大场菌群在BG1B培养基里阳性结果3、大场菌群在结晶紫中性红胆盐琼脂VRBA上的菌落特征4、大场菌群在去氧胆酸钠盐琼脂上的菌落特征5、大场菌群在伊红美蓝琼脂上的菌落特征6、大场菌群在显色培养基上的菌落特征五、大肠菌群检验MPN法接种量剖析：接种量问题，GB4789.3-2016中7.2初发酵试验规定〃选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管1ST肉汤，每管接种Im1（如超过Im1,则用双料1ST）〃。
这里所说的接种量Im1并非Im1样品接种量（即MPN检索表中的Im1样品接种量）,而是接种的稀释液的体积V=Im1（为了区分，本文中用V表示），那么实际的接种量m（为了区分,本文中用m来表示）为mχp（p为稀释液浓度）。
大肠杆菌检测方法
大肠菌群及检验一、大肠菌群介绍大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致,其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因.粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多.大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物,其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外,同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性.大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
二、大肠菌群检验方法：由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。
目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准.两个标准方法在检测程序上略有不同.（一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。
乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。
36±1℃培养48±2h，观察是否产气.分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。
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大肠杆菌的检测
食品微生物检验技术课程综
述
大肠杆菌的检测（MPN计数法）
院系：食品科学与药学学院
班级：食科11４
姓名: 张花
学号：１140３１431
组长：张军玲
成员：张花
赵晶郁
朱娟娟
大肠杆菌Peｔrifilｍ测试片计数法
摘要
食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段，而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一。
根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌.其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致
病菌的可能性。
Pｅtriｆilｍ大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRＢ平板培养基系统,并添加了TTＣ作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用.该方法目前已被多数权威机构认可,并在国内很多实验室开展运用。
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关键词大肠杆菌Ｐetrｉfｉｌm测试法
1设备和材料
1.1恒温培养箱:36±1℃。
1.2冰箱２~5℃。
1．3恒温水浴箱：44。
5±0。
２℃。
1．４天平：感量0．１g.
１．5均质器
1。
6振荡器。
１．7无菌吸管：lｍL(具0。
01 mＬ刻度）、10ｍＬ(具0.1mＬ刻度）或微量移液器及吸头。
1.8无菌锥形瓶：容量500mL.
1.9 玻璃珠：直径约５mm.
1.1０pH计或pH比色管或精密pH试纸
1。
１1试管架。
2。
培养基和试剂
2．1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LＳＴ）肉汤。
２。
２EＣ肉汤。
２．3蛋白胨水。
2．4缓冲葡萄糖蛋白胨水(MP-ＶP实验用）。
2.5磷酸盐缓冲液.
2。
6无菌生理盐水:称取8．５ｇ氯化钠溶于１000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌15mｉn。
2.71mol／L氢氧化钠(NaＯH ）：称取40g 氢氧化钠溶于100０ml蒸馏水中。
2．81mｏl／L 盐酸（HCI ) :移取浓盐酸90ml,用蒸馏水稀释至1０0０mｌ。
3检验程序
4.样品稀释
４。
１固体和半固体样品：以无菌操作将检样２５mＬ样品，置盛有２25ｍL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内（瓶内予置适当数量的玻璃珠，经充分振摇或研磨做成１：10的均匀稀释液.固体检样最好用均质器，以８ 00０—10 ０00 r／min的速度处理1~２min，做成1：10的样品均匀稀释液)。
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4.2液体样品:以无菌吸管吸取样品2５ｍl置盛有２25mＬ磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠）中，充分振摇，制成1：1０的样品匀液.
4.3样品匀液的pH值应在6。
５~７.5之间,必要时分别用１moｌ/Ｌ氢氧化钠（NａOH )或1ｍo ｌ／L 盐酸（HCI )调节.
４．４用1mL灭菌吸管吸取1:1０稀释液1ｍL,沿管壁缓缓注入含有9mL磷酸盐缓冲液的无菌试管内,振摇试管混匀，做成1:1０0的稀释液.
4。
5根据对样品污染状况的估计，按上条操作依次做1０倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
从制备样品匀液至样品接种完毕,全程不得超过15min.
5检验
5.１接种和培养
选取２～3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种两张测试片。
将测试片置于平坦实验台面上，揭开上层膜,用吸管吸取样品匀液1mｌ垂直地价在测试片的中央,将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜直接落下,将压板放置在上层膜中央处，轻轻地压下，是样品匀液覆盖与圆形的培养膜表面，切勿扭转压板。
拿起压板，静置至少1mｉn意识培养基凝固。
将测试片的透明面朝上放于36℃的培养箱内，地跌层数不超过2０片，肉、家禽和水产品,培养时间为２4±２h；其他食品培养时间为４８±2h....感谢聆听...
5.1判读
可肉眼观察计数,或用菌落计数器、放大镜、Ｐetｒｉfilm自动判读仪计数。
蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌,不论蓝色的深浅，部分蓝色的带气泡菌落也判定为大肠杆菌。
圆形培养膜边缘及边缘以外的菌落不计数。
当测试片出现大量气泡、不明显的小菌落,培养区成蓝色时，需要进一步稀释样品匀液,重新检验。
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６大肠杆菌测试片技术的报告
选择菌落数在1５～1５０之间的稀释度,两张
测试片菌落平均乘以稀释倍数，即为每克(或毫升)样品中大肠杆菌数，以CＦU／g(CＦU/mｌ）表示.
如果所有稀释度测试片上的菌落数都小于15，计数最低稀释度测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告;如果所有稀释度测试片上均无菌落生长,以“小于1乘以最低稀释倍数”报告；如果所有稀释度的菌落数都大于150，计数最高稀释度测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
技术菌落数大于150个的测试片，可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数以后乘以20，即为测试片上估算的菌落数（圆形生长面积为20c㎡）。
...感谢聆听...
参考文献
〖1〗中华人民共和国国家标准ＧB/T-4789.３8-2010.
〖2〗食品微生物检验/周建新主编。
北京化工工业出版社，2011．6
〖3〗...谢阅...
〖4〗
〖5〗。