P21基因过表达对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制
c-Myc启动子结合蛋白1与肿瘤
c-Myc启动子结合蛋白1与肿瘤郭三君;谢勇恩【摘要】Human c-Myc promoter binding protein 1 (MBP-1 )is a molecule recently discovered located in cell nucleus.MBP-1 can modulate the expressing of multiple genes related to cell proliferation,apoptosis and tumor.This article summarizes the research progress of thismolecule,including its gene structure,cellular location,down streaming target molecules and its association to tumor.%人 c-Myc 原癌基因启动子结合蛋白1（c-Myc promoter binding protein 1，MBP-1）是新近发现的一个定位于细胞核内的调节分子，能靶向调控多种细胞增殖、凋亡和肿瘤相关基因的表达。
本文归纳和总结了其基因结构、细胞定位、调控的下游靶分子及其与肿瘤发生发展的相关性等方面的研究进展。
【期刊名称】《川北医学院学报》【年(卷),期】2016(031)005【总页数】4页(P773-776)【关键词】c-Myc启动子结合蛋白1;靶分子;肿瘤【作者】郭三君;谢勇恩【作者单位】川北医学院免疫与分子生物学研究所，四川南充 637000;川北医学院免疫与分子生物学研究所，四川南充 637000【正文语种】中文Ray等[1]从人类宫颈癌细胞HeLa细胞cDNA表达文库中克隆出一个新基因，其表达产物能与人类c-Myc原癌基因P2启动子特异性结合，阻止c-Myc的表达，因而将其命名为c-Myc启动子结合蛋白1(c-Myc promoter binding protein 1，MBP-1)。
TM4SF1在甲状腺乳头状癌淋巴结转移中的作用及机制研究演示稿件
研究发现，过表达TM4SF1可以促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖，而抑制TM4SF1的表 达则可以诱导细胞凋亡。
详细描述
通过建立稳定过表达或抑制TM4SF1表达的甲状腺乳头状癌细胞系，进行细胞增殖和凋 亡实验，结果显示过表达TM4SF1可以促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖，而抑制
TM4SF1的表达则可以诱导细胞凋亡。这表明TM4SF1在甲状腺乳头状癌的生长过程中 也发挥重要作用。
TM4SF1作用的机制探讨
总结词
TM4SF1通过多种机制参与甲状腺乳头状癌 淋巴结转移过程，涉及细胞信号转导、细胞 骨架重排和肿瘤微环境等多个方面。
详细描述
研究发现，TM4SF1能够激活EGFR/MAPK 信号通路，促进癌细胞增殖和迁移。同时， TM4SF1还与细胞骨架蛋白相互作用，影响 细胞形态和运动能力。此外，TM4SF1还可 能影响肿瘤微环境中的细胞因子和基质成分 ，促进淋巴结转移。
详细描述
通过建立稳定过表达或抑制TM4SF1表达的甲状腺乳头状癌细胞系，进行细胞迁移和侵袭实验，结果 显示过表达TM4SF1可以促进甲状腺乳头状癌细胞的迁移和侵袭能力，而抑制TM4SF1的表达则可以 抑制其迁移和侵袭能力。这表明TM4SF1在甲状腺乳头状癌的转移过程中发挥重要作用。
TM4SF1对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响
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本研究的局限性和未来研究方向
• 总结词：本研究仍存在一定局限性，如样本量较小、缺乏临床数据验证等。未来研究应进一步探讨TM4SF1在 其他类型甲状腺癌中的表达和作用，以及其在肿瘤免疫和耐药方面的机制。
• 详细描述：首先，本研究仅针对甲状腺乳头状癌进行了研究，未能涵盖其他类型的甲状腺癌。因此，未来研究应进一步探讨TM4SF1在甲状腺癌中的普遍性和差异性。其次，本研究缺 乏临床数据验证，未能将研究成果直接应用于临床实践。未来研究应收集临床样本，对TM4SF1的表达水平与患者预后和治疗反应之间的关系进行深入分析。此外，本研究仅初步探讨 了TM4SF1作用的机制，未来研究应进一步挖掘其在肿瘤免疫和耐药方面的作用机制，为甲状腺癌的治疗提供更多潜在靶点。最后，本研究未能涉及TM4SF1的调控机制，如转录因子、 表观遗传学修饰等。未来研究可从基因表达调控角度深入探讨TM4SF1在甲状腺癌中的表达调控机制。
p21基因作用
p21基因作用P21基因是一种抑制细胞周期进程的关键基因，也被称为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A（Cip1）或骨架蛋白P21（Waf1/Cip1）。
这个基因编码的蛋白质P21是一种蛋白酶抑制剂，可以通过和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）结合以抑制其激酶活性。
在细胞内，CDK与其配体细胞周期蛋白（Cyclin）相结合后形成复合物，促进细胞周期的推进。
P21的出现可以抑制CDK的活性，从而阻断细胞周期的推进，使细胞停留在G1/S和G2/M转换期，保证了DNA修复和细胞凋亡的进行。
P21基因在人体细胞中广泛表达，它的表达受到多种信号的调控。
在细胞受到DNA损伤、细胞失去正常的生长因子刺激、细胞内出现异常增殖等情况下，P21基因会被激活并开始进行转录。
这样一来，P21蛋白就会在细胞核内大量积累，抑制CDK的活性，使细胞周期停滞，为细胞提供更多时间来进行DNA修复。
这是细胞对于DNA损伤的一种保护机制，可以避免受损的DNA进入有问题的细胞周期，从而避免细胞突变和癌变。
除了在DNA损伤修复过程中的重要作用外，P21基因还参与了多种细胞生理过程的调控。
例如，在细胞老化过程中，P21的表达上调可以抑制细胞的增殖，并促进细胞进入细胞凋亡程序。
这对于细胞的寿命和代谢稳定具有重要意义。
此外，研究表明P21还参与了多个信号通路的调节，如细胞凋亡通路、转录调节通路等，与细胞周期密切相关的转录因子和调节因子也有可能与P21相互作用，共同调控细胞的分化和发育。
P21基因作为一个细胞周期调控剂，具有广泛的生物学功能，对于维持细胞的正常功能和机体的健康至关重要。
近年来，关于P21基因的研究越来越受到关注，人们已经发现了许多与其相关的生理和病理学过程，并对其作用机制进行了深入研究。
首先，P21基因在细胞周期的控制中起着至关重要的作用。
正常细胞周期的进行需要严格的调控，细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）是细胞周期进行的重要调控分子。
细胞增殖相关基因的表达变化及其对生长发育的影响
细胞增殖相关基因的表达变化及其对生长发育的影响细胞增殖是人体生长发育、组织修复和癌细胞繁殖的基础。
而生物体内细胞增殖相关基因的表达变化决定了细胞增殖活力的高低和细胞命运的走向。
本文将探讨细胞增殖相关基因的表达变化及其对生长发育的影响。
一、细胞增殖相关基因的表达变化1.增殖相关基因的分类增殖相关基因主要包括促增殖因子（如胰岛素样增生因子1-1、表皮生长因子、神经生长因子等）、细胞周期调控基因（如Cyclin、CDKs等）、转录因子（如MYC、FOS等）和凋亡抑制基因（如BCL-2、Survivin等）等。
2.细胞增殖相关基因的表达变化在胚胎发育和组织修复时，增殖相关基因的表达呈现出高水平，而在成熟组织中则表达水平较低。
此外，体内外环境的改变也会导致增殖相关基因的表达发生变化。
例如，缺氧、营养不良、创伤和感染等外界刺激会刺激增殖相关基因的表达；而DNA损伤、细胞周期的调整和凋亡也会影响增殖相关基因的表达。
二、细胞增殖相关基因对生长发育的影响1.细胞增殖与生长发育细胞增殖与生长发育密切相关。
细胞增殖能够增加组织和器官的细胞数，从而使生命体积增大，细胞的分裂与生长紧密结合。
2.细胞增殖相关基因对生长发育的影响增殖相关基因的表达水平变化对生长发育有着至关重要的影响。
例如，缺氧和营养不良会抑制胰岛素样增生因子1-1的表达，从而影响生长激素的合成，导致生长发育受到抑制。
而MYC基因则是促进细胞增殖的核心转录因子，过高表达可以导致恶性肿瘤的发展；相反，对MYC基因的敲除或抑制会导致胚胎的发育和组织的修复能力下降。
3.细胞增殖在器官特化和功能分化中的作用细胞增殖在生命体的器官特化和功能分化中也扮演着重要的角色。
例如，不同生命阶段心肌细胞增殖能力的差异，导致心肌细胞分化和再生能力的不同。
总之，细胞增殖相关基因的表达变化与生长发育密切相关。
在人体发育、组织修复和癌细胞进展中都起着不可替代的作用。
随着对这些机制的深入研究，相信细胞增殖相关基因调控的神秘面纱也会逐渐揭开。
细胞增殖与凋亡途径及其在肿瘤治疗中的应用
细胞增殖与凋亡途径及其在肿瘤治疗中的应用细胞增殖和凋亡是生物体内最为重要的细胞信号传导途径之一。
它们对于生物的正常发育和组织修复、再生起到至关重要的作用。
而在肿瘤的形成和治疗中，细胞增殖和凋亡也扮演着非常重要的角色。
本文将对细胞增殖和凋亡途径的基本原理进行介绍，并阐述它们在肿瘤治疗中的应用。
一、细胞增殖途径细胞增殖是细胞在分裂周期中不断重复的过程，其分为四个阶段：G1期、S期、G2期以及M期。
在这个过程中，细胞必须依赖于复杂的信号传导途径来保证正常的增殖过程。
其中最为关键的信号通路是细胞周期调控蛋白（CDK）-细胞周期抑制蛋白（CKI）信号通路。
CDK与CKI是相互作用的蛋白，可以控制细胞周期的进程。
在G1到S期间，CDK的活性升高，CKI的表达下降，这时间细胞进入S期。
而在S和G2期间，CDK和CKI的相互作用表明细胞的生长阶段已经完成，而进入M期。
此外，各种外界环境因素（例如DNA损伤）也会影响CDK与CKI的相互作用，归纳为细胞应激信号通路。
现代肿瘤治疗中，细胞增殖途径的调控成为了关键的治疗手段。
例如，一些药物可以通过抑制CDK与CKI的相互作用来诱导细胞的凋亡，从而防止癌细胞增殖。
二、细胞凋亡途径细胞凋亡是由于DNA损伤、外界压力或其他原因引起的一种自我死亡的程序性途径。
细胞凋亡的主要机制包括线粒体途径和死亡受体途径。
线粒体途径主要是由于线粒体膜受到损伤，导致线粒体内部的细胞色素c溢出，从而触发细胞凋亡。
而死亡受体途径则是由于外界信号分子与细胞表面的受体结合，从而引起一连串的细胞内磷酸化反应，并最终导致细胞凋亡。
肿瘤细胞与正常细胞有一个重要的区别，就是其凋亡途径被失调了。
一般来说，肿瘤细胞会通过多种机制来逃避凋亡，使得它们无法被细胞凋亡途径所消灭。
因此，目前肿瘤治疗中，研究细胞凋亡途径的调控成为一个热门的领域。
三、细胞增殖与凋亡在肿瘤治疗中的应用在肿瘤治疗中，许多药物都是设计用来干扰细胞增殖和凋亡的途径，从而达到杀死癌细胞的目的。
肿瘤细胞中的过表达酶-概述说明以及解释
肿瘤细胞中的过表达酶-概述说明以及解释1. 引言1.1 概述概述肿瘤是一种异常增生的细胞群体，其发展和生长受到多个因素的调控。
过表达酶是一类在肿瘤细胞中异常高表达的酶，它们在肿瘤细胞的生长、分裂、侵袭和转移过程中起着重要的调控作用。
本文将对肿瘤细胞中过表达酶的定义、功能及其在肿瘤发展中的重要性进行详细探讨。
过表达酶是指在肿瘤细胞中表达水平异常增加的酶，与正常细胞相比，其活性和表达量明显增加。
这些过表达酶可以包括代谢酶、修复酶、信号传导酶等不同类型的酶，它们在细胞内参与了多个关键的代谢和调控过程。
由于过表达酶在肿瘤细胞中的异常高表达，其功能与调控作用也具有不同于正常细胞的特点。
肿瘤细胞中的过表达酶在肿瘤发展中起着重要的调控作用。
首先，它们参与了肿瘤细胞的增殖和生长过程。
某些过表达酶能够促进细胞周期的进程，使肿瘤细胞能够不受限地增殖，从而导致肿瘤的快速生长。
其次，过表达酶还参与了肿瘤细胞的侵袭和转移过程。
这些酶能够分解细胞外基质，促进肿瘤细胞的侵袭和转移，增加肿瘤的侵袭性和转移能力。
此外，过表达酶还与肿瘤细胞的耐药性和免疫逃逸等现象密切相关。
本文将在接下来的章节中详细探讨肿瘤细胞中过表达酶的相关知识。
首先，我们将对肿瘤细胞中过表达酶的定义和功能进行介绍，以便更好地理解它们在肿瘤发展中的作用。
接着，本文将重点讨论过表达酶在肿瘤细胞中的重要性，包括其在肿瘤细胞增殖、侵袭、转移以及治疗抗性中的作用。
最后，我们将总结本文的主要内容，并探讨过表达酶对肿瘤治疗的意义，希望通过对这一领域的研究，能够为肿瘤治疗提供新的思路和方法。
文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章结构部分旨在介绍整篇文章的组织结构，以帮助读者了解文章的脉络和内容安排。
本文按照以下结构展开讲述肿瘤细胞中的过表达酶的相关问题。
第一部分是引言部分，旨在引入文章的主题并给出整体的背景和目的。
引言部分包括三个方面的内容。
1.1 概述：在概述部分，我们将简要介绍肿瘤细胞和酶的基本概念，以及肿瘤细胞中过表达酶的现象。
AP-1与肿瘤、自身免疫性疾病、哮喘、肾脏疾病关系的研究进展
AP-1与肿瘤、自身免疫性疾病、哮喘、肾脏疾病关系的研究进展史珑，王向华，杨达胜（新乡医学院第一附属医院，河南新乡453100）摘要：激活蛋白1（AP-1）是机体内一种重要的转录因子。
近年来研究表明，AP-1活性失调与肿瘤、哮喘、自身免疫性疾病、肾脏疾病等多种疾病的发生、发展有关。
AP-1在前列腺癌、甲状腺癌、子宫内膜癌、胃癌等肿瘤中表达失调，其表达失调可导致肿瘤进展，且与预后相关。
AP-1在自身免疫性疾病如类风湿关节炎中过表达，而在系统性红斑狼疮患者中AP-1的表达降低。
AP-1高表达参与了支气管哮喘的发病，且与糖皮质激素抵抗有关。
AP-1可调节糖尿病肾病发生发展中起重要作用的基因的表达，还可介导糖尿病肾病标志蛋白纤连蛋白的合成。
另外，AP-1表达升高还与肾病综合征的发病有关。
关键词：激活蛋白1；肿瘤；自身免疫性疾病；哮喘；肾脏疾病doi ：10．3969/j．issn．1002-266X．2019．20．027中图分类号：Ｒ364文献标志码：A文章编号：1002-266X （2019）20-0093-04通信作者：杨达胜（E-mail ：yds0811@126．com ）激活蛋白（AP-1）是一种碱性亮氨酸拉链蛋白［1］，由Jun （c-Jun 、Jun-B 、Jun-D ）、Fos （c-Fos 、Fos-B 、Fra-1、Fra-2）、ATF （ATF2、ATF3、LＲF1、B-ATF 、JDP1、JDP2）和MAF （C-Maf 、MafB 、MafA 、Maf ）蛋白家族形成的同源或异源二聚体［2］。
AP-1家族中研究最多和最主要的是Jun 和Fos 蛋白家族。
AP-1是调节细胞增殖、分化和凋亡的关键转录因子［3］，作为基因转录启动的分子开关，AP-1信号转导通路可被细胞张力变化、电离作用、DNA 损伤、氧化应激、紫外线照射、细菌及病毒感染等刺激激活，活化的AP-1与TPA 反应元件（TＲE ）结合，促进多种炎症因子（如IL-2、IL-8、TNF-α、TGF-β1、IFN-γ等）的表达，进而影响细胞的生理功能、参与某些疾病的发生。
基因表达调控及其对细胞功能的影响
基因表达调控及其对细胞功能的影响基因表达调控是指细胞内部的一系列机制和过程，通过调控基因的转录和翻译过程，使得特定的基因在特定的时间和空间上表达出来。
这种调控机制对于细胞的功能和生物体的发育起着至关重要的作用。
本文将探讨基因表达调控的几种机制以及它们对细胞功能的影响。
1. 转录调控转录调控是指通过调控基因的转录过程来影响基因表达。
细胞内存在着多种转录因子和调控因子，它们可以结合到基因的启动子区域上，促进或抑制转录的进行。
这些调控因子可以响应环境信号或细胞内的信号通路，从而调节基因的表达水平。
例如，一些转录因子在细胞受到外界刺激时会被激活，进而启动特定基因的转录，从而调控细胞的生理反应。
2. 翻译调控翻译调控是指通过调控基因的翻译过程来影响基因表达。
在转录后，mRNA需要经过翻译过程才能产生蛋白质。
细胞内存在着多种调控因子，它们可以结合到mRNA上，促进或抑制翻译的进行。
这些调控因子可以调节翻译的速率和准确性，从而影响细胞内特定蛋白质的表达水平。
例如，一些调控因子可以选择性地促进特定mRNA的翻译，从而调控细胞的代谢和增殖。
3. 修饰调控修饰调控是指通过化学修饰基因组和蛋白质分子来影响基因表达。
细胞内存在着多种修饰酶和修饰酶，它们可以在DNA和蛋白质上添加或去除化学修饰基团。
这些化学修饰可以改变基因组的结构和染色质的状态，从而影响基因的可及性和表达水平。
例如，DNA甲基化是一种常见的修饰方式，它可以静默基因的表达，从而影响细胞的分化和发育。
基因表达调控对细胞功能的影响是多方面的。
首先，它可以使细胞在不同的环境和发育阶段中表达不同的基因，从而实现细胞的多样化和分化。
例如，在胚胎发育过程中，基因表达调控可以使细胞逐渐分化为不同的器官和组织。
其次，基因表达调控可以使细胞对外界刺激做出快速和准确的反应。
例如，当细胞受到外界刺激时，特定的基因会被启动，从而调控细胞的生理反应，如细胞凋亡和免疫应答。
此外，基因表达调控还可以影响细胞的代谢和增殖。
p21活化激酶在乳腺癌中的作用研究
p21活化激酶在乳腺癌中的作用研究
p21活化激酶是一种酪氨酸激酶，广泛存在于多种细胞类型中，参与细胞周期调控、细胞增殖和凋亡等生物学过程。
研究表明，p21活化激酶在乳腺癌的发生和发展中发挥着重要作用。
p21活化激酶在乳腺癌细胞中的表达水平通常显著增加，与肿瘤的浸润、转移和预后密切相关。
p21活化激酶通过调控细胞周期蛋白的磷酸化水平，影响乳腺癌细胞的增殖和凋亡，促进肿瘤的生长和转移。
p21活化激酶还可以与其他信号通路相互作用，调节乳腺癌细胞的代谢、转移和耐药性。
p21活化激酶在乳腺癌中的作用是多方面的，具有重要的生物学意义。
针对p21活化激酶在乳腺癌中的作用，研究人员进行了大量的实验研究。
他们发现，通过抑制p21活化激酶在乳腺癌细胞中的表达或活性，可以显著抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
p21活化激酶的过表达或激活会导致乳腺癌细胞的增殖和凋亡抑制，加速肿瘤的发展和转移。
这些实验结果进一步证实了p21活化激酶在乳腺癌中的重要作用，为深入研究该激酶的抑制剂和激活剂提供了重要的理论基础。
p21活化激酶在乳腺癌中的作用是显而易见的。
它通过调控细胞周期、细胞增殖和凋亡等生物学过程，影响乳腺癌的发展和进展。
深入研究p21活化激酶在乳腺癌中的作用，对于揭示乳腺癌的发病机制、发展新的治疗策略具有重要的意义。
未来，我们需要进一步明确p21活化激酶的作用机制，发现更多与其相互作用的分子和信号通路，并探索相关的治疗靶点和药物，为乳腺癌的治疗提供新的思路和策略。
我们相信，在不久的将来，p21活化激酶将成为乳腺癌治疗的重要靶点，为乳腺癌患者带来新的希望和机遇。
下调 p21活化蛋白激酶2表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
下调 p21活化蛋白激酶2表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响李翔;张晓艳;赵继敏;刘康栋;赵明耀;董子明【摘要】AIM:To study the effect of p21-activated protein kinase 2 (PAK2) knockdown by RNA interfer-ence on the proliferation and apoptosis of human breast cancer cells .METHODS:The short hairpin RNA ( shRNA) targe-ting PAK2 gene was designed and used for packing lentivirus in 293T cells.Human breast cancer MCF-7 cells were infected by the virus particles and PAK2 knockdown stable cell line was established by puromycin selection .The knockdown effi-ciency was assessed by Western blotting .The proliferation ability of MCF-7 cells was evaluated by CellTiter 96 AQueous and anchorage-independent growth assays .The cell apoptosis induced by staurosporine was detected by flow cytometry . RESULTS:The protein level of PAK2 was significantly suppressed after silencing of PAK2 gene in MCF-7 cells ( P<0.01).Furthermore, knockdown of PAK2 caused remarkable inhibition of the cell proliferation and colony formation (P<0.01).Staurosporine induced more apoptosis in the PAK2 knockdown cells compared with the control cells (P<0.01). CONCLUSION:Knockdown of PAK2 inhibits the proliferation of MCF-7 cells and increases the sensitivity of chemothera-peutic drug-induced cell apoptosis , suggesting that PAK2 might be a new therapeutic target in breast cancer treatment .%目的：应用RNA干扰技术下调人乳腺癌MCF-7细胞中p21活化蛋白激酶2（ PAK2）的表达，观察其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。
五种癌基因蛋白产物在甲状腺癌中的表达及意义
・论著・五种癌基因蛋白产物在甲状腺癌中的表达及意义陈天星 罗尧生 杨正中 刘伟 张会华作者单位:650032,昆明市,云南省第一人民医院病理科 【摘要】 目的 探讨甲状腺癌癌变的机制。
方法 应用免疫组化S 2P 法于石蜡切片对43例甲状腺癌、17例腺瘤、19例瘤旁甲状腺组织进行了c 2erbB 22、p53、Bcl 22、c 2myc 、p16癌基因产物的检测。
结果 癌组织中均有不同程度1种或1种以上基因产物表达与腺瘤及瘤旁组组间差异均非常显著(P <0.01)。
c 2erbB 22表达随癌组织分化程度增高而增高。
p53表达随癌组织分化程度增高而减少,与c 2erbB 22间呈负相关(P <0.05)。
在淋巴结转移病例中c 2erbB 22阳性率增高明显(P <0.05)。
结论 5种癌基因均分别参与了甲状腺癌的发生发展过程,癌变的发生可由多种基因相互作用所致。
c 2erbB 22可能在甲状腺乳头状癌的癌变中起重要作用。
癌基因产物检测尤其是同时检测c 2erbB 22、p53为甲状腺癌的临床病理诊断及估计预后提供了参考指标。
【关键词】 甲状腺癌;癌基因蛋白产物;免疫组织化学Expression of 5Oncogene proteins and its significance in thyroid carcinom a CHEN Tianxing ,LUO Yiaosheng ,Y ANG Zhengzhong ,et al 1Pathology Department ,The Frist Hospital o f Yunnan Province ,Kunming 650032,China【Abstract 】 Objective T o study the carcinogenesis.Methods c 2erbB 22,p53、Bcl 2,c 2myc and p16in 43cases of thyroid carcinoma ,17cases of adenoma and 19cases of adjacent normal tissues of thyroid tum or were exam 2ined in the form of paraffin sections using the method of immunohistochemistry S 2P.R esults In carcinoma tissuse there was one or m ore than one kind of expression of genes which had highly striking difference to adenoma and normal tissues (P <0.01).The espression of c 2erbB 22was increased with increasing degree of differentiation of the carcino 2ma.The expression of p53was decreased with the increasing degree of differentiation.A significant inverse correlation was found between p53and c 2erbB 22(P <0.05),The positive rate of c 2erbB 22was obviously higher in the cases of lymphaden translation (P <0.05).Conclusions The result suggested that five oncogene proteins were inv olved in the occurrence and development of thyroid carcinoma.The occurrence of thyroid carcinoma may result from the inter 2action of s ome oncogenes.c 2erbB 22may play an important role in papillary carcinoma.Oncogene proteins were as 2sayed ,esp.c 2erbB 22and p53were examined at the same time ,to provide clinical pathological diagnosis ,gence treat 2ment and prognosis of thyroid carcinoma with reference indexes.【K ey w ords 】 thyroid carcinoma ;oncogene protein ;immunohistochemistry 目前认为癌基因分为三大类:第一类为促癌细胞生长基因,第二类为抑癌基因,第三类为细胞凋亡的调控基因。
p21基因作用范文
p21基因作用范文p21基因是一种调控细胞周期的关键基因，它的主要作用是通过抑制细胞周期进展来维持基因组的稳定性，并参与细胞增殖、凋亡、衰老和肿瘤发生等多种生理过程。
本文将详细介绍p21基因的作用机制以及其在细胞周期调控、DNA损伤修复和细胞去氧核糖核酸体的功能中扮演的角色。
在细胞周期调控中，p21基因主要通过抑制细胞周期进展来维持细胞的稳定性。
细胞周期是细胞从分裂到再次分裂的过程，分为G1、S、G2和M四个阶段。
p21基因在细胞周期的G1期和S期起到抑制作用。
在G1期，p21基因通过调控细胞周期调节蛋白，如细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）和细胞周期蛋白（cyclins），以抑制细胞周期进展。
在S期，p21基因则通过抑制DNA合成酶的活性，限制DNA合成的进行，从而延长DNA复制时间。
这些调控机制使得细胞可以确保在DNA损伤修复完成之前不进入下一个细胞周期阶段，保证了基因组的稳定性。
此外，p21基因还参与了细胞凋亡和衰老过程。
细胞凋亡是细胞主动死亡的一种方式，对于维持机体内细胞数量的稳定和身体发育具有重要作用。
p21基因在细胞凋亡中发挥抑制作用，通过阻断细胞周期进展和抑制抗凋亡因子，促进细胞凋亡的发生。
另外，p21基因在细胞衰老中也发挥关键作用。
细胞衰老是机体衰老的一个重要原因，p21基因在细胞衰老过程中通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡来延缓细胞衰老。
此外，p21基因还与肿瘤发生密切相关。
肿瘤是由于细胞的DNA损伤修复机制紊乱或基因突变引起的异常细胞增殖。
p21基因作为一个重要的肿瘤抑制基因，在肿瘤的抑制中发挥重要作用。
研究发现，p21基因的过表达可以通过抑制细胞周期进展、促进细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的侵袭和转移，对多种肿瘤具有抑制作用。
此外，p21缺失或突变也被发现与多种肿瘤的发生和发展密切相关，表明p21基因的异常表达可能是肿瘤发生的一种重要机制。
在DNA损伤修复中，p21基因也发挥重要作用。
DNA是细胞遗传信息的载体，容易受到内源和外源损伤因素的影响。
PIWI相互作用RNA017724在肝细胞癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响
[文章编号]1006-2440(2023)03-0235-07[引文格式]吴依靖,王婕,王浩,等.PI W I相互作用R N A 017724在肝细胞癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响[J ].交通医学,2023,37(3):235-241.*[基金项目]南通市科技计划项目(J CZ2022036);第五批全国优秀中医临床人才研修项目。
**[作者简介]吴依靖,女,汉族,江苏苏州人,生于1995年10月,硕士,住院医师。
研究方向:消化系统疾病。
通信作者:王峰,E-m ai l :r i char d -wangf @PI W I相互作用R N A 017724在肝细胞癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响*吴依靖1,2**,王婕1,2,王浩1,2,陈琳2,王慧璇2,居林玲2,袁柳霞2,李民2,王峰3(1南通大学医学院,江苏226001;2南通大学附属南通第三医院/南通市第三人民医院肝病研究所;3南通大学附属医院检验科)[摘要]目的:分析PI W I相互作用R N A 017724在肝细胞癌组织、人肝癌细胞系中的表达及其对细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。
方法:采用实时定量PCR (r eal -t i m e quant i t at i ve PCR ,R T-qPCR )检测肝细胞癌组织和肝癌细胞系中PI W I相互作用R N A 017724的表达水平。
将PI W I相互作用R N A 017724模拟物和抑制剂转染SM M C-7721和PLC/PR F/5细胞,采用CCK -8法和细胞集落形成实验检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Tr answel l 实验检测各组细胞迁移和侵袭能力。
结果:肝癌组织中PI W I相互作用R N A 017724表达水平显著低于匹配的相邻正常肝组织,差异有统计学意义(P <0.05);PI W I相互作用R N A 017724低表达患者的生存期较短。
MEK通路抑制剂对人胰腺癌细胞生长及细胞周期相关抑癌基因表达
MEK通路抑制剂对人胰腺癌细胞生长及细胞周期相关抑癌基因表达【摘要】本研究探讨了MEK通路抑制剂对人胰腺癌细胞生长及细胞周期相关抑癌基因表达的影响。
首先介绍了MEK通路在癌症发生发展中的重要性，以及MEK通路抑制剂的作用机制。
接着实验结果显示，MEK通路抑制剂对人胰腺癌细胞生长具有显著的抑制作用，并且影响了细胞周期及抑癌基因表达水平。
最终的结论是，MEK通路抑制剂可能成为人胰腺癌治疗的潜在药物，并提出了未来研究方向和意义和启示。
本研究为探索新的胰腺癌治疗策略提供了重要参考。
【关键词】MEK通路, 胰腺癌, 细胞生长, 细胞周期, 抑癌基因, 抑制剂, 治疗, 实验方法, 结果分析, 研究方向, 意义, 启示1. 引言1.1 背景介绍胰腺癌是常见的恶性肿瘤之一，预后极其不良，其发病率逐年上升，对人类生命健康造成严重威胁。
目前，手术切除仍是治疗胰腺癌的首选方法，但大多数患者在确诊时已处于晚期，失去手术切除的机会，化疗、放疗等治疗手段效果不理想。
MEK通路是一个重要的信号传导途径，参与了细胞生长、增殖、存活等多种生理功能的调控。
近年来，研究发现MEK通路在多种癌症中异常活化，包括胰腺癌。
抑制MEK通路成为了治疗癌症的一个研究热点。
各种MEK通路抑制剂被开发出来，并在临床试验中取得了一定的进展，但其具体机制以及在人胰腺癌中的作用尚不完全清楚。
本研究旨在探究MEK通路抑制剂对人胰腺癌细胞生长及细胞周期相关抑癌基因表达的影响，为开发新型的胰腺癌治疗药物提供理论依据。
通过深入探讨MEK通路在癌症发生发展中的作用机制，可以为临床治疗提供新的思路和方向。
1.2 研究目的本研究旨在探究MEK通路抑制剂对人胰腺癌细胞生长及细胞周期相关抑癌基因表达的影响。
通过实验方法和结果分析，我们将以科学的手段验证MEK通路抑制剂能够抑制人胰腺癌细胞的生长，并探讨其对细胞周期及抑癌基因表达的调控作用。
通过本研究的开展，我们希望为胰腺癌的治疗提供新的方向，同时为深入理解MEK通路在胰腺癌发展中的作用机制提供有力的实验依据。
microRNA在甲状腺癌中的研究进展
microRNA在甲状腺癌中的研究进展甲状腺癌是近年来发病率显著增加的一种癌症，其发病机制十分复杂。
随着分子生物学和基因组学领域的不断发展，越来越多的研究发现，microRNA（miRNA）在甲状腺癌中的作用受到广泛关注。
miRNA是一类长约22个核苷酸的小分子RNA，能够通过与mRNA结合调控基因表达，从而影响细胞增殖、凋亡、转移等生物学过程。
本文将对目前miRNA在甲状腺癌中的研究进展进行综述。
miRNA对甲状腺癌分子亚型的识别和分类起到了关键作用。
一项研究发现，在不同的甲状腺癌亚型中，miRNA的表达模式存在显著差异。
例如，Papillary thyroid carcinoma （PTC）瘤组织中miRNA-146b-5p和miRNA-221的表达显著上调，而miRNA-375、miRNA-148b 和miRNA-10a的表达则显著下调。
miRNA-222在Follicular thyroid carcinoma（FTC）中表达显著上调，而miRNA-148a、miRNA-542-3p和miRNA-29c的表达则下调。
另外，miRNA-34a和miRNA-181a在各种甲状腺癌亚型中也表现出不同的表达模式。
这些miRNA的表达改变对PTC和FTC的分类有一定帮助。
miRNA对甲状腺癌的发生发展起到了重要的调控作用。
miRNA通过抑制或促进靶基因的表达发挥作用，从而影响甲状腺癌的细胞增殖、侵袭和转移。
例如，miRNA-222和miRNA-221能够通过调控p27Kip1的表达促进PTC的增殖和侵袭。
另外，miRNA-146b-5p也是PTC组织中高表达的miRNA之一，其能够通过抑制SMAD4表达增强TGF-β信号通路，从而促进PTC的侵入和血管生成。
miRNA-138和miRNA-139通过抑制Bmi-1和 HMGA2等基因表达，抑制FTC和ATC的增殖和侵袭。
miRNA-29a通过抑制MCL1和CDK6等基因表达，从而促进ATC细胞凋亡和抑制其增殖。
p21基因与哺乳动物器官再生相关性研究进展
p21基因与哺乳动物器官再生相关性研究进展郭倩倩;王大涛;褚文辉;赵海平;孙红梅;李春义【摘要】自然界中很多低等无脊椎动物及有尾目两栖动物都存在组织或附属器官再生现象,而哺乳动物中这种能力却是少见的.近年来随着具有器官再生能力的MRL 试验小鼠的发现,越来越多的试验证实哺乳动物也具有器官再生能力,这为临床上的损伤修复和肢体再生带来了新希望.组织、器官的再生离不开细胞增殖,细胞增殖离不开细胞周期,p21蛋白作为细胞周期的重要调控因子,在最新研究中发现,普通试验小鼠敲除p21基因后具有了同MRL试验小鼠一样的器官再生能力,确定了p21蛋白与再生有着密切联系.文章对p21基因与哺乳动物再生的关系作一综述.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2014(041)005【总页数】6页(P171-176)【关键词】再生;p21基因;哺乳动物;MRL【作者】郭倩倩;王大涛;褚文辉;赵海平;孙红梅;李春义【作者单位】江苏科技大学,江苏镇江212018;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学国家重点实验室,吉林长春 130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学国家重点实验室,吉林长春 130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学国家重点实验室,吉林长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学国家重点实验室,吉林长春 130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学国家重点实验室,吉林长春 130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学国家重点实验室,吉林长春 130112【正文语种】中文【中图分类】Q78许多生物体都具有器官再生能力，这种能力在低等无脊椎动物中很常见，如水螅、海绵及涡虫等，它们均可由身体的一小部分而再生出整个身体。
在脊椎动物中最典型的再生模型是有尾目两栖类蝾螈附肢的再生，对低等脊椎动物再生机制的研究已越来越深入，相对而言，对于哺乳动物再生的研究却举步维艰，这主要是因为哺乳动物器官再生能力在自然界中少见。
人源JAZF1基因真核表达载体的构建及其对胚胎癌细胞凋亡的影响
人源JAZF1基因真核表达载体的构建及其对胚胎癌细胞凋亡的影响陈倩，李超，杨诚诚，母彬，龚欢，黄超*（四川农业大学动物医学院，实验动物疾病模型研究室，成都611130）摘要:【目的】构建人源转录因子锌指并列基因1（JAZF1）真核表达载体，并探究过表达JAZF1对胚胎癌细胞存活的影响。
【方法】以胚胎癌细胞NCCIT 的cDNA 为模板扩增JAZF1基因片段，并将其与pRK5-myc 载体连接，构建重组质粒，转染至NCCIT 细胞；通过实时荧光定量PCR 和DAPI 染色法分别检测过表达JAZF1对NCCIT 细胞中炎性因子IL1-β、IL8、TGF-β转录水平的影响及对NCCIT 细胞存活的影响。
【结果】过表达JAZF1基因后，促炎因子IL1-β（P <0.05）、IL8（P <0.01）转录水平明显下降，而抑炎因子TGF-β的mRNA 表达水平无明显变化（P >0.05），同时NCCIT 细胞出现更明显的细胞凋亡（P <0.01）。
【结论】JAZF1可能通过抑制促炎因子IL1-β和IL8的表达来抑制炎症发展，进而抑制畸胎瘤进展。
关键词:锌指并列基因1；胚胎癌；炎性因子；细胞凋亡中图分类号:Q78文献标志码:Ａ文章编号:1000-2650（2021）01-0108-06Construction of Eukaryotic Expression Vector of Human Juxtaposedwith Another Zincfinger Gene 1and Its Influence on EmbryonalCarcinoma Cell ApoptosisCHEN Qian ，LI Chao ，YANG Chengcheng ，MU Bin ，GONG Huan ，HUANG Chao *（College of Veterinary Medicine ，Sichuan Agricultural University ，Chengdu 611130，China ）Abstract:【Objective 】The eukaryotic expression vector of human juxtaposed with another zincfinger gene1(JAZF1)was constructedto explore the effect of JAZF1on embryonal carcinoma cell survival.【Method 】The JAZF1gene fragment was amplified using the cDNA of embryonic cancer cell NCCIT as a template ，and wascloned into pRK5-myc vector to construct a recombinant plasmid.The recombinant plasmid wastransfected into NCCIT cells ，while the cell viability and the expression of transcription factorIL1-β，IL8and TGF-βwere following evaluated by DAPI staining and quantitative real-time PCR ，respectively.【Result 】Transfected with JAZF1，the transcriptional levels of proinflammatory factor IL1-βand IL8in NCCIT cells showed a significant suppression ，while enhanced expression of antiinflammatory factor T GF-茁was observed.Meanwhile ，we found increased cellularapoptosis in JAZF1-transfected NCCITcells.【Conclusion 】JAZF1may suppressinflammation by inhibiting the expression of IL1-βand IL8，and then inhibit the progressionofembryonic cancer.Keywords:human juxtaposed with another zinc finger gene 1(JZAF1)；embryonal carcinoma ；inflammat-oryfactor ；apoptosis第39卷第1期2021年2月收稿日期:2020-07-25基金项目:四川农业大学学科建设双支计划（2018-2019）。
GINS的作用及其在肿瘤中的表达和预后意义的研究进展
・326・医学临床研究2021年3月第38卷第3期J Clin Res,Mar.2O21,Vol38,M3•综述与讲座•GINS的作用及其在肿瘤中的表达和预后意义的研究进展，陈子源王万春…董一鹤吴桐(中南大学湘雅二医院骨科，湖南长沙410011)［关键词］DNA,肿瘤/遗传学；肿瘤/遗传学；肿瘤/病理生理学；综述［中图分类号］R730.23［文献标识码］C［doi：10.3969/j.issn,1671-7171.2021.03.002lX章编号］1671-7171(2021)03-0326-05真核生物中染色体DNA复制的起始是•个被高度调控的过程，所有细胞的染色体DNA复制都需要大量必需和非必需的蛋白质在空间和时间上协调的复杂相互作用GINS(go,ichi,ni,san)作为CMG(CDC45,MCM2-7,GINS)复合物的一部分，是真核生物DNA复制机制中的重要环节，参与了真核生物DNA复制的过程，并通过不同途径在其中发挥作用，对于染色体复制的起始和DNA复制的正常进行都是必需的比。
而GINS基因家族也在众多肿瘤中被发现高表达，并且促进肿瘤的发生及发展，且被发现为很多肿瘤的独立预后因素，并为一些肿瘤的治疗提供了新的靶点。
现就GINS的作用及其在肿瘤中的表达和预后意义综述如下。
1GINS的结构1.1总体结构GINS是由4条多肽链(Sld5, Psfl.Psf2,Psf3)组成的100kDa复合物，这四条多肽链分别由GINS基因家族的四个成员(GINS1. GINS2,GINS3,GINS4)编码。
四个亚单位组成一个类似于梯形的结构，Sld5和Psfl异二聚体作为结构的顶层,Psf2和Psf3形成底层,Sld5和Psf2几乎沿轴线排列，在一个水平界面。
Psfl和Psf3也近乎于相同的方向，SId5和Psf3之间、Psfl和Psf2之间则处于对角线位置，接触较少。
四个亚基中间为一强酸性空腔，但这空腔可能是锥形的，在底部关闭⑷。
211108259_十八碳二烯酸对神经胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响及其机制
十八碳二烯酸对神经胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响及其机制谢明仁１，何天晓１，袁 霞１，张 瞡２，俞 蕾１，俞发荣１△（１．甘肃政法大学公安分院，兰州７３００７０；２．甘肃省疾病预防控制中心，兰州７３００００）【摘要】 目的：探索十八碳二烯酸（ＯＤＡ）抑制神经胶质瘤细胞增殖与促凋亡作用及其机制。
方法：取培养的人神经胶质瘤细胞（细胞密度２×１０６ｃｅｌｌｓ／Ｌ）分为溶剂对照组（给予ＤＭＳＯ，含量为３０μｌ／Ｌ）、５ ＦＵ组（含量１０ｍｇ／Ｌ）和十八碳二烯酸组（设０．３、０．６、１．２ｍｇ／Ｌ三个剂量组）。
用台盼蓝、噻唑蓝（ＭＴＴ）检测ＯＤＡ对神经胶质瘤细胞的毒性作用，用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测神经胶质瘤细胞Ｐ５３、ＰＩ３Ｋ、Ｐ２１、ＰＫＢ／Ａｋｔ、ｃａｓｐａｓｅ ９蛋白表达水平。
结果：①光学显微镜细胞计数显示：ＯＤＡ低、中、高剂量组和５ ＦＵ组细胞增殖抑制率比溶剂对照组显著升高（Ｐ＜０．０１），与５ ＦＵ组相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。
②ＭＴＴ检测结果显示：与溶剂对照组相比，ＯＤＡ低、中、高剂量组和５ ＦＵ组细胞增殖抑制率显著升高（Ｐ＜０．０１）；与５ ＦＵ组相比，仅ＯＤＡ高剂量组细胞增殖抑制率显著增加（Ｐ＜０．０１）。
③流式细胞仪检测结果显示：与溶剂对照组相比，ＯＤＡ低、中、高剂量组和５ ＦＵ组Ｇ０／Ｇ１期细胞数显著增加（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），Ｇ２／Ｍ期细胞数显著减少（Ｐ＜０．０１），细胞凋亡率显著增加（Ｐ＜０．０１）；与５ ＦＵ组相比，仅ＯＤＡ高剂量组Ｇ２／Ｍ期细胞数显著减少（Ｐ＜０．０１），凋亡率显著增加（Ｐ＜０．０１）。
④ＥＬＩＳＡ检测结果显示：ＯＤＡ低、中、高剂量组和５ ＦＵ组Ｐ５３、Ｐ１３Ｋ、ＰＫＢ／Ａｋｔ蛋白表达水平比溶剂对照组均显著降低（均Ｐ＜０．０１），仅ＯＤＡ高剂量组蛋白表达水平均显著低于５ＦＵ组（Ｐ＜０．０１）；ＯＤＡ低、中、高剂量组和５ ＦＵ组Ｐ２１、ｃａｓｐａｓｅ ９蛋白表达水平明显高于溶剂对照组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），仅ＯＤＡ高剂量组蛋白表达水平显著高于５ ＦＵ组（Ｐ＜０．０１）。
原发性肝细胞癌组织中P21的亚细胞定位及其意义
原发性肝细胞癌组织中P21的亚细胞定位及其意义易玲;邱荣元;王松柏;刘崇梅;冯喜华;万焱鑫;伍小琼;何生松【摘要】目的探讨原发性肝细胞癌组织中P21的亚细胞定位及其意义.方法收集115例由肝硬化发展成肝癌的病理标本,包括同一病例的肝癌组织、癌旁组织、肝硬化组织.采用 SP 法分别行P21的免疫组织化学染色,观察P21的亚细胞分布,并对其与肝癌的临床病理特征、癌细胞分化程度进行相关性分析.结果 HCC 组和癌旁组均有P21的高表达(35.65%,38.26%),两者之间的差异无统计学意义(P>0.05),但明显高于肝硬化组(10.43%,P<0.01).P21胞质表达的阳性率,肝硬化组与癌旁组相近(8.33%,6.82%,P>0.05),而肝癌组胞质表达的阳性率最高(75.61%,P<0.01).P21的亚细胞定位分布与肝癌患者的发病年龄、乙肝病毒的感染、肿瘤大小无明显相关性(P>0.01或0.05),但与肿瘤细胞的病理分级、肿瘤转移具有良好的相关性.Ⅲ-Ⅳ级、伴有肿瘤转移的肝癌患者,其P21的胞质表达率更高.结论在肝硬化向肝癌转化的过程中,伴有P21亚细胞定位的改变,即由胞核移位到胞质,且肿瘤细胞恶性程度愈高,肿瘤转移愈早,胞质移位比例愈高.但这种亚细胞定位分布的改变,与肿瘤患者的发病年龄、乙肝病毒的感染、肿瘤大小无关.【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2013(028)006【总页数】4页(P593-595,598)【关键词】P21;亚细胞定位;胞核;胞核;肝癌;肝硬化【作者】易玲;邱荣元;王松柏;刘崇梅;冯喜华;万焱鑫;伍小琼;何生松【作者单位】414000,湖南师范大学附属岳阳医院;414000,湖南师范大学附属岳阳医院;414000,湖南师范大学附属岳阳医院;414000,湖南师范大学附属岳阳医院;414000,湖南师范大学附属岳阳医院;414000,湖南师范大学附属岳阳医院;414000,湖南师范大学附属岳阳医院;430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院【正文语种】中文【中图分类】R735.7原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上第五大常见恶性肿瘤，在癌症相关死亡原因中排名第三。
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P21基因过表达对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制翟健;胡万宁;李军;石福民【摘要】目的探讨过表达细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)基因对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法将人甲状腺癌细胞SW579分为对照组(未转染)、PCLneo-HK组(转染空载体)和PCLneo-P21组(转染真核过表达载体).采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力;采用流式细胞仪分析细胞的凋亡情况;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞中P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达水平.结果PCLneo-P21组SW579细胞中P21蛋白的相对表达量明显高于对照组(P﹤0.01);PCLneo-P21组SW579细胞的增殖率明显低于对照组,凋亡率明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01);PCLneo-P21组SW579细胞中Bcl-2、cyclin D1蛋白的相对表达量均明显低于对照组,BAX蛋白的相对表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01).结论过表达P21基因可以通过影响细胞凋亡相关基因的表达抑制甲状腺癌细胞的增殖,并诱导其凋亡.【期刊名称】《癌症进展》【年(卷),期】2019(017)003【总页数】4页(P280-283)【关键词】P21;甲状腺癌;增殖;凋亡;细胞周期蛋白D1【作者】翟健;胡万宁;李军;石福民【作者单位】唐山市人民医院头颈外科,河北唐山 0630010;唐山市人民医院头颈外科,河北唐山 0630010;唐山市人民医院头颈外科,河北唐山 0630010;唐山市人民医院头颈外科,河北唐山 0630010【正文语种】中文【中图分类】R736.1甲状腺癌是内分泌系统较为常见的一种恶性肿瘤，其发病率逐年增加，约占全身恶性肿瘤的3%，约占头颈部恶性肿瘤的5%[1]。
据报道，全球甲状腺癌的发病率女性是男性的3.57倍[2]。
目前，甲状腺癌的治疗手段主要包括手术治疗、内分泌治疗和131I治疗等，但治疗后易出现复发[3]。
因此，寻找新的方法改善肿瘤的治疗和预后具有重要意义。
肿瘤的发生是一个复杂的过程，受多种因素的影响，如癌基因和抑癌基因的异常表达等均可导致细胞的恶性增殖，严重威胁人类的生命健康。
细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（cyclindependent kinase inhibitor 1A，P21）可以抑制周期蛋白依赖性激酶的活性，对细胞周期发挥调控作用。
相关研究表明，P21在细胞增殖过程中DNA的损伤、修复过程中发挥重要作用，P21过表达可以使细胞周期停滞在G1、G2或S期[4-5]。
目前，关于P21在甲状腺癌中作用机制的研究相对较少，因此本研究通过过表达P21基因，探讨P21基因过表达对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制，旨在为甲状腺癌的诊断、治疗及预后提供新的思路。
1 材料与方法1.1 材料人甲状腺癌细胞系SW579购自美国菌种保藏中心（American Type Culture Collection，ATCC）细胞库，胎牛血清（fetal calf serum，FBS）、L-15培养基、脂质体Lipofectamine 2000均购自美国Invitrogen公司，噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）购自上海碧云天生物技术有限公司，膜联蛋白V（Annexin V）-异硫氰酸荧光素（FITC）/碘化丙锭（PI）细胞凋亡检测试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司，P21抗体购自美国BD公司，B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2）抗体、Bcl-2相关X蛋白（B cell lymphoma/leukemia-2 associated X protein，BAX）抗体、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）抗体均购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.2 细胞培养将SW579细胞冻存管迅速置于37℃水浴中，不停晃动使细胞尽快融化，800r/min离心5 min，收集细胞，常规培养于含10%FBS和青链霉素的L-15培养基中，置于5%CO2、37℃饱和湿度的细胞培养箱中进行培养。
采用0.25%胰蛋白酶消化细胞，按1∶3的比例每3～4天传代1次。
1.3 细胞转染取生长状态良好的对数期SW579细胞，采用0.25%胰蛋白酶消化细胞，采用不含抗生素的L-15培养基重悬细胞，以2×105/孔细胞加入6孔板中，置于CO2孵箱中培养24 h，待细胞覆盖率为90%～95%时，将细胞分为对照组（未转染）、PCLneo-HK组（转染空载体PCLneo-HK）和PCLneo-P21组（转染真核过表达载体PCLneo-P21）。
具体转染方法：将4 μg PCLneo-HK或PCLneo-P21质粒与10 μl Lipofectamine 2000混合液加入培养板中，在37℃培养箱中培养6 h，然后将培养基更换为含血清与双抗的培养基，采用蛋白质印迹法（Western blot）检测转染效果。
1.4 MTT法检测细胞增殖活力取SW579细胞，调整细胞浓度至2×103/ml，将细胞接种于96孔板中，按照不同分组（对照组、PCLneo-HK组、PCLneo-P21组）分别处理后置于孵育箱中培养48 h，每孔加入20 μl 5 mg/ml MTT溶液，继续培养4 h后终止，小心弃去上清液，加入150 μl二甲基亚砜，振荡混匀10 min，使结晶物充分溶解，置于酶联免疫检测仪上检测各孔在490 nm处的光密度值（optical density，OD），每组织5个复孔，实验重复3次，处理组与对照组OD值的比值为细胞的增殖率。
1.5 流式细胞仪分析细胞的凋亡情况取1×105个SW579细胞接种于6孔板上，按照不同分组（对照组、PCLneo-HK 组、PCLneo-P21组）培养48 h后，采用胰蛋白酶消化，离心，收集细胞，磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）清洗2次，采用1×binding buffer 重悬细胞，在凋亡检测试剂说明书的指导下每孔加入5 μl Annexin V-FITC和5 μl PI，振荡混匀，常温避光反应10 min，置于流式细胞仪上检测细胞凋亡率。
1.6 Western blot检测细胞中 Bcl-2、BAX、cyclin D1蛋白的表达量收集处理48 h后的对照组、PCLneo-HK组、PCLneo-P21组细胞，PBS清洗2次，加入细胞裂解液，12 000 r/min离心15 min，离心半径30 cm，保存于-80℃中，Bradford法检测蛋白浓度。
取样本蛋白与1×蛋白上样缓冲液充分混合后，在100℃中变性5 min，将提前配置的10%的分离胶和5%的浓缩胶固定于蛋白电泳槽中，每孔加入30 μg蛋白样品，90 V电泳至染料前沿进入分离胶，将电压提高至110 V，待溴酚蓝到达分离胶的底端时，停止电泳。
切去多余凝胶，在转移缓冲液中将蛋白凝胶转移至硝酸纤维素膜上，剪去多余部分，置于5～10 ml 5%脱脂牛奶封闭液中常温作用1 h，TBST缓冲液洗膜2次，加入脱脂牛奶稀释的一抗，4℃孵育过夜，TBST缓冲液室温下清洗3次，每次10 min，加入辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的二抗，37℃持续振荡60 min，TBST缓冲液室温下清洗3次，每次10 min，滴加电化学发光显色试剂，暗箱中曝光，Image J软件观察蛋白的灰度值，目的蛋白的相对表达量=目的蛋白条带灰度值/内参蛋白条带灰度值。
1.7 统计学分析采用SPSS 22.0统计软-件对数据进行分析。
计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用LSD-t检验。
以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果2.1 P21蛋白表达水平的比较PCLneo-HK组SW579细胞中P21蛋白的相对表达量与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；PCLneo-P21组SW579细胞中P21蛋白的相对表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（t=6.989，P＜0.01）。
（图1、表1）图1 Western blot检测SW579细胞中P21蛋白的表达水平表1 不同组别SW579细胞中P21蛋白的表达水平（±s）组别对照组PCLneo-HK组PCLneo-P21组P21蛋白相对表达量0.335±0.052 0.417±0.0630.733±0.0892.2 沉默P21表达对细胞增殖率的影响PCLneo-HK组SW579细胞的增殖率与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；PCLneo-P21组SW579细胞的增殖率明显低于对照组，差异有统计学意义（t=4.596，P＜0.01）。
（表2）表2 不同组别SW579细胞的增殖率（%，x-±s）对照组PCLneo-HK组PCLneo-P21组100.021±0.065 96.458±2.755 86.326±5.6862.3 沉默P21表达对细胞凋亡能力的影响PCLneo-HK组SW579细胞的凋亡率与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；PCLneo-P21组SW579细胞的凋亡率明显高于对照组，差异有统计学意义（t=7.899，P＜0.01）。
（图2、表3）图2 流式细胞仪检测SW579细胞的凋亡情况注：左上象限为细胞碎片；左下象限为未凋亡细胞；右上象限为晚期凋亡细胞；右下象限为早期凋亡细胞表3 不同组别SW579细胞的凋亡率（%，±s）组别细胞凋亡率2.4 沉默P21表达对细胞中Bcl-2、BAX、cyclin D1蛋白的影响PCLneo-HK组SW579细胞中Bcl-2、BAX、cyclin D1蛋白的相对表达量与对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；PCLneo-P21组SW579细胞中Bcl-2、cyclin D1蛋白的相对表达量均明显低于对照组，差异均有统计学意义（t=3.760、4.457，P＜0.01）；PCLneo-P21组SW579细胞中BAX蛋白的相对表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（t=3.918，P＜0.01）。
（图3、表4）图3 Western blot检测SW579细胞中Bcl-2、BAX、cyclin D1蛋白的表达情况表4 不同组别SW5-79细胞中Bcl-2、BAX、cyclin D1蛋白的相对表达量（x±s）组别对照组PCLneo-HK组PCLneo-P21组Bcl-2 0.332±0.068 0.362±0.0570.158±0.042 BAX 1.152±0.108 1.188±0.176 1.669±0.189 cyclin D11.346±0.188 1.305±0.101 0.876±0.0673 讨论基因的稳定性与细胞周期、细胞凋亡之间的相互作用，维持了细胞增殖的有序性，其中基因的稳定性对细胞的增殖调控起到根本作用[6]。