抗菌药物敏感试验实验

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抗菌药物敏感试验

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纸片扩散法（KirbyBauer法）
原理：
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
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操作方法：
1.挑取16～20h的菌落 2.用无菌生理盐水制备成0.5麦氏比浊管浊度的菌液。
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3.用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向平均涂抹琼脂表面（每次转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。
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4.用镊子将E-TEST试条的抗菌药物的一面贴向琼脂表面，有刻度的一面向外，直径140mm的平板可放置 6条，90mm平板只能放置1～2试条。
5.孵育，置平板于35℃孵育16～24h。
25
6.孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC) 。
No
No
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第九节细菌的分类命名
一、分类原则:细菌的分类原则上分为传统分类和种系分类。
分类方法：（1）人为分类法：
11
嗜麦芽窄食单胞菌：甲氧苄啶/磺胺异噁唑、左氧氟沙星、米诺环素；
嗜血杆菌属：氨苄西林、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、头孢他啶、美罗培南、阿奇霉素、环丙沙星、头孢克洛；
淋病奈瑟菌：头孢曲松、环丙沙星、青霉素、大观霉素、四环素；
肺炎链球菌：红霉素、苯唑西林、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、克林霉素、左氧氟沙星、四环素、万古霉素；

抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt生物技术实验教学中心课件

8.联合药物敏感试验
1）方法很多，其中纸片法最为常用。先将试验菌均匀涂布于培养基表面，盖好平皿，放置5分钟，待平板表面水分吸收后，将两种含药纸片贴于平板上，两纸片中心距离2--4mm左右。然后35℃ 孵育过夜，取出观察结果。
2）结果判断联合药物敏感试验可出现四种结果： A.无关作用：甲+乙=甲单或乙单 B.拮抗作用：甲+乙＜甲单或乙单 C.相加作用：甲+乙=甲单+乙单 D.协同作用：甲+乙＞甲单+乙单
三、实验操作步骤
（一）纸片扩散法：
1. M-H平板：直径为90mm，厚度 4mm。 2. 菌悬液制备：无菌挑取菌落于无菌生理盐水中，校
正浊度至0.5 麦氏。 3. 用无菌棉签浸入细菌悬液中，将棉签在试管壁上轻
轻挤压以挤去过多的菌液，用棉签以连续划线的方式均匀涂抹琼脂平板表面三次（每次转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。盖上平板的盖子，放置3~10min。
一、实验目的：
1. 掌握纸片扩散法（K-B法）的原理、操作方法、结果的判读及临床意义。
2. 了解各种稀释法抗生素敏感性试验的原理、操作方法、结果判读和临床意义。
3. 掌握纸片扩散法的质量控制，了解稀释法的质量控制。
二、实验原理
1. 抗菌药物敏感性试验是测定抗生素或其他抗微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力。这种能力可以通过稀释或扩散方法来测定。
六、影响因素：
1. 培养基：厚度，PH，离子浓度，成份，添加剂； 2. 抗菌药物的配制方法，纸片的含量，大小，
渗透性，保存方式等； 3. 细菌的接种量； 4. 培养的环境，温度与时间； 5. 结果的判断及解释标准等。
4.每个孔加入100ul浓度为105菌悬液（大肠或金葡），混匀，胶布封口，37°C培养。

细菌耐药性原理-抗菌药物敏感试验kej

该方法结合了稀释法和扩散法的原理和特点，操作简便，可得到微生物对抗菌药物敏感度的定量结果，
但价格较高。
操作方法： 1.挑取16～20h的菌落 2.用无菌生理盐水制备成0.5麦氏比浊管浊度的菌液。
3.用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向平均涂抹琼脂表面（每次转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。
联合药敏试验的方法
• 棋盘稀释法
• 原理先测定两药单药时各自的MIC值，再将各种稀释度的两药混合，测定两药联合时各药的MIC值，比较两药联合时MIC值与其单独MIC 值，计算部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concectration，FIC)，作为协同、相加、无关和拮抗的判断。
大肠埃希菌头孢噻肟
浓度 0.5
1
2
4 ug/ml
3.抗菌药物敏感性试验的方法
浓度梯度法（E-Test）药敏试验
E-Test即浓度梯度（多点药物浓度法）琼脂扩散试验。E试纸条背面含有干化、浓度由高至低连续梯度分布的抗菌药，药物浓度按log2梯度递减。抗菌药物从具有浓度刻度的塑料试纸条中向琼脂中扩散，在试纸条周围抑菌浓度范围内受试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈，抑菌圈与试纸条的横向相交处的读数刻度为MIC值。
抗菌药物的临床实践
剂量方案
血药浓度/时间
药代动力学 PK
其他组织或体液药物浓度/时间
感染部位药物浓度/时间
药理学或毒副作用
抗菌作用/ 时间
药效动力学 PD
＋ PK：反应体内药物浓度变化与时间关系
PD：反应抗菌药物在体外抗菌活性变化过程
MIC MBC PAE MPC

第4章抗菌药物敏感试验

第4章抗菌药物敏感试验一、需氧菌和兼性厌氧菌的体外抗菌药物敏感试验1.扩散法（K-B法）（1）原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在接种有待检菌的琼脂平板上，该点称为抗菌药源。

药物向周围扩散，形成了随着药源距离增加，琼脂中药物浓度递减的浓度梯度。

在药源周围可抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，形成无菌生长的透明圈即抑菌圈，其大小可以反映待检菌对测定药物的敏感性，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

（2）实验材料①培养基：采用水解酪蛋白（M-H）琼脂，pH为7.2，琼脂厚度4mm。

对生长条件要求高的细菌，如链球菌属细菌需加入5%脱纤维羊血，嗜血杆菌属细菌需加入1%血红蛋白（含Ⅴ因子）和1%Ⅹ因子复合物。

②抗菌药物纸片：选用直径为6.35mm，吸水量20μl的专用药敏纸片。

制备时取灭菌药敏纸片，经加样或浸泡药物溶液后冷冻干燥，置4℃保存备用，在有效期内使用。

③接种菌液挑取平板上形态相同的菌落4～5个，接种于3～5ml M-H肉汤中，于35℃中培养2～8h。

嗜血杆菌属和链球菌属细菌需用加血肉汤培养过夜。

用生理盐水或肉汤校正菌液至0.5麦氏比浊标准（相当于1.5×109/ml的含菌量）后在15min内接种。

（3）试验方法以无菌棉拭蘸取已制备好的菌液（其浊度为0.5麦氏比浊标准），在M-H琼脂表面均匀涂布接种3次，每次平板旋转60°，最后沿平板内缘涂抹１周。

平板置室温干燥3～5min，后用无菌镊子或专用纸片分配器将含药纸片贴于琼脂表面。

纸片应贴得均匀，各纸片中心相距＞24mm，纸片距平板内缘＞15mm。

直径为90mm的平板可贴6张纸片。

纸片贴牢后应避免再移动。

平板室温放置15min后倒置于35℃培养箱中培养16～18h后读取结果。

（4）结果解释平板置黑色背景上，从背面量取包括纸片直径在内的抑菌圈直径，单位为mm。

培养基中如果加有血液须打开皿盖从正面测量抑圈菌。

药敏反应实验报告

一、实验目的1. 了解药敏试验的基本原理和操作流程。

2. 掌握最小抑菌浓度（MIC）的测定方法。

3. 分析细菌对不同抗菌药物的敏感性，为临床合理用药提供依据。

二、实验原理药敏试验是一种体外试验方法，用于检测细菌对特定抗菌药物的敏感性。

通过观察细菌在含有不同浓度抗菌药物的培养基中的生长情况，可以确定最小抑菌浓度（MIC），即抑制细菌生长的最低药物浓度。

根据CLSI标准，将细菌对药物的敏感性分为敏感、中介和耐药三种。

三、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。

2. 抗菌药物：青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星等。

3. 培养基：MH肉汤、MH琼脂、MH培养基。

4. 仪器：恒温培养箱、微量移液器、无菌操作台、显微镜等。

四、实验方法1. 菌株培养：将待测菌株接种于MH肉汤培养基中，37℃培养24小时，备用。

2. 制备药敏纸片：将不同浓度的抗菌药物溶解于无菌生理盐水中，制成药敏纸片。

3. 点种细菌：将培养好的菌株用无菌棉签涂布于MH琼脂平板上，待菌落生长后，用无菌镊子将药敏纸片贴于平板表面。

4. 观察结果：将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察细菌生长情况，记录抑菌圈直径。

5. MIC测定：将培养好的菌株用无菌生理盐水稀释至一定浓度，分别加入不同浓度的抗菌药物，观察细菌生长情况，记录抑制细菌生长的最低药物浓度。

五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感。

2. 大肠杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均耐药。

3. 肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均中介。

六、讨论1. 药敏试验是临床合理用药的重要依据，通过测定细菌对药物的敏感性，可以指导临床医生选择合适的抗菌药物，避免滥用和误用。

2. 本实验结果显示，金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感，提示临床治疗金黄色葡萄球菌感染时，可以选择这些药物进行治疗。

微生物学检验(第3版)药物敏感试验

抗生素的种类一.目的：
四、氨基糖苷类抗生素按其来源分为：①由链霉菌属发酵滤液提取获得，有链霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龙霉素、新霉素；②由小单胞菌属发酵滤液中提取，有庆大霉素、福提霉素；③半合成氨基糖苷类，有阿米卡星、奈替米星、地贝卡星等。
抗生素的种类一.目的：
五、喹诺酮类抗生素第一代为窄谱抗生素，有新恶酸、奈啶酸和恶喹酸。第二代为广谱类抗生素，抗菌强度依次为环丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、氟咯沙星、培氟沙星、诺氟沙星。第三代为超广谱类抗生素，有司帕沙星、妥舒沙星、左氟沙星等。
纸片的名称，然后用棉试子蘸取菌液，在试管内
壁轻挤去多余菌液后均匀涂布于整个平板表面3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂一周。放置约5分钟后用镊子分别挟取所选择的药敏纸片贴上。室温放置10分钟左右，恒温箱培养24h。
验操实作
• (4)、MH平板涂布均匀，放置5分钟再贴纸片，纸片放置应该迅速准确，不得在平板上拖动纸片，纸片间的距离和位置要均匀。离平板边缘不小于15mm，两纸片间距离不小于24mm。
实验原理 1.原理：
实验操作（接种与培养）
• (1)、取待测菌平板，观察菌落形态，涂片镜检，革兰阴性杆菌做氧化酶试验，革兰阳性球菌做触决定选择何组、何种药敏纸片。
酶实验。并根据实验结果对该菌株作出初步判断，
药敏试验选择纸片
• 触酶阳性的G＋球菌：青、苯唑、克林、庆大、环
丙沙星、万古、红霉素、头孢唑林庆大、环丙沙星、万古
(一）苛养菌药敏试验抗生素的选用
A组一级试验并常规报告的抗微生物药 , 如肺炎链球菌用红霉素和青霉素。 B组一级试验有选择报告的抗微生物药 , 如肺炎链球菌用头孢噻肟或头孢曲松。 C组补充试验有选择报告的抗微生物药，如肺炎链球菌用头孢呋辛。

抗菌药物敏感试验

操作方法：1.抗菌药物的稀释和融解
2.抗菌药物母液的稀释
3.在微量聚乙烯微板孔中加各种不同浓度的抗生素 100μl，从低浓度往高浓度加样，不需要更换吸管。
4.挑选18~24小时的菌落置M-H肉汤增菌4~6小时。
5.制备0.5麦氏比浊管，然后1:200稀释，使之最终浓度105 CFU/ml。
除肺炎链球菌外的其他链球菌：红霉素、青霉素、克林霉素、万古霉素、头孢曲松、左氧氟沙星。
7.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。
8.经过35℃16～24h孵育。
9.取抑菌环直径，根据 CLSI（clinical and laboratory standards institute ）标准，报告细菌对该抗生素敏感(susceptible,S)、耐药(resistant,R)、中介(intermediate,I)。
纸片扩散法（KirbyBauer法）
原理：
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
第四章抗菌药物的敏感性试验
药敏试验的意义
1、可预测抗菌治疗的效果 2、指导临床抗菌药物的使用 3、发现或提示细菌耐药机制，帮助临床医生合理使用抗菌药物 4、监测细菌的耐用性，分析耐药菌的变化，预防和控制耐药菌感染的发生和流行
抗菌药物的敏感性试验
常用方法：

抗菌药物敏感性试验执行标准

抗菌药物敏感性试验执行标准抗菌药物敏感性试验是临床微生物学中非常重要的一项实验，它可以帮助医生选择最有效的抗菌药物来治疗感染性疾病。

执行标准的严格性和准确性对于试验结果的可靠性至关重要。

下面将介绍抗菌药物敏感性试验执行标准的相关内容。

首先，进行抗菌药物敏感性试验前，需要准备好所需的培养基、试验材料和各种试剂。

同时，要做好实验室的消毒和无菌操作，以确保试验的准确性和可靠性。

在进行试验时，需要按照严格的操作规程进行。

首先，要准备好待测菌株的悬浮液，然后按照一定比例将其接种到含有不同浓度抗菌药物的琼脂平板上。

接种后，要在恒温培养箱中进行培养，培养时间一般为16-18小时。

培养结束后，需要观察菌落的生长情况，并进行相关的数据记录和分析。

根据菌落的生长情况和抗菌药物的浓度，可以判断出菌株对抗菌药物的敏感性。

在记录和分析数据时，要注意细致入微，确保数据的准确性和可靠性。

在执行标准中，对试验结果的解释和判定也非常重要。

根据试验结果，可以判断出菌株对抗菌药物的敏感性、耐药性或者中间敏感性。

这些判定对于临床治疗具有指导意义，可以帮助医生选择最合适的抗菌药物来治疗感染性疾病。

此外，在执行标准中，还需要对试验过程中可能出现的干扰因素进行控制和排除。

比如，培养条件、试剂质量、操作技术等都可能对试验结果产生影响，需要在试验过程中进行严格的控制和调节。

总的来说，抗菌药物敏感性试验执行标准的严格性和准确性对于试验结果的可靠性至关重要。

在实验过程中，需要严格按照操作规程进行，确保试验过程的准确性和可靠性。

同时，对试验结果的解释和判定也非常重要，可以帮助医生选择最合适的抗菌药物来治疗感染性疾病。

在执行标准中，还需要对试验过程中可能出现的干扰因素进行控制和排除，以确保试验结果的准确性和可靠性。

抗菌药物敏感试验实验

阿米卡星（AMK）、环丙沙星（CIP） 4.庆大霉素稀释液：1支/桌（256U/ml） 5. 其它：MH肉汤、无菌刻度管、无菌棉签、镊子、
无菌试管、刻稀释法
K-B法操作方法
操作注意事项：
菌液应在15分钟内接种完毕接种后，平板放置时间不要超过5min 注意纸片距离
肉汤稀释法操作方法
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
M-H肉汤(ml)
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
抗生素(ml) 菌液(ml)
2
2
2
2
2
2
2
2
2弃－
去
0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
35℃孵育16~18h，观察结果
实验内容
第二次 1.观察K-B法的结果 2.观察肉汤稀释法的结果
K-B法结果解释
测量抑菌圈直径，参照CLSI的标准解释结果。
20mm
金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验结果判断
大肠埃希菌抗菌药物敏感性试验结果判断
实验目的 1.掌握纸片扩散法（K-B法）和肉汤稀释法
的原理、操作方法、结果的判读及其临床意义。 2.掌握纸片扩散法和肉汤稀释法的质量控制。
实验内容纸片琼脂扩散法（K-B法）肉汤稀释法
实验器材
1. 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌 2. 培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂）、MH肉汤 3. 抗菌纸片：青霉素（PEN）、庆大霉素（GEN）、

抗菌药物的敏感性试验及报告解读

明确提出在二级以上医院设立感染科与感染临床药师（第12、
13条），及临床微生物室（第14条）
6
Company name
概况和制定过程
第一章总则
第六章附则第五章法律责任
共六章 53条
第二章组织机构和职责
• 组织医院管理、临床、药学、微生物检验、感染等方面专家起草《抗菌药物临床应用管理办法》
19
Company name
培养条件（一）
需氧菌： 35℃ ±2 ℃ ，16-18小时嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌：20-24小时葡萄球菌：33-35 ℃ ，OXA、MET、NAF、VAN24小时肠球菌：VAN 24小时溶血性链球菌、肺炎链球菌、奈瑟氏菌属等：20-24小时
20
Company name
操作：
无菌棉签蘸取菌液，在管壁内将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1 周。室温干燥或35℃干燥5-15分钟用纸片分配器或无菌镊子将药物纸片紧贴于琼脂表面纸片间距 20mm 纸片离平板内缘 15mm
15
Company name
抗生素药敏试验质控
• 4月11日起征求全国意见
• 制定《抗菌药物临床应用分
第三章抗菌药物级管理目录》
临床应用管理
• 4月15日期征求全国意见
第四章监督管理
7
Company name
第三章抗菌药物临床应用管理
• 三级医院不得超过50种，二级医院不得超过35种 • 同一通用名称药品的品种，注射剂型和口服剂型各不得超过2种，处方组成
葡萄球菌属 Mueller-Hinton（MH）琼脂

抗菌药物敏感性试验(药敏试验)

箱内平板最好单独摆放，不超过两个叠在一起，否则中间的平板因达不到孵箱温度而产生预扩散的作用。
平板孵育规定时间（一般为18-24h）后读取结果，葡萄球菌和肠球菌必须孵育24h以检测苯唑西林和万古霉素的耐药性。
孵育16-18h 后检查每一块平板
如果划线满意，接种物准确无误，抑菌圈应为正圆形，菌落应融合生长
磺胺异恶唑
所有菌属
所有磺胺类
萘啶酸（敏感）肠杆菌科
头孢噻吩/头孢肠杆菌科唑啉（敏感）
所有喹诺酮类敏感所有头孢菌素敏感
万古霉素氨苄西林
革兰阳性杆菌肠球菌属
替考拉宁青霉素
B组药物
细菌对A组同类药物耐药，可选择性报告报告指征
特定的标本来源多种细菌感染多部位感染对A组药过敏、耐受或无效以流行病学调查为目的向感染控制部门报告
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距 ≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。直径90mm的平板最好贴6张。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸片中的药物已扩散到琼脂中。需要时应在适当的地方贴新纸片
孵育
必须用35℃孵箱（苛氧菌药敏平板应置于5% CO2 环境）
菌液浓度为1.5×108/ml 质控菌株
金黄色葡萄球菌 ATCC 25923 大肠埃希菌 ATCC 25922 铜绿假单胞菌 ATCC 27853
操作方法
菌液制备
挑取已纯化的4~5个菌落制备菌悬液
生长法
挑选琼脂平板上3~5个形态特征一致的菌落，用接种环接触每个菌落顶部
转移至4~5mL 适宜的液体培养基中（如胰酶消化大豆胨肉汤）
置35℃孵育2-6 h 用无菌生理盐水或肉汤校正，使其浊度至

抗菌药物的敏感性试验

目前，我国抗菌药物的应用现状是临床无指征治疗性、预防性用药严重及选择错误的品种、剂量及疗程。

而不合理用药可导致治疗失败、不良反应增多、细菌耐药性增长迅猛、医药资源大量消耗等不良后果。

而我们应该如何为临床正确选用抗生素呢？正确的答案是，我们应该根据感染菌株的药物敏感性试验合理选用抗生素。

抗菌药物的敏感性试验就是测定抗菌药物在体外抑制病原微生物生长的效力。

目前，我科遵循美国临床实验室标准化研究所（CLSI）2010版抗微生物药物敏感性试验执行标准进行操作。

由于CLSI标准的公认程度和准确性，许多国家都采用该标准。

该标准根据不同的细菌分类（如肠杆菌科、葡萄球菌属、铜绿假单胞菌等）制定可选用的抗生素及其药敏试验的判读标准，并将它们分成四组：A组：一级试验并常规首选报告的抗微生物药物；B组：一级试验，临床使用的主要抗生素（尤其在院内感染时）有选择报告的药物；C组：补充试验，有选择报告的药物；U组：补充试验，仅用于泌尿道感染细菌的抗微生物药物。

CLSI标准所制定的三级划分制及临床意义如下：高度敏感（S）：用该种药物常用剂量治疗有效；中介（I）：仅在应用高剂量抗菌药物时才有效，或者细菌处于体内抗菌药物的浓缩部位（如尿液、胆汁等）才被抑制；耐药（R）：药物对某一细菌的MIC高于药物在血或体液中可能达到的浓度，有时细菌能产生灭活抗菌药物的酶，则不论其MIC值大小如何，均应判定该菌为耐药。

在临床实践中，我们常可以听到一些关于细菌药敏试验与临床药效不符的抱怨。

这一现象的出现，国内外的一些文献认为主要与以下几方面有关。

①与临床是否正确地获得合格的标本至为相关；我们应规范标本的取材、送检及减少送检污染部位的标本（如：痰、咽拭子等）。

②可能出现真菌等二重感染。

③CLSI药敏标准制定中的局限性。

④细菌感染的诊断是否正确。

⑤药敏试验操作不当。

⑥用药剂量不足或出现耐药菌株。

⑦一般医院的微生物实验室做细菌培养仅限于需氧非苛养菌的检测。

抗菌药物敏感性试验

方法：
菌液制备：生理盐水校正测试菌和质控菌至 0.5麦氏比浊标准，再用MH肉汤稀释到 107CFU/ml；
加菌液：用微量加样器取0.1ml稀释菌液由低到高加于各排试管中，其最终的接种量为 5×105 CFU/ml。测试菌排、测试菌生长对照管加测试菌液；质控菌排、质控菌生长对照管加质控菌液。
实验内容
常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍。
纸片扩散法。肉汤稀释法。
一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍
纸片扩散法（Kirby-Bauer test）稀释法（dilution test） E试验法（E test）联合药物敏感试验特殊耐药菌及耐药酶的表型检测
耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测 β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等
二、纸片扩散法（K-B法）
原理：
含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
抗菌药物
青霉素苯唑西林万古霉素庆大霉素红霉素克林霉素磺胺药
纸片含药量
10U 1μg 30μg 10μg 15μg 2μg 1.25/23.75μg
耐药 ≤28 ≤10 — ≤12 ≤13 ≤14 ≤10
抑菌圈直径(mm)
中介
敏感
—
≥29
11～12
≥13
—
≥15
13～14
≥15
14～22
≥23
涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60º，最后沿平板内缘涂抹1周；

药敏试验实验报告

药敏试验实验报告一、实验目的药敏试验是测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制或杀灭作用的方法。

本次实验的目的在于了解临床分离菌株对常见抗菌药物的敏感性，为临床合理选用抗菌药物提供依据。

二、实验材料1、菌株来源本次实验所使用的菌株均来自临床送检的标本，包括痰液、尿液、血液、脓液等。

2、培养基采用 MuellerHinton 琼脂培养基，按照标准配方进行配制，并在 121℃下高压灭菌 15 分钟。

3、抗菌药物纸片选用多种常见的抗菌药物纸片，包括青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、喹诺酮类等，均购自正规生物试剂公司。

4、仪器设备恒温培养箱、无菌接种环、游标卡尺等。

三、实验方法1、菌株的复苏与培养将临床保存的菌株接种于合适的培养基上，在 35℃恒温培养箱中培养 18 24 小时，以获得纯培养物。

2、菌液的制备挑取培养后的单个菌落，用生理盐水制成 05 麦氏浊度的菌悬液。

3、接种用无菌棉拭子蘸取菌悬液，在培养基表面均匀涂抹 3 次，每次旋转60 度，最后沿平板边缘涂抹一周。

4、贴纸片用镊子将抗菌药物纸片均匀贴在培养基表面，纸片之间的距离应不小于 24 毫米，纸片中心距离平板边缘不小于 15 毫米。

5、培养将接种好的平板倒置放入 35℃恒温培养箱中培养 16 18 小时。

6、结果观察与测量培养结束后，用游标卡尺测量抑菌圈的直径。

四、结果判定根据不同抗菌药物的抑菌圈直径标准，判断菌株对该抗菌药物的敏感性。

通常分为敏感（S）、中介（I）和耐药（R）三种情况。

敏感：表示该菌株使用常规剂量的抗菌药物治疗时，其疗效满意。

中介：提示该菌株对常规剂量的抗菌药物治疗反应性较低，需提高药物剂量或在药物浓度部位有一定的疗效。

耐药：表明该菌株使用常规剂量的抗菌药物治疗无效。

五、实验结果本次实验共检测了____株临床分离菌株，包括____种细菌。

以下是部分实验结果：1、菌株 1抗菌药物 A：抑菌圈直径为____毫米，判定为敏感。

抗菌药物 B：抑菌圈直径为____毫米，判定为中介。

抗菌药物敏感性试验

转60℃）使菌液均匀分布，后沿平板内缘涂抹一周。 4)用镊子将E-test试条的抗菌药物的一面贴向琼脂表面，有刻度的一
面向外。 5)孵育，置平板于35℃孵育16-24h。
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6.孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC) 。
椭圆形细菌生长抑制区
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抑菌浓度指数（FICI）
FICI ＝
A药联合时的MIC A药单测的MIC
＋
B药联合时的MIC B药单测的Hale Waihona Puke ICFICI ﹤1为协同作用；
FICI =1为累加作用；
FICI﹥1 为拮抗或无关作用，无关时药物组合的MIC 等于浓度高的药物的MIC。
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2、抗菌药物的杀菌活性（1）最低杀菌浓度（MBC）
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（5）孵育：放于35℃孵箱中，通常于16-18h后，测量抑菌环直径。
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（6）测量抑菌环直径
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（7）与解释标准核对得出结论敏感(susceptible, S)：所分离菌株能被测试药物使用推荐剂量时在感染部位可达到的药物浓度所抑制。耐药 (resistant, R)：所分离菌株不被测试药物常规剂量可达到的药物浓度所抑制。
时的抗菌效果，其结果可以表现为协同、拮抗、累加和无关。
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2）部分抑菌浓度指数（FICI）测定：测定A、B两种药的MIC值，根据MIC值将两药配成不同浓度的
含药肉汤，将各浓度的A药和B药肉汤两两等量混合，组成棋盘模式不同药物组合的含药肉汤。观察孵育后各行列中不长菌的最低药物浓度管，即为药物组合的MIC值。
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（2）时间杀菌试验（time-kill assay）
1）概念：是指能够使试验菌减少99.9%以上的最低药物浓度。 2）操作方法：分别取高于MIC值的各管中的菌药混合肉汤划线接种于

药敏实验实验报告

药敏实验实验报告实验目的，通过对不同药物的药敏实验，了解不同药物对细菌的抑制作用，为临床药物选择提供参考。

实验材料与方法：1. 实验材料，青霉素、红霉素、头孢菌素、氯霉素、甲硝唑等不同种类的抗生素药物；2. 实验菌株，选择不同类型的细菌，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等；3. 实验方法，采用纸片扩散法，将不同药物浸润在纸片上，放置在含有不同细菌的琼脂平板上，观察不同药物对不同细菌的抑制情况。

实验结果：经过实验测定，得到了不同药物对不同细菌的抑制圈直径数据。

青霉素对金黄色葡萄球菌的抑制圈直径最大，达到20mm；红霉素对大肠杆菌的抑制圈直径最大，达到18mm；头孢菌素对金黄色葡萄球菌的抑制圈直径最大，达到22mm；氯霉素对大肠杆菌的抑制圈直径最大，达到15mm；甲硝唑对金黄色葡萄球菌的抑制圈直径最大，达到25mm。

实验分析：通过实验结果可以看出，不同药物对不同细菌的抑制作用存在差异。

青霉素对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强，而对大肠杆菌的抑制作用较弱；红霉素对大肠杆菌的抑制作用较强，而对金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱。

头孢菌素、氯霉素和甲硝唑对不同细菌的抑制作用也存在差异。

这些数据为临床药物选择提供了重要参考，可以根据不同细菌的药敏情况来选择最合适的药物治疗。

实验结论：通过药敏实验的结果分析，不同药物对不同细菌的抑制作用存在差异，为临床药物选择提供了重要参考。

在临床应用中，应根据细菌的药敏情况来选择最合适的药物治疗，以提高治疗效果。

实验注意事项：1. 实验过程中应严格按照操作规程进行，避免交叉污染；2. 实验结果应重复多次，以确保结果的准确性；3. 实验过程中应注意个人防护，避免接触抗生素药物。

实验展望：未来可以进一步扩大实验样本量，对更多种类的细菌和药物进行药敏实验，以获取更加全面的药敏数据，为临床药物选择提供更加准确的参考。

通过本次药敏实验，我们对不同药物对不同细菌的抑制作用有了更深入的了解，这对临床药物选择具有重要的指导意义。