三七总皂苷提取工艺研究

末中三七总皂苷 ( PNS ), Rg1、R e、R1、Rb1 含量, 结 果见 T ab 1。
Tab 1
Compar ison d ifferen t extrac tion
solven t concentration s
乙醇浓度 (% )
PN S(m g / g生药 )
70
731 31
30
771 17
- 461 50 ? 91 52
Fra Baidu bibliotek
1301 40 ? 14185
模型对照组
- 161115 ? 331 14v 2931 62 ? 51174v
阳性药物组
01 1 701 56 ? 141 94* * * 1421 58 ? 23119* * *
生泽泻水提物组 20 134134 ? 251 60*
2521 56 ? 40193
上述结果表明: 10倍量 70% 乙醇提取 3 次, 当 粒径范围在 8~ 40 目, 总皂苷含量在 84~ 92 m g / g 生药之间, 差异较小。 21213 提取工艺正交优化: 在对提取溶媒和粒径 考察的基础上, 采用正交试验法, 选用 L9 ( 34 ) 正交 表, 筛选因素为乙醇浓度, 乙醇用量, 提取次数, 提取 时间, 各因素分设三个水平。结果见 T ab 3、T ab 4。
机理 1 中 国药理学与毒理学杂志, 1989, 13( 3): 271
( 2005- 12- 29收稿 )
# 制剂与质量 #
三七总皂苷提取工艺研究
瞿林海, 郑 明, 楼宜嘉* (浙江大学药学院, 浙江杭州 310031)
摘要 目的: 优化三七总皂苷提取工艺。方法: 在考察 提取溶 媒和粒 径的前提 下, 采用正 交试验 法, 以 提取物 中三七总皂苷含量为考察指标, 对影响三七提取的因 素进行 了考察。结 果: 提取次 数对三 七总皂苷 得率有 显著影 响。选择过 8目筛的药材, 用 10倍量 70% 乙醇提取 3次, 每次 115 h, 所 得三七总 皂苷为 85174 ? 3116 m g /g 生药。 结论: 该工艺简便易行, 得率较高 , 适于大生产。
于保肝处方时, 选用盐泽泻较适合, 其盐制加强保肝 作用的成分变化机理有待进一步研究。
L iehr152观察到 D-氨基半乳糖引起的肝损伤程 度与大肠杆菌 内毒素密切相关。 CC l4 引起 肝损伤 系 CC l4 在肝微粒体细胞色素 450激活下生成三氯 甲基自由基及氯自由基, 引起的脂质过氧化, 使肝细 胞损伤 162。泽泻缓解 D-氨基半乳糖及 CC l4 引起的 急性肝损伤, 其效应可能与增加 SOD、过氧化氢酶、 谷胱苷肽的活性, 减少自由基对肝脏细胞的损伤等 有关。
功效112。三七总皂苷 ( Panax notog inseng Sapon ins, PNS) 由人参皂苷 Rg1、Rb1、R e和三七皂苷 R1等成
基金项目: 浙江省中医药管理局重点资助项目 ( N o1 2003K F001) ; 浙江省科技厅计划重点资助项目 ( N o12004C33106 ) 作者简介: 瞿林海 ( 1981-) , 男, 浙江海宁人, 硕士研究生, 研究方向: 中药药理学与新药开发。 * 通讯作者: 楼宜嘉, 教授, 博士生导师, Tel /Fax: 86-571-87217206, E-m a i:l yijialou @ z ju1 edu1 cn。
实验中发现, 造成急性肝损失后, 小鼠明显表现 活动减少, 倦缩, 毛色失去光泽, 中毒严重的表现萎 靡, 后肢瘫软, 体表温度下降, 甚至死亡。其中以模 型组小鼠状态最差, 死亡率最高。
参 考文 献
[ 1] 李广勋 1 中药药理与临床 1 天津: 天津科技翻译出版公 司, 1992: 1591
[ 2] 徐淑云, 卞如濂, 陈修 1 药理 实验方法 学 (第 3版 ) 1 北 京: 人民卫生出版社, 2002: 1346-13471
关键词 三七总皂 苷; 三七; 提取工艺; 正交试验 中图分类号: R 28412 文献标识码: A 文章编 号: 1001-4454( 2006) 06-0593-03
三 七 ( Roadix Notog inseng) 为五加 科 ( A raliaceae) 人参属 ( P anax)植物, 具有散瘀止血、消肿定痛之
T ab 2
Comp ar ison of partic le size( n = 3)
粒径范围 ( 目 ) 8-1 2 12-1 6 16-2 4 24-4 0
PN S( mg /g生药 ) 851 35 ? 1101 891 49 ? 1130 911 85 ? 2166 841 48 ? 3142
中药材第 29卷第 6期 2006年 6月
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分组成, 是三七主要活性部位。现代药理研究发现,
PN S 的药 理活 性主 要在 于改善 血液 系统 和心 血 管系 统功能、滋补强壮、调节免疫等 方面122, 因 此, 其市
场需求量很大。目前, 提取三七总皂苷的主要方法
为乙醇加热回流提取、渗漉法, 再用大孔吸附树脂或 正丁醇萃取纯化 132。为了提高三七总皂苷的得率,
[ 3] Jp 0477420[ 9277420] 11 M ar 19921 [ 4] CA V ol 98: 172944a1 [ 5] L iehr H1 et al1 A rch1 B1 Ce ll Pathol1 1978, 26: 3311 [ 6] 中来福, 张瑾岗, 张福勤, 等 1 四氯化碳致大鼠肝损伤的
不同粒径范围的三七对提取次数三七总皂苷得 率影响较小, 在选择的 8-12、12-16、16-24、24-40目 粒径范围内三七总皂苷得率为 88 mg / g生药左右, 考虑粉碎困难、节能降耗等因素, 从生产的综合效益 出发, 选择药材粒径达到 8目即可。
由于各因素中只有提取次数对三七总皂苷得率 有显著性影响, 因此提取次数选择 3次, 乙醇浓度、 乙醇用量、提取时间因素影响较小, 故最终选择工艺 条件为 10倍量 70% 乙醇提取 3次, 每次 115 h, 正交 验证结果三七总皂苷得率达到 85174 m g / g生药, 提 取率 > 96% , 提取相当完全。本文比较全面的考察 了各种影响三七总皂苷提取率的因素, 取得了令人 满意的结果, 且本工艺简便易行, 得率较高, 适用于 大生产。
及不同炮制品的水提物对四氯化碳诱导的急性肝损
伤小鼠血清 ALT 升高有明显降低作用, 其中盐泽泻
水提物还能降低肝损伤小鼠血清 AST 活性。
表2
泽泻生品不同炮制品对小鼠四氯化碳
急性肝损伤模型的保护作用 ( V ? S)
组别
剂量 ( g /kg)
A LT( U /L)
A ST ( U /L)
正常对照组
K3
651 983 681 900 771 000 681243
极差
41 690 11 553 231 840 21530
T ab 4
Analysis of var ian ce
因素
偏差平方和 自由度 F 比 F 临界值 显著性
乙醇浓度 331 092
乙醇用量 41 734
提取次数 10511 187
降低生产成本, 本文在考察提取溶媒、粒径对三七总
皂苷的得率影响的前提下, 采用正交设计优化三七 总皂苷提取工艺。
1 仪器与试剂
三七药材购自云南文山特安呐药业三七产业股
份有限责任公司; UV-3000紫外分光光度计; 人参皂
苷 Re对照品 ( 中国药品生物制品检定所 ) ; LGO15-
Ò型冷冻干燥器 ( 军事医学科学院实验仪器厂 ) 。
剂, 加 入 012 m l 5% 香兰 素-冰醋 酸 溶液 ( 新 鲜配 制 ) , 018 m l高氯酸, 60e 水 浴 15 m in, 流水冷 却 2
m in, 精密加入 5 m l冰醋酸, 匀均于 550 nm 测得吸
光度。取适量标准品, 按上法制作, 制备标准曲线, 计算样品的含量。
212 工艺筛选 为了全面考察影响三七总皂苷提
0
371 73
上述结果表明: 加入乙醇后, 总皂苷的提取效率 明显提高, 但 30% 乙醇和 70% 乙醇的提取效率差异 不大, 故正交设计中将乙醇浓度设置成 30% 、50% 、 70% 三个水平。 21212 粒径考察: 由于药材的颗粒粒径与有效成
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分的溶出效果之间有着密切关系, 因此我们选择 8-
取率的因素, 本文从提取溶媒, 三七粒径考察出发, 并采用正交试验法优化提取工艺。
21211 提取溶媒考察: 为了考察水提与醇提的效
率, 并为正交设计乙醇水平设置提供初步依据, 用经 粉碎过 8 目筛 的三七 粗粉, 分 别用 水、30% 乙醇、
70% 乙醇提取, 浓缩至一定体积, 冷冻干燥, 测定粉
12目, 12-16目, 16-24 目, 24-40目的 4 种粒径范围
的药材颗粒, 选用 10倍量的 70% 乙醇提取 3次, 每
次 2 h为提取条件, 分别进行提取, 减压浓缩至一定
体积, 冷冻干燥, 平 行做 3次实验。测 定总皂苷含
量, 选择合适粒径的药材颗粒进行下步工艺, 结果见
T ab 2。
2 方法
211 三七总皂苷含量测定方法 标准品的配制:
精密称取标准品 R e 610 mg 左右, 用甲醇定容至 10 m l。样品的配制: 称取约 20 mg 样品, 甲 醇定容至
10 m ,l 经 0145 mm 膜过滤, 弃初滤液, 收集续滤液。
取对照品溶液两份各取 100 m ,l 常温下挥干溶
盐泽泻水提物组 20 119157 ? 281 12* * 2371 33 ? 38159*
麸泽泻水提物组 20 130177 ? 321 86*
2481 72 ? 36161
3 讨论 泽泻作为传统的利水药, 在临床上治疗肝湿症
较多, 近来重剂量泽泻治疗肝炎或由此引起的肝腹 水、肝硬化也取得较好的疗效。日本及韩国学者研 究表明 , 13、42 其保肝作用的活性 成分为泽泻醇类成 分, 而此类成分大多数难溶或微溶于水。本实验结 果表明, 生泽泻及各炮制品均能明显对抗小鼠急性 肝损伤, 与文献研究一致, 但盐泽泻水提物保肝作用 从降 ALT、AST 酶来看要优于生泽泻及麸泽泻, 说明 泽泻在经过盐制后能增强保肝降酶的作用, 提示泽 泻中极性偏小的 ( 泽泻醇类 ) 保肝成分在盐制后增 强了其水溶性, 水煎煮即可将有效成分提取出, 这有 利于入汤药时的临床应用。结果提示临床泽泻片用
T ab 3 O r thogonal experimen tal design and resu lts
试验号
乙醇浓度 (A)
乙醇用量 (B)
提取次数 ( C)
提取时间 (D)
PNS (m g/ g 生药 )
1
70
7
1
1
5 31 2 2
2
70
10
2
115 79119
3
70
13
3
2
7 91 6 1
4
50
7
2
2
7 41 0 1
5
50
10
3
1
7 61 4 9
6
50
13
1
115 55115
7
30
7
3
115 74190
8
30
10
1
2
5 11 1 1
9
30
13
2
1
7 11 9 4
K1
701 673 671 377 531 160 671217
K2
681 550 681 930 751 047 691747
提取时间 91 715
误差
41 73
2
61990 191000 > 01 05
2
11000 191000 > 01 05
2 2221050 991000 < 01 01
2
21052 191000 > 01 05
2
中药材第 29卷第 6期 2006年 6月
直观分析结果表明, 提取影响因素主次顺序为: C > A > D > B。方差分析结果表明: C 因素, 即提取 次数的差别有显著性差异 ( P < 0101 ), 故 C 因素水 平 选 择 提 取 3 次。 因 此 确 定 提 取 最 佳 工 艺 为 A 1 B2 C3 D2, 即 10倍量 70% 乙醇提取 3次, 每次 115 h。 21214 提取正交验证试验: 为了考查所选择最佳 工艺的稳 定性, 需对其 进行 验证, 条件为 10 倍量 70% 乙醇提取 3次, 每次 115 h, 平 行做 3 次实验。 所得总皂苷为 85174 ? 3116 m g / g生药, 说明所选提 取工艺条件稳定。 3 讨论