ISO4832大肠菌群和粪大肠菌群测定

BS ISO 4832:2006食品和动物饲料的微生物学大肠菌群计数水

平法--菌落计数技术

序

ISO是国际标准的全球性组织。准备国际标准这项工作通常由ISO技术联盟来完成。每一个团体成员负责各自的学科。与ISO有合作的国际性机构、政府与非政府机构，也有参与这项工作。ISO与国际电子组织（IEC）在电子标准化方面有着密切的合作关系。

国际性标准的起草原则在《ISO/IEC 细则》第三部分中有给出。

起草的国际性标准被技术委员会采用是通过全体成员投票决定的。发布一个国际性标准需要至少75％成员投赞成票。国际性标准ISO 4831 由ISO/IEC 34技术委员会（农产品，小组委员会SC9，微生物）起草的。

这个第三版的ISO 4832取代了ISO 4832:1991和ISO 5541-1:1986。主要的修改内容如下：

——在35℃下培养这个可选择的程序已被删除（见4.2）；

——引入使用亮绿乳糖胆汁培养基做确证实验（见5.4和9.4）。

考虑到本标准的上一个版本已被修改，已确认ISO 4832:1991的选择性方法不受影响。

绪论

由于食品与饲料的种类繁多，这个标准不一定适合某一类产品。在这种情况下，可使用不同的方法，但必须有绝对的技术上的理由。否则，要尽可能地完全遵循本标准。

当这个标准下一次回顾时，将会对这个标准的使用做数据统计，特殊产品偏离本标准使用也会做相关统计。

同一类产品的检测方法也有可能不统一，国际性标准和/或国家标准也不一定完全与本标准相符合。希望相关标准做回顾时，会遵循本标准做出相关的修改，以使只有已被证明的技术上的理由才能与本标准偏离。

本标准在技术上的描述没有ISO 4831那样精确，但大部分的微生物检测能根据本标准开展，每克或每毫升样品中含大数量的大肠菌群可使用本标准。此外，

由于另外两个标准中对“大肠菌群”的定义也不一致，因此检测出的微生物含量也不一定一致。

针对一些特殊的产品，方法的选择可参照相关的国际性标准。

基于一个可实行的方法的目的，在条况3中给出的“大肠菌群”的定义并作为操作程序的基础，并不需要与其它相关文献保持一致。在其它文献中定义的“大肠菌群”，部分通过发酵管检测并不能产气。因此本标准中的检测方法并不能用于所有其它文献中提及的“大肠菌群”。

1 范围

本标准给出常规的方法检测及计数大肠菌群。它可适用于：

——人类的食物及动物饲料；

——食品生产和食品处理领域的环境样品。

通过计数固体培养基培养后的菌落数，温度控制在30℃或37℃。

注意：必须注意使用的温度，牛奶或奶制品的培养温度为30℃。

当估计每克或每毫升样品的数量超过100时，可使用本标准检测。

2 参考文献

本标准的参考文献如下。已过期的文献，后来改善或修订的，部分这种文献已经不适用。未过期的文献，最新版本都是适用的。

ISO 6887（所有部分），食物与动物饲料原料微生物学——样品准备原则，微生物检测样品原液及十倍法稀释——第一部分：样品原液和十倍法稀释的指导准则。

ISO 7218，食物与动物饲料原料微生物学——微生物检验指导准则。

ISO 8261，牛奶和奶制品——样品原液和十倍法稀释的指导准则。

ISO/TS 11133-1，食物与动物饲料原料微生物学——准备和配制培养基的指导方针——第一部分：实验室中培养基的配制及质控。

ISO/TS 11133-2:2003，食物与动物饲料原料微生物学——准备和配制培养基的指导方针——第二部分：培养基配制的指导方针。

3 术语和定义

以下术语和定义适用于本标准。

3.1 大肠菌群

在特殊的温度下（例如30℃或37℃），按照本标准的操作，在结晶紫中性红胆汁乳糖培养基上的典型菌落，在确证实验中能发酵乳糖产气的一类细菌。

4 原理

4.1 准备两个固体选择性培养基，接种一定量的液体样品原液或其它类型样品的悬液。在相同的条件下，接种其它稀释梯度，每梯度两个平板。

4.2 平板置于30℃或37℃培养24h。

4.3 计数平板上的典型菌落数，如必要，选取一定量的菌落做乳糖发酵实验。

4.4 选择计数的平板上的典型菌落数可给出每克或每毫升样品的大肠菌群数量。

5 培养基与稀释液

5.1 概述

参照ISO 7218，ISO/TS 11133-1和ISO/TS 11133-2中准备和配制培养基，及培养基性能测试部分。

5.2 稀释液

参照ISO 6887（相关部分），ISO 8261 或相关的国际性标准。

5.3 固体选择性培养基：结晶紫中性红胆汁乳糖（VRBL）培养基

5.3.1 成分

5.3.2 准备

以下操作程序是为了保存该选择性培养基并维持性状。

将所有成分或干粉培养基溶解至水中，静置数分钟。调整pH值，使之在煮沸后为7.4±0.2，在25℃下。加热至煮沸，并使它沸腾数次。

维持沸腾2min。然后在水浴锅中冷却至44℃～47℃。

为了避免过分加热，不能加热过长时间或反复加热。因此，不能放于灭菌锅中灭菌，并在使用前检查无菌状况。

在准备好后4h内使用。

5.3.3 培养基质量控制

参考ISO/TS 11133-1和ISO/TS 11133-2:2003，表B1。

5.4 确证培养基：亮绿乳糖胆汁肉汤

5.4.1 成分

5.4.2 准备

溶解所有成分或培养基干粉于水中，如需要可加热。

如需要，可在25℃调整pH值至7.2±0.2。

分装培养基至规格为16mm×160mm试管中，每管10ml。

121℃灭菌15min。必须保证灭菌后试管中不产生气泡。

5.4.3 培养基质量控制

参考ISO/TS 11133-1和ISO/TS 11133-2:2003，表B1。

6 仪器设备及玻璃器皿

一般的微生物实验室设备（参照ISO 7218），特别的，增加以下几项。6.1 干热灭菌和湿热灭菌设备

6.2 培养箱，可恒温35℃±1℃或37℃±1℃

6.3 平皿，塑料或玻璃的，直径90mm～10mm

6.4 移液器，1ml

6.5 水浴锅，能恒温至44℃～47℃或100℃。

6.6 菌落计数器

6.7试管，规格16mm×160mm