核酸检测实验室的规范化管理.ppt
合集下载
核酸检测实验室的规范化管理
2. 标本制备区
▪ 下述操作在该区进行： 标本保存、核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩 增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
▪ 为避免样本间的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反 应混合液的反应管。
▪ 对具有潜在传染危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭 活程序。
▪ 样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取 方法。
（六）靶核酸的逆转录(RT)和扩增
1．靶RNA的逆转录 下述因素通常影响cDNA合成的效率：(1)逆转录效率的降低或
完样错误等；(2)用于逆转录的标本中存在逆转录或Taq酶的抑制 物(如酚、氯仿、血红素等)；(3)RNA酶的存在导致RNA的降解。
（九）质量控制
（一）标本的采集
常用于基因扩增检测的临床标本包括EDTA或构橼酸钠抗凝全血 或骨髓、血清或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等。采血液等样 本时，应使用一次性密闭容器，如真空采血管。当使用非密闭采 样系统时，如尿、分泌物和骨髓的采样，必须注意防止来自采样 者的皮屑或分泌物的污染。采样时必须戴一次性手套。
（三）各区操作注意事项
1. 试剂贮存和准备区
▪ 下述操作在该区进行： 储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
▪ 在本区的实验操作过程中，必须戴手套并经常更换。 ▪ 操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。 ▪ 严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。 ▪ 工作结束后必须立即对工作区进行清洁。 ▪ 实验室及其设备的使用必须有日常记录。
3．进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即： 试剂贮存和准备区 标本制备区 扩增反应混合物配制和扩增 区 扩增产物分析区。
4．不同工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。工作人员 离开各工作区域时，不得将工作服带出。
新冠核酸检测实验室质量控制和生物安全培训课件ppt
）
4
二、实验室质量控制
实验室要求
质量控制
（一）实验室要求
1、实验室基本要求：
➢符合《病原微生物实验室生物安全管理条例 ➢具备经过卫生健康行政部门审核备案的生物安全二级及 以上实验室条件 ➢ 具备基因扩增检验实验室条件。
（一）实验室要求—合理分区
原则上设4个区域，各区域在物理空间上必须是完全相互独立，无论是在空间 上还是在使用中，应当始终处于完全分隔状态，不能有空气的直接相通。
保持实验室空间密闭，避免污染物扩散。 立即使用润湿有0.55%含氯消毒剂的毛巾覆盖污染区。 必要时（如大量溢撒时）可用过氧乙酸加热熏蒸实验室，剂量为
2g/m³，熏蒸过夜； 或20g/L 过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾，用量8ml/m³，作用
1~2 小时； 或用高锰酸钾-甲醛熏蒸：高锰酸钾8g/m³，放入耐热耐腐蚀容器
吸取标本
标本的灭活（适用时） 核酸提取及其加入至扩增
提取核酸
反应管（板）等
核酸加样
生物安全:
• 人员防护按照生物安全三 级 实验室防护水平
• 在生物安全二级实验室开展， 双人操作
• 吸取样本在安全柜内操作 • 核酸加样在安全柜内操作 • 离开安全柜更换手套
实验结束后处理： • 消毒实验台
面 和仪器表 面 • 更换手套 • 医疗废物即清
（二）质量控制
6、结果报告
✓ 隔离点隔离人员第14天解除隔离前，双试剂检测，省新冠病毒核酸检测 信息系统录入两条检测记录
（二）质量控制
6、结果报告
（二）质量控制
6、结果报告
三. 实验室生物安全
实验室检测 安全管理
实验室医疗 废物管理
实验室污染 处理
实验室生物安全
4
二、实验室质量控制
实验室要求
质量控制
（一）实验室要求
1、实验室基本要求：
➢符合《病原微生物实验室生物安全管理条例 ➢具备经过卫生健康行政部门审核备案的生物安全二级及 以上实验室条件 ➢ 具备基因扩增检验实验室条件。
（一）实验室要求—合理分区
原则上设4个区域，各区域在物理空间上必须是完全相互独立，无论是在空间 上还是在使用中，应当始终处于完全分隔状态，不能有空气的直接相通。
保持实验室空间密闭，避免污染物扩散。 立即使用润湿有0.55%含氯消毒剂的毛巾覆盖污染区。 必要时（如大量溢撒时）可用过氧乙酸加热熏蒸实验室，剂量为
2g/m³，熏蒸过夜； 或20g/L 过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾，用量8ml/m³，作用
1~2 小时； 或用高锰酸钾-甲醛熏蒸：高锰酸钾8g/m³，放入耐热耐腐蚀容器
吸取标本
标本的灭活（适用时） 核酸提取及其加入至扩增
提取核酸
反应管（板）等
核酸加样
生物安全:
• 人员防护按照生物安全三 级 实验室防护水平
• 在生物安全二级实验室开展， 双人操作
• 吸取样本在安全柜内操作 • 核酸加样在安全柜内操作 • 离开安全柜更换手套
实验结束后处理： • 消毒实验台
面 和仪器表 面 • 更换手套 • 医疗废物即清
（二）质量控制
6、结果报告
✓ 隔离点隔离人员第14天解除隔离前，双试剂检测，省新冠病毒核酸检测 信息系统录入两条检测记录
（二）质量控制
6、结果报告
（二）质量控制
6、结果报告
三. 实验室生物安全
实验室检测 安全管理
实验室医疗 废物管理
实验室污染 处理
实验室生物安全
核酸检测PPT
二、标本采集基本要求
（二）采样点设置： 1. 采样点设置应当遵循安全、科学、便民的原则。 2.采样点应当为独立空间，应划分出清洁区和污染 区，应具备通风条件，应具备手卫生条件。 3.需设立清晰的指引标识，明确采样流程和注意事 项。具备独立的等候区，尽可能保证人员单向流动， 落实“1米线”间隔要求，严控人员密度。
接收标本
在生物安全柜内 对标本进行核对
对标本进行灭 活处理
试剂准备
标本前处理
核酸提取
核酸扩增
结果分析及报告
应建立可疑标本和 阳性标本复检流程
18ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（四）实验室检测
注意事项
• 应当选择国家药品监督管理部门批准的试剂，并在选 择标本保存液和核酸提取试剂时，使用试剂盒说明书 上建议的配套试剂。
• 有些核酸提取试剂（如磁珠法或者一步法），容易受 到胍盐或保存液中特殊成分的影响，特别是一步法提 取应使用试剂厂家配套的标本保存液。
14
（一）实验室资质要求
应当符合《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院 令第424号）和《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办 法》（卫办医政发〔2010〕194号）有关规定 具备经过卫生健康行政部门审核备案的生物安全二级及以上 实验室条件，以及临床基因扩增检验实验室条件。
独立设置的医学检验实验室还应当符合《医学检验实验室基 本标准（试行）》《医学检验实验室管理规范（试行）》等 要求。
9
二、标本采集基本要求
（五）标本种类：多为呼吸道标本 1. 上呼吸道标本，如口咽拭子、鼻咽拭子等。 2.下呼吸道标本，如呼吸道吸取物、支气管灌洗液、肺泡灌 洗液、深咳痰液等。 3. 重症病例优选下呼吸道标本。 4. 根据临床需要可留取便标本。
核酸检测采样点设置及加强采样质量管理PPT学习培训课件
鼻咽拭子采样
采样人员手执拭子贴鼻孔进入， 沿下鼻道的底部向后缓缓深入，由于 鼻道呈弧形，不可用力过猛，以免发 生外伤出血。待拭子顶端到达鼻咽腔 后壁时，轻轻旋转一周（如遇反射性 咳嗽,应停留片刻），然后缓缓取出拭 子，将拭子头浸入含2~3ml病毒保存液 的管中。
采样人员个人防护
1
个人防护包括，正确穿脱个人防护装备（包括:医 用防护口罩、乳胶手套、防护面屏或护目镜、隔 离衣或防护服、工作帽），规范进行手卫生。
确保采样人员符合资质
各地要严格核酸采样人员的资质管理，在现有医务人员基础上，将民营 医院、零售药店、学校医务室以及企事业单位中具有卫生相关专业技术职业 资格的人员纳入采样人员队伍，经卫生健康行政部门组织规范培训并考核合 格后，方可从事核酸采样工作。采样人员的调配使用尽量不挤占正常医疗资 源，以保障人民群众看病就医需求。
规范开展核酸采样培训
一
各地卫生健康行政部门要按照《医疗机构新型冠状病毒核 酸检测工作手册（试行第二版）》和《新冠病毒核酸采样 培训方案》（见附件），规范做好核酸采样的组织、培训 、考核等相关工作。
二
通过制作培训视频、组织实操培训等，使采样人员熟练掌 握口咽拭子、鼻咽拭子等常用采集方法，正确穿脱使用个 人防护用品,落实各项感染控制措施。不得通过视频培训 取代实操知核酸采样点的查询途径，便于群众及时获得相关信息， 就近就便采样。通过电子地图、公共服务小程序、客户端等方式，向社会公布 核酸采样点信息，包括采样点地址、工作时间等，并及时更新维护；有条件的 地区，鼓励实时显示各采样点的排队等候状况。要合理安排采样服务时间，适 应不同人群的需求，灵活错时提供采样服务。对上班上学人员，可在早晨、傍 晚等时间安排集中采样，社区居民等其他人员可在工作时间采样。
【专家讲座】核酸检测实验室建立与应用PPT课件
6
5
7
1
2/8
25
0/5
0
2019/9/30
20
应用SAS9.0软件PARnaOlyBsiIsTo分f Pa析ram结eter果Estimates
ChiParameter
ChiSq
DF Estimate
Standard 95% Confidence
Error
Limits
Square Pr >
Intercept 0.0028 log10(Dose) 1 0.0011
2019/9/30
12
标准操作规程(SOP)的编写
核酸标本离心交接操作规程 核酸标本提取及汇集操作规程(科华) 核酸标本扩增检测操作规程（科华） 核酸标本全自动检测分析系统操作规程（CHIRON） 核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件） 核酸标本检测复检操作规程 生物安全柜标准操作规程 可移动紫外线灯标准操作规程 低温高速离心机标准操作规程 ABI 7300型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程
内标的作用 –质控整个反应。 –提示假阴性检测结果。 –监控反应的外部条件 –内标浓度要合适 –保持适度的内标失控.(<0.2%)
2019/9/30
18
核酸试剂灵敏度评估
概率单位回归分析 (PROBIT） 用于描述剂量-反应或不同因素间的剂量-
反应比较，反应结果应该是以二分类形式 表达的。 概率单位的回归方程为：
PROBIT Pi=A+BXi
2019/9/30
19
用国际标准品稀释成不同浓度评估血液HBV 核酸筛查方法，结果如下。请计算95%的检 出限量及可信范围CI
序号 浓度 （IU/ml） 阳性数/重复数 概率
核酸检测实验室的规范化管理
生物安全操作规范教育
教育实验室人员如何正确操作实验设备、使用实验试剂和处置实验废弃物，以 确保生物安全。
实验室人员的应急处理能力培训
应急预案培训
让实验室人员了解应急预案的内容、流程和操作规范，以便在紧急情况下能够迅 速响应。
应急处理能力评估
定期对实验室人员的应急处理能力进行评估和测试，以确保其能够在紧急情况下 胜任工作。
实验室的生物安全事故应急预案
一旦发生生物安全事故，实验室应立即启动应急预案， 进行初步处置，同时向有关部门报告。
在处理生物安全事故时，实验室应严格遵守相关法律法 规和标准要求，确保处置过程合法、科学、规范。
实验室应建立完善的生物安全事故应急预案，明确应急 组织、通讯联络、应急物资准备和应急处置等方面的要 求。
实验室的仪器设备故障应对措施
实验室应定期对仪器设备进行 检查和维护，确保设备正常运 行。
一旦仪器设备出现故障，实验 室应立即停用设备，并及时联 系维修人员进行维修。
在维修期间，实验室应采用备 用设备或者手动操作等方式继 续进行检测工作，保证检测工 作的连续性和稳定性。
实验室应建立设备故障应急预 案，对常见故障进行预防和应 对措施的培训，提高应对能力 。
风。
实验室设施
配备专业的实验室设备，如核酸 提取仪、PCR仪、电泳仪等，以 及相应的安全设施，如生物安全
柜、防护眼镜等。
实验室环境
定期监测实验室环境的各项指标 ，如温度、湿度、空气质量等，
确保符合实验要求。
实验室的软件系统建设
实验室管理体系
建立完善的实验室管理体系， 包括实验室管理规定、实验室 操作规程等，确保实验室各项
03
人员疲劳
某实验室在疫情防控期间承担了大量的核酸检测任务，导致人员疲劳，
教育实验室人员如何正确操作实验设备、使用实验试剂和处置实验废弃物，以 确保生物安全。
实验室人员的应急处理能力培训
应急预案培训
让实验室人员了解应急预案的内容、流程和操作规范，以便在紧急情况下能够迅 速响应。
应急处理能力评估
定期对实验室人员的应急处理能力进行评估和测试，以确保其能够在紧急情况下 胜任工作。
实验室的生物安全事故应急预案
一旦发生生物安全事故，实验室应立即启动应急预案， 进行初步处置，同时向有关部门报告。
在处理生物安全事故时，实验室应严格遵守相关法律法 规和标准要求，确保处置过程合法、科学、规范。
实验室应建立完善的生物安全事故应急预案，明确应急 组织、通讯联络、应急物资准备和应急处置等方面的要 求。
实验室的仪器设备故障应对措施
实验室应定期对仪器设备进行 检查和维护，确保设备正常运 行。
一旦仪器设备出现故障，实验 室应立即停用设备，并及时联 系维修人员进行维修。
在维修期间，实验室应采用备 用设备或者手动操作等方式继 续进行检测工作，保证检测工 作的连续性和稳定性。
实验室应建立设备故障应急预 案，对常见故障进行预防和应 对措施的培训，提高应对能力 。
风。
实验室设施
配备专业的实验室设备，如核酸 提取仪、PCR仪、电泳仪等，以 及相应的安全设施，如生物安全
柜、防护眼镜等。
实验室环境
定期监测实验室环境的各项指标 ，如温度、湿度、空气质量等，
确保符合实验要求。
实验室的软件系统建设
实验室管理体系
建立完善的实验室管理体系， 包括实验室管理规定、实验室 操作规程等，确保实验室各项
03
人员疲劳
某实验室在疫情防控期间承担了大量的核酸检测任务，导致人员疲劳，
核酸检测实验室的规范化管理
2
核酸检测实验室在疫情防控中起到关键作用
3
规范化管理能够提高实验室检测的准确性和可 靠性
核酸检测实验室的重要性
对疫情的防控和治 疗具有重要影响
对实验室工作人员 的安全具有重要影 响
对社会和经济的稳 定发展具有重要意 义
规范化管理的意义
提高核酸检测实验室的检测准确性和可靠性 提高实验室的工作效率和管理水平
的时间。
03
降低风险
规范化管理使得某省核酸检测实验室降低了操作风险和感染风险，保
障了实验室人员和公众的安全。
其他地区核酸检测实验室规范化管理的经验分享
建立专业的管理团队
建立专业的管理团队，包括实验室技术和管理人员，制 定科学的管理制度和工作流程，确保核酸检测实验室规 范化管理。
加强监督检查
加强核酸检测实验室的监督检查，发现问题及时整改， 确保实验室规范化管理的有效实施。
加强实验室人员的培训和教育，提高其技能 水平和质量意识，以促进实验室质量管理体 系的持续改进。
信息反馈机制
标准化和规范化
建立信息反馈机制，鼓励实验室人员提出改 进建议和意见，不断完善实验室质量管理体 系。
积极采用国际和国内先进的检测标准和技术 ，推动实验室质量管理体系的标准化和规范 化发展。
04
核酸检测实验室的风险管理
和分析，提高管理效率。
提升核酸检测实验室规范化管理水平的建议
加强人员培训
提高实验室管理人员和技术人员的专业素质，加强人员培训和考 核。
规范操作流程
建立标准化的核酸检测操作流程，严格按照规范进行操作，确保 检测结果的准确性。
加强监管力度
政府应加强对核酸检测实验室的监管力度，建立问责机制，对违 规行为进行严厉处罚。
核酸检测PPT
接触患者血液、体液、分泌物或排泄物,戴双层乳胶手套;手套被污染时,及时更换外层乳胶手套。
配置及防护要求四
每采一个人应当进行严格手消毒或更换手套。
标本保存
标本应尽快检测。能在24小时内检测的标本可置于4C保存; 24小时内无法检测的标本则应置于-70C或以下保存(如无70它保存条件,则 于-20C冰箱暂存)。应当设立专库或专柜单独保存标本。标本检测前及运送期间避免反复冻融。
应建立可疑标本和阳 性标本复检流程
核酸提取 核酸扩增
在生物安全柜内对 标本进行灭
标本前处理
结果分析及报告
第三部分 可能变量人员标本仪器
可能变量人员标本仪器
新型冠状病毒核酸检测工作要点
分析前
标本正确采集; 合适的运输条件; 适当的保存温度
分析中
性能验证/确认、室 内质控、
室间质评。
分析后
报告审核、 发放、
标本采集操作流程以及注意事项,确保做好标
3
-本信息记录,确保标本质量符合要求、确保标 4
-本及相关信息可追溯。
5
关键的技术本身是常量
新型冠状病毒核酸检测工作要点
检 测 人 员
专业 资质
应具备相关专业大专以上学历或具有中 级及以上专业技术职务任职资格。
工作 经验
同时具有2年以上的实验室工作经历和基 因检验相关培训合格证书。
新型冠状病毒核酸检测工作要点
内容一
医疗机构应当在卫生健康 行政部门门统筹下,做好 标本采集、核酸检测、检 测报告的信息对接工作。
内容二
建立统一的信息采集扫码 程序，信息应至少包括姓 名、性别、年龄、身份证 号、联系电话。
内容三
做到标本采集的个人信息 与医疗机构信息系统顺利 对接,各医疗机构间应做 到信息互通、互采、互认。
2024年度实验室规范化管理PPT课件
13
设备使用、维护与保养规定
使用规定
使用前需进行培训，了解设备性能、操作方法及安全注意事项；遵守操作规程， 不得超负荷使用或违规操作。
维护与保养
定期进行设备维护和保养，包括清洁设备表面、检查零部件磨损情况、更换易损 件等；建立维护保养记录，记录维护时间、内容、结果等信息。
2024/3/23
14
设备维修、报废与更新流程
报告编制
根据检测结果编制检测报告，报告内容应包括样品信息、检测结果、 结论等，确保报告的规范性和准确性。
2024/3/23
20
样品保密与知识产权保护
2024/3/23
保密措施
对涉及保密要求的样品和相关信息采 取严格的保密措施，如加密处理、专 人管理等，确保样品信息的保密性。
知识产权保护
尊重和保护样品的知识产权，如专利 权、商标权等，避免侵权行为的发生 。
8
危险化学品的安全管理
危险化学品的分类与标识
废弃危险化学品的处理
按照危险特性对化学品进行分类，并 设置明显的安全标识。
制定专门的废弃危险化学品处理流程 ，确保废弃物得到妥善处理。
危险化学品的储存与使用
建立严格的储存和使用制度，确保危 险化学品的安全存放和合理使用。
2024/3/23
9
实验室废弃物处理与环保要求
留样规定
3
根据需要设定留样期限和留样数量，确保在必要 时可对留样进行复检或追溯，留样应妥善保存在 指定区域。
2024/3/23
19
样品检测、记录与报告流程
检测流程
建立规范的检测流程，包括检测方法、操作步骤、注意事项等，确 保检测结果的准确性和可靠性。
记录管理
对检测过程进行详细记录，包括检测日期、操作人员、使用仪器、 检测结果等，确保数据的真实性和可追溯性。
设备使用、维护与保养规定
使用规定
使用前需进行培训，了解设备性能、操作方法及安全注意事项；遵守操作规程， 不得超负荷使用或违规操作。
维护与保养
定期进行设备维护和保养，包括清洁设备表面、检查零部件磨损情况、更换易损 件等；建立维护保养记录，记录维护时间、内容、结果等信息。
2024/3/23
14
设备维修、报废与更新流程
报告编制
根据检测结果编制检测报告，报告内容应包括样品信息、检测结果、 结论等，确保报告的规范性和准确性。
2024/3/23
20
样品保密与知识产权保护
2024/3/23
保密措施
对涉及保密要求的样品和相关信息采 取严格的保密措施，如加密处理、专 人管理等，确保样品信息的保密性。
知识产权保护
尊重和保护样品的知识产权，如专利 权、商标权等，避免侵权行为的发生 。
8
危险化学品的安全管理
危险化学品的分类与标识
废弃危险化学品的处理
按照危险特性对化学品进行分类，并 设置明显的安全标识。
制定专门的废弃危险化学品处理流程 ，确保废弃物得到妥善处理。
危险化学品的储存与使用
建立严格的储存和使用制度，确保危 险化学品的安全存放和合理使用。
2024/3/23
9
实验室废弃物处理与环保要求
留样规定
3
根据需要设定留样期限和留样数量，确保在必要 时可对留样进行复检或追溯，留样应妥善保存在 指定区域。
2024/3/23
19
样品检测、记录与报告流程
检测流程
建立规范的检测流程，包括检测方法、操作步骤、注意事项等，确 保检测结果的准确性和可靠性。
记录管理
对检测过程进行详细记录，包括检测日期、操作人员、使用仪器、 检测结果等，确保数据的真实性和可追溯性。
核酸检测实验室生物安全要求(新冠病毒核酸检测专题培训课件)
一次性防护服、医用防护口罩（N95）、护目镜/面屏、一次性帽子、 双层手套、鞋/靴套、
一级生物安全防护
医用外科口罩、乳胶手套、工作服，可戴医用防护帽
标本 运送人员
口罩气密性测试
PPCAR实R验T室 T检H测R安E全E
医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册
基本要求
• 标本灭活及检测应当在生物安全二级实验室进行 • 同时采用生物安全三级实验室的个人防护 • 制定实验室生物安全体系文件（包括管理手册、程序文件、作业指导书、记录）
压力排风系统
风机
生物安全柜 摆放位置
气流的完整性容易受人员走动、窗 户的开关、门的开启和关闭、空调 运行等因素的影响。为避免上述因 素的干扰，生物安全柜应放在远离 人员活动、物品流动以及可能会扰 乱气流的地方。在安全柜的后面、 左右两侧面各留30 cm的空间，以利 于安全柜的维护。上端应留30～35 cnl空间，以便准确测量空气通过排 风过滤器的速度及排风过滤器的更 换。
核酸提取和检测 安全要求
在生物安全柜内操作
实验结束后安全要求
实验室空气消毒
紫外消毒30分钟或紫 外消毒机照射消毒1小 时。必要时可采用核 酸清除剂等试剂清除
实验室残留核酸。
工作台面消毒
每天实验后，使用0.2% 含氯消毒剂或75%酒精 进行台面、地面消毒
生物安全柜消毒
医疗废物垃圾袋包扎 后用0.2%含有效氯或 75%酒精喷洒外表面。 试管架、实验台面、 移液器等用75%酒精擦 拭。关闭生物安全柜， 紫外灯消毒30分钟。
手部 防护
足部 防护
防护 面屏
手消毒
呼吸
医用垃
防护
圾袋
13
14
l 呼吸道防护是核心！ Ø 穿戴时要先戴口罩再戴帽子，才能保证最后脱口罩。注意摘除口罩的场 所是否安全！
一级生物安全防护
医用外科口罩、乳胶手套、工作服，可戴医用防护帽
标本 运送人员
口罩气密性测试
PPCAR实R验T室 T检H测R安E全E
医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册
基本要求
• 标本灭活及检测应当在生物安全二级实验室进行 • 同时采用生物安全三级实验室的个人防护 • 制定实验室生物安全体系文件（包括管理手册、程序文件、作业指导书、记录）
压力排风系统
风机
生物安全柜 摆放位置
气流的完整性容易受人员走动、窗 户的开关、门的开启和关闭、空调 运行等因素的影响。为避免上述因 素的干扰，生物安全柜应放在远离 人员活动、物品流动以及可能会扰 乱气流的地方。在安全柜的后面、 左右两侧面各留30 cm的空间，以利 于安全柜的维护。上端应留30～35 cnl空间，以便准确测量空气通过排 风过滤器的速度及排风过滤器的更 换。
核酸提取和检测 安全要求
在生物安全柜内操作
实验结束后安全要求
实验室空气消毒
紫外消毒30分钟或紫 外消毒机照射消毒1小 时。必要时可采用核 酸清除剂等试剂清除
实验室残留核酸。
工作台面消毒
每天实验后，使用0.2% 含氯消毒剂或75%酒精 进行台面、地面消毒
生物安全柜消毒
医疗废物垃圾袋包扎 后用0.2%含有效氯或 75%酒精喷洒外表面。 试管架、实验台面、 移液器等用75%酒精擦 拭。关闭生物安全柜， 紫外灯消毒30分钟。
手部 防护
足部 防护
防护 面屏
手消毒
呼吸
医用垃
防护
圾袋
13
14
l 呼吸道防护是核心！ Ø 穿戴时要先戴口罩再戴帽子，才能保证最后脱口罩。注意摘除口罩的场 所是否安全！
实验室的规范化管理方案PPT课件
• 从事药品微生物试验工作的人员均要受到专业教育和培 训.并对试验人员的岗位及职责进行考核,后上岗.
21
试验人员的培训
岗前培训 上岗前必须接受工作所必需的培训如设备操作、微生物检 验技术和实验室生物安 全等方面的培训。
试验人员的继续教育计划。
22
人员培训
硬件培训 - 生物安全操作知识和消毒知识。 - 卫生要求。 - 洁净室的使用、保洁、洁净度检测。 - 设施、仪器及设备的使用等.
23
人员培训
软件培训 技能培训
实验室的质量目标、体系文件、计量知识、法律法规、 质量标准的查找与使用。 各种SOP的书写与掌握。 无菌操作技能、培养基配制、灭菌及验证、菌种的转 种、传代、保管，无菌检查法及微生物限度检查法。
24
管理人员的培训
- 微生物实验室管理人员包括工作人员和监督人员， 其专业技 能和经验水平应与他们的职责范围相符。
—新版GMP要求
11
取样
应按照经批准的操作规程取样，操作规程应详细阐述： 取样方法； 所用器具； 样品量； 分样的方法； 存放样品容器的类型和状态； 样品容器的标识； 取样注意事项 尤其是无菌或有害物料的取样以及防止取样过程中污 染和交叉污染的注意事项；
—新版GMP要求
12
取样
贮存条件 取样器具的清洁方法和贮存要求。 - 取样方法应科学、合理，以保证样品的代表性。 - 留样应能代表被取样批次的产品或物料，也可抽取其他样品 来监控生产过程中最重要的环节（如生产的开始或结束）。 - 样品的容器应贴有唯一性的标签标明内容物，注明样品名称、 批号、取样日期、取自哪一包装容器、取样人。 - 样品应按规定的贮存条件保存，成品的样品应按照注册批准 的成品贮存条件保存。
- 所有活动都必须文件化。
21
试验人员的培训
岗前培训 上岗前必须接受工作所必需的培训如设备操作、微生物检 验技术和实验室生物安 全等方面的培训。
试验人员的继续教育计划。
22
人员培训
硬件培训 - 生物安全操作知识和消毒知识。 - 卫生要求。 - 洁净室的使用、保洁、洁净度检测。 - 设施、仪器及设备的使用等.
23
人员培训
软件培训 技能培训
实验室的质量目标、体系文件、计量知识、法律法规、 质量标准的查找与使用。 各种SOP的书写与掌握。 无菌操作技能、培养基配制、灭菌及验证、菌种的转 种、传代、保管，无菌检查法及微生物限度检查法。
24
管理人员的培训
- 微生物实验室管理人员包括工作人员和监督人员， 其专业技 能和经验水平应与他们的职责范围相符。
—新版GMP要求
11
取样
应按照经批准的操作规程取样，操作规程应详细阐述： 取样方法； 所用器具； 样品量； 分样的方法； 存放样品容器的类型和状态； 样品容器的标识； 取样注意事项 尤其是无菌或有害物料的取样以及防止取样过程中污 染和交叉污染的注意事项；
—新版GMP要求
12
取样
贮存条件 取样器具的清洁方法和贮存要求。 - 取样方法应科学、合理，以保证样品的代表性。 - 留样应能代表被取样批次的产品或物料，也可抽取其他样品 来监控生产过程中最重要的环节（如生产的开始或结束）。 - 样品的容器应贴有唯一性的标签标明内容物，注明样品名称、 批号、取样日期、取自哪一包装容器、取样人。 - 样品应按规定的贮存条件保存，成品的样品应按照注册批准 的成品贮存条件保存。
- 所有活动都必须文件化。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
3．进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即： 试剂贮存和准备区 标本制备区 扩增反应混合物配制
和扩增区 扩增产物分析区。
4．不同工作区域使用不同的工作服 ( 例如不同的颜色 ) 。工作人 员离开各工作区域时，不得将工作服带出。
（二）工作区域仪器设备配臵标准
1．试剂贮存和准备区
2-8℃和-15℃冰箱；混匀器；微量加样器( 覆盖1--1000μ l) ； 移动紫外灯( 近工作台面) ；消耗品： 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头 (带滤芯) ； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品。
核酸检测实验室的规范化管理
一、规范化设臵及管理
( 一) 临床基因扩增检验实验室区域设臵原则
1．临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域： 试剂贮存和准备区；标本制备区； 扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区。 （如使用全自动分析仪，区域可适当合并）
2．各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、 物品混用。
? 当靶核酸为RN时A ，逆转录PCR测定失败的常见原因是标本 在运送前未经充分的稳定化处理及核酸提取试剂的 RN酶A 的 污染。故建议使用高质量的商品核酸提取试剂。
3. 扩增区
? 下述操作在该区进行：DN或A RN扩A 增。 ? 在巢式PCR测定中，通常第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢
式扩增由较高的危险性，第二次加样必须在本区内进行。 ? 不能从本区再进入任何“上游”区域，可降低本区的气压以避免
气溶胶从本区漏出。 ? 为避免气溶胶所致的污染，尽量减少在本区的走动。
面区域的可能性
二、质量保证
临床基因扩增检验实验室质量保证涉及到整个基因扩 增检验所有阶段，即测定分析前的标本采集处理、测定中 的核酸提取，扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。
（一）标本的采集 （二）标本的稳定化处理 （三）标本的运送 （四）标本的贮存 （五）标本的处理( 核酸提取) （六）靶核酸的逆转录CFIT)和扩增 （七）污染 （八）扩增产物的分析
4. 扩测定。
? 本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本
区的物品及工作服将扩增产物带出。
? 本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、
丙稀酰胺、甲醛或同位素等，应注意实验人员的安全防护。
? 本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前
（三）标本的运送
? 标本采集后必须尽快送至实验室。 ? 经过稳定化处理的标本可在常温下邮寄运送。 ? 用于RN检A 测的标本，如果未经稳定化处理，须速冻后，
放在干冰中运送。
（四）标本的贮存
? 临床体液标本如血清／血浆等可于 -70℃下长时间贮存。 ? 用于DN测A 定的已纯化核酸样本可在 10 mmo／l L Tris —
3. 扩增反应混合物配制和扩增区
核酸扩增仪；微量加样器( 覆盖1--1000μl) ； 可移动紫外灯( 近工作台面) ；消耗品（一次性手套、一次性吸水纸、 耐高压处理的离心管和加样器吸头( 带滤芯) ； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品.
4. 扩增产物分析区
基本仪器设备如下： 微量加样器( 覆盖1--1000μl) ； 可移动紫外灯；消耗品； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品。
? 玻璃器皿在使用前应高压处理。
? 临床用于RN（A 如HCVRN）A 扩增检测的血标本建议进行抗凝处理， 并尽快（3小时以内）分离血浆，以避免 RN的A 降解。如未作抗凝 处理，则抽血后，必须在 1小时内分离血清。
（二）标本的稳定化处理
? 用于DN扩A 增检测的标本，应及时送至实验室。
? 用 于 RNA测 定 的 标 本 应 进 行 稳 定 化 处 理 ， 异 硫 氰 酸 胍 盐 (Guanidinethiocyanate，CITC)可使DN酶A 和 RNA酶立即失活， 因此在采集标本时，可将标本材料如血清或血浆按 1：4的比例加 至含有5mo／l L GITC的试管中，从而使血清 ( 浆) 中的RN酶A 不可 逆失活。
2．标本制备区
1-8℃冰箱、- 20℃或- 80℃冰箱；高速台式冷冻离心机； 混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器 (覆盖1--1000μ l) ； 可移动紫外灯( 近工作台面) ；超净工作台；消耗品; 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头 (带滤芯) ； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品； 如需处理大分子DN，A 应备有超声波水浴仪。
2. 标本制备区
? 下述操作在该区进行： 标本保存、核酸（ RN、A DN）A 提取、贮存及其加入至扩
增反应管和测定RN时A cDN的A 合成。
? 为避免样本间的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反 应混合液的反应管。
? 对具有潜在传染危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭 活程序。
? 样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取 方法。
（九）质量控制
（一）标本的采集
? 常用于基因扩增检测的临床标本包括 EDTA或构橼酸钠抗凝全血或 骨髓、血清或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等。采血液等样本 时，应使用一次性密闭容器，如真空采血管。当使用非密闭采样 系统时，如尿、分泌物和骨髓的采样，必须注意防止来自采样者 的皮屑或分泌物的污染。采样时必须戴一次性手套。
1mmo／l L EDTA缓冲液 (pH7.5—8.0) 中4℃保存。 ? 用于RNA测定的已纯化核酸样本应在缓冲液中 -80℃或液氮
中贮存。 ? 用乙醇沉淀的核酸样本贮存在 -20℃即可。 ? 用GITC处理的RNA标本在室温可保存 7天。
（五）标本的处理( 核酸提取)
? 标本处理即核酸提取纯化是决定扩增检测成败的关键性步 骤，在使用商品核酸提取试剂提取临床标本中的核酸模板 前，应对其进行充分评价以验证其提取的有效性。
（三）各区操作注意事项
1. 试剂贮存和准备区
? 下述操作在该区进行： 储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
? 在本区的实验操作过程中，必须戴手套并经常更换。 ? 操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。 ? 严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。 ? 工作结束后必须立即对工作区进行清洁。 ? 实验室及其设备的使用必须有日常记录。
和扩增区 扩增产物分析区。
4．不同工作区域使用不同的工作服 ( 例如不同的颜色 ) 。工作人 员离开各工作区域时，不得将工作服带出。
（二）工作区域仪器设备配臵标准
1．试剂贮存和准备区
2-8℃和-15℃冰箱；混匀器；微量加样器( 覆盖1--1000μ l) ； 移动紫外灯( 近工作台面) ；消耗品： 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头 (带滤芯) ； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品。
核酸检测实验室的规范化管理
一、规范化设臵及管理
( 一) 临床基因扩增检验实验室区域设臵原则
1．临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域： 试剂贮存和准备区；标本制备区； 扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区。 （如使用全自动分析仪，区域可适当合并）
2．各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、 物品混用。
? 当靶核酸为RN时A ，逆转录PCR测定失败的常见原因是标本 在运送前未经充分的稳定化处理及核酸提取试剂的 RN酶A 的 污染。故建议使用高质量的商品核酸提取试剂。
3. 扩增区
? 下述操作在该区进行：DN或A RN扩A 增。 ? 在巢式PCR测定中，通常第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢
式扩增由较高的危险性，第二次加样必须在本区内进行。 ? 不能从本区再进入任何“上游”区域，可降低本区的气压以避免
气溶胶从本区漏出。 ? 为避免气溶胶所致的污染，尽量减少在本区的走动。
面区域的可能性
二、质量保证
临床基因扩增检验实验室质量保证涉及到整个基因扩 增检验所有阶段，即测定分析前的标本采集处理、测定中 的核酸提取，扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。
（一）标本的采集 （二）标本的稳定化处理 （三）标本的运送 （四）标本的贮存 （五）标本的处理( 核酸提取) （六）靶核酸的逆转录CFIT)和扩增 （七）污染 （八）扩增产物的分析
4. 扩测定。
? 本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本
区的物品及工作服将扩增产物带出。
? 本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、
丙稀酰胺、甲醛或同位素等，应注意实验人员的安全防护。
? 本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前
（三）标本的运送
? 标本采集后必须尽快送至实验室。 ? 经过稳定化处理的标本可在常温下邮寄运送。 ? 用于RN检A 测的标本，如果未经稳定化处理，须速冻后，
放在干冰中运送。
（四）标本的贮存
? 临床体液标本如血清／血浆等可于 -70℃下长时间贮存。 ? 用于DN测A 定的已纯化核酸样本可在 10 mmo／l L Tris —
3. 扩增反应混合物配制和扩增区
核酸扩增仪；微量加样器( 覆盖1--1000μl) ； 可移动紫外灯( 近工作台面) ；消耗品（一次性手套、一次性吸水纸、 耐高压处理的离心管和加样器吸头( 带滤芯) ； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品.
4. 扩增产物分析区
基本仪器设备如下： 微量加样器( 覆盖1--1000μl) ； 可移动紫外灯；消耗品； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品。
? 玻璃器皿在使用前应高压处理。
? 临床用于RN（A 如HCVRN）A 扩增检测的血标本建议进行抗凝处理， 并尽快（3小时以内）分离血浆，以避免 RN的A 降解。如未作抗凝 处理，则抽血后，必须在 1小时内分离血清。
（二）标本的稳定化处理
? 用于DN扩A 增检测的标本，应及时送至实验室。
? 用 于 RNA测 定 的 标 本 应 进 行 稳 定 化 处 理 ， 异 硫 氰 酸 胍 盐 (Guanidinethiocyanate，CITC)可使DN酶A 和 RNA酶立即失活， 因此在采集标本时，可将标本材料如血清或血浆按 1：4的比例加 至含有5mo／l L GITC的试管中，从而使血清 ( 浆) 中的RN酶A 不可 逆失活。
2．标本制备区
1-8℃冰箱、- 20℃或- 80℃冰箱；高速台式冷冻离心机； 混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器 (覆盖1--1000μ l) ； 可移动紫外灯( 近工作台面) ；超净工作台；消耗品; 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头 (带滤芯) ； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品； 如需处理大分子DN，A 应备有超声波水浴仪。
2. 标本制备区
? 下述操作在该区进行： 标本保存、核酸（ RN、A DN）A 提取、贮存及其加入至扩
增反应管和测定RN时A cDN的A 合成。
? 为避免样本间的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反 应混合液的反应管。
? 对具有潜在传染危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭 活程序。
? 样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取 方法。
（九）质量控制
（一）标本的采集
? 常用于基因扩增检测的临床标本包括 EDTA或构橼酸钠抗凝全血或 骨髓、血清或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等。采血液等样本 时，应使用一次性密闭容器，如真空采血管。当使用非密闭采样 系统时，如尿、分泌物和骨髓的采样，必须注意防止来自采样者 的皮屑或分泌物的污染。采样时必须戴一次性手套。
1mmo／l L EDTA缓冲液 (pH7.5—8.0) 中4℃保存。 ? 用于RNA测定的已纯化核酸样本应在缓冲液中 -80℃或液氮
中贮存。 ? 用乙醇沉淀的核酸样本贮存在 -20℃即可。 ? 用GITC处理的RNA标本在室温可保存 7天。
（五）标本的处理( 核酸提取)
? 标本处理即核酸提取纯化是决定扩增检测成败的关键性步 骤，在使用商品核酸提取试剂提取临床标本中的核酸模板 前，应对其进行充分评价以验证其提取的有效性。
（三）各区操作注意事项
1. 试剂贮存和准备区
? 下述操作在该区进行： 储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
? 在本区的实验操作过程中，必须戴手套并经常更换。 ? 操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。 ? 严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。 ? 工作结束后必须立即对工作区进行清洁。 ? 实验室及其设备的使用必须有日常记录。