空气细菌总数的测定
空气中微生物的检测
2011.11.21
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一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、结果计算 五、结果评价
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一、实验目的和意义
掌握检测和计数空气中微生物的基本方法
掌握无菌操作技术和微生物实验的基本操 作
学习对室内空气进行初步的微生物学评价
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实验意义
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三、实验步骤
1.自然沉降法 配制琼脂培养基（已做） ↓
培养皿暴露空气中5min/10min ↓
37℃温箱培养24h ↓
计数和结果评价
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采样布点原则 a. 根据室内面积进行对角线或者梅花式均匀布点，
小于50m2的房间应设3个点，50～100m2设3～5个 ；100m2以上至少5个点 b. 采样高度 和人呼吸高度一致（1.2～1.5m） c. 采样点应避开风口，离墙壁距离应大于0.5m,采样 时关闭门窗，减少人员走动
空气中细菌总数常作为室内空气质量和空 气受到微生物性污染程度的指标。
用于医院、公共场所等空气质量的评价
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二、实验原理
1：自然沉降法（沉降平板法）
根据空气中携有微生物气溶胶粒子在地心引力的 作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上， 经过24h，37℃温箱培养计算出菌落数。
特点：此法简单方便，但稳定性差，直径1～5μm 的粒子在5min中内沉降距离有限，使小粒子采集 率较低。
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各种粒径大小的菌落易沉降的部位及意义
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特点 a. 采集粒谱范围广，一般在0.2～20μm以上； b. 采样效率高，逃逸少 c. 微生物存活率高
低温空气中细菌菌落总数检测方法
附录C
（规范性附录）
空气中细菌菌落总数检测方法
C1测定空气中动态下细菌菌落总数。
C2采用平板暴露法：
车间在30m2以上者，于东、西、南、北（距墙1m处）、中五点；小于30m2者，于一条对角线里、中、外三点，高度均在1.5m处采样，将普通营养琼脂平板（9cm直径）按上述采样点和高度布放，暴露15min后立即关盖，于37℃温箱培养24h后观察结果，求出5个或3个采样点的平均菌数。计算公式见式（C1）：
菌数/m3=
50000N
……………；
T——平板暴露时间，min；
N——平均菌落数。
空气中细菌含量的测定
实验室空气中细菌含量的测定
一．实验目的
测定实验室空气中沉降菌的含量，了解实验室的洁净程度。
二．实验原理
空气中漂浮着各种微生物，将盛有无菌培养液的平民放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落在培养基上，然后在37摄氏度的恒温培养箱中培养24h，计数每个培养皿表面的菌落数，由于一个菌落是由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。
三．实验材料
琼脂，锥形瓶，无菌水，电热炉，培养皿，卧室灭菌锅，烘箱，37℃生化培养箱，超净工作台
四．实验方法
称取2.35g琼脂，加热溶解到100ml无菌水，存放于锥形瓶中，用封口膜和牛皮纸包装好锥形瓶。
准备五个培养皿，用牛皮纸包好，和锥形瓶一起放进卧室灭菌锅中灭菌，温度121℃，时间30min。
于无菌工作台上，每个培养皿倒进10ml培养基，待冷却凝固。
分别置于室内同一平面五个不同的点（四角加中央），打开皿盖，暴露15min,盖好平皿盖，37℃恒温箱中培养24h，
五．计算方法
按照奥梅梁斯基氏计算法，面积为100平方厘米的培养基表面5min沉降下来的细菌数相当于10L空气中所含菌落数来计算
细菌数（m³）=N*100/A*5/T*100/10=50000N/AT
(A:平板面积cm2、T平板暴露时间min、N：平板菌落数)。
空气细菌测定
空气细菌测定将采得的空气样品，通过培养，进行细菌菌落计数，或折算成单位体积空气中所含细菌数，对照标准，作出空气清洁或污染程度的评价。
一、沉降平皿法将盛有培养基的平皿持平暴露在空气中一定时间，然后置温箱培养，计算所生长的菌落数。
1．制备培养基常用的营养琼脂培养基含以下成分：牛肉浸膏50g；蛋白陈10g；氯分钠5g；琼脂20g；加水至1000ml。
调节培养基pH7.2～7.4，经15磅30分钟高压灭菌。
2．空气采样（1）选择有代表性的采样点，一般在室内四角及室中央，放置含营养琼脂的平皿。
（2）打开皿盖（将皿盖置于平皿底下，不可仰放，以防污染），将有培养基的平皿，暴露于空气10～20分钟（视空气清洁程度而定），采样毕合上皿盖，记录采样时间。
（3）培养皿置于37℃温箱培养24小时。
（4）记录5个平皿的菌落总数。
3．结果计算：100cm2琼脂面积上，5分钟所降落的菌落数，相当于10L空气所含细菌数，计算结果如下：t——平皿暴露于空气中的时间（分钟）N——培养后，平皿上的菌落总数A——所用平皿的面积（cm2）二、离心式空气微生物采样法（一）原理：采用LWC-1型离心式空气微生物采样器。
当采样器通电后，借助采样器内叶轮的高速旋转，把距离40cm范围内的空气吸进采样器，由于离心力的作用，空气中的粒子冲击到含有琼脂培养基的塑料条上，而空气呈螺旋状离开采样器涡壳流出。
（二）操作步骤1．根据所采细菌种类，往琼脂培养基条上浇灌不同种类的培养基，每条琼脂培养基的注入量约为6ml。
2．把琼脂培养基条，从无菌塑料套中取出，插入采样器头部的涡壳内。
3．根据需要选定采样时间的采样地点。
4．将电源开关拨至“开”的位置，指示灯亮。
5．按动按钮，即起动开始采样。
6．采样完毕，关断电源开关。
将基条从涡壳内抽出，放入无菌塑料套中（将条的凹面对准套的凸面）送恒温箱中进行培养，然后计算菌落数。
7．菌落计算菌落形成单位CFU/m3=琼脂培养基条上的菌落数／40×采样时间（min）琼脂培养基的表面积为34×1cm2。
空气培养细菌总数的卫生学标准
空气培养细菌总数的卫生学标准
空气中的细菌总数是衡量空气卫生状况的重要指标之一。
空气中的细菌数量过
多可能会对人体健康造成影响，因此对空气中细菌总数的卫生学标准有着严格的要求。
首先，根据卫生学标准，空气中细菌总数的测定方法应当符合相关的规范和标准。
通常采用的方法是空气采样后在培养基上进行培养，然后通过计数方法来测定细菌总数。
这一过程需要严格控制培养条件和操作流程，以确保测定结果的准确性和可靠性。
其次，根据卫生学标准，空气中细菌总数的限定值应当符合相关的卫生标准。
一般来说，不同场所对空气中细菌总数的要求也有所不同。
例如，医疗机构、食品加工场所等对空气中细菌总数的要求更为严格，而一般办公场所、居住区域对空气中细菌总数的要求相对较低。
这些限定值的制定应当考虑到不同场所的特点和实际需求，以保障人们的健康和安全。
此外，根据卫生学标准，空气中细菌总数的监测和管理应当符合相关的规范和
要求。
定期对空气中细菌总数进行监测，及时发现和处理空气污染问题，是保障空气卫生的重要手段。
同时，对空气中细菌总数的管理也需要建立健全的制度和措施，加强对空气质量的管理和控制。
总的来说，空气培养细菌总数的卫生学标准是保障空气卫生的重要依据，对空
气中细菌总数的测定、限定值的制定以及监测和管理都有着严格的要求。
只有严格遵守这些标准和要求，才能有效保障人们的健康和安全。
因此，各相关单位和个人都应当重视空气培养细菌总数的卫生学标准，加强对空气质量的管理和控制，共同营造一个清洁、卫生的空气环境。
试验 公共场所空气微生物细菌总数测定
3 开 2min 80L
4 开 4min 160L
1~4 关 8min 320L
实验注意事项
空气微生物采样应尽量避开空调、门窗气 流量变化较大的区域
采样前与相关公共场管理部门有效的协调 平皿中营养琼脂厚度和制备水平，避免出
现气泡 沉降平板法平皿盖的放置 撞击式空气采样时要注意消毒和无菌操作 采样高度的选择：中心空调出风口
风速 采样者
Ⅵ
0.25
0.65-1.1
FA-1型六级筛板固体撞击式空气微生物采样器
筛板孔径范围 I 1.18um II 0.25um
捕获粒子范围 I >7.0um II 0.65um~1.0um
JWL-2 二级筛板固体撞击式空气微生物采样器
FA-1型撞击式空气微生物采样器采样
采样方法 地点 采样点：布点数量、位置、高度 采样方法和步骤 １平板制备：每平皿约8ml营养琼脂 ２采样器的消毒和安装 ３采样时间和流量： 时间根据空气状况，流量28.3L/min ４ 37℃培养48h (24h)
5 取出采样平皿，平皿加盖。依次编号。
6 细菌培养 采样平皿带回实验室，37℃ 48h
Andersen 采样器 各级喷嘴孔径及捕获粒子大小范围
级别 Ⅰ Ⅱ
喷嘴孔径 mm 1.80 0.91
捕获粒子 um ≥7.0 4.7-7.0
Ⅲ
0.71
3.3-4.7
Ⅳ
0.53
2.1-3.3
Ⅴ
0.34
1.1-2.1
5 样品培养 采样平皿带回实 验室，37℃ 48h
JWL－1A型 单级固体撞击式空气微生物采样器
JWL－1A型空气微生物采样器
采样方法 地点 采样点：布点数量、位置、高度 采样方法和步骤 １平板制备：每平皿5ml营养琼脂 ２调整采样器的采样时间和流量：20L/min，1~3min ３采样头的消毒和平皿的安装 ４现场采样，信息记录 ５ 37℃培养48h (24h)
空气细菌总数的测定
空气细菌总数的测定一、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。
一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。
在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。
在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。
空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。
空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。
空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。
某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。
因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。
----测定方法--平皿沉降法二、测定原理空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。
三、试剂营养琼脂1、成分A蛋白胨 1gB牛肉膏 0.3gC氯化钠 0.5gD琼脂 1.5gE蒸馏水1000mL2、制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
空气细菌数量的检测（共5篇）
空气细菌数量的检测（共5篇）第一篇：空气细菌数量的检测空气细菌数量的检测引言：与外界相通的各个空间的空气中均有大量的细菌存在，且种类繁多，而这些微生物中绝大多数对我们人体来讲都是有益的，但其中也有一部分微生物往往是实验室各种实验材料、实验菌种污染的祸根，也是引起人类各种传染性疾病的祸根。
因此，对空气进行细菌学检验，目的在于调查气溶胶扩散的范围、滞留时间及浓度；确定空气中病原体种类；研究呼吸道传染病传播机制及气雾免疫的应用；考核空气卫生学及消毒效果，树立“处处有菌”和严格的消毒与灭菌观念。
而处于学院的我们来说，学院空气质量的好坏与师生们的生活与学习息息相关，通过沉降法检测细菌总数来判断空气中的卫生状况与污染程度并了解空气质量显得至关重要。
材料与方法：（一）仪器与材料1、普通营养琼脂平板（由中山大学新华学院医学实验室提供）2、恒温培养箱（中山大学新华学院医学实验室提供）（二）采样地点按照《室内空气质量标准》的要求进行采样布点，选取新华学院的图书馆、西门口、校道、教学楼以及微生物实验室。
（三）采样时间及方法采样时间为2014年9月1日下午两到四点，采样天气为晴朗无雨，采样方法为自然沉降法。
沉降法是以微生物在空气中能随尘粒下降的原理，将平板平放在空气中暴露一定时间，使空气中的细菌直接沉降至培养基表面，然后置37摄氏度孵育24小时，计算菌落数。
实验方法：a.取用普通营养琼脂平板5个（直径7cm），在皿底做上标记；b.采用自然沉降法收集细菌，采用地点为新华学院的各个指定地方。
将平板打开，平板盖朝下放置在平板旁，分别暴露于空气中20分钟，然后盖好。
并注明采样的地点和暴露的时间；c.平板放置于37℃的恒温培养箱培养24小时后取出后观察，计算出所生长的菌落数和数量。
（四）菌落数计算按下列公式可得出空气中细菌总数。
每立方米细菌数=50,000N/AT A:所用平板面积（平方厘米）；T:平板暴露于空气中的时间（分钟为单位；N：平板上的菌落数实验结果使用实验室提供的营养琼脂平板，在学校各个地方收集空气中的细菌，培养空气中的细菌，并经过实验室的空气细菌培养24h后，得出以下数据：样本号 1 2 3 4 5 6 7 8 采样地点图书馆西门口校道采样时间/min平板上菌落数20 20 5 15 12 3 4 7 0 微生物实验室厕所微生物实验室楼梯教学楼 20 微生物实验室 20 微生物实验室办公室1、由上述数据可知校园内的空气质量较好；2、各采样点的空气菌落对比：校道>微生物实验室厕所>微生物实验室>西门口>教学楼>微生物实验室楼梯>图书馆>微生物实验室办公室。
空气中细菌总数的测定
室内空气中细菌总数检测实施细则一、范围适用于室内空气细菌总数测定。
二、引用标准GB/T18883-2002 室内空气中细菌总数检验方法三、原理撞击法：采用撞击式空气微生物采样器采样通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔而产生高速气流，从而使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37℃、48h培养后，计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。
四、仪器和设备1．高压蒸汽灭菌器。
2．干热灭菌器。
3．恒温培养箱。
4．冰箱。
5．平皿。
（直径9㎝）6．制备培养基用一般设备：量筒，三角烧瓶，pH计或精密pH试纸等。
7．撞击式空气微生物采样器（FSC-IV便携式浮游生物采样器）。
五、培养基1．营养琼脂培养基1．成分：蛋白胨20g牛肉浸膏3g氯化钠5g琼脂15g～20g蒸馏水1000ml2．制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min 高压灭菌。
营养琼脂平板的制备参照采样器使用说明。
六、选点要求1．采样点的数量根据监测室内面积大小和现场情况而确定，以期能正确反映室内空气污染物的水平。
原则上小于50㎡的房间应设（1～3）个点；50㎡～100㎡设（3～5）个点；100㎡以上至少设5个点。
在对角线上或梅花式均匀分布。
2．采样点应避开通风口，离墙壁距离应大于0.5m。
3．采样点的高度：原则上与人的呼吸带高度相一致。
相对高度0.5m～1.5m之间。
七、采样将采样器消毒，按仪器使用说明进行采样。
一般情况下采样量为30L～150L，应根据所使用仪器性能和室内空气微生物污染程度，酌情增加或减少空气采样量。
八、样品培养样品采完后，将带菌营养琼脂平板置36℃±1℃恒温箱中，培养48h，计数菌落数，并根据采样器的流量和采样时间，换算成每立方米空气中的菌落数。
以每立方米菌落数（cfu/m3）报告结果。
空气中细菌含量的检测
平皿沉降法：采样时将普通琼脂培养基或血琼脂培养基5个，分别置于室内同一平面五个不同的点（室内四个角及中央），打开皿盖，让平皿暴露15～30min后盖好平皿盖，置于37℃温箱中培养，次日观察平皿菌落，计数五个平皿生长菌落数，根据5min内100cm2培养基中降落细菌数相当于10L空气中所含细菌数而计算1m3空气中的细菌数。
计算公式为：细菌数（CFU）/ m3＝N×100/A×5/T×1000/10＝50000N/AT
注：A：平板面积（cm2）；
T：平板暴露时间（min）；
N：平板平均菌落数（CFU）；
摘于医学检验专业2003年版《微生物检验学》
1，培养基的配制
称取10g蛋白胨、3g牛肉浸膏、5g氯化钠、20g琼脂，充分混合后，加入到1000毫升蒸馏水中，用盐酸和氢氧化钠调节溶液的ph值为7.4-7.6，过滤除去沉淀后，分装在5个250毫升三角烧瓶中，放入高压蒸汽灭菌锅中，在121摄氏度下灭菌15分钟。
取出后置于暗处备用。
2.制作平皿
加热使测定所用的培养基融化，待冷至50-60摄氏度时，倾入培养皿，每皿注入15-20毫升，一共制作5块。
盖上皿盖
3细菌含量的测定
（1）利用微生物在空气中能随尘粒下沉的原理，将盛有培养基的平皿平放，移去平皿盖，在空气中暴露五分钟，培养皿距离地面1米，距离墙壁最近不可小于30cm,
室中中央及周角各放一平皿。
（2）培养：放入37摄氏度恒温箱中培养24小时。
室内空气中细菌总数的测定方法
室内空气中细菌总数的测定方法G.1 原理采用撞击式空气微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，将悬浮在空气中的微生物采集到营养琼脂平板上，经36℃±1℃、48 h培养后得到细菌菌落数的测定方法。
G.2 营养琼脂培养基G.2.1 成分蛋白胨10 g，牛肉浸膏3 g，氯化钠5 g，琼脂20 g，蒸馏水1000 mL。
G.2.2 制法将蛋白胨、肉膏、氯化钠溶于蒸馏水中，校正pH为7.2～7.6，加入琼脂，121℃，20 min高压灭菌。
待冷却到45℃时，制成平板备用。
G.3 仪器和设备本方法中使用的仪器和设备如下：——六级筛孔撞击式微生物采样器；——高压蒸汽灭菌器；——恒温培养箱；——制备培养基用一般设备：量筒，锥形瓶，pH计或精密pH试纸等。
G.4 样品采集和保存G.4.1 点位布设见A.2。
G.4.2 以无菌操作，将营养琼脂平板逐级装入六级筛孔撞击式微生物采样器，以28.3L/min流量采集 10 min。
采样器使用按照说明书要求进行。
G.4.3 将采集后的营养琼脂平板储存于4℃，并尽快返回实验室进行培养。
G.5 分析步骤将采集后的营养琼脂平板倒置于36℃±1℃培养48 h，菌落计数。
G.6 结果计算与表示G.6.1 结果计算室内空气中细菌总数浓度按式（G.1）计算。
················································································(G.1)c =ΣN×1000v×t式中：c——细菌总数浓度，单位为菌落形成单位每立方米（CFU/m3）；ΣN——六级平板菌落合计数，单位为菌落形成单位（CFU）；v——采样流量，单位为升每分钟（L/min）；t——采样时间，单位为分钟（min）。
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定随着人们对公共场所环境质量要求的提高，对公共场所空气中微生物的检测也越来越重视。
其中，细菌总数是衡量空气中微生物含量的一项主要指标。
下面将详细介绍公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤。
1.样品采集首先，确定采样位置。
根据公共场所的具体情况，如是否有空调、通风设备等信息，选择具有代表性的采样点位。
一般来说，可选择通风良好、人员流动频繁的位置进行采样。
然后，采用采样器具进行空气采样。
空气采样器具常用的有空气生物分析仪、洒雾器等。
根据采样器具的具体操作手册，按照规定的操作步骤进行采样，同时注意采样时间和采样量的控制。
2.样品处理采样完成后，将采样器具中的采样物转移到适当的载体（如培养基、液体培养基）中。
根据具体情况，选择合适的载体。
对于空气样品，一般选择液体培养基，如生理盐水。
将采样管中的液体转移到含有生理盐水的试管中。
3.稀释操作将采样物进行稀释，以便于接种和计数。
稀释液的选择可依据之前的实验经验，一般选用营养琼脂或平板培养基。
将采样物中的适量细菌悬浮液取出，用移液管分别转移到不同稀释管中，依次进行系列二次稀释。
每次稀释后，需充分摇匀。
根据之前的实验经验，每一次稀释可选用10倍、100倍、1000倍等稀释倍数。
4.接种和培养将稀释液分别接种到含有固体培养基的平板上，均匀涂布。
然后将接种后的平板培养基放置于恒温培养箱中，选择适宜的培养温度和时间。
一般来说，菌落计数应在培养48小时后进行。
5.计数和结果分析计数时，将培养出的菌落进行清点，并将数量记录下来。
根据菌落的大小、颜色和形态等特征，可初步判断不同菌种的存在情况。
最后，将不同菌种的菌落数量进行统计和分析，并将细菌总数计算出来。
需要注意的是，在细菌总数测定过程中，应严格控制实验条件，如温度、湿度等，以确保结果的准确性。
另外，细菌总数的测定结果应与相关标准进行比较，以评估空气中微生物的含量是否符合要求。
总结：公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤包括样品采集、样品处理、稀释操作、接种和培养、计数和结果分析等。
空气中菌落总数测定方法
空气中菌落总数测定方法空气中菌落总数测定方法是评估环境中微生物污染程度的一种方法。
空气中存在着大量的微生物，包括细菌、真菌和病毒等，它们对人类健康和生物环境都具有一定影响。
因此，了解空气中微生物的总数是非常重要的。
下面将介绍几种常用的空气中菌落总数测定方法。
1.培养法：培养法是目前最广泛使用的一种空气中菌落总数测定方法。
该方法依赖于菌落在富营养培养基上的繁殖，通过计数培养基上的菌落形成单位（CFU）来估计空气中的微生物总数。
常用的培养基有厌氧培养基和好气培养基。
测定步骤大致为：收集空气样本→灭菌并将空气样本传递到培养基上→培养一定时间→用显微镜或裸眼观察菌落的形成（需要进行稀释）→根据菌落数量进行计数。
2.分光光度法：分光光度法是另一种常用的测定空气中菌落总数的方法。
该方法通过测量菌落中主要的色素如叶绿素等的吸光度来估计菌落的数量。
测定步骤包括：将收集到的空气样本溶解在适当的溶液中→将溶液置于分光光度计中测量吸光度→根据标准曲线计算样本中菌落的数量。
3.过滤法：过滤法是通过将空气样本通过微孔过滤膜将其中的微生物捕获，在过滤膜上的菌落形成后进行计数。
该方法适用于空气中微生物浓度较低的情况。
测定步骤为：用特制的采样器收集过滤膜→将过滤膜放置在培养基上进行培养→菌落形成后计数。
4.PCR法：PCR法是一种利用聚合酶链反应（PCR）技术进行空气中菌落总数测定的方法。
该方法通过提取空气中微生物的DNA并进行PCR扩增，通过计数扩增产物的数量来估计菌落的总数。
PCR法具有快速、灵敏和高效等特点。
综上所述，根据不同的实验条件和需要，可以选择适当的方法来测定空气中菌落的总数。
这些方法各有特点，可以相互验证，以获得准确的结果。
同时，不同方法的选择还需要根据实验室设备和人力资源等因素来考虑，以确保实验的有效进行。
空气中微生物数量的检测
二、实验原理
1：自然沉降法（沉降平板法） 根据空气中携有微生物气溶胶粒子在地心引力的
作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上， 经过24h，37℃温箱培养计算出菌落数。 特点：此法简单方便，但稳定性差，直径1～5μm 的粒子在5min中内沉降距离有限，使小粒子采集 率较低。
各种粒径大小的菌落易沉降的部位及意义
特点 a. 采集粒谱范围广，一般在0.2～20μm以上； b. 采样效率高，逃逸少 c. 微生物存活率高
3.滤过法：使一定量的空气通过吸附剂（灭 菌生理盐水），然后培养吸附剂中的细菌， 计算出菌落数。
4.液体撞击法：和固体撞击式采样器一样， 是利用喷射气流方式将空气中的微生物粒 子采集在小体积的液体中，适用于高浓度 的空气微生物采样。
3. 日光，波长为254纳米的紫外线光具有杀 菌作用
4. 湿度，湿度过低，繁殖体易趋向死亡。
= 50000N/(A×T)
A-平板面积（cm2） T-暴露时间（min）
N-平均菌落数（cfu/皿）
2.撞击法 空气含菌量(cfu/m3)=[六级采样板的总菌数（cfu）
÷28.3（L/min）×采样时间（min）] ×1000
计算空气中微生物大小分布： 各级微生物粒子数 ％=该级菌落数/六级总菌落数
Anderson采样器（FA-1型）
各级撞击盘捕获粒子范围及孔径大小
Ⅰ：＞7μm Ⅱ：4.7~7μm Ⅲ：3.3~4.7μm Ⅳ：2.1~3.3μm Ⅴ：1.1~2.1μm Ⅵ：0.65~1.1μm
孔径1.18㎜ 孔径0.91㎜ 孔径0.71㎜ 孔径0.53㎜ 孔径0.34㎜ 孔径0.25㎜
空气细菌培养的采样方法
1 空气细菌培养的采样方法检测空气细菌总数的细菌培养法平板暴露法。
此法简便，目前大部分医疗单位采用。
在消毒处理后，操作前进行，室内面积≤30m2对角线内、中、外处设3点，内外点布位距墙壁1m处，室内面积＞30m2设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1m处。
基本原理是：空气中细菌等微生物可随尘粒一起下降，在室内各采样点处放好营养琼脂平板，采样高度距地面0.8～1.5m，采样时，将平板盖打开，暴露5min或10min，盖好平板。
将平板置于37℃恒温箱培养48h计算菌落数。
2 细菌数的计算方法细菌总数（cfu/m3=4500N/A×T）式中A=平板面积（cm2） T——平板暴露时间（min） N——平均菌落数（cfu）这个计算公式是根据在面积100cm3的培养基表面，5min内能落下的细菌相当于10L空气中含的细菌数而推算出来的。
3 空气消毒效果和污染状况的评价空气消毒效果的比较应在消毒前后取样进行培养，如消毒后空气中细菌数明显下降，说明消毒效果好，下面规定适用GB15982——1995规定：Ⅰ类区域细菌总数≤10cfu/m3，并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅱ类区域细菌总数≤200cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅲ类区域细菌总数≤500cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格。
Ⅰ类环境包括层流洁净手术室和层流洁净病房只能采用层流通风才能空气中的微生物减到此标准以下。
Ⅱ类环境包括普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室洁净区、烧伤病房、重症监护病房、采用循环风紫外线空气消毒器或静电吸附式空气消毒器，这类均为有人房间，必须采用对人无毒无害且可连续消毒才能使空气中的微生物减到此标准以下。
Ⅲ类环境包括儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房室和房间，采用紫外线消毒，化学消毒剂熏蒸或喷雾消毒。
据统计，目前世界上有41种主要传染病，其中经空气传播的就有14种，占首位［1］。
室内环境检测：菌落总数的测定
感谢各位倾听
Professional Resource Base of Indoor Environmental Inspection and Control Technology
菌落总数的测定
室内空气中的细菌总数的检测 ——撞击法
• 2.营养琼脂培养基 • 成分：蛋白质20g；牛肉浸膏3g；氯化钠5g；琼脂15～20g；蒸馏水
1000mL。 • 制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，
121℃，20min高压灭菌。 • 撞击法参照采样器使用说明制备营养琼脂平板。
应性鼻炎和哮喘等； • 经常食用被致病微生物群污染的粮食、食品、饮料、水可引起消化道疾
病；螨虫是强致敏原，可使人患过敏性鼻炎、过敏性湿疹及过敏性哮喘。
菌落总数的测定
室内空气中的细菌总数的检测 ——撞击法
• 1.测定原理 • 撞击法是采用撞击式空气微生物采样器采样，通过抽气动力作用，使
空气通过狭缝或小孔而产生高速气流，悬浮在空气中的带菌粒子撞击 到营养琼脂平板上，在37℃环境下、经48h培养后，计算出每立方米空 气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。
菌落总数的测定
室内空气中的细菌总数的检测 ——撞击法
• 3.操作步骤: • （1）选择有代表性的房间和位置设置采样点。将采样器消毒、按仪
器使用说明进行采样。 • （2）样品采完后，将带菌营养琼脂平板置(36±1)℃恒温箱中，培养
48h，计数菌落数，并根据采样器的流量和采样时间，换算成每立方 米空气中的菌落数。以cfu／m3报告结果。
职业任务模块五 菌落总数的测定
菌落总数的测定
• 室内空气中细菌总数，是评价和控制室内微生物污染状况的重要指标。 • 1.室内空气微生物的分类 • 非致病性腐生微生物；来自人体的病原微生物；尘螨；真菌； • 2.危害 • 空气传播的病原微生物可引起肺炎、鼻炎、水痘、麻疹和流感、呼吸道、
室内空气中细菌的测定
（二）试剂与材料：
营养琼脂培养基：
（1）成份： 蛋白胨
10克
牛肉浸膏
3克
氯化钠
5克
磷酸二氢钠
1克
琼脂
15～20克
蒸馏水
1000毫升
（二）试剂与材料：
营养琼脂培养基： （2）制法：将上述成分混合后，加热溶解。调节PH 值7.8～8.0。过滤除去沉渣，分装于三角烧瓶中，经 121℃（103kPa）高压蒸气灭菌20分钟，然后倾注适 量（15～20毫升）于已灭菌处理的平皿内，制成营养 琼脂平板备用。若当天不用，应置冰箱内保存。
五、操作步骤：
（一）制作营养琼脂平板（无菌操作）
操作者面前点燃酒精灯 打开已灭菌处理的平皿 倾注适量营养琼脂培养基（15～20毫升） 冷凝（大约15分钟）
（二）选择采样点的要求：
1．采样点的数量 根据监测室内面积大小和现场情况而确定，以
期能正确反映室内空气污染物的水平。原则上小于 50㎡的房间应设（1～3）个点；50㎡～100㎡设 （3～5）个点；100㎡以上至少设5个点。在对角线 上或梅花式均匀分布。 2．采样点应避开通风口，离墙壁距离应大于0.5m。 3．采样点的高度：原则上与人的呼吸带高度相一 致。相对高度0.5m～1.5m之间。
化较大处。整个采样过程中，应动作轻缓，避 免扬起灰尘，并要注意无菌操作。 4.采样中打开皿盖时，可将皿盖向下，切忌血盖向 上而暴露于空气中，影响采样结果。暴露5分钟 后，应按打开皿盖的顺序，盖上皿盖，带回实 验室置培养箱，37℃、24小时培养后计数菌落。
补充：
1.撞击式空气采样法：用空气动力泵抽气进入狭缝， 使气流速度加快，撞击于正在转动的平皿上。并粘 附其上，培养。CFU/m3 2.吸收法：气流经过一定的吸收液，培养。 3.暴露法：CFU/皿。缺点：颗粒物质运动符合 stokes定律，由于人流、季节、白天细菌数>晚上， 且技术定量不同等可造成误差。
空气中微生物数量的检测
五、结果评价
• 空气微生物卫生标准，是以细菌作为标准 • 细菌选用的指标是菌落总数，表示方法为cfu/皿或
者cfu/m3
我国现行标准是根据空气中实测细菌数和流行病学 观察结果为主要依据。
• 室内空气质量标准 （GB/T18883-2002） • 2500cfu/m3
公共场所空气卫生标准
• 图书馆、阅览室的空气卫生标准：空气细菌总数 ≤2500cfu/m3（撞击式），或≤30个/皿（沉降式）
空气中微生物数量的检测
内容
• 一、实验目的 • 二、实验原理 • 三、实验步骤 • 四、结果计算 • 五、结果评价
一、实验目的和意义
• 掌握检测和计数空气中微生物的基本方法
• 掌握无菌操作技术和微生物实验的基本操 作
• 学习对室内空气进行初步的微生物学评价
实验意义
• 空气中细菌总数常作为室内空气质量和空 气受到微生物性污染程度的指标。
注意事项： 整个过程注意无菌操作。
四、结果计算
• 1.自然沉降法
• 根据奥梅梁斯基建议，面积为100cm2的平板培养基，暴露 于空气中5min，于37℃温箱培养24h后所生长的菌落数相 当于10L空气中的细菌数
• 空气中细菌数（cfu/m 3） =1000×[(100/A) ×(5/t) ×(1/10)] ×N
Anderson采样器（FA-1型）
各级撞击盘捕获粒子范围及孔径大小
• Ⅰ：＞7μm • Ⅱ：4.7~7μm • Ⅲ：3.3~4.7μm • Ⅳ：2.1~3.3μm • Ⅴ：1.1~2.1μm • Ⅵ：0.65~1.1μm
孔径1.18㎜ 孔径0.91㎜ 孔径0.71㎜ 孔径0.53㎜ 孔径0.34㎜ 孔径0.25㎜
• 2.撞击法 调整采样器高度为呼吸带高度于1.2～1.5m
公共场所空气中细菌总数检验方法
公共场所空气中细菌总数检验方法1 定义撞击法（impacting method）是采用撞击式空气微生物采样器采样，通过抽气动力作用，使用空气通过狭颖或小孔而产生高整气流，使用悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37°、48h培养后，计算出每m3空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。
自然沉降法（natural sinking method）是指直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露15分钟，经37°、48h培养后计数生长的细菌菌落数的采样测定方法。
2 仪器和设备2.1高压蒸汽灭菌器。
2.2干热灭菌器。
2.3恒温培养箱。
2.4冰箱。
2.5平皿（直径9cm）。
2.6制备培养基用一般设备：量筒，三角烧瓶，pH计或精密pH试纸等。
2.7撞击式空气微生物采样器。
3培养基3.1营养琼脂培养基3.1.1成分；蛋白胨牛肉浸膏10g氯化钠3g琼脂15～20g蒸馏水1000ml3.1.2制法将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min高压灭菌。
用自然沉降法测定时，倾注约15ml于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。
撞击法参照采样器使用说明制备营养琼脂平板。
4操作步骤4.1撞击法4.1.1选择有代表性的位置设置采样点。
将采样器消毒，按仪器使用说明进行采样。
4.1.2样品采完后，将带核辐射营养琼脂平板置36±1℃恒温箱中，培养48h，计数菌落数，并根据采样器的流量和采样时间，换算成每m3空气中的菌落数，以CFU/m3报告结果。
4.1.3选择撞击式空气微生物采样器的基本要求。
（a）对空气中细菌捕获率达95%。
（b）操作简单，携带方便，性能稳定，便于消毒。
4.2自然沉降法4.2.1设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。
通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为1采样点，该交点与四墙角连线的中点为另外4个采样点。
采样高度为1.2～1.5m。
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空气细菌总数的测定
一、实验原理
培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。
一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。
在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。
在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。
空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。
空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。
空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。
某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。
因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。
----测定方法--平皿沉降法
二、测定原理
空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。
三、试剂
营养琼脂
1、成分
A蛋白胨 1g
B牛肉膏 0.3g
C氯化钠 0.5g
D琼脂 1.5g
E蒸馏水1000mL
2、制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
四、仪器设备
1、高压蒸汽灭菌器
2、干热灭菌箱
3、恒温培养箱36±1℃
4、电炉
5、天平
6、冰箱
7、放大镜或菌落计数器
8、 pH计或精密pH试纸
9、灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。