WB操作步骤-自己整理
wb的基本原理和操作流程
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WB操作步骤-自己整理
Western Blot 相关实验方法与试剂（湿转法）人工肝实验室学习姚瑶（一）目的蛋白提取：（1）单层贴壁细胞总蛋白的提取：1、倒掉细胞培养液，加入Hanks液洗涤一次后倒掉，根据所用细胞决定是否用胰酶消化，加入适量（约5ml）新鲜细胞培养液后，将贴壁细胞吹起，并转移至4支离心管内，配平后，1500转离心10min。
2、倒掉上清，用4度预冷PBS溶液洗涤沉淀，1500转离心10min。
共洗三次，每次十分钟。
3、倒掉上清，吸净，每管加入50ul 细胞裂解液RIPA，吹散，加入后由于DNA的释放可迅速变粘稠，故应尽快转移至1.5ml EP 管内，-20℃裂解30min。
4、超声波细胞裂解仪上将各管裂解15s。
（可不做）5、4℃，12000转离心10min。
6、将上清转移至0.5ml EP管中，每管100ul，冰浴待用。
（2）组织中总蛋白的提取：1、取约100mg肝组织于研磨器内，加入500ul 细胞裂解液RIPA，研磨后吸出于1.5ml EP管内，再加入500ul RIPA，研磨后吸出于上EP管内。
冰上裂解30min。
2、配平后，4℃，14000转离心10min。
3、将上清分装于0.5ml EP管内，每管100ul，冰浴待用（二）蛋白含量的测定：1、稀释标准品：10ul标准品C液+90ul PBS溶液，混匀。
2、按0、1、2、4、8、12、16、20ul将稀释后的标准品加入于96孔板内，并用PBS将各孔补足20ul。
3、将第2、3排96孔板分别加入样品1ul、0.5ul，（可采用倍比稀释法），并用PBS将各孔补足20ul。
4、配制工作液：按A液：B液=50：1配制适量工作液，每孔加入200ul。
5、37℃水浴30min。
6、酶标仪测定各孔OD值（A570，Mode1）。
7、绘制标准曲线，计算样品蛋白浓度。
（三）SDS-PAGE电泳：（1）清洗玻璃板（2）灌胶与上样：1、配胶：根据目的蛋白的大小，决定分离胶的浓度。
免疫印迹（WB）实验操作具体步骤及详细说明
免疫印迹（WB）实验操作具体步骤及详细说明免疫印迹（WB）实验操作具体步骤及详细说明一、试剂和溶液转印缓冲液：0.025M Tris base , 0.187 M 甘氨酸, 25%甲醇氨基黑溶液：0.1% 酸性黑10B 1×TBST：25mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 0.2 M NaCl , 0.1%Tween 20 封闭液：TBST 配制的5%牛奶抗体稀释液：TBST 配制的5%牛奶显色系统：ECL 显色二、实验步骤1.电泳：将裂解液进行SDS-PAGE 电泳，80v，30 分钟，120v，90 分钟；2.转膜：PVDF 膜在甲醇中浸泡约30 秒左右，滤纸浸泡在转印缓冲液预湿，半干法转印到PVDF 膜上，10v，150 分钟；3.染色：氨基黑染色5 分钟，甲醇褪去背景色，观察条带；4.膜活化：将PVDF 膜置于甲醇活化1min，用纯水洗膜2 次后再用TBST 洗涤3 次；5.封闭：将膜条置于5%牛奶或2% BSA 中，室温混摇2h；6.一抗孵育：将待检抗体用3%牛奶或2% BSA 稀释到合适浓度（参照抗体说明书，根据客户预实验结果，稀释度上下浮动一个数量级都为正常），将膜放入对应的已稀释待检样品中，置4℃混摇孵育过夜；7.洗涤：取出膜放在TBST 中洗涤3×5min；8.二抗孵育：将膜取出放入稀释好的HRP 标记的二抗（参照二抗说明书进行稀释）中，室温混摇2h；9.洗涤：取出膜放在TBST 中洗涤3×5min；10.ECL 显色：将膜取出放入混匀的ECL 显色液中，孵育3min，将膜取出贴在有荧光角标的胶片上，迅速用保鲜膜包好；11.曝光：把底片放在暗盒中，根据荧光强度分别对X 光胶片作不同时间段的曝光，曝光结束后，将底片取出，1min 显影，30s 清洗，1min 定影，30s 清洗，晾干；12.结果分析：用扫描仪将曝光后的X 光胶片扫描，做后续结果分析。
WB实验步骤详解
WB实验步骤详解Western blotting（简称WB）是一种常用的蛋白质检测技术，通过将蛋白质分离、转移和检测，可以用来确定特定蛋白质的存在和表达水平。
本文将详细介绍WB实验的步骤，以帮助读者了解该技术的操作流程。
1. 细胞培养和蛋白提取。
首先，需要培养细胞并收集细胞样本。
将细胞样本离心，去除培养基，然后用PBS洗涤细胞。
接下来，加入细胞裂解液并振荡离心，收集上清液，即为蛋白提取物。
2. 蛋白质浓度测定。
使用BCA或Bradford方法测定蛋白提取物的浓度，以确保后续实验中使用的蛋白质量一致。
3. SDS-PAGE凝胶电泳。
将蛋白提取物加入蛋白负载缓冲液，然后加入SDS-PAGE凝胶槽中。
进行电泳分离蛋白质，根据蛋白质大小和电荷不同，蛋白质会在凝胶中形成不同的条带。
4. 蛋白质转印。
将SDS-PAGE凝胶中的蛋白质转移到膜上，通常使用半湿式或全湿式转印。
将蛋白质从凝胶转移到膜上，使得蛋白质可以与抗体结合。
5. 阻塞。
将膜放入含有蛋白质的溶液中，如5%脱脂奶粉或蛋白质阻塞缓冲液中，阻塞非特异性结合位点。
6. 一抗孵育。
加入第一抗体，孵育过夜。
第一抗体与目标蛋白结合，形成抗原-抗体复合物。
7. 洗涤。
用TBST或PBS洗膜，去除未结合的抗体。
8. 二抗孵育。
加入HRP标记的二抗，孵育1小时。
二抗与第一抗体结合，形成复合物。
9. 洗涤。
用TBST或PBS洗膜，去除未结合的二抗。
10. 显色。
加入ECL显色液，使得膜上的蛋白质产生发光反应。
将膜放入暗室中，用X光片曝光，然后用显影液显影。
11. 图像获取和分析。
将X光片放入X光片扫描仪中，获取蛋白质条带的图像。
使用图像分析软件，如ImageJ，分析蛋白质的相对表达水平。
以上就是WB实验的详细步骤，每一步都至关重要，需要严格按照操作规程进行。
希望本文能够帮助读者更好地理解WB实验的操作流程，并在实验中取得准确、可靠的结果。
WB实验的基本原理及操作流程
WB实验的基本原理及操作流程WB实验（Western Blotting）是一种用于检测和分离蛋白质的实验方法，广泛应用于生物医学和生物化学领域。
它通过将复杂的蛋白质混合物按照分子大小分离，并使用特异性抗体来探测目标蛋白质。
本文将介绍WB实验的基本原理及操作流程。
一、基本原理WB实验主要基于蛋白质的电泳分离和免疫染色原理。
具体步骤如下：1.样品制备：首先，需要从细胞或组织中提取蛋白质，并经过适当的处理，如裂解细胞、破碎细胞膜等，以获取纯净的蛋白质样品。
2. SDS-电泳：将样品加入聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrylamide Gel），随后进行电泳。
这一步骤会根据蛋白质的分子大小进行分离。
3.转膜：将分离的蛋白质从凝胶转移到聚乙烯2.2-羟基苯基酮（PVDF）或硝酸纤维素膜上，这样可以更容易进行免疫染色。
4.封闭：将转膜后的膜进行封闭，通常使用牛血清白蛋白（BSA）或脱脂奶粉等阻断非特异性结合位点。
5.抗体反应：加入目标蛋白质特异性的抗体，使其与特定抗原位点结合。
6.洗涤：将膜洗涤以去除非特异性的抗体。
7.免疫染色：加入酶标记的辅助抗体，它与目标抗体结合，并携带可检测信号物质（如酶或荧光染料）。
8.显色：加入合适的底物，使酶标记的辅助抗体产生可视化的颜色或荧光信号。
9.分析：通过成像设备（如X射线胶片或荧光成像系统）观察和记录目标蛋白质的表达。
二、操作流程下面是一份WB实验的基本操作流程，具体步骤可能因实验目的和实验条件而有所变化。
1.样品制备：a.收集细胞或组织样品，并使用适当的缓冲液裂解细胞膜。
b.添加蛋白质提取试剂，并彻底裂解细胞。
c.离心裂解后的细胞，收集上清液，其中含有目标蛋白质。
2.SDS-电泳：a.准备好聚丙烯酰胺凝胶，通常使用8%至12%的分辨胶。
b.加载待测样品和分子量标记蛋白质到凝胶中。
c.进行电泳，常用条件为100V持续电解，直到样品顶到凝胶底部。
3.转膜：a.准备合适大小的PVDF或硝酸纤维素膜，并剪成和凝胶一样大小。
WB实验操作流程
WB实验操作流程Western Blot实验操作指南Western Blot即蛋⽩质印迹法（免疫印迹试验），是分⼦⽣物学、⽣物化学和免疫遗传学中常⽤的⼀种实验⽅法。
其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或⽣物组织样品中的特定蛋⽩进⾏显影。
通过分析显影的位置和显影深度获得特定蛋⽩质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
实验流程主要包括以下⼏个步骤：样品制备；SDS-PAGE凝胶电泳；转膜；封闭；免疫杂交；显影。
实验器材操作步骤样品制备准备进⾏western blot的样品可分为细胞、组织、免疫沉淀或亲和纯化后的蛋⽩等。
样品为蛋⽩溶液时不需要进⾏提取，⽽样品为细胞、组织或包埋组织等则需要根据样品的特性对其进⾏提取。
根据需求不同还可针对于细胞亚结构进⾏提取。
（1）以体外培养的贴壁细胞样本为例，对其进⾏总蛋⽩提取：1、倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸⽔纸上使吸⽔纸吸⼲培养液（或将瓶直⽴放置⼀会⼉使残余培养液流到瓶底然后再⽤移液器将其吸⾛）。
2、每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。
平放轻轻摇动1min洗涤细胞，然后弃去洗液。
重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。
将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。
3、按1ml裂解液加10 µl PMSF（100mM），摇匀置于冰上。
（PMSF要摇匀⾄⽆结晶时才可与裂解液混合。
）4、每瓶细胞加400 µl含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。
5、裂解完后，⽤⼲净的刮棒将细胞刮于培养瓶的⼀侧（动作要快），然后⽤枪将细胞碎⽚和裂解液移⾄1.5ml离⼼管中。
（整个操作尽量在冰上进⾏。
）6、于4℃下12000rpm离⼼5min。
（提前开离⼼机预冷）7、将离⼼后的上清分装转移倒0.5min的离⼼管中放于－20℃保存。
（2）以哺乳动物组织样本为例，对其进⾏总蛋⽩提取：1. 将100 mg 组织剪切成⼩块，加⼊适量的冰冷PBS 洗涤两次后，4℃，700×g（3000 rpm) 离⼼3 min，弃上清。
WB实验步骤
WB实验步骤WB实验是一种分离和检测蛋白质的常用实验技术。
以下是WB实验的详细步骤，共分为六个主要步骤。
步骤一：蛋白质提取1.1收集实验所需样本，例如细胞或组织。
如果是细胞样本，可以通过细胞培养离心将细胞沉淀下来。
如果是组织样本，可以通过切割及别的方法收集组织样本。
1.2加入合适的蛋白质提取缓冲液，如RIPA缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂和磷酸酯酶抑制剂，以保护蛋白质的完整性。
1.3震荡或旋转混合样本，使细胞或组织彻底裂解。
1.4将样本在低温下离心，以去除细胞残渣和细胞核等。
1.5收集上清液，其中含有溶解的蛋白质。
步骤二：蛋白质浓度测定2.1 使用BCA蛋白质定量试剂盒或Bradford蛋白质定量试剂盒等试剂，根据试剂盒说明书，测定蛋白质的浓度。
2.2根据蛋白质的浓度调整提取的蛋白质样本的浓度，以保证后续实验的准确性。
步骤三：SDS-电泳3.1准备一定比例的分离凝胶和浓缩凝胶。
通常使用8%-12%的聚丙烯酰胺凝胶。
3.2预运行凝胶，将上清液和蛋白质样本与蛋白负载缓冲液混合，使其达到相同的体积分数，并加入还原剂和SDS。
3.3将混合样品加载到凝胶孔中，根据需要分别加载蛋白质标准，以便确定蛋白质样品的分子量。
3.4设置合适的电泳电压，使蛋白质在凝胶中进行电泳，直至蛋白质通过凝胶前进行分离。
3.5 可以通过染料（如Coomassie blue G-250染色）或银染等方法，可视化分离的蛋白质带。
步骤四：蛋白质转移4.1准备一块聚偏氟乙烯（PVDF）或硝酸纤维膜（NC）作为蛋白质的转移载体，并根据凝胶大小和所需的转移时间切割。
4.2将预运行的蛋白质凝胶和转移载体置于转移装置中，确保凝胶和载体之间没有气泡。
4.3加入冷却的转移缓冲液，确保完全润湿载体，并移除空气泡。
4.4设置合适的转移电流和时间，以将蛋白质从凝胶中转移到膜上。
4.5转移结束后，将膜从转移装置中取出，并立即进行后续处理。
步骤五：免疫检测5.1将膜与阻塞缓冲液溶液处理，以防止非特异性结合。
WB操作流程
电泳分离，转膜，固定蛋白于膜上
封闭
9
Western Blot 第四步：抗体孵育
一抗的选择 单克隆抗体 多克隆抗体 二抗的选择 HRP，AP，生物素，荧光素，罗丹明标记
注意：抗体的稀释倍数是由底物和待检 测蛋白质的丰度决定的，为了获得最佳 实验结果，强烈推荐进行预实验，以确 定具体的实验参数
Western Blot
可曝光的Marker PM Western Midview Marker
可结合二抗或通过一抗间接结合二抗 可与目的蛋白在同一张胶片上曝光
Western Blot
可曝光的marker PM Blue MidRange View Marker
6条蓝色条带，电泳过程全程监控 35kD条带可结合抗体， 可与目的蛋白一起曝光
稳定性 底物 动力学特性 价格 发光底物 显色底物
Western Blot
化学显色法
第五步检测 方法
方便、便宜、有毒、灵敏度较低、费抗体、反应慢、线性窄、不易 保存、不能重新剥离检测 化学发光法 灵敏、快速、节省抗体、反应快、线性宽、无害、特异性高、可重 新剥离 检测
12
Western Blot
Chinese Academy of Agricultural Science From may,2008, to present, more than 40 institutions outsourcing their antibody production to CWBIO
北京康为世纪生物科技有限公司
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Western Blot
印迹膜选择
6
Western Blot
WB实验步骤详解
WB实验步骤详解WB实验（Western Blotting）是一种用于检测和鉴定蛋白质的实验技术。
在WB实验中，通常将目标蛋白质从混合蛋白样本中分离出来，然后通过电泳将其分离在聚丙烯酰胺凝胶上，并利用蛋白质转印技术将蛋白质迁移到膜上。
最后，使用特异性抗体进行免疫染色来检测目标蛋白质。
下面是WB实验的详细步骤：1.提取蛋白质：首先，从细胞、组织样本中提取蛋白质。
这个步骤可以使用不同的方法，例如细胞裂解、组织切碎和离心等。
提取的蛋白质可以用于整个WB实验的下一步。
2.蛋白质电泳分离：将提取的蛋白质样本与样品缓冲液混合，然后加载到聚丙烯酰胺凝胶上。
通常使用的凝胶是SDS-（聚丙烯酰胺凝胶电泳），该凝胶根据蛋白质的分子量将其分离开来。
样品加载完毕后，通电进行电泳分离。
较小的蛋白质会迁移到凝胶的上部，较大的蛋白质会停留在凝胶的下部。
3.转印：将电泳分离后的蛋白质转移到膜上。
通常使用的膜是聚偏氟乙烯（PVDF）或硝酸纤维素膜。
在转印之前，通常将凝胶浸泡在转移缓冲液中以增强转印效果。
然后，将凝胶与膜、滤纸层堆叠在一起，将其放置在转印装置中，施加电流进行蛋白质转印。
4.阻断：将转印完成的膜孔洞中的非特异性结合位点进行阻断。
阻断是为了防止以后的抗原-抗体反应受到非特异性结合的干扰。
最常用的阻断剂是1%-5%的非脂牛奶粉或5%-10%的牛血清蛋白。
5.抗体孵育：使用特异性的抗体来检测目标蛋白质。
首先将抗体稀释在主抗体稀释液中，然后将其加到阻断后的膜上进行孵育。
通常在4℃下过夜孵育，使抗体与目标蛋白质结合。
选择合适的抗体对于获得准确的结果非常重要。
6.辅助抗体孵育：将特异性抗体之外的次级抗体添加到膜上，用于识别已结合的主抗体。
这些次级抗体通常与酶（如辣根过氧化物酶）或荧光染料标记进行共轭，以便于标记的抗体的检测。
次级抗体与主抗体结合形成复合物。
7.检测：使用特定的检测方法来显示已结合的抗体。
这些方法可以使用酶标法（如辣根过氧化物酶反应和色素显色）或荧光技术（如荧光染料）。
WB详细操作过程
一、制胶1、注意一定要将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干2、玻璃板干净后，对着与胶接触的面对其靠拢，整齐的夹到绿色架子里，再按照说明书，配制分离胶（分为两块的配制与一块的配制），其中PAGE（解冻现拿现用，聚丙酰胺（4度冰箱冷藏），在加入分离胶之前用水检验是否漏水3、用枪头，对好玻璃板的边缘打下去，注意快速不要漏出去，液面要平，根据插梳子的位置，加入到一定高度，最后在加满纯水覆盖其上，封胶4、静置40min,将分离胶上的水倒出，观察分离胶是否有较好的制作好5、配制浓缩胶（分为两块的配制与一块的配制），配制好后迅速的加入到玻璃板内，，并插上梳子，静置30min6、结束后，将玻璃板取下，放入纯水的盒子里，放入到4度冰箱内备用二、提取蛋白1、取出六孔板，吸取原培养液丢弃，靠边加入PBS洗涤（500ml），轻晃，吸取废液丢弃，洗涤三次2、加入蛋白裂解液（视细胞数量而定）加入裂解液之后，调小移液枪量程，反复摧打至培养皿底部全透明3、将产物吸入1.5ml的EP管，用震荡机振荡30s，冰浴10min，反复三次，取的两支EP管标注蛋白名字）4、振荡离心13000转，4度，5min5、用移液枪取离心后的上清液至新取的EP管，1.5ml 2支，注意名称的对称6、放入—80度冰箱储存三、蛋白定量测定1、准备工作：BCA工作液、蛋白标准液、96孔板、冰盒、提取的蛋白2、按照说明书计算所需BCA工作液的量，A液：B液=50：13、在孔板盖子上标记，加标准液（8个）与样品的标记，在本子上写好浓度梯度，对着位置加入标准液浓度0，1，2，4，8，12，16，20，之后在标准样品的孔内，用pbs加满到20微升4、加完标准液，在对应的孔里加样品20微升，最后将配好的BCA 液加入到标准液和样品中各200微升，5、放在37度振荡培养箱内振荡孵育30分钟6、提前将酶标仪打开7、时间到了之后，去将孔板拿出放入酶标仪中测蛋白：步骤：session ——new——next——use default——next finish——设置波长（526）——出仓——file wizard——设置孔板数——no.of unknows——add and close——左上角results——左下方右键点（report/export)——把左侧中的data添加到右框——点save to file 选择储存路径——保存出仓——放板、入仓、开始8、若没有错误，则将剩余的蛋白根据比例1：4（Loading buffer：蛋白）加入Loading buffer9、孵育100度，5min，提前将电锅浴打开10、完成后放入-80度四：样品蛋白处理准备：PBS，移液枪，1.5mlEP管步骤：取出上样样品至1.5 ml离心管中，加入5×SDS 上样缓冲液至终浓度为1×。
wb的简化步骤
wb的简化步骤
WB即Western blot，是一种综合性的免疫学检测技术。
其简化步骤如下：
1. 提取膜蛋白或者总蛋白（主要使用RIPA蛋白裂解液和蛋白酶抑制剂，低温操作）。
2. 制胶（玻璃要洗干净，缓慢铺胶）。
3. 跑电泳（电泳液可以使用干粉直接加双蒸水的，也可以使用SDS、甘氨酸和Tris配制。
上层胶80V+30min，下层胶120V+90min）。
4. 转膜（转膜使用的纤维膜价格较贵，一般分为0.22um、0.47um两种。
小分子蛋白要求孔径小一些，一般300mA+70min，但若发现蛋白在胶上有残留，可适当延长时间）。
5. 封闭（2h BSA或者5%脱脂奶粉，用PBST或TBST配制）。
6. 孵育抗体（4°C过夜，一抗二抗，二抗2h）。
7. 显影（使用ECL）。
WB操作复杂，实验过程中需要严格按照操作步骤进行，同时注意细节和条件的优化，以确保实验结果的准确性。
如果有需要更详细的步骤，可以查询相关的实验手册或者咨询相关的实验技术人员。
WB实验步骤详细情况总结
蛋白提取（所有操作在冰上进行）1. 裂解1）配裂解液：PMSF=100 : 1，（裂解液和PMSF在-20 C保存，提前一天4C解冻）取2ml裂解液，加20 M PMSF混匀2）称取30mg组织，切碎放入标记好的AP管中，加入600讪上述1中液体（加入液体与组织比例为20：1），冰上静置10mi n2. 匀浆先用超纯水润洗一下匀浆机的钢头，（同时进行几组匀浆时，组间也要润洗钢头）在匀浆机（在生化室）上每次匀浆10s,两次（间隔5s），冰上静置30min3. 离心（在基础4楼416室）1）自带1ml枪以及蓝枪头和黄枪头，三个 1.5的离心管（①，②两个标记，③加少量超纯水，③号是为了离心平衡，对称放置）2）将离心机预冷至4 C为止，以1200X10r/min离心15min3）用移液枪将上层清液取出放入①②号管中4. 变性（上样缓冲液：样品=4: 1）将样品转移至2~3个0.5mlAP管中加上样缓冲液，100 C变性10mi n仪器屏幕：温度「C）时间（时：分钟）5. 保存变性结束后，打开AP管盖放一下气，然后4C保存，点样是取出即可用WB实验步骤1. 清洗玻璃板：清洗玻璃板后风干，将玻璃板对齐后放入夹中卡紧，操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。
2. 配制分离胶1）准备：1ml枪（蓝色枪头），200讪枪（黄色枪头）10讪（白色枪头）2）10%分离胶的配置：（用50ml烧杯。
1.0mm板配1.5块胶，1.5mm板配2块板）3. 灌胶沿玻璃板右上角缓慢匀速加入分离胶（用1ml移液枪，不要将移液管内液体完全打出防止气泡）保持液面平稳上升至上方绿色线为止4. 水封立即用1ml超纯水进行水封（利用重力把胶压平），如有气泡则用针头吸出防止影响电泳效果，等待20-30mi n5. 浓缩胶的配制（5% ）6. 电泳（电泳液最多使用两次）1）安装电泳装置低板对内，上方夹住，往两板中加入电泳液至黑线并观察是否漏液，缓慢拔掉梳子（注意两手平衡拔岀防止拔歪）2）点样（不易时间过长，防止样品条带扩散）组数少时尽量靠中间点样，边缘易跑歪3）连接电泳仪电泳池与电泳盖连接：黑对黑，红对红电永池的两个电极插入电极盖孔内，打开开关恒压电泳先调电压至70mV，跑约20min。
WB实验步骤详解
WB实验步骤详解Western blotting (WB)是一种用于检测蛋白质的技术，它可以分析蛋白质的大小、数量和结构。
WB通常用于检测特定蛋白质在细胞或组织中的表达水平，以及蛋白质的修饰状态。
本文将详细介绍WB实验的步骤，以帮助读者更好地理解和掌握这一技术。
步骤一，细胞或组织的裂解。
WB实验的第一步是将细胞或组织裂解，以释放蛋白质。
通常使用RIPA缓冲液或其它含有蛋白酶抑制剂的裂解液来裂解细胞或组织。
裂解液中的蛋白酶抑制剂可以防止蛋白质在裂解过程中被降解，保证蛋白质的完整性。
步骤二，蛋白质的分离。
裂解后的细胞或组织中含有大量的蛋白质，需要将这些蛋白质分离出来。
通常使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）来分离蛋白质。
SDS-PAGE可以根据蛋白质的大小将其分离成不同的条带，方便后续的检测。
步骤三，将蛋白质转移到膜上。
分离后的蛋白质需要转移到膜上，以便进行免疫印迹检测。
通常使用半湿式或全湿式电泳转印系统将蛋白质转移到聚偏氟乙烯（PVDF）或硝酸纤维素膜上。
转印的时间和电压需要根据蛋白质的大小和数量来确定。
步骤四，膜的封闭。
转移完蛋白质后，需要将膜进行封闭，以防止非特异性结合。
封闭通常使用5%脱脂奶粉或蛋白质封闭剂进行，可以有效地减少非特异性结合，并提高抗体对目标蛋白的特异性识别。
步骤五，抗体的孵育。
封闭后的膜需要与特异性的一抗进行孵育。
一抗可以是针对目标蛋白的单克隆或多克隆抗体。
孵育时间和温度需要根据抗体的性质来确定，通常在4°C下孵育一晚上。
步骤六，膜的洗涤。
孵育完一抗后，需要对膜进行洗涤，以去除未结合的抗体和非特异性结合。
洗涤液通常是含有Tween-20的PBS或TBST缓冲液，需要进行多次洗涤以确保膜的干净。
步骤七，二抗的孵育。
洗涤完膜后，需要与特异性的二抗进行孵育。
二抗通常是与酶或荧光素结合的抗体，可以识别一抗并发出特定的信号。
孵育时间和温度需要根据二抗的性质来确定。
步骤八，膜的洗涤。
WB操作过程
一、操作步骤：1. 蛋白样品制备（1）单层贴壁细胞总蛋白的提取：①倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。
②每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS（0.01 M pH7.2～7.3）。
平放轻轻摇动1 min 洗涤细胞，然后弃去洗液。
重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。
将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。
③按1ml裂解液加10 μl PMSF（100 mM），摇匀置于冰上。
（PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。
）④每瓶细胞加400 μl含PMSF的裂解液，于冰上裂解30 min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。
⑤裂解完后，用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快），然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5 ml 离心管中。
（整个操作尽量在冰上进行。
）⑥于4℃下12000 rpm离心5 min 。
（提前开离心机预冷）⑦将离心后的上清分装转移倒0.5 min 的离心管中放于-20℃保存。
（2）组织中总蛋白的提取：①将少量组织块置于1～2 ml 匀浆器中球状部位，用干净的剪刀将组织块尽量剪碎。
②加400 ml单去污剂裂解液裂（含PMSF）于匀浆器中，进行匀浆。
然后置于冰上。
③几分钟后再碾一会儿再置于冰上，要重复碾几次使组织尽量碾碎。
④裂解30 min后，即可用移液器将裂解液移至1.5 ml 离心管中，然后在4℃下12000 rpm 离心5 min ，取上清分装于0.5 ml 离心管中并置于-20℃保存。
（3）加药物处理的贴壁细胞总蛋白的提取：由于受药物的影响，一些细胞脱落下来，所以除按（1）操作外还应收集培养液中的细胞。
以下是培养液中细胞总蛋白的提取：①将培养液倒至1.5 ml 离心管中，于2500 rpm 离心5 min。
②弃上清，加入4 ml PBS并用枪轻轻吹打洗涤，然后2500 rpm 离心5 min 。
弃上清后用PBS重复洗涤一次。
WB实验步骤详细总结
蛋白提取（所有操作在冰上进行）1.裂解1)配裂解液：PMSF=100：1，（裂解液和PMSF在-20℃保存，提前一天4℃解冻）取2ml裂解液，加20μl PMSF混匀2)称取30mg组织，切碎放入标记好的AP管中，加入600μl上述1中液体（加入液体与组织比例为20：1），冰上静置10min2.匀浆先用超纯水润洗一下匀浆机的钢头，（同时进行几组匀浆时，组间也要润洗钢头）在匀浆机（在生化室）上每次匀浆10s，两次（间隔5s），冰上静置30min3.离心（在基础4楼416室）1)自带1ml枪以及蓝枪头和黄枪头，三个1.5的离心管（①，②两个标记，③加少量超纯水，③号是为了离心平衡，对称放置）2)将离心机预冷至4℃为止，以1200×10r/min离心15min3)用移液枪将上层清液取出放入①②号管中4.变性（上样缓冲液：样品=4：1）将样品转移至2~3个0.5mlAP管中加上样缓冲液，100℃变性10min仪器屏幕：5.保存变性结束后，打开AP管盖放一下气，然后4℃保存，点样是取出即可用WB实验步骤1.清洗玻璃板：清洗玻璃板后风干，将玻璃板对齐后放入夹中卡紧，操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。
2.配制分离胶1)准备：1ml枪（蓝色枪头），200μl枪（黄色枪头）10μl（白色枪头）2)10%分离胶的配置：（用50ml烧杯。
1.0mm板配1.5块胶，1.5mm板配2块板）3.灌胶沿玻璃板右上角缓慢匀速加入分离胶（用1ml移液枪，不要将移液管内液体完全打出防止气泡）保持液面平稳上升至上方绿色线为止4.水封立即用1ml超纯水进行水封（利用重力把胶压平），如有气泡则用针头吸出防止影响电泳效果，等待20-30min5.浓缩胶的配制（5%）6. 电泳（电泳液最多使用两次）1)安装电泳装置低板对内，上方夹住，往两板中加入电泳液至黑线并观察是否漏液，缓慢拔掉梳子（注意两手平衡拔出防止拔歪）2) 点样（不易时间过长，防止样品条带扩散）3)连接电泳仪电泳池与电泳盖连接：黑对黑，红对红电永池的两个电极插入电极盖孔内，打开开关恒压电泳 先调电压至70mV ，跑约20min 。
WB操作基本流程
WB操作基本流程Western-Blot 操作流程母液1.0mol/L Tris·HCl Tris (MW121.14) 30.29g＋蒸馏水200ml （用于上抗体后漂洗，一次配250ml）溶解后，用浓盐酸(约15ml)调pH 至7.6，最后用蒸馏水定容至250ml，室温保存。
此液体用来配置TBS缓冲液，用来漂洗上抗体后的膜17.4mg/ml (100mmol/L)PMSF PMSF 0.174g＋异丙醇10ml溶后，分装1.5ml离心管，室温0.2mol/L NaH2PO4NaH2PO4(MW119.98) 12g＋蒸馏水至500ml 溶解后，室温保存。
0.2mol/LNa2HPO4Na2HPO4·12H2O(MW 358.14) 71.6g＋蒸馏水至1000ml 溶解后，室温保存。
10％SDS SDS 10g＋蒸馏水至100ml 50℃水浴下溶解，室温保存。
如长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。
10％过硫酸胺(AP) 过硫酸胺0.1g＋超纯水1.0ml溶解后，4℃保存，现配现用。
(可先将干粉称好分量后放在EP 管中，一次性多装几管，使用时加入超纯水即可)1.5mol/L Tris·HCl(pH8.8) Tris (MW121.14) 45.43g＋超纯水200ml （用于做胶，一次配100ml）溶解后，用浓盐酸调pH 至8.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。
0.5mol/L Tris·HCl(pH6.8) Tris (MW121.14) 15.14g＋超纯水200ml （用于做胶，一次配100ml）溶解后，用浓盐酸调pH 至6.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。
90％Acr/Bic(37.5：1) 丙稀酰胺(Acr)28.125g＋甲叉双丙稀酰胺(Bic)0.75g＋超纯水至100ml溶解后，一定要用滤纸过滤，4℃保存。
WB完整步骤
Western blot 步骤：配胶制胶跑胶转移胶（转膜）封闭和孵抗体扫膜一.配胶这些小孔的孔径随“双丙烯酰胺～丙烯酰胺”比率的增加而变小，比率接近 1：20 时孔径达到最小值。
SDS聚丙烯酰胺凝胶大多按“双丙烯酰胺～丙烯酰胺”为1：29 配制，试验表明它能分离大小相差只有3% 的蛋白质。
1.分离胶（按照自己目的蛋白的大小说明选择合适的浓度）2.浓缩胶均可事先配好（除AP及TEMED外），过滤后作为储存液避光存放于4℃，可至少存放1个月，临用前取出室温平衡（否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡，有条件者可真空抽吸3分钟），加入10%AP（0.7~0.8:100, 分离胶浓度越高AP浓度越低，15%的分离胶可用到0.5:100）及TEMED（分离胶用0.4:1000, 15%的可用到0.3:1000，浓缩胶用0.8：1000）PAGE配胶的试剂和配方比例对电泳结果的质量当然有决定性的影响，这个配胶的比例，在《分子克隆》上有详细的论述，相信大家都不难查到。
容易忽视的问题主要在于过硫酸铵（AP）一定要新鲜——最好用小指管配AP（写日期）保存在-20度，超过2周的AP扔掉算了，或者已经反复打开使用多次的AP都别用，二制胶1.灌入2/3的分离胶后应立即封胶，即压线。
30分钟胶浓度＜10%时可用0.1%的SDS封，浓度＞10%时用水饱和的异丁醇或异戊醇，也可以用0.1%的SDS。
封胶后切记，勿动。
如用醇封胶需用大量清水及ddH2O冲洗干净，然后加少量0.1%的SDS，目的是通过降低张力清除残留水滴10%的AP最好现配现用，如在4℃存放勿超过两周。
30%的丙烯酰胺如有沉淀，最好弃掉过硫酸铵（APS）(10%;w/v)取3g过硫酸铵，溶于去离子水，至终体积为30mL。
此溶液4℃下在短暂的数日内是稳定的，但建议，对每一组新胶均应新鲜配制但摇动溶液时不要过于剧烈以免引入过多地氧气2.灌积层胶5%（统一）40min说明：可延长，宁长勿短。
WB原理、步骤及总结
实验原理蛋白质印迹是把电泳分离的蛋白质转移到固定基质上，然后利用抗原抗体反应来检测特异性的蛋白分子的技术，包括三个部分：SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳转移，免疫印迹分析。
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳主要用于测定蛋白质相对分子质量，SDS是阴离子去污剂，能断裂蛋白质分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏其高级结构。
SDS与大多数蛋白质的结合比为1.4:1，由于SDS带有大量的负电荷，与蛋白质结合时掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别，使各种蛋白质带有相同密度的负电荷，形似长椭圆棒，蛋白迁移率与蛋白质相对分子质量的对数呈线性关系。
因此，利用相对分子质量标准蛋白所作的标准曲线，可以求得未知蛋白的相对分子质量。
电泳后蛋白质分子嵌在凝胶介质中，探针分子很难通过凝胶孔，将蛋白质从凝胶转移到固定基质上可以对蛋白质进行免疫检测分析。
方法有两种：①水平半干式转移即将凝胶和固定基质似三明治样夹在缓冲液浸湿的滤纸中间，通电10~30min可完成②垂直湿式转移即将凝胶和固定基质夹在滤纸中间，浸在转移装置的缓冲液中，通电2~4h或过夜可完成。
固定基质通常有硝酸纤维素膜、聚偏二氟乙烯膜和尼龙膜。
蛋白质转移到固定化膜上之后，通过蛋白质染料如丽春红S检测膜上的总蛋白，或用考马斯亮蓝检测凝胶上的蛋白剩余量，以验证转移是否成功。
用抗体作为探针进行特异性的免疫反应检测抗原蛋白，分为4步：①用非特异性、非反应活性分子封阻固定化膜上未吸附蛋白的自由结合区，以防止作为探针的抗体结合到膜上，出现检测时的高背景②固定化膜用专一性的一抗温育，使一抗与膜上的抗原蛋白分子特异性结合③酶标二抗与一抗特异结合④加入酶底物，适当保温，膜上便可见到颜色反应，检测出抗原蛋白区带。
主要溶液10%分离胶水 3.3mL、30% 丙烯酰胺混合液 4.0mL、1.0mol/L Tris（pH8.8）2.5mL、10% SDS 0.1mL、10%过硫酸铵0.1mL、TEMED 0.004mL5%浓缩胶水 2.7mL、30%丙烯酰胺混合液0.67mL、1.0mol/L Tris0.5mL、10%SDS0.04Ml/10%过硫酸铵0.04mL、TEMED0.004mL1×Tris –甘氨酸电泳缓冲液Tris碱3.03g、甘氨酸18.77g、SDS 1g，用去离子水定容至1L2×SDS凝胶加样缓冲液Tris-HCl（pH6.8） 100mmol/L，β-巯基乙醇10%，10%甘油，0.01%溴酚蓝，10%SDS转移缓冲液Tris 2.45g，甘氨酸11.25g，甲醇100mL，加去离子水至1LTBSTTris 1.21g NaCl 8.77g，Tween-20 1 mL，加去离子水至1LStripping1.3mL Tris （pH 6.8），4mL10%SDS，140µlβ-巯基乙醇，用水定容到20mL 实验步骤1 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳⑴凝胶配置①分离胶的配置：将配置好的分离胶液混匀后迅速倒入胶槽中，至距离短玻璃板顶端约2cm处，停止灌胶。
WB完整步骤
Western blot 步骤：配胶制胶跑胶转移胶（转膜）封闭和孵抗体扫膜一.配胶这些小孔的孔径随“双丙烯酰胺～丙烯酰胺”比率的增加而变小，比率接近 1：20 时孔径达到最小值。
SDS聚丙烯酰胺凝胶大多按“双丙烯酰胺～丙烯酰胺”为1：29 配制，试验表明它能分离大小相差只有3% 的蛋白质。
1.分离胶（按照自己目的蛋白的大小说明选择合适的浓度）2.浓缩胶均可事先配好（除AP及TEMED外），过滤后作为储存液避光存放于4℃，可至少存放1个月，临用前取出室温平衡（否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡，有条件者可真空抽吸3分钟），加入10%AP（0.7~0.8:100, 分离胶浓度越高AP浓度越低，15%的分离胶可用到0.5:100）及TEMED（分离胶用0.4:1000, 15%的可用到0.3:1000，浓缩胶用0.8：1000）PAGE配胶的试剂和配方比例对电泳结果的质量当然有决定性的影响，这个配胶的比例，在《分子克隆》上有详细的论述，相信大家都不难查到。
容易忽视的问题主要在于过硫酸铵（AP）一定要新鲜——最好用小指管配AP（写日期）保存在-20度，超过2周的AP扔掉算了，或者已经反复打开使用多次的AP都别用，二制胶1.灌入2/3的分离胶后应立即封胶，即压线。
30分钟胶浓度＜10%时可用0.1%的SDS封，浓度＞10%时用水饱和的异丁醇或异戊醇，也可以用0.1%的SDS。
封胶后切记，勿动。
如用醇封胶需用大量清水及ddH2O冲洗干净，然后加少量0.1%的SDS，目的是通过降低张力清除残留水滴10%的AP最好现配现用，如在4℃存放勿超过两周。
30%的丙烯酰胺如有沉淀，最好弃掉过硫酸铵（APS）(10%;w/v)取3g过硫酸铵，溶于去离子水，至终体积为30mL。
此溶液4℃下在短暂的数日内是稳定的，但建议，对每一组新胶均应新鲜配制但摇动溶液时不要过于剧烈以免引入过多地氧气2.灌积层胶5%（统一）40min说明：可延长，宁长勿短。
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Western Blot 相关实验方法与试剂（湿转法）人工肝实验室学习姚瑶（一）目的蛋白提取：（1）单层贴壁细胞总蛋白的提取：1、倒掉细胞培养液，加入Hanks液洗涤一次后倒掉，根据所用细胞决定是否用胰酶消化，加入适量（约5ml）新鲜细胞培养液后，将贴壁细胞吹起，并转移至4支离心管内，配平后，1500转离心10min。
2、倒掉上清，用4度预冷PBS溶液洗涤沉淀，1500转离心10min。
共洗三次，每次十分钟。
3、倒掉上清，吸净，每管加入50ul 细胞裂解液RIPA，吹散，加入后由于DNA的释放可迅速变粘稠，故应尽快转移至1.5ml EP 管内，-20℃裂解30min。
4、超声波细胞裂解仪上将各管裂解15s。
（可不做）5、4℃，12000转离心10min。
6、将上清转移至0.5ml EP管中，每管100ul，冰浴待用。
（2）组织中总蛋白的提取：1、取约100mg肝组织于研磨器内，加入500ul 细胞裂解液RIPA，研磨后吸出于1.5ml EP管内，再加入500ul RIPA，研磨后吸出于上EP管内。
冰上裂解30min。
2、配平后，4℃，14000转离心10min。
3、将上清分装于0.5ml EP管内，每管100ul，冰浴待用（二）蛋白含量的测定：1、稀释标准品：10ul标准品C液+90ul PBS溶液，混匀。
2、按0、1、2、4、8、12、16、20ul将稀释后的标准品加入于96孔板内，并用PBS将各孔补足20ul。
3、将第2、3排96孔板分别加入样品1ul、0.5ul，（可采用倍比稀释法），并用PBS将各孔补足20ul。
4、配制工作液：按A液：B液=50：1配制适量工作液，每孔加入200ul。
5、37℃水浴30min。
6、酶标仪测定各孔OD值（A570，Mode1）。
7、绘制标准曲线，计算样品蛋白浓度。
（三）SDS-PAGE电泳：（1）清洗玻璃板（2）灌胶与上样：1、配胶：根据目的蛋白的大小，决定分离胶的浓度。
以5ml 10%分离胶、3ml 5%浓缩胶为例：10%分离胶5%浓缩胶去离子水 1.9ml 2.1ml30%聚丙烯酰胺 1.7ml0.5ml1.5M Tris-HCl（Ph8.8） 1.3ml ------1.0M Tris-HCl（Ph6.8）------- 380ul10%SDS 50ul 30ul10%AP 50ul 30ulTEMED 2ul 3ul2、处理蛋白：计算含20-50ug蛋白的溶液体积即为上样量，加入上样量等体积的2×上样缓冲液Buffer，再加入上述总体积1/10的β-巯基乙醇，混匀后，放入PCR仪内，95℃反应10min。
3、加样：加入1×Tris-甘氨酸电泳液，电泳液至少要漫过内侧小玻璃板，取下梳子，安装好电泳槽，倒入缓冲液，微量加样器加样。
需在外槽电泳缓冲液中洗涤数次，以免交叉污染。
（3）电泳：100V，20min，待溴酚蓝成一直线后，150V，电泳至溴酚蓝刚跑出即可终止电泳(一般1.5h)，取出跑好的凝胶，切胶至适合大小。
进行转膜。
也可在转膜前验证是否有目的条带，使用考马斯亮蓝液置于摇床染色12h。
染完后观察，用脱色液脱色，20min/次，直至透明。
再进行转膜。
（四）转膜：配制1×转膜缓冲液（现配）。
一般配制成10×转膜缓冲液储存。
需要时配制成1×现用。
PVDF膜需用甲醇激活(15s)，注意戴手套、赶走气泡、胶与膜的位置、膜的正反面。
放置顺序为：海绵--滤纸2层—PVDF膜—凝胶--滤纸2层—海绵。
（大小：凝胶>滤纸>PVDF膜）（五）免疫反应：1、5%脱脂奶粉封闭，4℃过夜。
2、一抗孵育。
3、洗膜：PBST/TBST洗膜3次，10min/次。
4、二抗孵育。
5、洗膜：PBST/TBST洗膜3次，10min/次。
（六）显色：将HyGLO试剂A 750ul与试剂B 750ul混合后，均匀地滴于膜正面，约1min后，抖掉膜上液体，并吸干后显色。
在Western Blotting实验过程中使用内参的方法有：一、超级简便的标记内参使用法：只要在二抗孵育时加入HRP标记内参抗体，按照正常操作即可。
二、普通内参：当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量相差不大时，可以先进行目的蛋白的抗体温育显色和检测。
然后使用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体，重新进行内参蛋白的抗体温育、显色检测。
三、当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量大小相差比较明显情况下，可以在转膜后预染，根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分，使内参蛋白与目的蛋白分开。
然后两块膜分别与内参蛋白抗体以及目的蛋白抗体进行温育，二抗温育以及显色。
丽春红染色剂是一种阴离子重氮染料，由重氮氨基偶氮苯二磺酸（diazotized 4-amino-1,1’-azobenzene-3,4’-disulfonic acid）和萘酚二磺酸（2-naphthol- 3,6-disulfonic acid）耦合到四钠盐上。
其分子式C22H12N4Na4O13S4，分子量为760.6。
最大吸收光谱为520nm波长。
带负电荷的丽春红分子与正电荷的蛋白质氨基基团结合，也可以非共价键形式与蛋白质非极性区域结合。
丽春红染色溶液是染料丽春红与蛋白质氨基基团的结合并显示红色蛋白条带，快速、敏感、可逆地检测PVDF膜、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜上的蛋白成分。
丽春红染色溶液性能长期稳定，着色清晰灵敏，可检测250ng以上的蛋白。
丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗去除。
使用方法：1．取适量丽春红染色液，用去离子水10X稀释备用，染色液的用量，依膜的大小而定，浸没膜即可；2．将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，振荡5-10分钟或更长时间；3．取出印迹膜，用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，可出现清晰条带，记录结果；4．用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的Western检测。
Western Blot 相关试剂附1：溶液配制1、胰酶：0.25g 胰酶加PBS至100ml。
2、30%聚丙烯酰胺：聚丙烯酰胺29g+双丙烯酰胺1g 见蒸馏水至100ml3、Tris-HCl：1.5 M ：36g Tris 加水至200ml 加HCL滴定至pH 8.8。
1.0 M ：24g Tris 加水至200ml 加HCL滴定至pH 6.8。
4、10% AP：AP 1g 加蒸馏水至10ml5、5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：Tris 15.1g 甘氨酸94g SDS 5g 。
使用时稀释成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液6、10×转膜缓冲液：甘氨酸 29g Tris-HCL 58g SDS 3.7g 加蒸馏水至1 L。
1×转膜缓冲液：10×转膜缓冲液配100ml+甲醇200ml+蒸馏水至1000ml7、10% SDS：SDS 10g，加入约80ml去离子水，68℃加热溶解，加去离子水定容至100ml。
室温保存。
8、TBST缓冲液：NaCL 8.8g 1 M Tris-HCl(pH 8.0) 20ml 加入800ml去离子水，加入0.5ml Tween 20后充分混匀。
定容至1L，4℃保存。
9、封闭液：脱脂奶粉5g 加入TBST/1×PBS 定容至1L。
Tween-20【性状】聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸酯的混合物。
【作用与用途】为司盘和环氧乙烷的缩合物，由于其分子中有较多的亲水性基团一聚氧乙烯基，故亲水性强，为一种非离子型去污剂。
常作为水包油（O/W）型乳化剂；可与其他乳化剂如月桂醇硫酸钠或司盘类合用，能增加乳剂的稳定性。
也可作某些药物的增溶剂。
Tween-20有复性抗原的作用，可提高特异性的识别能力。
在做westen blot 时，用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点可以降低抗体的非特异性结合。
封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的标委、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。
最常见的封闭剂是BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和Tween-20（0.05 - 0.1%）稀溶液。
Tween 和同类型的Triton X-1OO(聚乙二醇辛基苯基醚)非离子型去污剂在乳化蛋白时，不破坏蛋白的结构，可减少对蛋白质之间原有的相互作用的破坏。
离子型去污剂如SDS则破坏蛋白的结构。
产品系列:吐温20(TWEEN-20)、吐温21(TWEEN-21)、吐温40(TWEEN-40)、吐温60(TWEEN-60)、吐温61(TWEEN-61)、吐温80(TWEEN-80)、吐温81(TWEEN-81)、吐温85(TWEEN-85)。
一、产品简介ACR是丙烯酸酯类（Acrylics）的缩写，也是丙烯酸酯类系列改性剂的总称，系丙烯酸酯类的高分子共聚物。
本公司生产的ACR为甲基丙烯酸甲酯与丙烯酸酯的共聚物，为白色可流动固体粉末。
根据丙烯酸酯类的不同，所得的ACR性能及用途各异，其应用范围广泛。
二、性能及质量指标ACR是一种易流动的白色粉末，无毒、无腐蚀性，属非危险品，粒度较细，真密度为1.05－1.20g/cm3，具体质量指标如下：序号项目单位201401一等品合格品一等品合格品1特性粘数ml/g1.8－3.03.0－4.02表观密度g/cm30.3－0.50.4－0.63挥发物含量%,≤1.02.01.02.04筛余物(0.315mm)%,≤1.02.01.02.0三、用途ACR作为加工助剂，可明显缩短塑化时间，加快熔融，促进塑化，对挤出制品可使其平衡扭矩提高，使其塑化均匀；对压延制品，加入ACR能克服表面皱纹，有利于物料包辊，减少气泡；对于真空成型制品，加入ACR可提高熔体延伸性，克服熔体破裂现象，容易深拉成型，并使制品厚薄均匀。
从制品的外观来看，ACR可明显提高制品的表面光泽度，使制品看起来光滑细腻。
本加工助剂应用范围非常广泛，除硬质PVC制品外，对半硬质PVC制品和软质PVC制品均具有改进加工性能的功效，适用于需要良好耐候性的不透明PVC制品，如管道、建筑材料（壁板、门窗异型材、管件、百叶窗、雨水槽等）以及注塑、吹塑制品等。
四：包装25kg聚丙烯复膜编织袋包装。
参考资料：acr和bis：当然是产生凝胶的最基本物质。
SDS：使蛋白在胶中可以保持变性Tris-Hcl:使分离胶的pH保持在8.8，浓缩胶的pH保持在6.8对于浓缩胶来说，pH6.8可以通过甘氨酸和和氯离子的作用产生压缩，从而使蛋白条带压细。
对于分离胶来说，pH8.8与甘氨酸的pka接近，从而使不同分子量的蛋白产生不同的泳动速度，从而使不同分子量的蛋白分开。