鸡胚在医学中的应用
病毒的鸡胚培养法接种途径
新乡医学院微生物学教研室 监督电话:3029945 Email:jcbwsw@
内容提要
一 抗酸染色 二 病毒的接种技术 三 真菌菌落的观察 （小白鼠和鸡胚共用注射器16支，病毒悬液用 锥蓝染液代替，小白鼠8只，鸡胚15只，微 量移液器4支，真菌示教培养管4支）
缺陷：带毒，缺敏感动物。
常用动物：鼠、家兔、猴和羊等。
接种的途径：脑内、鼻内、皮内、腹腔内和静
脉注射等。
1 病毒的动物接种
目的 了解病毒的动物接种法 材料 小白鼠（1~3天或3周龄）， 乙型脑炎 病毒悬液， 1ml注射器（8支），碘酒 ， 棉签，眼科剪等
小白鼠的脑内接种（共8只小白鼠）
病毒的培养
病毒的概念：形态最小，结构最简 单的微生物。缺乏完整的酶系统， 无完整的细胞结构，必须在活的组 织细胞中才能增殖。
常用的分离、 培养、鉴定 病毒的分离培养 病毒的方法
动物接种法
鸡胚培养法
组织细胞培养法
动物接种（Animal inoculation）
最早应用的病毒培养法。 用途：分离鉴定、传代、制备免疫血清。
本次实验不做培养，接种完病毒，可将 鸡胚去除部分卵壳后，小心将卵壳内组 织倒入平皿中，观察接种的病毒替代液 （锥蓝染液）是否接种部位正确及各膜 囊等的组织结构。
注意事项
消毒小白鼠时不要碰到眼睛
注射时不要扎的太深以免扎到手
磨卵壳及钻孔时力量要适中
看过的鸡胚不要倒入水池，倒入指定的 大烧杯中
菌落光滑、湿润；无菌丝 隐球菌菌落 外观和酵母型菌落相似，显微镜下可看到假菌丝 白色念株菌菌落 菌落系由多细胞菌丝体所组成 大多数丝状真菌或霉菌的菌落
〖医学〗流感病毒的分离鉴定
(2)取尿囊液0．1mL,作1：10稀释。
(3)取10支小试管，按给各管参加生理盐水。
(4)取1：10稀释的尿囊液0．2mL，加人第1个试管 中，混匀后，再吸出0．2mL参加第2个试管中； 混匀后，从第2个试管吸出0．2mL参加第3个试 管……依次作倍比稀释至第九管，混匀后自第9 个试管中取出0．2mL弃掉。这样各管液体量均 为0．2mL，从第1-9个试管的尿囊液稀释度为 1:20，1:40，…，1:5120，第10个试管为生理 盐水对照管。
+－
－
－
→→ → → → → → →→
㈠ ㈡ ㈢ ㈣ ㈤㈥ ㈦ ㈧ ㈨㈩
试管号 10
12 3 4 5
67
8
9
生理盐水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
0.2
0.2
病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
0.2
弃0.2
病毒稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 对照
不 管 是 中 医学 还是西 医学， 从二者 现有的 思维方 式的开 展趋势 来看， 均是走 向现代 系统论 思维， 中医药 学理论 与现代 科学体 系之间 具有系 统同型 性，属 于本质 相同而 描述表 达方式 不同的 两种科 学形式 。可望 在现代 系统论 思维上 实现交 融或统 一，成 为中西 医在新 的开展 水平上 实现交 融或统 一的支 撑点， 希冀籍 此能给 中医学 以至生 命科学 带来良 好的开 展机遇 ，进而 对医学 理论带 来新的 革命。 编 辑 本 段 现 代中医 史
《医学微生物学》动物接种实验与病毒培养技术实验
《医学微生物学》动物接种实验与病毒培养技术实验实验动物在病原微生物中的研究上占有重要地位。
利用实验动物可以进行病原菌的分离鉴定、毒力的检测、制备免疫血清等生物制品；进行各种皮肤试验；建立人工感染的动物模型；进行发病机制、疾病防治以及免疫机制的研究等。
一、实验动物的管理1．实验室常用的动物：家兔、豚鼠、小白鼠、大白鼠、地鼠、绵羊、鸡等，根据实验的目的选择最适宜的动物。
2．实验动物必须与正常动物分开饲养，动物室内要经常保持清洁和空气畅通，并应有防蚊、防蝇、防逃跑及保暖设备。
3．实验动物要精心饲养，喂以适当的饲料并给以充足的水，任何动物也不要断水。
4．实验动物要有详细的记录，包括性别、体重、体表特征(如毛色等)、接种材料、接种日期、接种途径、剂量、次数以及接种变化等。
5．实验动物应做好标记，对较大动物如家兔、豚鼠等可用金属号码牌固定于耳朵上，对较小动物如大白鼠、小白鼠等可用复红(或苦味酸等染料)涂于身体的不同部位，以资识别。
盛装动物的笼具等，也应付以标签。
6．接种后的动物应每天观察1～2次，注意动物的精神状态，活动能力、饮食和大小便情况，体温、注射部位的反应以及全身反应，如不安、耸毛、震颤、弓背、麻痹及死亡等，并应详细记录之。
7．感染动物死亡后，应立即剖检或暂时冻存。
动物的排泄物及使用的笼具等必须严格消毒。
任何用过的动物，不宜再做其他试验。
二、实验动物的选择选择实验动物应注意以下几点：1．易感性：是选择实验动物的首要条件。
2．动物健康：体质健康、发育正常、体重适宜；最好使用自己繁殖的动物，由市场购买的动物至少经过一周的隔离观察，证明无隐性感染方可使用；某些特殊实验应需选用专门喂养繁殖的无菌动物；实验动物应容易获得，便于喂养和管理。
3．动物大小：同一实验应选用大小一致的动物，通常以年龄或体重为标准。
4．性别：某些实验最好选用同一性别，特别是免疫的动物和需要观察较长时间的实验动物。
5．动物品系：某些实验要求使用纯系动物，纯系小鼠用于免疫学、杂交瘤及病毒感染等研究。
常用实验动物在生物医学研究中的应用
最早用于这方
表 1 其他常用实验动物在生物医学研究中的应用
畜牧兽医科技信息
2013 年第 07 期 7
专论与综述
面研究的动物即家免，如利用纯胆固醇溶于植物油中喂饲家 兔，可引起家兔典型的高胆固醇血症，主动脉粥样硬化病、冠 状动脉硬化病。
大鼠对营养物质缺乏敏感，可发 生典型缺乏症状，是营养学研究使用最早、最多的实验动物。
大鼠常用于药物毒力、药效评价、新药筛 选等研究。
可复制成各种肿瘤模型，是肿瘤实验研究 最常用的实验动物之一。易患肝癌，可用二乙基亚硝胺、二甲 基偶氨苯（DAB）复制大鼠肝癌，用甲基苄基亚硝胺诱发复制 大鼠食管癌等。
大鼠是研究支气管肺炎、副伤寒的重要实 验动物。对流感病毒、麻疯、霉形体、巴氏杆ห้องสมุดไป่ตู้、葡萄球菌、念 珠菌、黄曲霉菌等比较敏感，适合复制多种细菌性和病毒性
吸虫、锥虫、疟疾等寄生虫病的研究。 许多近交系小鼠自发性肿瘤发病率很
高，与人体肿瘤接近，进行药物筛选比移植性肿瘤可能更为 理想。另外，严重免疫缺陷小鼠，如裸鼠、SCID 小鼠可接受各 种人类肿瘤细胞的植入，直接用于人类肿瘤生长、转移及治 疗的研究。
小鼠毛色变化多样，其遗传学基 础已研究得比较清楚，因此常用小鼠毛色做遗传学分析。此 外，许多小鼠具有遗传疾病，如小鼠黑色素瘤、家族性肥胖、 遗传性贫血、尿崩症等，这些疾病与人类发病相似，可用作人 类遗传疾病的动物模型。
用于某些药物或毒物对胎儿后期发育影响的实验；由于豚鼠 对组织胺敏感，能引起支气管痉挛性哮喘，常用于平喘药和 抗组织胺药物的研究等。
211181479_鸡胚地龙贴膏联合双醋瑞因治疗早中期膝骨关节炎的临床观察
·药物与临床·鸡胚地龙贴膏联合双醋瑞因治疗早中期膝骨关节炎的临床观察Δ张强 1＊，曹益发 2，胡建山 1，李溥 2，胡静 2，陆耀宇 1，苏军 1，梁子聪 1，杨柱 3 #（1.贵州省黔南布依族苗族自治州中医医院/贵州中医药大学第三附属医院骨伤科，贵州 都匀 558000；2.贵州水族药物开发有限责任公司，贵州 三都 558100；3.贵州中医药大学骨伤学院，贵阳 550025）中图分类号 R 969.3；R 979.9 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）09-1099-05DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.09.14摘要 目的 探讨鸡胚地龙贴膏联合双醋瑞因治疗早中期膝骨关节炎（KOA ）的临床疗效及安全性。
方法 将100例KOA 患者按随机数字表法分为对照组和试验组，每组50例。
对照组患者口服双醋瑞因胶囊，每次50 mg ，每日2次；试验组患者在对照组治疗基础上给予鸡胚地龙贴膏外贴，每日1次。
两组疗程均为4周，疗程结束后3个月随访。
观察两组患者的临床疗效，治疗前后及疗程结束后3个月随访时的视觉模拟评分法（V AS ）评分、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数量表（WOMAC ）评分、Lysholm 膝关节功能评分，检测膝关节液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、超氧化物歧化酶（SOD ）、丙二醛（MDA ）、一氧化氮（NO ）、软骨寡聚基质蛋白（COMP ）、基质金属蛋白酶13（MMP-13）和Ⅱ型胶原C 端肽（CTX-Ⅱ）的水平，并记录不良反应发生情况。
结果 治疗4周后，试验组患者的总有效率为96.0%，对照组为90.0%，两组比较差异无统计学意义（P ＞0.05）；疗程结束后3个月随访时，试验组患者的总有效率（94.0%）显著高于对照组（62.0%）（P ＜0.05）。
治疗4周后和疗程结束后3个月随访时，两组患者的V AS 评分、WOMAC 评分和膝关节液中TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 、NO 、COMP 、MMP-13、CTX-Ⅱ水平均显著低于治疗前，Lysholm 评分和膝关节液中SOD 活性均显著高于治疗前，且同一时期试验组指标均显著优于对照组（P ＜0.05）。
医学微生物学：病毒感染的检查方法与防治原则
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检
原则：与细菌类似 •用于分离培养的标本： 采取采取急性期标本、使用抗生素处 理防细菌污染
无菌操作、低温保存、尽快送检
•血清学诊断的标本： 双份血清？
早期采集
标本的采集和送检六原则
无菌采集 采集合适的标本
采集双份血清
尽快送检 正确标记
❖ 种类：常用的传代细胞有HeLa（宫颈癌）细胞、KB（口 腔癌）细胞、HEp-2（喉癌）细胞、Vero（非洲绿猴肾） 细胞等。
❖ 特点及作用：由于传代细胞系能有规律地持续传代，容
易保存（-70℃~-196℃）且对某些病毒易感，因此，在
诊断、科研等非疫苗生产的项目中常被采用。目前广泛 用于病毒的实验室诊断工作，根据病毒对细胞的亲嗜性 ，选择敏感的细胞系使用传代细胞系
病毒1:100稀释
病毒1:1000稀释
中性红染色：活细胞呈红色，受病毒感染破坏的细胞不着色
三、病毒感染的诊断
1.病毒形态学检查 2.病毒成分（病毒蛋白和核酸）检查 3.病毒感染的血清学（病毒抗体）检查
❖ 标本类型？ 与细菌标本类似 ❖ 好的标本？ 正常无菌性体液 ❖ 标本内容物一般需要含有宿主细胞
二、病毒的分离培养与鉴定
病毒的实验室诊断方法
动物接种
病 毒
鸡胚培养
分离培养方法（金标准）
检 细胞培 养 测 病毒成分检测
活细胞
血清学诊断
（一）病毒的分离培养
1.动物接种
❖ 最原始的病毒培养方法 多用于没有敏感细胞进行细胞培养的病毒 （乙肝、丙肝、丁肝、戊肝病毒等）
二倍体细胞培养(diploid cell culture )
胚的培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握胚胎培养的基本原理和操作步骤。
2. 学习在体外条件下模拟胚胎发育过程，观察胚胎的形态变化和生长情况。
3. 探讨不同培养条件对胚胎发育的影响。
二、实验原理胚胎培养是指将受精卵或早期胚胎置于体外的人工培养系统中，模拟体内环境，使其继续发育和生长。
通过胚胎培养，可以研究胚胎发育的规律，筛选优良胚胎，以及进行胚胎基因编辑等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 受精卵或早期胚胎- 培养基：DMEM/F12、KSR、Hams F12- 胎牛血清（FBS）- 促性腺激素（如hCG）- 透明质酸酶- 胚胎培养皿- 显微镜- CO2培养箱- 移液器- 计时器2. 实验仪器：- 超净工作台- 恒温箱- 高压灭菌器- 电子天平四、实验步骤1. 准备培养基：- 将DMEM/F12、KSR、Hams F12培养基按照说明书比例配制，并加入胎牛血清（FBS）。
- 将培养基在无菌条件下过滤除菌，并分装于培养皿中，备用。
2. 胚胎处理：- 将受精卵或早期胚胎置于超净工作台中，用消毒后的移液器吸取一定量的透明质酸酶，轻轻涂抹在胚胎表面。
- 适当放置一段时间，使透明质酸酶作用于胚胎表面，使其分散成单个细胞。
3. 胚胎培养：- 将处理后的胚胎放入装有培养基的培养皿中，放入CO2培养箱中培养。
- 每天观察胚胎的生长情况，记录胚胎的形态变化和细胞分裂情况。
4. 不同培养条件实验：- 将胚胎分别置于不同浓度的胎牛血清（FBS）培养基中培养，观察胚胎的生长情况。
- 将胚胎置于不同温度、pH值、氧气浓度等条件下培养，观察胚胎的生长情况。
5. 结果记录与分析：- 记录不同培养条件下胚胎的形态变化、细胞分裂情况以及生长速度。
- 对实验结果进行统计分析，探讨不同培养条件对胚胎发育的影响。
五、实验结果1. 正常培养条件下：- 胚胎在正常培养条件下能够正常发育，细胞分裂速度较快，形态变化明显。
2. 不同胎牛血清（FBS）浓度条件下：- 随着胎牛血清（FBS）浓度的增加，胚胎的生长速度和细胞分裂速度逐渐加快。
第十二章病毒的培养
第十二章病毒的培养一、实验动物二、鸡胚三、组织培养(一)组织（块）培养(二)器官培养(三)细胞培养(四)组织和细胞的培养方法(五)细胞克隆技术(六)细胞的保存四、病毒的组织培养五、病毒蚀斑技术病毒缺乏完整的酶系统,又无核糖体等细胞器,所以不能在任何无生命的培养液内生长。
因此,实验动物、鸡胚以及体外培养的器官和细胞就成为人工增殖病毒的基本工具。
而大量病毒的培养,又是病毒学实验研究以及制备疫苗和特异性诊断制剂的先决条件。
培养病毒最早应用的方法是实验动物和鸡胚,但从50年代简便适用的细胞培养广泛应用于病毒培养以来,前两种方法已降到次要地位,但至今仍有部分病毒的分离鉴定还离不开实验动物或鸡胚,特别是在免疫血清制备以及病毒致病性、免疫性、发病机理和药物效检等方面。
在禽类病毒病和流感、副流感类等病毒病的研究方面,鸡胚(含其它禽胚)仍具有重要的应用价值。
一、实验动物实验动物是长期以来分离和增殖病毒、制造病毒抗原和病毒疫苗以及病毒病实验研究的常用材料和工具。
但是后来发现,实验动物经常自身带有病毒,常常混淆试验结果,并给病毒疫苗的生产带来严重的潜在危险,例如被某些致瘤病毒所污染等等。
为了克服这个缺陷,目前已通过微生物控制手段,培育出无菌动物(Germ Free Animal, 简称GF)、已知菌动物或称悉生动物(Gnotobiotics, 简称GN)和无特定病原动物(Specific Pathogen Free Animal,简称SPF)。
GF动物体内和体外均检不出任何微生物、寄生虫或其它生命体。
GN是确知所带微生物的动物。
只带一种菌的叫单菌动物,其次为双菌和三菌动物,四菌以上则称多菌动物。
SPF是指体内无特定微生物和寄生虫感染的动物。
从微生物控制的程度讲,SPF动物虽是这三类中最低的,但它无人畜共患病,无主要传染病,无对实验研究产生干扰的微生物,所以能满足病毒学一般实验的需要,比应用普通实验动物取得的结果更为科学与可靠。
新型肿瘤在体模型——鸡胚绒毛尿囊膜的研究进展
新型肿瘤在体模型——鸡胚绒毛尿囊膜的研究进展张锦燕【摘要】鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)是近年来兴起的一种新型的肿瘤模型,与传统的动物肿瘤模型相比具有更为简单、方便、价廉、快速、敏感等的优点.利用CAM肿瘤模型在肿瘤浸润以及肿瘤转移机制、肿瘤血管生成、抗肿瘤药物筛选等各方面研究均取得了一定的成果.然而,CAM肿瘤模型的应用尚存在一定的局限性以及有待解决的问题.充分并正确利用此模型可以为肿瘤生长侵袭的体外研究提供一种科学可行的方法及思路.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2010(016)011【总页数】3页(P1639-1641)【关键词】鸡胚绒毛屎囊膜;肿瘤;模型【作者】张锦燕【作者单位】广西医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科,南宁,530021【正文语种】中文【中图分类】R73-3为了解恶性肿瘤在体的生物学行为特点,往往需要构建肿瘤在体模型模拟肿瘤真实生存环境。
鸡胚绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane,CAM）在发育的早中期不排斥来自异种动物的组织、细胞移植,因此可作移植人类恶性肿瘤的接受体。
CAM模型已广泛应用于新生血管生成、微循环、肿瘤生物学等方面的研究[1],现就 CAM肿瘤模型的研究进展予以综述。
1 肿瘤在体模型的发展历程肿瘤动物模型作为人类肿瘤的复制,是肿瘤研究中不可缺少的手段。
随着近代医学发展,特别是肿瘤学和免疫学研究的需要,免疫缺陷动物的出现解决了移植瘤的免疫排斥问题,人体肿瘤移植于免疫缺陷动物,能保持其生物学特性,对于研究人体肿瘤的机制,药物筛选提供了很大帮助。
裸鼠是在近十几年中发展起来的动物模型,在肿瘤学、免疫学、有效药品的筛选等实验方面,有着特殊的价值。
研究者[2]发现,裸鼠移植瘤可以保存原有组织学构造或各种功能,且将人癌组织的组织培养物移种于裸鼠时,能重现已在组织培养中消失的原有的癌结构。
这些特征有助于分析人类肿瘤的性质,从而推动各方面的工作,为实验肿瘤学提供新的有效的工具。
鸡胚原代细胞培养
鸡胚原代细胞培养细胞是一微小而完整的生命单位，它组成各种生物体并生长、繁殖。
在生命体外，如果提供类似生物体内的环境条件，细胞也能生长繁殖。
要使每个细胞都能从人造环境中获得营养物质，必须将组织块分散成单个细胞。
组织培养法是目前培养病毒应用最广的一种方法，其优点是：一般没有隐性感染，没有免疫抵抗力，便于选择易感细胞，实验条件易于控制，成本便宜，经济适用。
组织培养法多应用于病毒的分离、鉴定、病毒感染细胞的机制、生产疫苗和抗原等。
很多组织，包括鸡胚，各种动物的肾脏组织，人胎羊膜细胞或流产胎儿组织等均可作组织培养的来源。
细胞来源的选择，主要是根据细胞对病毒的敏感性而定。
组织培养的方法中以单层细胞培养是最常用的方法，它又有原代和次代细胞培养、二倍体细胞株和传代细胞系三种类型。
原代培养是指将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖的过程。
本试验介绍原代细胞的鸡胚成纤维细胞培养方法。
（一）实验目的了解单层细胞培养方法（二）实验材料1、10日龄鸡胚。
2、1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank’s液，碘酒。
3、无菌组织培养瓶、吸管、滴管、剪子、镊子、超净工作台、CO2培养箱、蒸水器、纯水器（生物级）、滤器、真空泵、高压灭菌锅、培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）。
（三）实验方法1、用碘酒消毒鸡卵气室端外壳，并将鸡胚直立于卵架上。
以镊子将小鸡取出放在无菌培养皿内，去头，爪、内脏和骨骼，用Hanks氏溶液洗2-3次。
2、用小剪在小烧瓶内将鸡胚剪成小块（1～２mm3），加Hankr氏溶液（约１０ml）冲洗2-3次，静置１～２分钟，用毛细吸管吸去液体，依同法再洗涤２次，将血球充分洗去。
３、用镊子将组织块放入无菌三角烧瓶内，加入１０～１５ml0.25液，37?水溶浴20分钟，中间摇动几次，由于胰酶的作用可使大量的细胞游离，液体变混，经四层纱布过滤后的细胞悬液，低速离心沉淀（1000转/分钟以内），5分钟，吸上去清液，再用Hanks氏溶液洗一次，沉淀物加入适量营养液，用白细胞计数的方法进行计数，使成每毫升含50～８０万细胞的细胞悬液。
【医学实验】禽流感病毒的鸡胚培养法 PPT课件
4. 温度、反应时间、反应体系对血凝试验的结果影 响都很大。温度过高病毒毒力过强会出现溶血， 不利于判定。反应的时间不能太长，对照孔出现 沉淀就可以判定。
思考问题
加病毒液和红细胞悬液时为什么要反向加？ 血凝试验设置空白对照的意义？ 病毒悬液为什么采取倍比稀释而不是更高倍 数如十倍比稀释？
鸡胚原代细胞培养及流感病毒感染细胞的红细胞吸附
鸡胚的结构与生理
鸡胚由三个胚层发育而来，即外胚层，中胚 层和内胚层，它们构成了胚胎的组织与器官
鸡 胚培养的病毒接种
（一）活胚检查
1.血管 2.胎动 3.绒毛尿囊膜
（二）实验材料
鸡受精卵, 照蛋灯, 打孔器或剪刀, 蛋盘, 无菌注 射器和针头, 消毒酒精, 酒精灯, 石腊 病毒毒种用生理盐水稀释备用
1. 第1孔加入0.4ml尿囊液，第2孔加入0.1ml 尿囊液。
2. 吸取0.9ml生理盐水于血凝板第2孔，从第 3孔至第10孔每孔各加生理盐水0.4ml。
3. 反复吹打3～4次第2孔，从混匀的第2孔中 丢弃0.2ml，吸取0.4ml至第3孔混匀，再 吸0.4ml至第4孔，依次稀释到第9孔，第9 孔经稀释吹打后吸出0.4ml，
6）将烧杯中的细胞平均分配于5个25ml细胞瓶中， 补充1640培养基至3ml，置37 ℃培养
7）培养24小时后观察细胞的生长情况并描述细胞形 态。
原代细胞的培养与维持
1) 充分漂洗; 2) 起始的2天中尽量减少振荡; 3) 分离繁殖或测定病毒之用，细胞浓度可以加大，
尽量贴壁形成厚层； 4) 待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状，此时的pH
（四）收获病毒
鸡胚为活的有机体，因此要严格无菌操作， 同时动作要仔细，以免造成物理死亡。接种 后24小时内死亡应不计结果。
医学微生物第24章病毒感染的检查方法与防治原则
尽早诊断和治疗，控制病毒复制，减轻病情，降 低并发症的发生率。
公共卫生措施
监测与预警
01
建立健全的病毒监测网络，及时发现疫情，采取有效措施控制
疫情扩散。
卫生宣传教育
02
加强公众的卫生宣传教育，提高公众的自我防护意识和能力。
隔离与控制措施
03
对疑似和确诊病例采取隔离措施，控制传染源，切断传播途径。
04 病毒感染的案例分析
案例一：流感病毒感染的检查与防治
病毒分离与培养
通过采集呼吸道标本进行病毒分 离与培养，是确诊流感病毒感染 的金标准。
抗原检测
利用抗原抗体反应原理，通过采 集鼻咽拭子等标本进行快速检测 。
案例一：流感病毒感染的检查与防治
• 核酸检测：利用聚合酶链式反应（PCR） 技术对病毒核酸进行检测，具有高灵敏度 和特异性。
血清学检查的优缺点
方法简便、快速，可用于回顾性诊断和流行病学调查，但不能用于 早期诊断。
抗原检测
01
02
03
原理
通过检测病毒抗原，确定 病毒的存在。
方法
包括免疫荧光法、酶联免 疫法等。
抗原检测的优缺点
灵敏度高，特异性强，可 用于早期诊断，但可能出 现假阳性或假阴性结果。
核酸检测
1 2
原理
通过检测病毒核酸（DNA或RNA），确定病毒 的存在。
方法
包括反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、实时 荧光定量PCR等。
3
核酸检测的优缺点
灵敏度高，特异性强，可快速诊断，但可能出现 假阳性或假阴性结果，且对检测技术要求较高。
02 病毒感染的防治原则
预防原则
疫苗接种
通过接种疫苗，提高人群免疫 力，预防病毒感染。
实验一-鸡胚成纤维细胞的培养
02
实验过程中，细胞形态和生长曲线的变化符合预期，表明实验
操作和Байду номын сангаас件控制得当。
传代培养后细胞稳定增殖，表明所使用的培养基和条件能够支
03
持鸡胚成纤维细胞的正常生长。
对实验的改进和展望
在未来的实验中，可以尝试优化培养基的成分，以提高细胞的生长速度和活性。
可以进一步研究不同条件对鸡胚成纤维细胞生长和功能的影响，如温度、pH、气体 环境等。
了解细胞培养的基本原理和操作流程
掌握细胞生长和增殖 的基本原理，了解细 胞周期和细胞分裂的 过程。
了解细胞培养过程中 的注意事项和安全措 施。
熟悉细胞培养的基本 流程，包括原代细胞 的培养和传代细胞的 继代培养。
学习细胞培养的实验设计和数据分析方法
01 学习如何设计细胞培养的实验方案，确定实验参 数和对照组设置。
实验一-鸡胚成纤维 细胞的培养
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论
01
CATALOGUE
实验目的
掌握鸡胚成纤维细胞的培养技术
01
掌握细胞培养的基本操作，如细胞分离、传代、计 数等。
02
熟悉细胞培养所需的仪器和试剂，如显微镜、细胞 培养皿、胰蛋白酶等。
03
了解细胞培养的环境条件，如温度、湿度、气体等 。
细胞形态的观察结果分析
总结词
观察鸡胚成纤维细胞的形态变化，分析 细胞形态与细胞功能的关系。
VS
详细描述
在实验过程中，通过显微镜观察鸡胚成纤 维细胞的形态变化，记录细胞的形态特征 。通过对比不同培养时间的细胞形态，可 以分析细胞形态与细胞功能的关系，进一 步了解细胞的生理状态和变化规律。
2024年兽医医学(实验动物)临床医技知识考试题库与答案
2024年兽医医学（实验动物）临床医技知识考试题库与答案一、单选题1.实验动物的年龄描述中，哪个阶段通常指从离乳后到性成熟前的时期？A、幼年期B、青年期C、成年期D、老年期参考答案：B2.下列哪个不是新生小鼠特点？Λ.赤裸无毛B.红色C.眼半闭合D.重5克参考答案：C3.实验动物环境设施分类的正确名称为？A.普通环境B.清洁环境C.隔离环境D.上述三项都对参考答案：D4.实验动物伦理审查的主要目的是什么？A、确保实验结果的准确性B、保护实验动物免受不必要的痛苦C、减少实验成本D、加快实验进度参考答案：B5.卜.列哪种是刺激性排卵动物？A.猫B.小鼠C.大鼠D.豚鼠参考答案：A6.适合用于药物对循环系统作用机制的分析的动物是？A.豚鼠B.小鼠C.兔D.猫参考答案：D7.下列哪种动物常用于制作单克隆抗体？A、小鼠B、豚鼠C、兔D、犬参考答案：A8.哪项不是实验动物选择时应考虑的因素？A、实验目的B、动物种类C、实验成本D、实验者的个人喜好参考答案：D9.实验动物饲养环境中最基本的控制要素不包括以下哪一项？A、温度B、湿度C、光照D、颜色参考答案：D10.下列哪种动物因其免疫系统发达，常用「免疫学研究和疫苗评估？A、兔B、豚鼠C、小鼠D、以上都是参考答案：D11.实验动物安乐死时，应遵循的原则不包括以下哪一项？A、最小化痛苦B、符合伦理标准C、简便易行D、尊重动物生命参考答案：C12.在实验动物饲养过程中，为了避免近亲繁殖，通常会采取什么措施？A、定期更换笼具B、混养不同品种的动物C、实施严格的育种管理D、增加饲养密度参考答案：C13.哪种实验动物因其与人类基因同源性高，常用于基因编辑和转基因研究？A、小鼠B、兔C、豚鼠D、斑马鱼参考答案：A14.实验动物饲养设施中的气压控制主要是为了什么？A、减少噪音B、控制微生物传播C、保持温度稳定D、方便实验操作参考答案：B15.下列哪种实验动物常用「神经科学和行为学的研究？A、猴C、兔D、鱼类（如斑马鱼）参考答案：A16.实验动物福利原则中，“替代”原则指的是什么？A、用无生命的材料替代实验动物B、用一种实验动物替代另一种更高级的动物C、用计算机模拟实验替代动物实验D、以上都是参考答案：D17.实验动物饲养环境中，噪音控制的重要性在于什么？A、保护实验人员的听力B、避免动物受到惊吓C、提高实验结果的准确性D、美化饲养环境参考答案：B18.下列哪种实验动物因其骨骼结构与人类相似，常用于骨科疾病和修复材料的研究？A、兔C、犬D、羊参考答案：A19.实验动物设施中的自动饮水系统主要优势是什么？A、减少人工劳动B、提高水质C、控制饮水量D、美化环境参考答案：A20.在实验动物伦理审查中，对于实验结束后的动物处理，通常要求什么？A、必须全部安乐死B、必须全部放生C、根据实验目的和动物状态合理处理D、无具体要求参考答案：C21.哪种实验动物因其生理特点，常用于呼吸系统疾病的研究？A、兔B、豚鼠C、犬D、以上都是参考答案：D22.实验动物设施中的紧急应对计划通常包括哪些内容？A、火灾应对措施B、停电和停水应对措施C、动物逃脱应对措施D、以上都是参考答案：D23.哪种实验动物因其对辐射敏感，常用丁•辐射生物学和放射医学研究？A、鼠类（如小鼠）B、兔C、鱼类（如斑马鱼）D、昆虫（如果蝇）参考答案：A24.哪种实验动物因其对药物代谢过程与人类相似，常用于药物代谢动力学的研究？A.猴25兔C.犬D.小型猪参考答案：C25.实验动物安乐死时，选择安乐死方法的主要依据是什么？A.实验人员个人偏好B.动物种类和大小C.实验经费预算D.实验室传统习惯参考答案：B26.下列哪种实验动物因其皮肤反应敏感，常用「化妆品和皮肤刺激性的研究？A.兔B.豚鼠C.小鼠D.猫参考答案：A27.实验动物饲养设施中的环境监测通常包括哪些内容？A.温度、湿度和光照28噪音和振动C.微生物和有害气体D.以上都是参考答案：D28.实验动物饲养中，为何需要定期进行体重监测？A、评估动物生长状态B、确定饲料投喂量C、预测动物发情周期D、以上都是参考答案：A29.实验动物福利原则中的“减少”原则指的是什么？A、减少实验动物的使用数量B、减少实验动物的痛苦C、减少实验经费开支D、减少实验人员的工作量参考答案：A30.下列哪种实验动物因其生殖周期短、繁殖力强，常用于遗传学研究和基因筛选？A、小鼠B、兔C、豚鼠D、犬参考答案：A31.实验动物饲养设施中的通风系统应如何设计以确保空气质量？A、负压通风，防止空气外泄B、正压通风，保持室内气压高于室外C、双向通风，交替进行D、根据设施具体情况灵活设计参考答案：B32.在实验动物运输过程中，最重要的是确保什么？A、运输速度B、运输成本C、动物福利D、货物安全参考答案：C33.哪种实验动物因其对肿瘤生长敏感，常用于肿瘤学和抗癌药物的研究？A、鼠类（如小鼠）B、兔C、豚鼠D、鸡参考答案：A34.实验动物饲养中的“环境丰富化”是指什么？A、提供更多的饲料种类B、增加笼具内的装饰物，促进动物行为多样性C、扩大饲养空间D、频繁更换饲养人员参考答案：B35.实验动物伦理审查中，关了动物使用的最小化原则,以下哪项描述是正确的？A、尽可能减少实验动物的使用数量B、尽可能缩短实验周期C、尽可能使用低等级的实验动物D、尽可能使用替代方法减少动物使用参考答案：A36.在实验动物饲养中，为何需要遵循“无菌”或“特定病原体自由"（SPF）原则？Λ.防止实验动物间交叉感染37提高实验结果的可靠性C.保护实验人员免受感染D.以上都是参考答案：D37.哪种实验动物因其对药物毒性敏感，常用于药物毒性研究和安全性评估？Λ.啮齿类动物（如小鼠、大鼠）B.兔C.犬D.非人灵长类动物参考答案：A38.实验动物饲养设施中的“生物安全级别”是如何划分的？A.根据饲养动物种类和实验需求确定B.全国统一标准，无差异C.只需考虑动物传染病的风险D.无需特别划分参考答案：A39.卜.列哪项不是实验动物饲养中常见的环境应激因素？A.温度波动B.噪音干扰C.笼具清洁不彻底D.饲养人员频繁更换参考答案：C40.在实验动物伦理审查中，关于''人道终点”的判断，以下哪项描述是正确的？A.实验动物出现严重不适时即可判定为人道终点B.必须由兽医或具有资质的实验人员根据动物状态和实验协议来判断C.实验周期结束时自动判定为人道终点D.无需特别考虑，由实验人员自行决定参考答案：B41.哪种实验动物因其生理结构和功能与人类相似，常用于眼科疾病和视力矫正材料的研究？A.兔B.豚鼠C.犬D.猴参考答案：A42.实验动物饲养设施中的“动物福利官”或“兽医”主要负责什么？A.监督实验动物的饲养和实验过程B.负责动物的F1.常饲养和清洁C.设计和执行实验方案D.评估实验结果参考答案：A43.哪种实验动物因其骨骼发育过程与人类相似，常用广骨质疏松症和骨骼疾病的研究？A.小鼠B.兔D.鼠类和大鼠均可参考答案：A44.实验动物饲养管理中，关于饲料的要求，以下哪项是不正确的？A、新鲜B、无毒C、无污染D、随意存放参考答案：D45.实验动物中的SPF级指的是什么？A、无特定病原体级B、清洁级C、普通级D、无菌级参考答案：A46.哪种实验动物因其生理、解剖及代谢特点与人类相似，常用于新药的临床前研究？A、猴C、豚鼠D、小鼠参考答案：A47.实验动物麻醉时，最常用的全身麻醉剂是？A、乙醛B、氯胺酮C、戊巴比妥钠C.根据饲养动物种类和实验需求灵活调整D.只需在动物更换时清洁消毒参考答案：C51.哪种实验动物因其对过敏反应敏感，常用于变态反应和免疫学的研究？A.豚鼠B.兔C.小鼠D.大鼠参考答案：A52.实验动物饲养环境中，空气流通的主要目的是什么？Λ,降低温度B.增加湿度C.去除有害气体和微生物D.提高氧气含量参考答案：C53.卜.列哪项不是实验动物饲养人员的基本职责？A.定期清洁笼具的重视57.对于从事实验动物人员的规定有一。
医学实验动物学
• 普通动物 1 普通开放性饲养环境 2 普通实验动物饲料 3 不携带人兽共患病病原 4 不携带动物烈性传染病病原 绝对排除：鼠痘病毒、流行性出血热病毒
• 清洁动物 1 饲养于亚屏障系统 2 需要辐照饲料 3 必须排除：多杀巴氏杆菌、嗜肺巴氏杆菌、波氏杆菌、肺 支原体、泰泽氏菌、鼠棒状杆菌等 4 必要时检查：小肠结肠炎耶氏菌、大肠杆菌、皮肤病原真 菌、李氏杆菌等
门新兴学科。前者是以实验动物本身为对象，专门 研究它的育种、保种、生物学特性、繁殖、饲养管 理以及疾病的诊治和预防等,以期达到培育标准的实 验动物；后者是以实验动物为材料，采用各种方法 在动物身上进行实验,研究动物实验过程中实验动物 的反应、表现及其发生发展规律等，着重解决实验 动物如何应用于各个科学领域，为生命科学和经济 建设服务
精品课件
• 无菌动物（GF）
1 不携带任何生命体 2 隔离器饲养（无菌环境） 3 饲料、饮水需保证无菌 • 体内、外无任何可检测出的活的微生物和寄生虫的动物。来 源于无菌手术剖腹取胎，饲养在无菌隔离器内，人工喂乳或 保姆代养培育而成
• 悉生动物（GN）
1 来自无菌动物 2 人工接种单菌、双菌、三菌或多菌（已知菌） 3 其他条件同无菌动物 • 来源于无菌动物，体内携带有已知微生物的动物。饲养在隔 离器中
个近交系杂交而成 杂交群 (Cross Breeding colony) 两种不
同品系杂交，利用杂交一代 F1杂交优势 突变系（Mutant strain）具有特殊突变基
因的品系动物，正常染色体基因发生突变，并具有 各种遗传缺陷的动物
精品课件
• 按微生物控制的程度,目前我国将实验动物 分为四个等级
parasitology)
• 研究实验动物的微生物、寄生虫等病 原对实验动物的影响，疾病防治等
0Azhxq《医学微生物学》复习思考题
生活需要游戏，但不能游戏人生；生活需要歌舞，但不需醉生梦死；生活需要艺术，但不能投机取巧；生活需要勇气，但不能鲁莽蛮干；生活需要重复，但不能重蹈覆辙。
-----无名《医学微生物学》复习思考题绪论1、微生物的概念，微生物分哪三型八大类？第1章细菌的形态与结构1、名词解释：细菌L型；中介体；质粒；芽胞2、细菌的基本结构与特殊结构以及它们的主要功能、G+菌与G-菌的细胞壁的比较。
3、简述细菌L型的形成、主要生物学性状及其临床意义。
4、试述某些抗生素（青霉素、溶菌酶、红霉素、链霉素）的抗菌作用机制。
5、革兰染色的原理、方法、结果判断与临床意义。
第2章细菌的生理1、名词解释：IMViC试验；热原质；细菌素；内毒素；外毒素；培养基；菌落；纯培养2、简述细菌生长繁殖的基本条件有哪些？为什么专性厌氧菌在有氧环境中不能生长繁殖？3、细菌的合成代谢产物种类及其在医学上的意义？4、细菌的生长曲线可分为几期？各自的主要特点是什么？5、按物理性状不同可将培养基分哪几种？各有何主要用途？6、按用途不同可将培养基分为哪几种？请各列出一种常用的培养基。
7、根据细菌代谢时对分子氧的需求与否，可将细菌分为哪几类？第3章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全1、名词解释：消毒；灭菌；无菌；无菌操作；2、常用湿热灭菌方法的种类及其效果与适用范围。
3、高压蒸汽灭菌法所要求的条件和用途各是什么？4、请叙述紫外线的杀菌作用机制、特点和注意事项。
5、化学消毒剂按其杀菌能力可分为哪三大类？6、简述乙醇、碘酊、过氧化氢、过氧乙酸、戊二醛、环氧乙烷消毒灭菌的主要特点。
7、请简要说明手术室常规使用的消毒灭菌方法。
8、病原微生物实验室生物安全的核心是什么？9、根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，可将其分为哪四类？10、化学消毒剂的杀菌机制有哪些？各自种类的代表是什么？11、影响消毒灭菌效果的因素有哪些？第4章噬菌体1、名词解释：噬菌体；前噬菌体；毒性噬菌体；溶原性细菌2、毒性噬菌体增殖以何种方式增殖？它的增殖过程包括哪几个阶段？3、温和噬菌体在宿主菌内有哪几种存在状态？第5章细菌的遗传与变异1、名词解释：转化；接合；转导；溶原性转换；耐药性变异；卡介苗（BCG）2、医学上重要的质粒的种类有哪些？简述质粒的主要特征。
医学微生物学(第9版)第二篇 病毒学 第二十四章 病毒感染的检查方法与防治原则
第一节
病毒感染的检查方法 diagnosis of viral infection
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医学微生物学（第9版）
一、标本的采集与送检
1. 采急性期标本 2. 抗生素处理易污染标本 3. 低温保存，尽快送检 4. 血清学诊断采双份血清（发病初期、病后 2~3 周）
医学微生物学（第9版）
二、病毒的分离与鉴定
（二）病毒的鉴定
3. 病毒的感染性及数量测定 （3）空斑形成试验 （plaque forming test）：
原理：将适量病毒接种单层细胞，病毒增殖使感染的细胞脱落，形成肉眼可见的空斑， 一个空斑即一个空斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：每个空斑是由一个感染 性病毒颗粒形成的。可测定活病毒数量（感染性病毒量的滴度可用 PFU/ml 表示）
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三、病毒感染的诊断
（一）形态学检查
1. 电镜和免疫电镜检查：病毒形态和大小
（李凡主编的第 8 版医学微生物学 图 27-1，258 页）
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二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒的分离培养
2. 鸡胚培养 （1）孵化 9~14 天的鸡胚 （2）优点：对多种病毒敏感，条件易控制，操作简单，成本较低 （3）缺点：无病毒增殖指标；有些病毒可致鸡胚死亡
生物医学研究中鸡胚的应用材料
生物医学研究中鸡胚的应用材料言鸡胚很早就被用作培养载体,在病毒学、友育学、药理学、肿瘤学及非肿瘤性疾病等研究领域得到广泛应用。
鸡胚的绒毛?í -囊膜、尿囊腔、羊膜腔、胚体及各器官组织等都可以作为培养载体,同时鸡胚及各组织器官也可在体外培养,击。
鸡胚成纤维细胞的体外培养、鸡胚背根神经节的体外培养等用绒毛Jjf..囊膜模型来研究浆细胞条件培养基诱导血管生成的能力,友现活动性骨髓瘤患者的条件培养基较非活动性骨髓瘤患者的条件培养基能显着促进血管的生成。
他们还进一步发现多友性骨髓瘤的促血管生成反应和某些内源性血管生成抑制因子的缺失有关.Ribatti等通过把不同神经母细胞瘤患者的活检肿瘤组织移植入绒毛Jjf..囊膜,证实有癌基因MYCN扩增者比元MYCN扩增者具有史显着的促血管生成作用.Kern 等应用绒毛尿囊膜模型研究发现明替佐米有很强的抗血管生成作用,但这一作用可以被GRP-78因子所拮抗。
通过构建各种肿瘾的绒毛尿囊膜模型,鸡胚在肿瘤的种植与转移的研究中也有广泛的应用。
绒毛尿囊膜模型最早由Knighton等提出,近年来国内外学者已成功的建立卵巢癌绒毛尿囊膜模型、胃癌绒毛尿囊膜模型、前列腺癌绒毛尿囊膜模型I11l,鼻咽癌绒毛尿囊膜模型肿瘤组织来源不同构建模型所需最佳条件有所区别,有文献报道黑色素癌细胞株、前列腺癌细胞株接种细胞数在105-106就可以有较好的成瘤效果应用鸡胚尿囊腔和羊膜腔接种法比较了流感病毒的鸡胚培养和细胞培养两种分离方法的异同。
发现鸡胚培养法较细胞培养法具有病毒易复制,接种部位病毒含量大,对病毒不产生抗体,来源元足,操作简单等优点。
Me町等从细胞病变和抗原滴度两个方面比较了鸡胚肝细胞培养禽腺病毒和SPF鸡肾细胞培养禽腺病毒,两者并无明显差异,可以用鸡胚肝细胞培养禽腺病毒来替代传统的SPF鸡肾细胞培养法,黄杰庭[ 24J利用SPF鸡胚进行了中国首例甲型灿灿病毒的分离培养和鉴定。
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鸡胚在医学中的应用摘要：鸡胚是研究动物发育的重要模型，已被大量用于医学各个学科的研究。
对鸡胚的研究可以追溯到古希腊著名的博物学家亚里士多德，之后被很多生物学家予以深入的研究。
现在对鸡胚发育的过程已有清楚的了解和认识。
鸡胚在疫苗的开发和研究中更是有着不可替代的作用。
本文主要阐述了鸡胚胎在发育生物学、肿瘤、神经、干细胞和免疫等研究领域中的应用。
关键词：鸡胚；发育；肿瘤；神经；干细胞；免疫正文：1鸡胚与发育生物学鸡胚在发育生物学上作为一个重要模型系统已具有悠久的历史，一个多世纪以来，鸡胚已经成为洞悉发育过程和胚胎细胞命运的一个经典实验模型。
随着生物技术的发展，如体内电穿孔技术、胚胎干细胞、新的转基因技术和基因组测序完成等，这些已经使鸡胚模型系统已变得更加强大，再结合传统的移植和世系追踪等技术，鸡胚已成为最优秀的实验系统之一[1]。
随着模式生物鸡的基因资源增加、胚胎的易得性和RNA干扰方法的应用，这些都使研究胚胎发育中众多基因的功能变得简单容易。
因此，鸡胚也成为众多对基因功能感兴趣的脊椎动物学家首选的研究系统[2]。
2 鸡胚和肿瘤宫颈癌是一种严重威胁女性健康和生命安全的恶性肿瘤[3,4]，近年来宫颈癌的治疗手段有了改进，但其生存率仍然有待提高，宫颈癌的动物模型对提高宫颈癌的实验研究水平具有重要意义。
有人用BALB／c~nude、SCID小鼠或大鼠作为人宫颈癌移植瘤的动物模型[5,6,7]。
鸡胚作为人类疾病模型有许多优点[8]，有人把鸡胚作为其它癌细胞如人结肠癌细胞系HT-29、成釉细胞瘤细胞、骨肉瘤细胞移植受体[9,10]，或作为肿瘤新生血管形成、肿瘤侵袭和远处脏器转移潜能，以及抗肿瘤药物作用机制探讨等方面研究的体内实验模型[11]，为建立宫颈癌鸡胚模型提供了可能性与借鉴方法。
3 鸡胚和神经生物学3.1建立鸡胚神经管缺陷模型鸡胚胎内注射氨甲喋呤(MTX)，制作鸡胚神经管缺陷动物模型。
鲍南、施诚仁等选用上海农业科学院“菜杭”鸡的受精蛋552枚，分成3组，分别为药物(MTX)注射组、生理盐水注射对照组及正常对照组。
药物注射时间选择在鸡胚孵化第2-7d，MTX剂量分别为0.01、0.02、0.05、0.l及0.25mg/kg。
孵化3周后观察结果。
结果孵育第3~6d注药的鸡(剂量为0.01、0.02、0.05及0.lmg/kg)有神经管缺陷畸形产生，为脑膜脑膨出、骶尾骨退化等[12]。
3.2 提取鸡胚内神经营养活性物质及其生物活性陈姝、何蕴韶等采用不同截留分子质量的超滤膜将不同胚龄的鸡胚内的蛋白分离提取，分成不同分子质量的蛋白组分，采用原代海马神经元和鸡胚背根节体外培养技术进行神经营养活性的分析与鉴定，发现不同胚龄的鸡胚相对分子质量Mr>50*103，的蛋白组分体外培养的海马神经元较对照组神经元存活数目多，存活时间长，突起粗而长，表明鸡胚相对分子质量Mr>50*l03蛋白组分可以维持和促进海马神经元的存活、生长．促进神经元之间的连接。
值得注意的是相对分子质量Mr>50*l03蛋白组分可以明显改变神经元胞体的形态，胞体截面积较对照组明显增大，表明对神经元也有较强的促分化的作用。
胚龄El6与El9的蛋白组分的促神经存活、分化与突起生长的作用较El2更加明显，提示随着胚龄的增加，具有神经营养活性的此蛋白组分的含量有增加的趋势。
免疫组化方法揭示鸡胚相对分子质量Mr>50*l03的蛋白组分对于神经细胞的作用有高度特异性。
本实验结果显示鸡胚相对分子质量Mr>5*l03蛋白组分除对中枢神经元的明显营养作用外．对外周神经背根节也有明显的促神经突起生长的作用[13,14,15,16]。
4 鸡胚和胚胎干细胞4.1 鸡胚胎干细胞的离体培养体系4.1.1 鸡胚胎干细胞的分离由于鸡的胚胎发育特点，受精卵排出体外时巳处于胚胎发育的X期，形成了具有约60000个细胞的盘状囊胚，相当于哺乳动物的囊胚期，因此并不能像哺乳动物那样从内细胞团来获得ES细胞。
1990年，Petitte J N等首次将分离的芦花鸡X期胚盘细胞注入白莱航鸡胚胎，获得芦花鸡与白莱航鸡的种系嵌合体，Naito M等(1991)采用同样方法获得了鹌鹑与鸡的种间嵌合体。
随后大量实验证明，X期胚盘细胞具有发育的全能性，可参与各种组织的形成。
Pain B等[17]利用鸡X 期胚盘细胞首次成功培养出鸡ES细胞，细胞传至35代仍具有全能性，并获得种系嵌合体鸡。
Park TS等[18]从5.5d鸡胚生殖嵴分离PGCs细胞并在体外培养4个月，成功建立类EG(embryonic germ cells，EG)细胞系。
在国内，安静等[19]、谢蓓等[20]及秦洁等[21]分别成功对X期胚盘细胞及PGCs细胞进行离体培养与传代，在一定传代次数内细胞保持未分化状态，并获得种系嵌合体。
目前，主要通过X 期胚盘分离胚盘细胞或从早期胚胎生殖嵴分离PGCs来培养鸡ES细胞。
胚盘细胞可从X期胚盘的明区经胰酶消化后获得，而PGCs主要是从Ⅺ期～Ⅻ期鸡胚的血液或5.5d鸡胚生殖腺中分离并经Ficoll密度梯度离心法纯化[22]，但这种方法获得的PGCs数量有限，且操作繁琐。
最近Mozdziak PE等口报道了一种新方法—荧光活化细胞分拣法，用胚胎阶段表面特异性抗原SSEA-1(stage-specific embryonic antigens，SSEAs)对细胞进行荧光标记后，可从xⅢ期～xv期胚胎的血液及27期生殖嵴中分离到大量有活性的PGcs，大大提高了分离PGCs的效率口[23]。
4.1.2 鸡胚胎干细胞的离体培养ES细胞离体培养的关键是在保证细胞具备无限增殖能力的同时维持其未分化状态，而胚胎及机体发育过程中分化和分裂增殖一般是同时进行的，因此必须筛选适宜的培养体系，目前主要通过合理设计基础培养基、采用饲养层细胞培养以及添加抑制分化的细胞因子来解决。
4.1.3 鸡胚胎干细胞的鉴定关于ES细胞的鉴定标准有以下几条：①从囊胚内细胞团或原始生殖细胞分离培养获得；②能在体外长期培养且保持未分化状态；③AKP、OCT-4、SSEAs阳性表达，高端粒酶活性；④在体内或体外具有多向分化的能力；⑤长期培养后仍能维持正常的二倍体核型。
鸡ES细胞可通过形态学、APK活性、SSEAs检测、分化实验、嵌合体试验等方法进行鉴定[24,25]。
5 鸡胚和免疫学眼一泌尿生殖道衣原体是一种具独特生活周期的专性真核细胞内寄生性原核微生物[26]。
大规模培养和纯化一直是其研究过程中的困难所[27]。
1965年Gordon建立的McCoy细胞培养法是分离培养眼一泌尿生殖道衣原体的较好方法。
郭建巍、周学良[28]将Co．在McCoy细胞中扩大培养至50以上细胞形成包涵体以后用细胞培养物接种7日龄鸡胚卵黄囊，用此二步法来制各实验用的抗原。
通过第一步，oC．可在McoC y细胞中增殖生长，不但提高了Co．的数量，而且在48小时左右形成较多具传染性的原体。
用它来感染鸡胚．使鸡胚对Co．的敏感性提高，比较短的时间内出现充血、水肿至死亡。
McCoy细胞培养法与鸡胚卵黄囊接种法联合用于Co．的培养，不但克服了单纯用McCoy细胞培养中操作过程复杂，容易污染，抗原收获量小的缺点，而且也解决了Co．在鸡胚卵黄囊中死亡不规律．接种量大造成的毒种易于丢失等不足，同时在两种宿主体内交替传代还可避免Co．毒性的下降，在比较短的时间里可获得较多的抗原。
随着鸡基因组学和鸡胚胎体外操作技术的不断发展和完善，鸡胚胎在生命科学研究中的地位必将越来越受到研究者的广泛重视和偏爱，相信在不久的将来鸡胚能够发挥更大的实验模型作用，并最终为人类医学和畜牧业的发展和应用贡献更大的力量。
参考文献[1] SternCD．The chick：a great model system becomes even greater．Dev Cel1, 2005, 8: 9-17.[2] Brown WR et a1．The chicken as a model for large—scale analysis of vertebrate gene function．Nat Rev Genet, 2003, 4: 87-98.[3] BrakeT, Lambert PF. Estrogen contirbutes to the onset, persistence, and Malignant progression of cervical cancer in a human papillomavirus-transgenic mouse model[J]．PNAS, 2005, 102(7): 2490-2495.[4] Rock CL, Michael CW, Reynolds RK. Prevention of cervix cancer[J]. Crit Rev Oncol/Hematol, 2000, 33(3): 169-185.[5] 张凯举, 赵艳忠, 尚宏伟, 等. BALB/c裸小鼠人宫颈癌模型的建立[J]. 首都医科大学学报, 2008, 29(5): 593-596.[6] 许恬怡, 凌斌, 王群华, 等. SCID鼠人宫颈癌组织模型的建立及其生物学特性初探[J]. 安徽医科大学学报, 2005, 40(6): 541-543.[7] 高岿然, 史铁梅, 邸晶, 等. 宫颈癌移植瘤大鼠动物模型的建立[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2008, 12(28): 5494-5498.[8] Ye F, Chen H, Liang Z, et a1. Establishment of a cervical cancer model via inoculating SiHa cells into humanized severe combined immunodeifcient mice[J]. Eur Gynaecol Oncol, 2006, 27(6): l235-l238.[9] Maas JWM, Le Noble FAC, Dnnselman GAJ, et a1. The chick embryo chorioallantoic membrane as a model to investigate the angiogenic properties of human endometrium[J]. GynecolObstet Invest, 1999, 48: 108-112.[10] 张磊涛, 黄洪章, 唐海阔, 等. 成釉细胞瘤的鸡胚绒毛尿囊膜侵袭模型的建立[J]. 现代口腔医学杂志, 2007, 1: 10-l2.[11] Wang HL, Deng CS, Yuan YF, et a1. Effects of antiangiopoietin-2 antibody on vascularization of an implanted model of human colonic carcinoma on chick embyro[J]. Chn J Gastroint Surg, 2007, 10(3): 278-280.[12] 鲍南, 施诚仁, 严志龙, 等. 鸡胚神经管缺陷模型的建立[J]. 上海第二医科大学学报, 2000, 4: 358-360.[13] 王廷华，冯忠堂，邹晓莉，等．鸡胚脊髓背角感觉神经元诱向因子的初步分离及鉴定[J]．华西医科大学学报，2000。