Waters1525-2489高效液相色谱仪操作规程

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1.目的：规范Waters1525型高效液相色谱仪的操作，确保检测设备安全稳定的运行。

2.范围：适用于Waters1525型高效液相色谱仪的操作使用。

3.职责：检验员负责本规程的执行。

4.操作步骤

4.1开机前检查

流动相对应泵单元放置，检查电源线接口连接完好

4.2色谱柱的安装

安装待测样品所需的色谱柱，注意色谱柱方向。打开柱温箱电源开关，设置柱温箱温度。

4.3开机

4.3.1泵单元

打开泵电源，待自检通过后排气泡。（注：上泵是B泵，一般放置水系流动相；下泵是A泵，一般放置有机系流动相。）拧开上泵排液（空）阀螺旋，用注射器抽去管道及泵头内气泡，然后立即拧紧排液（空）阀螺旋。下泵排气泡操作与上泵相同。

4.3.2打开检测器电源

等待自检通过，大约5min。

4.3.3打开色谱工作站

打开计算机电源，点击桌面图标，进入Breeze2 色谱工作站，用户名输入breeze，点击确定按钮，操作的项目选择“hd”，色谱系统选择“1525/2489”，点击确定。

4.4建立分析方法

点击（调用方法组编辑器向导）图标，点击对话框中的“新建”，在电脑下方任务栏中出现（仪器方法编辑器），点开，设置波长等条件，再点击，设置A、B两泵的流速，然后点击保存图标，在对话框中输入此方法的名称，比

如“亚麻酸方法”，再点击保存。在“新方法组”的对话框中点击图标，选择“亚麻酸方法”，点击两次下一步，再点击完成。

4.5平衡仪器

点击(平衡系统/监视基线图标)，在对话框中，选择方法如“亚麻酸方法”，点击设置。等待仪器设置反应，再次点击（平衡系统/监视基线）。等待基线平衡（一般约30-40min）。

4.6进样与数据采集：

基线平衡后（30-40min），点击（中断正在运行的样品组或单进样）图标，

结束平衡。点击（单进样）图标，编辑样品名称、进样体积和运行时间，选择方法组，点击进样即可开始进样。

4.7谱图处理：

点击图标，点，再点，双击所要查看的谱图。建立谱图处理

方法：在通道中选中标准品谱图，双击点开，出现的对话框点击“是”，再点击（处理参数向导），选择“新建处理方法”，点确定，用鼠标左键拖住选择目标峰段，然后点基“下一步”，直到出现，输入目标峰名称后点击“下一步”，直到出现，输入谱图处理方法名称，点击完成，在出现的对话框中点击保存。点击图标，点，再点，选择所需处理的标准品及样品图谱，单击右键，单击处理，选择“使用指定的方法处理”，单击下拉菜单，选择所需方法后点击确定，点击，再点，选择所需查看的图谱双击左键，即可查看目标峰的数据。

4.7结果计算（标准曲线）

进入查询数据，在通道中，选择标准谱图，右击选择改变样品，在其工具栏中点击（量），在对话框中将样品类型选择标准样，点击（从处理方法复制），选择谱图新建的处理方法名，在当前项下，输入组分名称，对应组分的浓度，单位（

定的处理方法，选择谱图新建的处理方法名称，标准品（选择清除校正）；样品（无需校正），确定。在结果中，更新查看。系统计算出样品浓度C

样

（mg/ml）

组分质量分数X（%）=C

样（mg/ml）*稀释倍数/ M

样

4.8报告打印

在结果中，选择样品，右键选择预览，在报告方法对话框中，选择Peak Summary Report。

4.9色谱柱清洗、关机：

样品分析结束后，关闭检测器电源及柱温箱。按规定20倍柱体积冲洗色谱柱，（如反相色谱：含盐或酸、碱的流动相先用10%甲醇水冲洗再用甲醇冲洗）清洗结束后，点击图标，在流量A和流量B栏中分别输入0，变化率栏中输入0.5-1.0min，点击应用，确定，等压力为0时即可关掉泵的电源。进样针用甲醇清洗后放回，然后做好仪器使用记录。

5.注意事项：

5.1 双泵在运行中需要更换流动相之前，必须把双泵的流速设置为0，即把泵关掉，具体操作为点击图标，在流量A和流量B栏中分别输入0，最好在变化率栏中输入0.5-1min，保护泵单元。点击应用，再确定，等压力为0时再更换流动相。

5.2 每次更换流动相后，必须排（液）气泡。

5.3 每隔一段时间（约一周），在使用仪器时，上下泵排完气泡后，将泵单元的参比阀切换至排空（向右转90°），单击图标，设置A、B两泵流量，使其排空约10mL液体，完成后，再单击图标，将A、B两泵流量设置为0，当压力为0时，再将参比阀向左转动90°即可。

5.4 检测器：通讯失败时，右键重设TUV。

6.相关文件：无

7.附录：无