第一章 血液标本采集和制片 ppt课件

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(二)草酸钠: 机理:可与血中钙离子生成草酸钙沉 淀,阻止血凝固。 浓度:0.1mol/L,与血按1:9比例混合。 用途:出凝血性疾病 缺点:不能作血涂片,因可产生草酸 盐结晶,还可使淋巴细胞核出现“三叶式” 改变或红细胞出现棘形。
三、血液标本的抗凝
(三)双草酸盐:草酸钾+草酸铵 机理:与钙离子形成草酸钙沉淀达到
第二节血液标本采集质量保证
3、采血操作对检验结果的影响 (3)采血体位:直立比仰卧血液浓 缩,细胞计数和大分子增高。 (4)止血带压迫时间:不超过1min, 过长将引起血液浓缩,成分改变,影响 结果。
第二节血液标本采集质量保证
4、其他 (1)输液: (2)避免溶血: (3)抗凝剂对标本影响 (4)低温保存对标本的影响 血液分析仪测定抗凝血标本不宜低温 保存,低温可使血液成分及细胞形态发生 变化;室温保存时间不能超过6h,冰冻标 本不宜反复冻融,解冻后应完全融化、混 匀后应用。
第三节 血涂片制备和染色
第三节 血涂片制备和染色
一、血片制备
(一)载玻片的清洁
1、新玻片用1mol/L(10%) Hcl浸 泡24h→清水彻底冲洗→烤干后备用。
2、用过的玻片用肥皂水煮沸 20min→趁热将血膜刷洗干净→清水反复 冲洗。
(二)制血片: 推片法
于载玻片1/3与2/3交 界处加绿豆大血1滴→
1)、手指:WHO推荐以左手中指或无 名指尖内侧为宜。
婴幼儿-- 半岁以上用手指,半岁以 下用拇指或足底部内、外侧缘
烧伤病人-- 视具体情况选择皮肤完 整部位采血或静脉血。
第一节 血液标本的采集
(一)皮肤采血: 1、采血部位: 1)手指: 2)耳垂:痛感较轻,操作方便,适于
反复采血。 缺陷:血循环较差,受气温影响较大,
→DC等。 (5)若做出血时间测定, 需另刺一针,
不能拭去第一 滴血。凝血时间另外测定。
第一节 血液标本的采集
激光皮肤采血法 (1)器材:激光采血器、一次性激
光防护罩、微量吸管、消毒用品 (2)方法:
第一节 血液标本的采集
激光皮肤采血法 (3)注意事项: ①禁止在有易燃易爆气体环境中操作,
106mmol/L(30.8g/L)
三、血液标本的抗凝
(一)枸橼酸钠 用途:
1. 止 凝 血 象 检 查 , 血 液 保 养 液 用 109mmol/L按1:9比例。
2.血沉测定,用106mmol/L与血按1:4 比例。(ICSH国际血液学标准化委员会推 荐)
缺点:不适于血细胞计数。
三、血液标本的抗凝
不停转动,使纤维蛋白缠绕凝固于玻璃珠 上,从而阻止血凝固。或用棉签挠。
用途:适用于免疫学检查和红斑狼疮 细胞检查。
四、血标本的运送、保存与处理 血标本处理的基本原则 ①把每一分标本当作无法重新获得的 唯一标本, 加以小心运送、保护、保存 、 检测和报告; ②要视每一分标本都有传染性, 对高 危标本要注明标识; ③严禁用口吸标本,避免标本污染皮肤 和实验台; ④检验完毕,标本必须消毒处理, 容器 要消毒、毁型或焚烧。
抗凝。 配制:100ml抗凝剂中含草酸钾0.8g,
草 酸 铵 1.2g 取 此 液 0.2 ~ 0.5ml 于 小 瓶 内 80℃以下/烘干可使2~5ml血不凝。>80℃ 草酸酸盐可被分解为碳酸盐而失效。
三、血液标本的抗凝
(三)双草酸盐:草酸钾+草酸铵 用途:草酸钾盐或钠盐可使红细胞体
积皱缩(约11%)。草酸铵可使红细胞胀 大。二者适当混合不影响红细胞形态和体 积如:红细胞比积,血细胞计数,网织红 计数等,抗凝以后5小时结果可靠。
三、血液标本的抗凝 (五)乙二胺四乙酸(EDTA)盐: 缺点:
1.影响血小板聚集和白细胞吞噬功能, 不适于出血凝血检查及血小板功能检验。
2.能影响某些酶的活性和抑制红斑狼 疮因子,故不适于制作组化染色和检查红 斑狼疮细胞的血涂片。
三、血液标本的抗凝
(六)脱纤维蛋白法(物理抗凝): 方法:将血液注入有玻璃珠的盛器中
缺点:草酸盐可引起血小板聚集,并 可影响白细胞形态故不适用于血小板计数 和白细胞分类计数。
三、血液标本的抗凝
(四)肝素: 肝素广泛存在于肺、肝、脾等几乎所
有组织的血管肥大细胞和嗜碱性粒细胞的 颗粒中。
三、血液标本的抗凝
(四)肝素: 机理:
1.与抗凝血酶Ⅱ(AT-Ⅱ)一起,在低浓 度能抑制因子IXa、Ⅷ和PF3之间的作用, 阻止凝血酶形成。
四、血标本的运送、保存与处理 (一)血液标本检测前预处理 分离血清、分离血浆、分离血细胞 (二)血液标本运送 遵循:唯一标识原则、生物安全原则、 及时运送原则
四、血标本的运送、保存与处理 (三)血液标本拒收 溶血、容器不当、标本量不足、转运 不当、申请单标识不清、标本污染或破损均 要拒收 (四)血液标本保存 按要求分为室温保存、冷藏保存、冷 冻保存 立即送检标本:血氨、血沉、血气分 析酸性磷酸酶、乳酸等。 (五)检测后标本处理 原则:将危险减至最小、对环境危害 减至最小
三、血液标本的抗凝
(四)肝素: 用途:肝素具有抗凝能力强,不影响
血细胞引起溶血等优点,为一种较好的抗 凝剂。红细胞计数,血红蛋白测定,红细 胞比积及多种生化分析。也是抗血栓药物 之一。
缺点:过量肝素会引起白细胞凝集和 血小板减少,故不能用于白细胞计数,血 小板计数。肝素抗凝血瑞氏染色后背景呈 是深兰色,影响镜检,故也不适于作DC。
2、药物对检验结果影响: ①影响反应系统待测成分的物理性质; ②参与检验化学反应; ③影响机体生理功能和细胞活动的代 谢; ④对器官的药理活性和毒性作用。
第二节血液标本采集质量保证
3、采血操作对检验结果的影响 (1)采血的时间 应尽可能上午9时前空腹采血,应尽 可能检查和治疗前采血 (2)采血部位 1)皮肤采血:避开炎症、化脓 、冻伤 等处; 2)静脉采血: 选择大而浅表的大血管。
瑞氏粉沉淀(ME)
瑞氏粉不溶于水,而溶于甲醇
二、血涂片染色
(一)瑞氏染色法(Wright) 【原理】 1、瑞氏染液组成:
(1)瑞氏粉的组成:
第二节血液标本采集质量保证
血液标本的采集是分析前质量控制 的重要环节之一
一、采血环境要求与生物安全
1、环境要求:环境应舒适、宽敞、 明亮通风、有足够的采血窗口。
2、生物安全:防止交叉感染,履行 环境消毒。
第二节血液标本采集质量保证
二、标本的采集的一般要求 (一)检验申请单 (二)标本采集和处理具体要求 患者告知、患者准备说明书、标本采
2. 加强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)灭活丝氨 酸蛋白酶,从而阻止凝血酶形成
3. 抑制凝血酶的自我催化抑制因子Ⅹ 的作用。
4. 高浓度时可阴断凝血酶与纤维蛋白 的反应
三、血液标本的抗凝
(四)肝素: 配 制 : 肝 素 粉 ( 每 mg 含 100 ~ 125 单 位),配成1g/L水溶液取0.5ml置小瓶中, 放37℃~50℃烘干,可抗凝血5ml。
采血部位:肘前静脉为主,亦可用手背 部、手腕部和外踝部静脉。幼儿用颈外静脉 采血。
第一节 血液标本的采集
(二)静脉采血法
1、普通静脉采血
注意事项
①严格无菌操作,止血带压迫时间不超 过1min,抽血时避免气泡。
②以检查项目要求选择是否空腹采血。
③出血性疾病要用硅化或塑料注射器和 试管。
④应拔下注射针头后,将血沿试管壁注 入试管。
第一章
血液标本采集和血涂片制备
第一节 血液标本的采集
二、血标本采集的方法 (一)皮肤采血(毛细血管采血)
凡用血量较少,<0.1ml的检验项目,均 可用此法采血。
如:①手工操作做 RBC、WBC、Hb、PLT 等。
②婴幼儿血液分析仪做血常规
第一节 血液标本的采集
二、血标本采集的方法
(一)皮肤采血(毛细血管采血) 1、采血部位:
化学,不适于血库
钾测定 化学 血沉 铅测定 血库
P10 表1-3
三、血液标本的抗凝
抗凝:应用物理的或化学的方法,除 掉或抑制血液中的某些凝血因子,阻止血 液凝固,称抗凝。
抗凝剂(物质):能够阻止血液凝固 的化学试剂或物质。
三、血液标本的抗凝
(一) 枸橼酸钠 机理:与血中钙离子形成可溶性螯合 物,从而阻止血液凝固。 浓度:109mmol/L(32.0g/L),
以免引起爆炸事故;
②禁止用肉眼观看激光窗口或将激光窗 口对准身体其他部位;
③防护罩要紧贴采血部位,以免影响标 本采集效果;
④激光采血器的透镜部分应经常清洁。
第一节 血液标本的采集
(二)静脉采血法 1、普通静脉采血
凡需血量较多(0.2ml)的检验项目, 用此采血法,如:多项血细胞分析、压积、 血沉等。
头 体体 尾尾
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321 推推血 片片滴 速与大 度玻小
片 之 间 角 度
二、 血涂片染色
常用染色方法有: 瑞氏染色法、姬姆萨染色法、瑞姬 氏染色法
(一)瑞氏染色法(Wright) 【原理】 1、瑞氏染液组成:瑞氏粉+甲醇
(1)瑞氏粉的组成:
美蓝的氯盐 + 伊红的钠盐 +水 →
须颠倒混匀8次
化学清洁的试管
须颠倒混匀5次,使血液 与激活剂充分接触。凝块完 全形成后离心 - 须颠倒混匀8次 血液与抗凝剂比例为4:1 铅浓度<0.1ug/ml -
用途 化学、血清学、血库 全血细胞计数(CBC) 凝血检查(PT、APTT、
因子测定) 化学
葡萄糖、糖耐量、乙醇 浓度 血培养
毒理学、微量金属
第一节 血液标本的采集
2、真空采血法 又称负压采血法。真空采血装置有套筒
式、头皮静脉式。 封闭式采血无需容器之间转移,减少了
溶血现象,同时样本转运方便,避免医患间 的交叉感染。
根据需要不同,不同检验项目,在真空 管上标有不同颜色。
盖子颜色 红色 紫色 淡蓝色
绿色
灰色
黄色
深蓝色
金黄色
淡绿色 桔黄色 黑色 棕色 粉红色
血细胞汁数和血红蛋白浓度等结果<静脉 血,且冬季波动幅度较大,已是淘汰。
第一节 血液标本的采集
(一)皮肤采血: 2、采血器材 (1)采血针皮肤采血法 1)微量吸管:10ul、20ul刻度。 2)采血针:用三棱针或专用“采血
针”,用前须高压或煮沸消毒,为避免交叉 感染应严格实行一人一支吸管和一根针。
左手拇指与中指持载 玻片(血滴靠中指端) →
右手持边缘平滑的推 片,从血滴前方接触 血液→使血液散开成 一线 →以推片与载 片保持25∼30度夹角 →向前(母指方向)推 动→形成血膜
(三) 良好涂片标准
(1)呈头、体、尾分明的舌形 外观 (2)血膜均匀一致,厚薄适宜 (3)两边留有空隙(较大细胞常在边缘)
三、血液标本的抗凝
(五)乙二胺四乙酸(EDTA)盐: 机理:与血中钙离子结合成螯合物,阻 止血液凝固. 配制:ICSH建议其使用浓度为每毫升 血1.5~2.2mg。实验室常将其配成15g/L, 取0.5ml100℃,烘干,可抗凝血5ml。
三、血液标本的抗凝 (五)乙二胺四乙酸(EDTA)盐:
用途:适用于多项血液学检查 血细胞计数(特别是血小板计数) 红细胞比积测定(室温下48h内红细 胞比积不改变)
目前最好的是激光无痛采血仪。
3)消毒用具: 3、采血方法:略
第一节 血液标本的采集
(一)皮肤采血: 4、注意事项: (1)采血部位应无水肿、冻疮、炎症、
紫绀、溃疡。 (2)注意消毒及用具一次性使用。 (3)以血液自行流出为佳。可轻挤压,
切忌用力挤压,以免组织液混入。 (4)采血顺序为:PLT→RBC→Hb→WBC
集类别和数量、标本采集日期和时间、标 本处理要求、标本采集人员、标本采集器 材和安全处理。 (三)标本信息完整性与接收 对特殊标本处理、急危重病人标识、 规定时间内送检、注意物理条件对标本影 响、标本归档记录、接收记录等
第二节血液标本采集质量保证
三、血液标本采集及检测结果的影响因素 1、患者生理状态和饮食的影响 标本采集时的活动情况、精神状态、 饮食、吸烟、等都影响结果(见p12表1-5)
添加抗凝剂 无 EDTA 枸橼酸钠
肝素钠、肝素锂、 肝素铵 氟化钠、草酸钾
多茴香脑磺酸钠 (SPS) 无抗凝剂或肝素 钠、EDTA 分离胶/凝块激 活剂
分离胶/肝素锂 凝血酶 枸橼酸钠 肝素钠 无
注意事项 凝块形成约需30min 须颠倒混匀6~8次 须颠倒混匀;血液与抗 凝剂比例为9:1 根据实验需要.选择不同 类型的肝素 不能用于其他化学检查
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