流式细胞仪的简要介绍与注意事项
流式细胞仪校准安全操作及保养规程
流式细胞仪校准安全操作及保养规程1. 背景流式细胞仪是一种现代化的实验仪器，广泛应用于生命科学、医学研究、诊断和治疗等领域。
流式细胞仪可以对单个细胞进行快速测量和分析，具有高灵敏度、高通量和高精度的优点。
在使用流式细胞仪时，正确的校准和安全操作，以及定期的保养是非常重要的。
2. 流式细胞仪的校准方法流式细胞仪的校准是保证实验结果准确的前提。
在进行校准之前，需要先准备好以下工具：•流式细胞仪校准珠•DI水•漂白液•消毒剂•塑料管•紫外线消毒灯2.1 流速校准1.将流式细胞仪开机，并将流式细胞仪校准珠装载到样品池中。
2.打开软件界面，进入流速校准模式。
3.将DI水装入塑料管，并连接到样品流路上。
4.开始采集数据，记录每个管道中的时间和事件数。
5.根据样品流速，计算出要达到特定事件数所需的时间，这就是实际流速。
6.通过调整样品流量控制器，将实际流速调整至设定值。
2.2 光学参数校准在进行光学参数校准之前，需要将流式细胞仪校准珠置于样品池中。
2.2.1 激发光的校准1.进入激发光校准模式，打开紫外线消毒灯。
2.将DI水装入塑料管中，并连接到样品流路上。
3.开始采集数据，记录激发光强度和事件数。
4.根据实际激发光强度，调整光源强度，使其达到设定值。
2.2.2 探测光的校准1.进入探测光校准模式，放置漂白液样品。
2.打开灯箱，选择合适的滤片和灵敏度，开始采集数据。
3.根据采集到的数据，调整探测器增益，使其达到合适的灵敏度。
2.3 粒子大小校准1.将流式细胞仪校准珠装载到样品池中。
2.进入粒子大小校准模式，开始采集数据。
3.根据采集到的数据，调整光学系统，将校准珠作为参考，确定粒子的大小。
3. 流式细胞仪的安全操作在操作流式细胞仪时，需要做好以下几点：1.先关掉紫外线消毒灯，并断开电源，然后进行操作。
2.对样品进行处理前，先进行消毒。
3.在进行样品注入时，应该进行过滤，并先进行细胞计数，控制加入的细胞数量。
4.遵守严格的操作规程，在操作流式细胞仪时，不要将手伸入仪器。
流式细胞仪简介
流式细胞仪一、结构技术特点（4个方面）：（1）流动室和液流系统（2）激光源和光路系统（3）光电管和信号测量及计算机分析系统（4）细胞分选系统流式细胞计是对细胞进行自动分析和分选的装置。
它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。
多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。
也就是说，它的细节分辨率为零。
流式细胞计的基本结构二、原理：1、将待测细胞染色后制成单细胞悬液。
2、用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。
3、流式细胞仪通常以激光作为发光源。
经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。
4、这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。
5、光散射信号在前向小角度进行检测，光散射信号基本上反映了细胞体积的大小；6、荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。
这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，7、经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。
8、计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，液可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。
9、检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。
单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。
一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程流式细胞仪是一种用于单个细胞分析的高通量仪器，广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。
为了确保流式细胞仪的正常运行和准确结果的获取，需要制定一套规范的操作规程。
以下是流式细胞仪操作规程的一些基本要点：一、实验前准备：1.确保流式细胞仪处于稳定状态，并将其连接到电源并打开电源。
2.检查仪器的液氮箱和压力容器，确保液氮和气源充足。
3.准备实验所需的标本样品和相应试剂。
4.检查流束对齐和测量准备：校准激光、确定流速、检查流束质量控制。
二、流式细胞仪样品制备：1.使用无菌技术制备样品，并严格遵循相关操作规范。
2.样品的准备应考虑到细胞的数量和稳定性，避免细胞聚集、损伤或死亡。
3.样品的制备应注意避免氧化和污染的发生，以确保结果的准确性。
三、样品装载和分析：1.使用无菌技术将样品加载到流式细胞仪中，并确保样品注射器和管道清洁和无气泡。
2.对于多个样本的分析，应注意正确的样品顺序和识别，以避免混淆。
3.设置合适的仪器参数和测量条件，例如流速、激发和发射光源、滤光片设置和增益调节等。
4.开始样品分析之前，应进行负空白检测和仪器的系统背景校正。
5.开始实验后，密切观察结果窗口，并根据需要进行相应的数据记录和保存。
四、实验后操作：1.实验结束后，关闭流式细胞仪和相关辅助设备，并进行正常关机程序。
2.将仪器和试剂的残留物清洁干净，并按照相关操作规范进行废弃物的处理。
3.维护仪器的常规保养，例如清洁仪器表面、更换滤光片、标定仪器等。
4.及时记录和整理实验数据，并进行必要的数据分析和结果解释。
五、安全注意事项：1.在操作过程中，应遵守相关的生物安全和化学安全规范，例如穿戴好实验室服装、戴手套、戴眼镜等。
2.对于辐射性或有毒性样品的操作，应采取额外的防护措施，例如使用密封容器、穿戴防护服等。
3.在使用激光和其他高能源光源时，注意防护眼睛和暴露部位，避免直接观察激光光源。
总结：流式细胞仪是一种复杂的仪器，需要严格的操作规范来确保实验结果的准确性和数据的可靠性。
流式细胞仪(FlowCytometer)基本原理
流式细胞术的特点
检测对象：单细胞悬液或生物颗粒； 检测参数：多参数； 检测特点：单细胞水平分析； 检测速度：高速，最高达上万个细胞/秒； 检测结果：精度高、准确性好； 可对目标细胞进行分选；
2、流式细胞术光信号检测
光信号的类型 散射光信号：与标记荧光素无关，
是细胞的固有参数。 前向散射光(forward scatter, FSC)； 侧向散射光(side scatter, SSC)。
FL1
FL2
散点图和伪彩图
等高图和密度图
等高图：类似于地图中的等高线，同一条线上的细胞数目相等，越在里 面的曲线代表细胞数目越多。
散点图(Dot Plot) 伪彩图(Pseudo-color Plot) 等高线图(Contour Plot) 密度图(Density Plot) 假三维图(Pseudo 3D Plot)
• 三维图(3D Plot)
直方图 Histogram
细胞的某一单参数数据的统计分布图，横坐标表示荧光信号 或散射光信号相对强度的值，单位是道数，纵坐标一般是细 胞数。
Hoechst（343, 450）常见为Hoechst33342和Hoechst33258，非嵌入的方 式与DNA链上的A-T碱基对结合。能对活细胞染色，用于活细胞DNA定量分 析，如精子分选；还用于侧群细胞的分选。
PY（派若宁 560, 573） RNA染料，能进入活细胞。
AO（吖啶橙 509, 525） DNA、RNA染料，染色后DNA呈黄绿色荧光，RNA呈 橙黄色荧光，可进行DNA/RNA双参数分析。
……
每个细胞检测5个参数，那么获取10000个细胞，容量为 5×10000（字或双字）。
流式数据的显示方式
• 常用分析软件
流式细胞仪原理及操作步骤
流式细胞仪原理及操作步骤流式细胞仪（FCM）是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。
其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断，对淋巴细胞群和亚群进行精确分类，还能分离纯化某一群或亚群细胞。
活细胞免疫荧光技术是用于FCM检测的标本准备，染色后也能在荧光显微镜下进行观察，在某些实验条件下，活细胞免疫荧光染色后的特异性和敏感性要优于滴片固定的常规间接免疫荧光的结果。
（一）原理活细胞表面保留有较完整的抗原或受体，先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。
（二）操作步骤制备活性高的细胞悬液（培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法）↓用10％FCS RPMI1640调整细胞浓度为5×10６～１×10７／ml↓取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb（5～50μl）的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl 1 ∶20（用DPBS稀释）灭活正常兔血清（或兔抗鼠）荧光标记物，充分振摇↓ 4 ℃30min 用洗涤液洗涤2 次，每次加液2ml 左右1000rpm×5min↓加适量固定液（如为FCM制备标本，一般加入1ml 固定液，如制片后在荧光显微镜下观察，视细胞浓度加入100～500μl 固定液）↓ FCM检测或制片后荧光显微镜下观察（标本在试管中可保存5～7 天）（三）试剂和器材1. 各种特异性单克隆抗体。
2. 荧光标记的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗体，灭活正常兔血清。
3. 10％FCS RPMI1640, DPBS 、洗涤液、固定液（见附录）。
4. 玻璃管、塑料管、离心机、荧光显微镜等。
（四）注意事项1. 整个操作在4℃下进行，洗涤液中加有比常规防腐剂量高10 倍的NaN３，上述实验条件是防止一抗结合细胞膜抗原后发生交联、脱落。
流式细胞仪的简要介绍与注意事项
流式细胞仪的简要介绍与注意事项(流式细胞仪,注意事项)来源：评论：0我要评论[流式细胞仪的简要介绍与注意事项(流式细胞仪,注意事项)] 一、流式细胞仪的检测范围1．流式细胞仪可以检测细胞结构，包括：细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、R NA 含量、蛋白质含量。
2．流式细胞仪可以检测细胞功能，包括：细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。
[关键词:流式细胞仪注意事项]…••一、流式细胞仪的检测范围1．流式细胞仪可以检测细胞结构，包括：细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、R NA 含量、蛋白质含量。
2．流式细胞仪可以检测细胞功能，包括：细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。
二、流式细胞仪的临床应用1．流式细胞术在肿瘤学中的应用：流式细胞术可以检测肿瘤细胞增殖周期、检测肿瘤细胞表面标记、癌基因表达产物、进行多药耐药性分析、检测凋亡；2．流式细胞术在血液学中的应用：检测白血病和淋巴瘤细胞、活化血小板、造血干细胞（CD34+）计数、白血病与淋巴瘤的免疫分型、网织红细胞计数、细胞移植的交叉配型和免疫状态监测；3．流式细胞术在免疫学中的应用：可以进行淋巴细胞及其亚群分析、淋巴细胞免疫分型、检测细胞因子。
三、流式细胞仪的科研应用主要有细胞动力学功能研究、环境微生物分析、流式细胞术与分子生物学研究。
四、流式细胞术常规检测时的样品制备(一) 直接免疫荧光标记法取一定量细胞（约1×106细胞/ml），直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应（如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入），孵育20～60分钟后，用PBS（pH7.2 ～7.4）洗1～2次，加入缓冲液重悬，上机检测。
本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。
流式细胞仪使用注意事项
流式细胞仪使用注意事项
- 使用预约：使用者应合理预约机器使用时间，保证自己的正常测试需求和仪器清洗时间。
如果出现实际使用时间低于预约时间50%的情况，平台技术人员应该根据其出现次数频率对其进行警告处理，并按预约
时间收取测试费用。
- 流式实验室安全规定：操作流式细胞仪设备时必须全程佩戴手套。
流式细胞仪平台实验室内禁止饮食。
使用仪器务必注意防火安全，发现
隐患立即通知管理员。
流式分析和分选人类样本需注意生物安全性，
测试后残余样本自行带走处理，仪器使用后须用clean液充分清洗；
目前流式细胞仪平台禁止做人类感染性样本，不注意生物安全者，被
发现后将终身禁用平台流式设备；PI需对本课题组样本的生物安全性
负责，如有隐瞒，将禁用该课题组使用平台流式细胞仪。
- 流式设备操作规则：没有经过平台技术员培训或培训未通过的同学，禁止独立操作仪器；练习或学习阶段的同学如需操作仪器，必须有工
作人员或者有独立使用权限的同学全程在场陪同；测试过程中如需中
途离开，分析型流式需处于standby状态，分选型流式液流需处于关
闭状态。
为防止流式细胞仪管路堵塞，样本在上机前必须经过过滤处理；提前过滤好的样本在上机前需确保样本状态，不含细胞团块等易
堵塞管路的杂质。
流式测试结束，使用者必须清洗仪器，并按照指定
方法和时间进行清洗。
周末或夜间使用完毕后，如距离下一位使用者
预约时间大于2小时，当前使用者必须关机；最后一位使用者用完流式设备后必须关机，并按照关机步骤正确关闭设备。
流式细胞仪液安全操作及保养规程
流式细胞仪液安全操作及保养规程概述流式细胞仪是一种高级的生物分析仪器，最初是用于血液分析。
现在，它已被广泛应用于分析其他种类的细胞和微生物，包括花粉、细菌、酵母菌、真菌和小型水生动物等。
在使用流式细胞仪进行样品分析时，经常需要使用不同种类的化学试剂来修饰和标记待测物，包括荧光染色试剂、离子染料等。
这些化学试剂虽然对于有效的分析是必要的，但它们也具有很高的危险性，因此需要进行特别的安全操作和保养。
本规程旨在规范流式细胞仪液操作和安全管理，以便在最大程度上保护实验人员的身体健康和设备的完好性。
液体样品管理在使用流式细胞仪时，经常需要使用各种化学试剂和液体样品。
以下是管理这些液体样品的安全操作指南：1.所有试剂和液体样品应密封存放，并标明名称、浓度和储存条件。
2.所有试剂和液体样品的使用都需要严格遵循剂量的建议，并避免直接接触肌肤、口腔和眼睛。
3.液体样品在运输和转移过程中应当使用经过验证的安全容器和工具，避免因不当操作而导致溅泼和泄漏。
4.任何泄漏或飞溅应立即清洁，避免持续使用，并避免对其他设备、试剂和人员带来影响。
操作规范下面是在流式细胞仪操作时要遵循的安全操作指南：1.在进行任何操作之前确认试剂和样品的标记和浓度，确保使用正确的试剂和样品。
2.严密关闭试剂瓶和样品瓶的盖子，并严格遵循流式细胞仪的操作程序。
3.在使用荧光染色试剂时，应尽可能避免暴露于光源或阳光下，以避免染料的失效和实验误差。
4.在流式细胞仪的运转界面中，避免不必要的操作，避免误操作损害设备。
5.在样品进入流式细胞仪前，必须通过过滤器过滤并严格按照操作步骤加样。
6.操作完成后，要及时清理设备的样品盘和针头等设备，并确认设备处于关闭状态。
设备保养以下是保养流式细胞仪设备的注意事项：1.每天完成使用后，必须对设备的各个部分进行清洗，并进行消毒及干燥处理。
2.避免使用挥发性液体或喷雾进行清洁和消毒设备。
要使用适当的清洁剂和杀菌剂，并根据操作手册中规定处理设备。
流式细胞仪使用规范
流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。
流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。
为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。
1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。
b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。
c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。
2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。
可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。
b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。
c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。
3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。
b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。
c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。
d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。
4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。
b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。
如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。
c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。
5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。
b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。
流式细胞仪使用方法说明书
流式细胞仪使用方法说明书1. 概述流式细胞仪是一种用于细胞分析和排序的先进仪器。
本方法说明书旨在向用户介绍如何正确操作流式细胞仪以及最佳的使用方法。
请用户在使用前仔细阅读本说明书并遵循相关的安全操作规程。
2. 仪器组成流式细胞仪主要由以下几个组成部分构成：- 流体传送系统：用于将样本引入仪器并排除废弃物。
- 激光系统：产生激光束以激发样本中的荧光染料。
- 光学系统：收集样本产生的荧光信号并进行检测。
- 数据分析系统：用于解析和分析收集到的数据。
3. 使用准备在进行流式细胞仪实验之前，请确保以下几个步骤已经完成：- 仪器校准：根据仪器的使用手册进行仪器校准，确保仪器工作在最佳状态。
- 样本准备：按照实验需求，对待测样本进行合适的处理，例如细胞培养、染色等。
- 试剂准备：准备好所需的荧光染料、缓冲液等试剂。
4. 仪器操作以下是流式细胞仪的一般操作步骤：- 打开仪器电源，并等待仪器启动完成。
- 将样本装入合适的样本管，并在样本管中加入适量的荧光染料或其他试剂。
- 将样本管放入仪器中的样本槽，并调整流速和其他参数。
- 启动激光系统，并调整激光强度和波长以适应实验需求。
- 开始数据采集，根据仪器界面指示收集所需数据。
- 数据分析：根据实验需要，使用相应的数据分析软件对采集到的数据进行解析和处理。
5. 安全注意事项在使用流式细胞仪时，务必注意以下安全事项：- 佩戴个人防护装备，包括实验手套和护目镜。
- 遵循实验室的生物安全规程，确保样本处理符合相关的安全要求。
- 避免直接暴露于激光束下，以免损伤眼睛和皮肤。
- 在清洁仪器时使用合适的溶剂，并按照仪器清洁的标准程序进行操作。
6. 故障排除在实际操作中，有时可能会遇到仪器故障或其他问题。
以下是一些常见问题及其排除方法：- 仪器无法启动: 检查电源连接是否正常，重启仪器。
- 数据质量差: 检查样本制备和染色的质量，调整参数和仪器校准。
- 清洗困难: 检查是否有阻塞，按照清洁程序进行清洗。
流式细胞仪安全操作及保养规程
流式细胞仪安全操作及保养规程1. 前言流式细胞仪是一种高端的生命分析仪器，广泛应用于医学、化学、生物学等领域，已经成为现代实验室不可或缺的仪器之一。
然而，流式细胞仪的操作较为复杂，使用过程中需要注意许多安全问题，否则会对自身和实验室环境造成潜在的危害。
为了确保流式细胞仪的正常、安全使用，特制定以下操作及保养规程。
2. 流式细胞仪操作规程2.1 准备工作在使用流式细胞仪前，应注意以下准备工作：2.1.1 带上个人防护装备在使用流式细胞仪时，需要带上一定的个人防护装备，如实验手套、口罩、眼镜等，以防范样本物质对自身的伤害。
2.1.2 样品制备精确地制备样品是获得准确、可重复的流式细胞仪数据的关键。
在制备样品时，需要注意以下事项：•样品应洁净，纯度高；•样品应稀释至适合的浓度；•样品需要避免暴露在光线下。
2.1.3 流式细胞仪清洁使用流式细胞仪前，应将设备清洗并按照操作手册正确设置。
注意声音警报器和信号灯的功效。
2.2 实验操作2.2.1 启动流式细胞仪启动流式细胞仪的前提条件是样品审核通过、清洁完毕并符合清洁过程中设定的安全警戒线。
按照以下操作步骤进行启动：1.将流式细胞仪插头插入电源插座；2.打开流式细胞仪前面板上的电源开关；3.检查设备是否能够正常通电；4.检查设备上的液晶屏是否正常显示。
2.2.2 样品操作样品操作是流式细胞仪的核心，需要遵循以下步骤：1.打开样品架门；2.将样品检测管放在样品架上，注意是否正确安装；3.关上样品架门，并设置喷雾器；4.按下样品检测管的开关，将样品进入流式细胞仪；5.启动流式细胞仪，进行检测。
2.2.3 关闭流式细胞仪实验室操作完毕后，需要及时关闭流式细胞仪，避免发生紧急事故。
按照以下步骤进行：1.关闭流式细胞仪喷雾器；2.将样品架门打开，取出检测管；3.关闭前面板的电源开关；4.拔出插头，关闭电源。
2.3 安全注意事项在实验操作中，需要注意以下安全事项：•在操作流式细胞仪前，应认真阅读使用说明书和操作手册。
唯公流式细胞仪说明书
唯公流式细胞仪说明书唯公流式细胞仪说明书一、产品简介该流式细胞仪是一款高端技术的生物荧光图像分析仪器，具有快速、灵敏、高精度等特点，广泛应用于生命科学、医学研究等领域。
二、主要特点1.高灵敏度：可检测到极微小光信号，实现高度灵敏的光学检测；2.高分辨率：采用高精度镜头和滤光片，可实现高分辨率成像；3.宽波谱透射：可使用多种荧光和吸收光标记物，涵盖更广泛的应用场景；4.多通道检测：可同时检测多种标记物，提高检测效率；5.易于使用：人性化的操作界面，易于针对不同样本类型进行调整；6.数据分析功能：自动化数据处理功能，轻松完成荧光图像的分析；7.高效节能：节能设计，不仅保证高效工作，还能有效降低能源消耗。
三、主要参数1.激光器：488 nm，633 nm2.光源：氩离子激光器，He-Ne激光器3.探测器：八通道光散射及荧光检测4.检测灵敏度：2个荧光分子5.最大流速：1L/min6.样品速度范围：1个细胞/秒~10万个细胞/秒四、使用说明1.将样品加入样品管中，放入样品池，并调整流速；2.选择合适的荧光标记物；3.启动流式细胞仪，进行数据采集；4.导出数据文档，进行数据分析。
以上仅为简要使用说明，详细操作步骤请参考唯公流式细胞仪用户手册。
五、注意事项1.严格按照操作说明使用，避免误操作；2.样品池应进行定期清洗和消毒；3.在操作时应佩戴手套和口罩，避免样品的污染；4.不得私自拆卸设备，有需要时请联系唯公流式细胞仪售后服务。
请您务必仔细阅读唯公流式细胞仪使用说明，并按照操作步骤进行操作，以充分发挥设备的检测效果。
1流式细胞仪基础知识介绍
1流式细胞仪基础知识介绍流式细胞仪（Flow Cytometry）是一种通过流式技术对细胞进行快速分析和计数的仪器。
它结合了光学、电子和计算机技术，可以对单个细胞进行高效的多参数分析，可广泛应用于生命科学研究、临床诊断、药物研发等领域。
流式细胞仪的基本原理是通过激光束照射样本中的细胞，并利用光学系统收集和分析由细胞散射、荧光等产生的光信号。
其主要组成部分包括激光器、光学系统、流体系统和电子计算机系统。
激光器是流式细胞仪的光源，产生高强度的单色激光束。
常用的激光器有氩离子激光器、固态激光器和半导体激光器等，不同波长的激光器可用于激发不同荧光染料。
光学系统包括一系列透镜和滤光片，用于聚焦和收集激光束，并选择感兴趣的荧光信号进行检测。
透镜系统可以调整激光束的聚焦位置和扩展角度，使样品中的细胞逐个通过激光束。
流体系统通过将样品溶液注入流式细胞仪的流体管道中，使细胞以单个细胞的形式通过激光束，避免了背景信号的干扰。
流体系统还可以调节细胞的流速，以控制细胞之间的间隔，避免细胞重叠。
电子计算机系统是流式细胞仪的核心部分，用于控制仪器的运行和获得并分析光信号。
通过相应的软件，可以对细胞进行多参数分析，如细胞大小、形态、DNA含量、荧光标记等。
在流式细胞仪中，细胞通过激光束照射后，会产生散射光和荧光光信号。
散射光主要分为正向散射光（Forward Scatter，FSC）和侧向散射光（Side Scatter，SSC）。
FSC信号反映细胞的大小和复杂度，SSC信号反映细胞内部的结构和颗粒物质。
这些散射光信号可以提供有关细胞的一些形态信息。
荧光染料是流式细胞仪中常用的标记物质，通过与细胞中的特定成分结合，可以用来标记不同的细胞类型、活性分子和细胞内的蛋白质等。
荧光染料在激发后发出特定的荧光信号，可以通过滤光片选择性地收集和检测。
通过同时使用多种荧光染料，可以对不同的生物学参数进行同时分析。
流式细胞仪的数据分析可以通过绘制细胞密度分布曲线、细胞聚类分析、细胞亚群分析等方法进行。
流式细胞仪使用注意事项
流式细胞仪使用注意事项
流式细胞仪是一种高级的细胞分析仪器，它可以对单个细胞进行快速、高效的分析和排序。
在使用流式细胞仪时，需要注意以下几点： 1. 样品制备
样品制备是流式细胞仪分析的关键步骤之一。
样品应该充分混合，并且需要过滤以去除细胞团块和杂质。
此外，样品的浓度也需要适当，过高或过低的浓度都会影响分析结果。
2. 仪器操作
在使用流式细胞仪时，需要仔细阅读仪器的操作手册，并按照要求进行操作。
在操作过程中，需要注意仪器的清洁和维护，以确保仪器的正常运行。
3. 数据分析
流式细胞仪可以生成大量的数据，因此需要进行有效的数据分析。
在进行数据分析时，需要注意选择合适的软件和算法，并进行正确的数据解释和统计分析。
4. 安全注意事项
流式细胞仪使用时需要注意安全问题。
在操作过程中，需要佩戴手
套和口罩，避免样品污染和呼吸道感染。
此外，需要注意仪器的电源和电缆，避免电击和火灾等安全事故。
流式细胞仪是一种高级的细胞分析仪器，使用时需要注意样品制备、仪器操作、数据分析和安全问题。
只有在正确使用和维护的情况下，才能获得准确、可靠的分析结果。
流式细胞检测服务安全操作及保养规程
流式细胞检测服务安全操作及保养规程流式细胞仪是一种常用于细胞和微生物学研究的仪器。
由于其高分辨率和高灵敏度，越来越多的实验室选择使用流式细胞仪进行细胞分析和排序。
然而，流式细胞仪需要经常维护和保养，以确保其正常运行和获得准确的结果。
本文将介绍流式细胞检测服务的安全操作和保养规程。
安全操作1. 禁止直接接触样本流式细胞仪中的样本可能含有病原体或有害物质，因此最好避免直接接触样本。
在操作前，请佩戴手套和口罩。
2. 使用防护措施在操作流式细胞仪时，应注意使用防护措施，如佩戴防护眼镜、手套和口罩。
如果意外溅洒了样本或试剂，请立即用大量水冲洗受影响的区域。
3. 清洁工作区在每次使用流式细胞仪后，应及时清洁工作区，以防止潜在的污染。
使用酒精或消毒液擦拭工作区表面。
4. 注意电气安全在插拔电源线和其他电气部件时，务必注意先拔掉电源线。
在更换零部件时，要使用符合安全标准的工具。
5. 遵守细胞培养实验室的规则流式细胞检测服务通常在细胞培养实验室进行，因此应遵守实验室的规则和标准操作程序。
在细胞培养前，请先了解实验室的操作规程。
保养规程1. 定期检查系统保持流式细胞仪的正常运行，需要定期对其进行检查。
这包括检查光源、光学透镜、过滤器、激光、探头、定标等。
如果出现问题，请及时联系售后服务。
2. 定期清洁为了确保流式细胞仪的精度和可靠性，应定期对其进行清洁和消毒。
在清洁过程中，应使用无菌水、酒精或消毒液。
清洁应按照制造商的指示进行。
3. 定期更换耗材流式细胞仪需要定期更换各种耗材，如样本管、石英反射板、过滤器、校准微球和荧光探头等。
更换耗材应按照制造商的指示进行。
4. 避光保存流式细胞仪的灵敏度和可靠性都受光线影响，因此必须避光保存。
在保存和运输流式细胞仪时，应使用防光袋或盒子。
使用前，请检查仪器是否暴露在光线下。
5. 定期校准为了保证流式细胞仪的准确度和可重复性，应定期进行校准。
校准包括流速校准、信号放大器增益校准、定标和荧光补偿等。
流式细胞仪概述
由右图可知，空气泵 产生压缩空气，通过鞘 流压力调节器加在鞘液 上一恒定的压力，这样 鞘液以匀速运动流过流 动室，在整个系统运行 中流速是不变的。
（二）激光光源与光束成形系统 激光是一种相干光源，它能提供单波长、高强度及稳定
（三）光学系统 FCM的光学系统是由若干组透镜、滤光片和小孔组成。 滤光片主要分为： 1.长通滤光片 长通滤光片使特定波长以上的光通过。 2.短通滤光片 特定波长以下的光通过。 3.带通滤光片 带通滤光片允许一定波长范围内的光通过
（四）信号检测与分析 当细胞携带荧光素标记物，通过激光照射区时，细胞内
二、流式细胞仪细胞分选原理
在压电晶体上加上频率为30kHz的信号，使液柱断裂成一连串 均匀的液滴。当某类细胞的特性与要分选的细胞相同时，流 式细胞仪就会在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴 充以特定的电荷，带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电 场时，依所带电荷的符号分别向左偏转或向右偏转，落入指 定的收集器内，从而达到细胞分类收集的目的。
二、常用的荧光染料与标记染色
散射光信号是激光照在细胞上所产生的前向光和侧向光 信号。荧光信号来自于细胞的自发荧光或被分析细胞经特 异性荧光标记染色后通过激光束激发后所产生的。 因此，被分析细胞在制备成单细胞悬液后，经过与荧光染 料染色后才能上机进行检测。
焦宁Y与异硫氰酸荧光素（FITC，530nm）分别是RNA与 蛋白质的特异性染料；
（五）细胞分选器
1．小水滴的形成 压电晶体带动流动室振动，液流形成水滴。
喷嘴的振动频率即每秒钟产生水滴的数目。当喷嘴直径 为50μm时，信号频率为40kHz，则每秒钟产生4万个水滴。 若每秒钟流出的细胞是1000个，则平均每40个水滴中只有一 个水滴是有细胞的，其他皆为空白。
流式细胞仪使用注意事项
流式细胞仪使用注意事项流式细胞仪是一种广泛应用于生物学、医学、免疫学等领域的高精度分析仪器，可以对细胞、微粒子等进行快速、准确的分析。
但是，在使用流式细胞仪时，需要注意一些事项，以确保其正常运行和准确分析结果。
一、仪器安全1. 使用前检查仪器是否正常，如有异常情况，应及时进行维修或更换。
2. 在使用过程中，应注意避免碰撞和摔落，避免损坏仪器。
3. 在操作过程中，应注意保持仪器干燥、清洁，避免污染或损坏仪器。
4. 在更换试剂或样品时，应注意避免溅出，避免危险物质的接触和吸入。
二、操作规范1. 在操作前，应先熟悉仪器的使用方法和操作流程，避免误操作。
2. 在样品准备和处理过程中，应注意避免污染和交叉感染，避免影响结果的准确性。
3. 在样品注入时，应注意样品的浓度和体积，避免过度稀释或浓缩，影响结果的准确性。
4. 在仪器运行过程中，应注意监测仪器的状态和数据输出，避免出现异常情况。
5. 在操作结束后，应及时清洗和消毒仪器，避免残留污染物或危险物质。
三、结果分析1. 在分析结果时，应注意对数据进行正确解读和分析，避免误判或漏判。
2. 在结果分析过程中，应注意对结果的质量进行评估和验证，避免出现偏差或误差。
3. 在结果分析结束后，应及时记录和保存结果数据，避免数据丢失或误删。
四、安全防护1. 在使用过程中，应注意遵守实验室安全规范和操作规程，避免发生意外事故。
2. 在使用过程中，应注意佩戴个人防护装备，如手套、口罩、护目镜等，避免危险物质的接触和吸入。
3. 在使用过程中，应注意对危险物质进行正确处理和处置，避免对环境和人体造成影响。
总之，流式细胞仪是一种高精度的分析仪器，使用时需要注意安全、操作规范、结果分析和安全防护等方面，以确保其正常运行和准确分析结果。
同时，还需要不断学习和掌握新的技术和方法，提高自身的技能和能力，为科学研究和医学诊断做出更大的贡献。
流式细胞仪
将其L拖OG至O 空白区。
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流式细胞仪基本操作流程
2、开启CellQuest 软件、编辑实验文件 检查现有仪器条件
从Cytometer菜单中选择Threshold，出现 Threshold 窗口在Threshold 窗口：确认FSC为设阈参数，初步确认 预设阈值52。将其拖至空白区。
从Cytometer菜单中选择Compensation，确认所有预 设数值皆为零。将其拖至空白区。
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流式细胞仪基本操作流程
3、上样品、设置仪器
使仪器处于High RUN，支撑架左移，上阴性对照管样 品，支撑架回位。确认Acquisition Control 窗口中 Setup前需打叉或打勾 (即不储存数据)，点击Acquire。观 察FSC/SSC图的变化
调节 FSC/SSC
流式细胞术的研究对象为生物颗粒，如各种细胞、染色体、 微生物、及人工合成微球等
流式细胞术研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并
加以定量
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二、流式细胞仪基本原理
流式细胞仪的组成
液流系统
聚焦细胞以供检测
光学系统
激发和收集光信号
电子系统
将光信号转化为电信号，并使其数字化以供计算机分析
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流式细胞仪基本操作流程
4、收集实验数据 计数器Counters
从Acquire 菜单中选择Counters. 窗口会显示样品分析速 率、与总数进度。
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流式细胞仪基本操作流程
4、收集实验数据 收集实验数据
样品放到检测区，在Acquisition Control窗口中，将 Setup
流式细胞仪验证安全操作及保养规程
流式细胞仪验证安全操作及保养规程1.安全操作注意事项在使用流式细胞仪前，需要了解一些重要的安全操作注意事项。
1.1.操作前准备在开始使用流式细胞仪进行实验前，需要进行以下几项准备：•检查仪器是否处于正常工作状态，确认仪器所有部件处于正确位置且完好无损。
•验证仪器是否与正确的电源相连，且电压是否符合要求。
•在使用前请仔细阅读仪器使用手册和操控手册，了解仪器的使用方法和注意事项。
1.2.操作时的注意事项在使用流式细胞仪时，需要注意以下事项：•在操作中，请戴手套、口罩、护目镜等防护用品以保障实验安全。
•在操作过程中请谨慎处理所有实验物品，包括悬浮细胞、试剂、化学物质等，以防止潜在的危险性。
•在使用前，请认真了解所有细胞、细胞培养液和试剂的性质。
针对化学品，需要了解其化学性质和可能的安全危险。
•如果产生任何实验安全问题，请立即向实验室负责人汇报。
1.3.操作后的处理在完成实验后，需要及时清理和处理实验设备和试剂。
需要注意以下事项：•仔细处理所有试剂和化学物品残余，以避免造成污染和安全隐患。
•在使用后，请及时将实验设备清洗并消毒，以便下一次使用。
•对于所有的样品和试剂，在使用完毕后，需要按照规定的方法和处置方式进行处理。
2.保养规程为了保证流式细胞仪的稳定性和可靠性，需要定期对仪器进行保养和维护。
2.1.日常维护•定期清洗所有外部器具以保证外观清洁。
•在使用后请直接关闭流量阀门。
•室温下运输仪器时，需要等待至少4小时后才能进行使用。
2.2.周期保养•在使用过程中，请避免不当使用和暴力操作。
•每隔3个月，需要对仪器进行一次全面保养，检查每个器具的精确度以及指示符和测量系统的正常性能。
2.3.异常处理•如果在实验中出现任何异常或者问题，请立即联系厂家或者技术支持人员。
•如果需要维修，请按照说明书上的流程进行步骤。
任何私自处理都可能会导致更大的损害。
结论通过对流式细胞仪的安全操作和保养规程的详细说明，可以让我们更加清晰地了解如何安全、高效地进行实验操作。
成像流式细胞仪安全操作及保养规程
成像流式细胞仪安全操作及保养规程成像流式细胞仪（Imaging Flow Cytometer）是一种非常重要的生物实验设备，在细胞生物学、医学和药物研发等领域中发挥着重要的作用。
本文将介绍成像流式细胞仪的安全操作规范和保养规程，以确保设备的正常运转和使用者的安全。
安全操作规范1. 穿戴个人防护装备使用成像流式细胞仪时，必须穿戴个人防护装备，包括实验衣、手套、护目镜、防护口罩等。
这可以避免实验过程中可能产生的液体飞溅、化学品溅出以及光线照射对身体造成危害。
2. 仪器使用前验收在使用成像流式细胞仪之前，必须进行仪器的验收。
检查设备是否符合使用要求，检查电源是否正常、温度和湿度是否适宜、系统是否完好、消毒是否到位等。
保证了仪器的正常运行环境和原始状态，才能提供准确的数据分析和诊断。
3. 样本处理前准备工作在进行样本处理前，必须对样本本身进行检查，避免出现不必要的污染和误差。
制备样本时，要按照规定的方案进行，根据实验要求选择合适的缓冲液、酶溶液和标记物，避免使用过期或未知来源的反应体系或化学品。
对于可能产生气溶胶的操作，如打孔操作和离心机，需要使用带有过滤系统或密闭工作台进行处理。
4. 设备操作步骤操作设备前，需要进行清洁消毒，确认光、聚焦、样本探测、触发控制器和成像等参数的设定以及校准。
仪器操作时，必须严格按照操作步骤进行，禁止在设备运行时对设备进行维护和调整。
操作时不能将手臂、头部和身体靠近仪器前沿，并保持设备周围的通风畅通。
5. 设备操作后处理仪器操作结束后，应对设备进行彻底清洁；将样本架、样本容器和废液等物品进行严格的分类处理、包装和消毒处理。
保存检测数据应按照操作规范进行保存和管理，不得丢失或随意散布泄露。
保养规程1. 日常保养日常保养包括设备的日常清洁消毒和常规维护。
设备的日常清洁消毒一般应每日进行。
消毒剂应选择标准化消毒剂，在使用前按要求稀释后喷洒在设备表面，使用纸巾擦拭干净。
如有污渍难以清除时，需要询问厂家或使用专业清洗剂。
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流式细胞仪的简要介绍与注意事项(流式细胞仪,注意事项)
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[流式细胞仪的简要介绍与注意事项(流式细胞仪,注意事项)] 一、流式细胞仪的检测范围1．流式细胞仪可以检测细胞结构，包括：细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、R NA 含量、蛋白质含量。
2．流式细胞仪可以检测细胞功能，包括：细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。
[关键词:流式细胞仪注意事项]…
••一、流式细胞仪的检测范围
1．流式细胞仪可以检测细胞结构，包括：细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、R NA 含量、蛋白质含量。
2．流式细胞仪可以检测细胞功能，包括：细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。
二、流式细胞仪的临床应用
1．流式细胞术在肿瘤学中的应用：流式细胞术可以检测肿瘤细胞增殖周期、检测肿瘤细胞表面标记、癌基因表达产物、进行多药耐药性分析、检测凋亡；
2．流式细胞术在血液学中的应用：检测白血病和淋巴瘤细胞、活化血小板、造血干细胞（CD34+）计数、白血病与淋巴瘤的免疫分型、网织红细胞计数、细胞移植的交叉配型和免疫状态监测；
3．流式细胞术在免疫学中的应用：可以进行淋巴细胞及其亚群分析、淋巴细胞免疫分型、检测细胞因子。
三、流式细胞仪的科研应用
主要有细胞动力学功能研究、环境微生物分析、流式细胞术与分子生物学研究。
四、流式细胞术常规检测时的样品制备
(一) 直接免疫荧光标记法
取一定量细胞（约1×106细胞/ml），直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应（如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入），孵育20～60分钟后，用PBS（pH7.2 ～7.4）洗1～2次，加入缓冲液重悬，上机检测。
本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。
虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。
(二) 间接免疫荧光标记法
取一定量的细胞悬液（约1X106细胞/ml），先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原-抗体-抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。
本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。
但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。
所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。
另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。
五、质量控制和注意事项
流式细胞仪并非是完全自动化的仪器，准确的实验结果还需要准确的人工技术配合，所以标本制备需要规范，仪器本身亦需要质量控制。
（一）流式细胞术免疫学检测的影响因素和质量控制
流式细胞术在免疫学中有着广泛的应用，其免疫荧光染色的标本制备非常重要，常常由于标本制备过程中出现人为非特异性荧光干扰(尤其在间接免疫荧光染色中)或细胞浓度低等影
响检测结果。
解决这些影响因素的方法如下：
(1) 确保标本上机检测前的浓度为1X106/ml，细胞浓度过低直接影响检测结果。
(2) 使用蛋白封闭剂，封闭非特异结合位点，尤其在间接免疫荧光标记时必不可少。
常用的蛋白封闭剂为0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。
(3) 荧光抗体染色后充分洗涤，注意混匀和离心速度，减少重叠细胞和细胞碎片。
(4) 设置对照样品，采用与抗体来源同型匹配的无关对照和荧光抗体的本底对照。
(5)判定结果时，应注意减去本底荧光，为使免疫荧光的定量分析更精确，应用计算机程序软件，用拟合曲线方法从实验组的曲线峰值中减去对照组的曲线峰值，可以得到更准确的免疫荧光定量结果。
(6) 注意染色后避光，保证细胞免疫荧光的稳定。
（二）DNA倍体分析的质量控制仍没有统一的标准，各文献报道的实验结果差异较大，1993年10月美国癌症(cancer)研究组织制定了FCMDNA定的统一标准，我们根据这些标准并结合国内有经验的专家多年的实践，对FCM的DNA分析技术的质控和注意事项进行说明。
(1) 手术切除的新鲜标本或活检针吸标本取材时，要避免出血坏死组织。
(2) 标本采集后要及时固定或深低温保存，以免组织发生自溶，DNA降解，而造成测试结果的误差。
(3) 固定剂要采用对组织细胞穿透性强的浓度，70%的乙醇固定效果较好。
(4) 单细胞悬液制备过程中，注意将待测细胞成分分离出来，减少其他成分的干扰，并注意不要损伤该群细胞。
(5) 细胞样品的采集要保证足够的细胞浓度，即1X106/ml，杂质、碎片、团块和重叠细胞应<2%，对肿瘤细胞DNA异倍体的分析样品，至少有20%的肿瘤细胞存在。
(6) 石蜡包埋组织单细胞制备时要注意：取材时应选取无自溶、坏死的组织，对肿瘤组织标本，选取含肿瘤细胞丰富的区域；石蜡组织片的厚度要适宜，最好为40～50μm 。
过薄或过厚的切片均会影响检测结果；彻底脱蜡，以免残留的石蜡影响酶的消化活性，验证脱蜡是否完全的方法是弃去二甲苯，加入100%乙醇，如果无絮状物浮起，说明蜡已脱净；水化要充分，使组织还原到与新鲜组织相似的状态；注意消化的时间和消化酶的活性。
常规使用0.5%胃蛋白酶，pH 1.5。
（三）操作方面
(1)流式细胞仪在整个工作过程中处于最佳状态，能保证定量检测的准确性和检测精度。
使用标准样品调整仪器的变异系数在最小范围，分辨率在最好状态，能避免在测量过程中仪器条件的变化引起的检测误差。
(2)评价仪器精度的重要指标是仪器的变异系数（CV），对于校准样品，其CV值越小越好，CV值越小，说明仪器校正的精度越高。
校准样品包括非生物样品（荧光微球）和生物细胞样品（人淋巴细胞、鸡红细胞等）。
目前，非生物荧光微球已有商品试剂，CV一般<2%～3%。