疟原虫实验室检查
疟原虫的显微镜检查
疟疾（Malaria）•系世界六大热带病和我国五大寄生虫病之一，危害极大，非洲每年约100万儿童死于疟疾•疟疾主要分布于热带、亚热带各国，我国的华南、华中(特别是云南和海南)•疟原虫属原生动物亚界--顶复门--孢子纲--疟原虫属•寄生人类的疟原虫有：间日疟原虫、恶性疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫等•疟原虫通过蚊叮咬而感染人，疟疾的典型临床表现是周期性寒战、发热和出汗•疟疾诊断主要靠外周血涂片检查•用磷酸氯喹及磷酸伯氨喹治疗，对于抗氯喹虫株则宜用青蒿素类药物、或与奎宁、咯萘啶、磺胺多辛和乙胺嘧啶等联合用药疟疾的临床症状临床表现•周期性：冷（1-2h)à热(4-6h) à汗。
实际上发作周期多不典型，尤其是儿童、初发时和进入疟区的初患病例•冷：全身颤拦、皮肤鸡皮样、面色苍白，口唇与指甲发紫等；夏天盖几层棉被也不暖•热：面色绯红、皮肤灼热、体温39-40℃可伴头痛\全身酸痛,小儿或严重成人可发生惊厥、谵亡或昏迷•汗：大汗淋漓、体温急降，乏力•贫血：发作次数越多、病程越长贫血越严重。
•脾肿大、硬化：脾切面颜色变深；大可达脐下；重量可达500至1000g.慢性患者脾纤维化，包膜增厚而变硬原因•发作周期和红内期裂体增殖周期一致。
•疟原虫代谢产物(外源性热原质)和裂殖子、残余和变性血红蛋白、红细胞碎片被吞噬细胞吞食而产生内源性热原质•疟原虫对红细胞的直接破坏•脾巨噬细胞吞噬红细胞•骨髓造血受抑制•免疫病理（正常抗疟抗体+红细胞自身抗体）疟原虫的生活周期生活史中的关注点：1.感染阶段：子孢子2.感染方式：蚊虫叮咬和输血3.致病阶段：红内期原虫4.寄生部位：肝、红细胞5.媒介：蚊(为终宿主）6.诊断阶段：红内期原虫疟疾的实验诊断病原检查:1. 血涂片染色取外周血制成厚、薄血膜，经吉氏或瑞氏液染色镜检2. 采血时间•恶性疟：发作时、查环状体，发作数小时后因晚期滋养体寄生虫的红细胞滞留下皮下脂肪及内脏微血管中，不易查见。
疟原虫检验技术
白细胞疟原虫计数法举例
●假设计数200 WBC中有35个疟原虫，在不知患 者白细胞数的情况下，以每微升血8000个白细 胞为数, 由此计算出每微升血液疟原虫密度为：
35（疟原虫数）÷200（计数的白细胞）x 8000（每 微升血白细胞数） =1400 / μl 答：该患者的疟原虫密度为1400 / μl。
半定量计数法
用厚血膜每个视野中所观察到疟原虫的平均数粗略 地估计出疟原虫密度。这种方法简便，缺点是计数 的疟原虫数受血膜厚薄影响，只能定性，不宜作定 量分析。 国内常用。此方法将密度分为6级： 1.全厚血膜查见疟原虫数在10个以内，记录实际数字 2.全厚血膜查见疟原虫数在10个以上，但平均每个视 野不到1个虫，记录“少” 3.平均每个视野1~5个虫，记录“＋” 4.平均每个视野6~10个虫，记录“++” 5. 平均每个视野11~100个虫，记录“+++ ” 6. 平均每个视野100个虫以上，记录“++++ ”。
薄血膜再取一小滴血.将血置于第一张玻片离厚血膜适 当远的地方.将采血玻片(推片)的边缘紧贴载玻片使 血液沿边缘散开(如图示).
正确的推片姿势
标准的疟疾厚薄血膜片位置
各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片
门诊发热病人血片 居民普查血片
厚薄血膜的标准
●厚血膜血量适宜，不宜过多或过少
●薄血膜平整,无皱折和空泡.红细胞单层排列
各期滋 养体 裂殖体
涨大,可达正 常 的 1.5-2 倍
涨大,可达正 常 的 1.251.5倍
薛氏 点可 出现
薛氏 点可 出现
疟原虫实验室镜检-课件(1)
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以下照片在一般发热病人血片中是观察不到的
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寄生的红细胞
染色后，寄生的红细胞溶解，轮 廓消失，但有时尚留下一“影子” 或小点。
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实图
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混合感染
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谢谢!
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小于正常红细胞；裂殖子 较小，8～26个，通常8、 18个，排列不规则，疟 色素成团块状，黑褐色
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雌配子体（薄血膜）
间日疟
恶性疟
大于正常红细胞，圆形；核 小．致密，深红色，偏于一 侧，胞浆深蓝色；疟色素散 在
疟疾实验室检查及诊断
疟疾实验室检查及诊断一、实验室检查1、血象红细胞和血红蛋白在多次发作后下降，恶性疟尤重；白细胞总数初发时可稍增，后正常或稍低，白细胞分类单核细胞常增多，并见吞噬有疟色素颗粒。
2、疟原虫检查(1)血液涂片(薄片或厚片)染色查疟原虫。
并可鉴别疟原虫种类。
(2)骨髓涂片染色查疟原虫，阳性率较血片高。
3、血清学检查疟疾抗体一般在感染后2〜3周出现，4〜8周达高峰，以后逐渐下降。
现已应用的有间接免疫荧光、间接血凝与酶联免疫吸附试验等，阳性率可达90%,一般用于流行病学调查。
二、诊断(一)流行病学有在疟疾流行区居住或旅行史，近年有疟疾发作史或近期曾接受过输血的发热患者都应被怀疑。
(二)具周期性寒战、发热、出汗等典型临床表现的可作初步诊断。
不规律发热，而伴脾、肝肿大及贫血，应想到疟疾的可能。
凶险型多发生在流行期中，多急起，高热寒战，昏迷与抽搐等。
流行区婴幼儿突然高热、寒战、昏迷，也应考虑本病。
（三）实验室检查主要是查找疟原虫，通常找到即可确诊。
血片找疟原虫应当在寒战发作时采血，此时原虫数多、易找。
需要时应多次重复查找。
并一定要做厚血片寻找。
如临床高度怀疑而血片多次阴性，可做骨髓穿刺涂片查找疟原虫。
（四）治疗性诊断临床表现很象疟疾，但经多次检查未找到疟原虫。
可试用杀灭红内期原虫的药物（如氯喳），治疗48小时发热控制者，可能为疟疾。
但注意耐氯喳虫株。
三、鉴别诊断（一）一般非典型疟疾应与下列疾病相鉴别1、败血症疟疾急起高热，热型稽留或弛张者，类似败血症。
但败血症全身中毒症状重；有局灶性炎症或转移性化脓病灶；白细胞总数及中性粒细胞增高；血培养可有病原菌生长。
2、钩端螺旋体病本病流行多在秋收季节，与参加秋收接触疫水有密切关系。
临床典型症状“寒热酸痛一身乏，眼红腿痛淋巴大”可供鉴别。
3、丝虫病急性丝虫病有时需与疟疾鉴别，鉴别主要依据离心性淋巴管炎，血片中找到微丝坳。
4、伤寒、副伤寒一般起病不急，持续高热，常无寒战及大汗，有听力减退，相对缓脉，玫瑰疹，白细胞减少，嗜酸性粒细胞消失，肥达氏反应阳性，血或骨髓培养阳性等特点，不难鉴别。
疟原虫检验技术
具有较高的灵敏性和特异性，可用于早期诊断和流行病学调查。
优点
恶性疟原虫免疫荧光染色法
优点
具有较高的灵敏性和特异性，可用于早期诊断、药物治疗监测和流行病学调查等。
原理
以疟原虫特异性DNA片段作为引物，通过聚合酶链反应扩增特异性DNA片段，然后将扩增产物进行电泳分析，以检测疟原虫的存在。
局限性
不同种疟原虫的DNA序列存在差异，因此需要针对不同种疟原虫设计不同的引物。
聚合酶链反应（PCR）
对疟原虫的基因序列进行分析，可了解疟原虫的种群结构、遗传变异和抗药性。
核酸序列分析
分子生物学检验
体外培养法
将患者血液中的疟原虫接种到按蚊细胞或其它传代细胞系中，进行体外培养，用于分离和鉴定疟原虫。
体内培养法
将患者血液中的疟原虫接种到按蚊体内，进行体内培养，用于分离和鉴定疟原虫。
流行病学调查
通过对疟疾疫源地进行分析，找出传染源和传播途径，有助于制定针对性的防控措施，控制疫情扩散。
疫源地分析
流行病学调查与疫源地分析
结论与展望
06
疟原虫检验技术的重要性和意义
疟原虫检验技术是疟疾诊断、治疗和防控的关键手段，对于减少疟疾传播、保护人民健康具有重要意义。
疟原虫检验技术的发展和应用，有助于提高疟疾防治效果，降低疟疾发病率和死亡率，为国家和人民节省了大量医疗资源和社会成本。
xx年xx月xx日
疟原虫检验技术
目录
contents
疟原虫检验概述疟原虫检验技术分类各种疟原虫检验技术介绍疟原虫检验技术的应用范围与局限性疟原虫检验的实际应用案例结论与展望
疟原虫检验概述
01
疟原虫检验是指通过实验室手段对患者的血液、组织、排泄物等进行检查，以确诊疟疾感染和评估病情严重程度。
疟原虫检测
3.血涂片检查 在染色后的血膜上加一滴香柏油，用光学显微镜油 镜检查。以检查厚血膜为主，薄血膜主要用于虫种鉴 别。着色较好的血膜，红细胞呈淡红色，嗜酸粒细胞 颗粒呈鲜红色，中性粒细胞核呈紫蓝色，淋巴细胞及 疟原虫胞浆呈蓝色或淡蓝色，疟原虫核呈红色。除环 状体外，其它各期均可见疟色素。以查完整个厚血膜， 未查见疟原虫判为阴性。根据疟原虫形态确定恶性疟、 间日疟、三日疟、卵形疟或混合感染。
2、血膜的染色 （1）染色液的制备 目前的血膜染剂有吉氏和瑞氏 两种。吉氏染液不仅适用于厚血膜和批量血膜的染色。 而且效果稳定，染色时间和染液浓度对染色结果影响 较小，染色后的血膜保存时间较长，同时吉氏染液能 长期保存而不变质，染色技术也易掌握，被推荐使用。 瑞氏染色因操作简便，常用于个别血片染色。 吉氏染液：吉氏粉5g，甲醇250ml，甘油250ml。 将吉氏粉置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，边加 边研，到甘油加完为止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在 研钵中加少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次 加甲醇，洗后再倒入瓶中，至甲醇洗净研钵为止。塞 紧瓶塞，充分摇匀，室温内放置， 每天用力摇动溶液5 分钟，3天后即可使用。
（4）厚、薄血膜的位置 根据需要，每张载玻片上 可做1个薄血膜、1个厚血膜和1个薄血膜、或一个薄血 膜和2 个厚血膜、或2 个薄血膜和 2 个厚血膜、或 1张载 玻片上制作多个厚血膜。 （5）染色前血膜的保存 血膜制成后，立即将受检者 号码写在玻片上，血膜朝下插入直竖的标本盒内，让 血膜自然干燥后才能染色。吉氏染液时薄血膜在染色 前须经甲醇固定，而厚血膜在染色前必须溶血，但制 作的厚血膜也可直接染色。血膜放置时间，夏天不宜 超过48小时，冬天不宜超过 72小时，否则厚血膜会自 然固定而不能溶血，影响镜检。不能及时染色的血膜， 可先用甲醇固定薄血膜，将厚血膜溶血，晾干后包好， 放入干燥器中，置于冰箱内保存。临用时，将干燥器 放置室温中1～2小时后取出血片。
疟原虫检查的标准操作程序
疟原虫检查的标准操作程序【目的】用于指导血液中检查疟原虫。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报请专业组长及科主任签字后生效。
【方法原理】疟原虫寄生于人体后，分为各个阶段存在于血液中。
经瑞氏染色后，其染色质呈红色，疟色素棕黄色等特征性颜色，从而使疟原虫的各个阶段在血涂片中呈现其特定的形态。
【病人准备和标本要求】间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10小时左右采血，恶性疟患者，应在发作后20h左右采血，标本及时制成血片。
【操作方法】1、取外周血或EDTAK2抗凝血1滴于载玻片上，以常法推制成薄片。
2、待血膜完全干燥后即可进行瑞氏染色。
3、干后以油镜检查，如在病人寒战发作前取血检查，阳性率较高。
间日疟原虫感染之红细胞常胀大，血片两边及尾部疟原虫较多，检查时可先看片尾部。
4、3种疟原虫形态特点，如表1表1 薄血片上3种疟原虫形态特点形态名称形态特点间日疟三日疟恶性疟早期滋养体（环状体）虫体大小细胞质染色质较大，约为红细胞1/3浅蓝色，呈较薄环状较大，约为红细胞1/3浅蓝色，呈较厚环状同间日疟较小，约为红细胞的1/6浅蓝色，环较状薄细胞边缘可有2个环状体红色小点，一般为1个或更多环状体晚期滋养体虫体大小细胞质疟色素可长得很大，甚至充满整个红细胞阿米巴状，变化很多棕黄色，呈微小短杆较小坚实带状，变化不多黄绿色，较粗颗粒在末梢血中查不到裂殖体虫体大小斑点状，四散分布薛氏小点鲜红、细小，均匀分布较小状，四散分布齐氏小点，红色裂殖体虫体大小细胞质裂殖子数目裂殖子形态很大松散，较不规则12-24个，平均16个排列不规则较小坚实，较圆6-12个排列不规则或呈花朵状在末梢血中查不到配子母体虫体大小细胞质染色质疟色素红细胞圆形，约为红细胞1/2以上深蓝色致密，深红色，位于一边沿边分布胀大，色较淡圆形与红细胞等大或较小深蓝色致密，深红色，位于一边沿边分布正常或缩小半月形，两端钝圆（雄）两端较尖（雌）蓝色致密，深红色，位于中央黑褐色，密集于中央正常，偶然缩小，色深【参考区间】疟原虫：阴性【临床意义】1、查见疟原虫是临床判定疟疾的指标之一。
疟原虫检验技术
正确的推片姿势
标准的疟疾厚薄血膜片位置
各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片
门诊发热病人血片 居民普查血片
厚薄血膜的标准
●厚血膜血量适宜，不宜过多或过少
●薄血膜平整,无皱折和空泡.红细胞单层排列
血片染色
两种染色方法: ●吉氏染色法 ●瑞氏染色法
常用吉氏染色法
吉氏染液(原液)的配置
吉氏染粉 (Azure B typ来自) 5g疟原虫人类四种疟原虫的 基 本特征
感染人的疟原虫有四种:
恶性疟原虫 P. falciparum 间日疟原虫 P. vivax 三日疟原虫 P. malariae 卵形疟原虫 P. ovale
恶性疟 P.falciparum
● 四种疟原虫中致病力最强 ● 无免疫力者感染后出现急性症状,不及时治
疗可危及生命 ● 在我国主要流行云南省和海南省
2. 显微镜下选择红细胞排列整齐密集，无重迭的视 野（ 300-500红细胞/视野）
3. 按一定顺序移动血片记数红细胞的同时，记录疟 原虫数
4. 如果能见到疟原虫，但是记数5000～10000个红细胞 时却没有感染红细胞，那么设定感染率为＜１％
如何确定疟原虫血片为阴性
● 检查全部厚血膜未查见疟原虫 ● 最少检查100个厚血膜油镜视野未查见
感染红细胞边 缘破碎状
薛氏点明显疟 色素棕黄色,类 似间日疟原虫
种
周 围 血 红细胞形态
疟原虫形态
中发育
阶段
大小
点彩
胞浆
疟色素
裂殖子数
恶 性 疟 原 环状体
虫
配子体
正常
常见 茂氏 点
环状体钎细， 常见２个核
粗黑，配子 体中明显
疟疾镜检的实验室技术
疟疾镜检的重要性
疟疾镜检能够快速、 准确地诊断疟疾，为 及时治疗提供依据。
对于疟疾高发地区， 疟疾镜检是监测和评 估疟疾流行情况的重 要手段。
通过疟疾镜检，可以 及早发现疟疾，防止 病情恶化，减少并发 症的发生。
疟疾镜检的历史与发展
疟疾镜检最早可追溯到19世纪末期，当时使用简单的显微镜观察血液样本。
免疫学检测
检测方法
采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光抗体试验（IFA）等方法检测血液中疟 原虫抗原或抗体。
检测原理
利用特异性抗体与疟原虫抗原结合的原理，通过显色反应或荧光标记来判断疟原 虫的存在。
03
疟疾镜检的步骤与操作
样本采集与处理
采集时间
选择疟疾感染后红细胞期， 即发热后2-3天采集样本， 此时疟原虫数量最多，检 出率最高。
改进样本处理方法，提高疟原虫 的提取和富集效果，降低背景干
扰，提高检测灵敏度。
特异性抗体标记
利用特异性抗体标记疟原虫，降 低非特异性染色，提高检测特异
性。
基因检测技术
利用基因检测技术，对疟原虫基 因进行检测，提高检测的灵敏度
和特异性。
降低操作复杂度与成本
简化操作流程
优化检测流程，减少操作步骤，降低操作复杂度。
采集部位
通常采集静脉血液，常用 肘静脉或耳垂。
采集量
根据检测需求，一般采集 5-10ml血液。
血液样本处理
离心分离
将采集的血液放入离心管中，以 一定速度离心，使红细胞下沉， 分离出血浆和白细胞层。
制备涂片
用毛细管吸取白细胞层中的疟原 虫，均匀涂在载玻片上，晾干后 进行显微镜检查。
显微镜检查
显微镜类型
镜检过程需要经过多个步骤，包括血液采集、制片、染色和观察等，操作较为复杂。
疟疾诊断的三条标准
疟疾诊断的三条标准
疟疾是由疟原虫属寄生虫引起的疾病，它被蚊子叮咬传播给人类。
疟疾的准确和及时诊断对于治疗和控制该病至关重要。
以下是疟疾诊断的三个主要标准：
1.症状标准：疟疾的常见症状包括发热、寒战、头痛、肌肉疼痛和乏力等。
这些症状在感染后通常会在几天至几周内出现，具体时间取决于感染的疟原虫种类。
症状标准对于怀疑疟疾的初步筛查非常有用，但这些症状不具特异性，也可能与其他感染性疾病相似。
2.血液检测标准：确诊疟疾的关键是通过实验室检测检测到感染者体内的疟原虫。
目前，最常用的方法是通过显微镜检查染色的血液标本。
这种方法允许观察到疟原虫的形态特征，确定感染的种类。
血液检测的准确性取决于经验丰富的实验室技术人员和标本质量。
3.分子诊断标准：分子检测方法，如聚合酶链反应（PCR），已经成为疟疾诊断中的重要工具。
PCR可以检测和鉴定疟原虫的DNA或RNA，其高度敏感性和特异性使其成为一种快速且准确的诊断方法。
PCR技术特别适用于低感染水平和疟疾流行不稳定的地区。
疟疾诊断的三条标准
疟疾诊断的三条标准
疟疾诊断的三条标准是：症状、实验室检查和流行病学史。
1. 症状：疟疾的常见症状包括发热、寒战、头痛、肌肉和关节疼痛、乏力和恶心等。
疟疾症状可能会周期性地出现和消失，与感染者的疟原虫感染周期有关。
2. 实验室检查：疟疾的确诊需要通过显微镜下观察血液标本来检测疟原虫的存在。
目前常用的方法是血涂片染色法和快速诊断试纸法。
血涂片染色法是将血液标本涂于玻璃片上，用染色剂染色后，通过显微镜观察疟原虫的形态和数量。
快速诊断试纸法使用抗原抗体反应来检测疟原虫。
3. 流行病学史：疟疾的诊断还需要考虑患者的流行病学史，包括旅行史和居住地点。
疟疾主要存在于热带和亚热带地区，如非洲、亚洲和拉丁美洲等。
因此，如果有旅行史或居住在这些地区，并且出现了疟疾的症状，就需要考虑疟疾的可能性。
疟原虫的镜检技术
正确使用显微镜步骤
01
02
03
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将载玻片放在载物台上， 用压片夹固定。
转动转换器，将低倍物镜 对准通光孔。
调节光圈和反光镜，使视 野亮度适宜。
转动粗准焦螺旋，使镜筒 缓缓下降，直到物镜接近 载玻片。
一只眼注视目镜内，同时 逆时针方向转动粗准焦螺 旋，使镜筒缓缓上升，直 到看清物像为止。再略微 转动细准焦螺旋，使看到 的物像更加清晰。
结果判断失误
应结合临床症状和其他检查结果进 行综合判断，避免误诊或漏诊。
06
镜检技术在疟疾防控中应用前景
提高镜检技术准确性和效率
01
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03
改进显微镜设备
采用高分辨率、高对比度 的显微镜，提高疟原虫检 测的准确性。
优化镜检流程
建立标准化的镜检操作流 程，减少人为因素对结果 的影响，提高检测效率。
05
常见误区及问题解决方法
涂片制作中常见问题
涂片过厚或过薄
染色时间不足或过长
应掌握适当的涂片厚度，过厚会影响 观察，过薄则可能漏检。
应严格控制染色时间，确保疟原虫着 色清晰。
血液未充分干燥
涂片后应等待血液完全干燥，否则在 染色过程中可能导致颜色不均匀。
观察过程中常见问题
02
Hale Waihona Puke 0103显微镜使用不当
100%
流行病学调查
通过对人群进行疟原虫检测，可 以了解疟疾的分布情况、流行趋 势和传播途径等信息，为制定防 治策略提供依据。
80%
药物疗效评价
在治疗过程中进行疟原虫检测， 可以观察药物的疗效和患者的恢 复情况，及时调整治疗方案。
02
镜检技术原理及方法
疟原虫的实验室检查
实验室诊断
血涂片姬氏或瑞氏染色法：取外周血制 成厚、薄血膜，经吉氏或瑞氏液染色后 油镜检查瑞氏Wright或姬氏Giemsa染色： 核染成紫红色，胞质呈兰色，疟原虫消 化血红蛋白产物-疟色素呈棕黄色 疟原虫基本构造相同-细胞膜、质、核 疟原虫在RBC内各期形态各不相同，各型 之间也有差异
血涂片的制作
小滋养体
间日疟
约为红细胞直径的 1/3，环较粗大；1 个核，2个核和一个 红细胞寄生2个环状 体不如恶性疟原虫多 见
恶性疟
约为红细胞的1/6； 环纤细，核1-2个； 一个红细胞寄生2个 环状体的常见
间日疟
双核
恶性疟
双环状体
恶性疟
大滋养体（环状体）
•
间日疟
恶性疟
Hale Waihona Puke 虫体不规则，较大；阿 体小，圆形；空泡小； 米巴样空泡明显；疟色 早期疟色素细小，金黄 素细小，黄褐色 色，晚期结成块状，黄 褐色
• 厚血膜涂片：原虫变形，且红 细胞已溶，鉴别有困难，但原 虫集中，易发现 （确诊疟疾，有没有） • 薄血膜涂片：原虫形态结构完 整，清晰，可辩认原虫的种类 和各发育阶段的形态特征，适 用于临床诊断，但虫数较少易 漏检。 （鉴别虫种，哪一种）
常见的红内期疟原虫镜下形态：
滋养体期： 早期、晚期滋养体
疟原虫的实验室检查
概述
一、疟原虫 隶属顶复门孢子虫纲真球虫目疟原虫科 疟原虫属，目前已知130余种，寄生人体 者仅有4种，即间日疟原虫，恶性疟原虫， 三日疟原虫和卵形疟原虫。分别引起间 日疟、恶性疟、三日疟、卵形疟，统称 为疟疾（malaria）。
二、疟疾
概述
• 疟疾（Malaria）是世界六大热带病和我 国五大寄生虫病之一，对人类危害极大， 非洲每年死于疟疾的儿童约100万。 • 疟疾主要分布在热带、亚热带各国。在 我国华南、华中的某些地区，特别是云 南和海南省有不少病例。安徽省2007年2008年9月的感染也位于我国前列。 • 疟疾仍是我国重点防治寄生虫病之一。
疟原虫检验技术
仪器使用记录
建立仪器使用记录，包括 使用日期、使用时间、使 用人员等信息，以便追踪 问题。
室内质控和室间质评参与情况
室内质控
改进措施
建立室内质控体系，定期对实验操作 过程进行监控和评估，确保实验结果 的准确性和可靠性。
根据室内质控和室间质评结果，及时 总结经验教训，对实验操作进行优化 和改进。
室间质评
疟原虫特点
疟原虫是一种单细胞寄生生物，具有 寄生性、致病性和传播性。其生命周 期包括在人体内进行无性繁殖和在按 蚊体内进行有性繁殖两个阶段。
疟原虫生活史及传播途径
生活史
疟原虫在人体内寄生在红细胞中，通过裂体增殖方式进行无性繁殖。当按蚊叮咬 感染者时，疟原虫进入按蚊体内进行有性繁殖，形成子孢子。当按蚊再次叮咬人 时，子孢子侵入人体红细胞，开始新一轮的无性繁殖。
具有重要意义。
评估治疗效果
定期监测患者血液中疟原虫密度 变化，可评估抗疟药物的治疗效
果。
疟原虫检验在流行病学调查中应用
疫情监测
通过检测人群中的疟原虫感染率，可了解疟疾在特定地区的流行 状况，为制定防控策略提供依据。
传染源追踪
对确诊疟疾病例进行个案调查，了解其感染来源和传播途径，有助 于追踪传染源，阻断传播链。
人群免疫水平评估
通过检测人群中的疟原虫抗体水平，可评估人群的免疫状况，为制 定免疫策略提供参考。
新技术新方法在疟原虫检验中应用前景
基因诊断技术
01
利用PCR、基因测序等技术检测疟原虫基因，提高诊断敏感性
和特异性，有助于早期发现和鉴别诊断。
免疫学方法
02
发展高灵敏度、高特异性的免疫学检测方法，如ELISA、胶体金
法等，提高疟疾的诊断效率。
疟原虫检查
四、诊 断
（一）病原学检查
取外周血做厚薄血涂片法
厚血涂片法
3大滴血，圆形血 膜 干燥后，溶血染色
薄血涂片法
1滴血，舌形血膜 干燥后，固定染色
定性，提高检出率， 定性，检出率低， 不能鉴别 可以鉴别诊断 更多的应用于流行 区普查 更多的应用于实验 室检查
报告结果
• 阴性报告：登记，留下血片。
• 高度可疑或阳性报告：登记，留下血片。
思考题
一、人是疟原虫的什么宿主？什么是疟原虫的终宿 主？ 二、疟原虫的基本结构是什么？ 三、疟疾会发生脾肿大的原因是什么？ 四、哪种疟疾的发热发作周期不同于其他的？哪种 疟疾凶险并可导致脑型疟疾？哪种疟原虫不引起 急性症状，贫血轻微，并可导致免疫性肾炎？ 五、疟疾采血时间的要点是什么？
子孢子雌蚊吸血经皮侵入人体移入肝细胞速发型子孢子迟发型子孢子612个月休眠无性裂体生殖胀破rbc释放某些因素刺激侵入血流进入rbc环状体增殖大滋养体早期裂殖体成熟裂殖体胀破rbc释放经过几次裂体增殖雌配子体雄配子体雌蚊吸血进入蚊胃雌配子雄配子合子配子结合动合子穿过胃壁孢子增殖三疟原虫的基本结构四疟原虫的基本形态一制片厚血涂片法薄血涂片法3大滴血圆形血干燥后溶血染色干燥后固定染色定性提高检出率不能鉴别定性检出率低可以鉴别诊断更多的应用于流行区普查更多的应用于实验室检查取外周血做厚薄血涂片法间日疟原虫环状体胞质淡蓝色环较大约为rbc直径的13位于中央位
谢谢！
间日疟原虫
大滋养体 • 核1个； • 胞质增多，形状不 规则，有伪足伸出； • 疟色素棕黄色，细
小杆状，分散在细
胞质内。
间日疟原虫
裂殖体 • 早期裂殖体 核开始分裂；胞质随着 核的分裂渐呈圆形，空 泡消失；疟色素开始集 中。 • 晚期裂殖体 虫体充满RBC，裂殖子 12-24个，排列不规则； 疟色素集中
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染液（原液）配方
吉氏染液 : ?吉氏（ Giemsa ）染剂粉 ?甘油 ?甲醇 瑞氏染液 : ?瑞氏染剂粉 ?甲醇 ?甘油 （染液配制好后要过滤）
0.5 克 25 毫升 25 毫升
0.2 克 100 毫升 3 毫升
吉氏染液配制
? 吉氏染剂粉→研钵→甘油→研磨→甲 醇洗去甘油溶液→有色玻璃瓶中→每 日用力摇动5min，室温 一月后应用。 （此染液为原液）
疟原虫实验室检查
上海交通大学医学院附属瑞金医院 王剑飚
64370045-600612
背景
? 疟疾在我国古代称为瘴气，国外称malaria， 为意大利文mala（不良）与aria（空气）二 字合成。本病是由雌按蚊叮咬人体，将其 体内寄生的疟原虫传入人体而引起的。疟 疾是以周期性冷热发作为最主要特征，脾 肿大、贫血以及脑、肝、肾、心、肠、胃 等受损引起的各种综合征
? 色素聚集成团块
? 成熟裂殖体约有12－24个 细胞核
? 胞浆也随之分裂
? 受染RBC 胀大、颜色苍白、虫体几 乎充满红细胞
间日疟原虫雄配子体
? 虫体较小，占满胀大的红细胞 ? 胞质浅蓝 ? 核大疏松，淡红色，多位于虫体
的中央。 ? 疟色素分散
间日疟原虫雌配子体
? 虫体较大，占满胀大的红细胞 ? 胞质致密，色深蓝 ? 核小致密，深红色，多位于虫
分类
? 寄生于人体的疟原虫有4种，即间日疟、恶 性疟、三日疟和卵形疟
发病机制
? 疟原虫在红细胞中增殖成裂殖子，使红细胞胀大 破裂时，大量的裂殖子和疟原虫代谢产物进入血 流，引起异性蛋白反应，机体肌肉收缩产热，网 状内皮系统吞噬细胞功能增强，故可引起肝、脾 肿大，多次发作可致贫血等。
? 疟原虫在红细胞内增殖成熟所需时间不同，间日 疟和卵形疟为 48小时，三日疟为 72小时，恶性疟 为24～48小时，故临床上出现周期性发作
薄血膜中常见的血液成分
人类四种疟原虫的基本特征
间日疟原虫 恶性疟原虫 三日疟原虫 卵形疟原虫
环状体 滋养体 裂殖体 配子体
疟原虫图谱
间日疟 三日疟 恶性疟 卵形疟
间日疟早期滋养体--环状体
约占寄生红细胞的1/3，很少见到一个红细胞寄生2 个环状体和一个环状体有2个核。
间日疟滋养体-大滋养体
吉氏染色方法
? 成批染色： 3 ％的吉氏稀释液滴加(或在 染色缸内染色亦可），→ 30 分钟→用水 冲干净，凉干。
? 单片染色：1毫升蒸馏水加1滴吉氏原液， 染色 30-40 分钟； (或 10%吉氏稀释液， 染色 10-15 分钟) 。其他同上。
瑞氏染液配制
?将瑞氏染剂粉 1g置于研钵内，加入 15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻 璃瓶中，再用 500ml甲醇洗出研钵 中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后 置室温下，每天摇动 5分钟，3天后 即可使用。
体一侧
? 疟色素分散
间日疟（P. vivax）鉴定要点
1. 红ห้องสมุดไป่ตู้胞通 常涨大
2. 薛氏点明 显
3. 成熟环状 体粗大
4. 滋养体有 阿米巴样 伪足
5. 可见不同 发育期的 原虫
恶性疟原虫--环状体
? 环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不胀大 ? 可见数粒，大小不一，红色粗大的茂氏点 ? 核1个，但2个常见，红细胞常含 2个以上原虫 ? 虫体常位于红细胞的边缘 ，呈“飞鸟状” ? 不带色素
生活史
抗疟原虫治疗
? 控制临床发作的药物：氯喹、青蒿素类 （青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、双氢青蒿 素）。
? 防止复发：伯氨喹啉 、磷酸哌喹
实验室检查
?血片的制作 ?血片的染色 ?疟原虫的镜检
血片制作
? 载玻片：无油迹、无灰尘，无划痕、清洁 ? 推片：边缘光滑无缺口 ? 采血部位：耳垂、手指、足跟 ? 血液量：薄血膜1-1.5mm3，厚血膜4-5mm3 ? 推片与载玻片的角度：25-30度 ? 大小：薄血膜宽1.5-2cm，厚血膜直径0.8-1cm
血片的制作、染色、镜检中应注意的事项
? 血量 ? 血膜的厚薄 ? 血膜的固定 ? 染液（原液）质量、陈旧 ? 染液浓度、气温及染色时间 ? 稀释液配制时间 ? 稀释用水的酸碱度 ? 镜检技能 （滴加镜油，100倍油镜头检查；自上而
下、自左而右逐个视野顺序检查）
? 显微镜质量
自动化染片
镜检
? 疟原虫三要素 核---鲜红色 胞浆---蓝色 疟色素---黄褐色或黑褐色，
血片制作
? 位置：通常是将厚、薄血膜涂在一张载片上。方 法是将载片分为 6等分，第1、2格备贴标签及编 号用；厚血膜在第 2、第3格的交界处，薄血膜在 第3格中央至第 6格中部。作为标本的血片每张玻 片涂厚、薄血膜各 1个。
? 或将载片分为 6等分，第1、2格备贴标签及编号 用；厚血膜涂在第 3格中央，薄血膜涂在第 4格前 缘至第 6格中部。
恶性疟原虫—大滋养体
? 一般不出现在外周血 ? 虫体小结实，圆形，
不活动 ? 疟色素集中一团，黑
褐色 ? 原虫此时开始集中在
内脏毛细血管
恶性疟成熟裂殖体
? 裂殖子8～36个，通常 18～24个，排列不规则
瑞氏染色方法
? 厚、薄血膜间用蜡笔划一横线。薄血膜不用固 定，厚血膜需溶血。
? 在薄血膜上滴加瑞氏染液 5－8滴，染色 2分钟 后，再加与染液等量的水于薄血膜上，用吸管 将染液与蒸馏水混合均匀后，把染液引到厚血 膜上，使厚血膜再染色 10分钟。用清水轻轻冲 去染液，晾干。
厚薄血膜的标准
? 厚血膜血量适宜，不宜过多或过少 薄血膜平整，无皱折和空泡，红细胞单层排列
血片的制作—采血
玻片的执持
厚血膜的位置：第2第3格中央
推片边缘沾取少量血液至玻片中部
玻片和推片之间角度25-30度
呈舌状样的薄血膜（2㎝宽）
血片的染色
?染色前的处理 ?薄血膜用甲醇固定 ?厚血膜进行溶血
薄血膜用甲醇固定
厚血膜必须当天溶血，一般不宜超过 24 小时
经甲醇固定、溶血处理后的血片
? 经8～10小时，虫体增大，胞质增多，伸出 伪足。
? 出现黄褐色的疟色素。 ? 红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量
较多，淡红色的小点，称薛氏小点
间日疟裂殖体
? 2.1
? 经40小时晚期滋养体发育成熟， 虫体变圆，空泡消失
未成熟裂殖体? （核i开m始m分at裂u又re称裂sc殖h体izo前n期t ）