甲醛含量的测定

甲醛含量的测定
一、仪器与设备：分光光度计，精密天平，恒温水浴锅，量瓶（50ml 、100ml ），刻度吸管（、2ml 、5ml ），移液管（5ml 、25ml ），量筒，试管，锥形瓶（250ml5个，100ml ），称量瓶，高温炉，酸式滴定管（50ml ，校正曲线或校正值），干燥器（内装变色硅胶），玻璃漏斗（3个），恒温水浴锅。

二、试剂与溶液：吐温80（AR ），乙醇（AR ），醋酸（AR ），醋酸铵（AR ），乙酰丙酮（AR ），甲醛溶液（40％）（AR ），NaOH 滴定液(1mol/L)，盐酸滴定液(1mol/L)，K 2MnO 4，基准草酸钠，硫酸，H 2O 2试液（AR ），溴麝香草酚篮指示液，甲基红－溴甲酚绿混合指示液，酚酞指示液，基准无水Na 2CO 3。

三、试剂和指示剂配制：
⑴甲基红－溴甲酚绿混合指示液：①取甲基红置于100ml 乙醇溶液中，摇匀，得％甲基红的乙醇溶液；②取溴甲酚绿置于100ml 乙醇溶液中，摇匀，得％溴甲酚绿的乙醇溶液；③取％甲基红的乙醇溶液20ml ，加％溴甲酚绿的乙醇溶液30ml ，摇匀，得甲基红－溴甲酚绿混合指示液。

⑵酚酞指示液：取酚酞1g 置于100ml 乙醇溶液中，摇匀。

⑶NaOH 滴定液(1mol/L)：①取NaOH 适量，加水振荡使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。

取澄清NaOH 饱和溶液56ml ，加新沸过的冷水使成1000ml ，摇匀；②NaOH 滴定液的标定：取在105℃干燥2～3h 至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾，精密称量6g ，加新沸过的冷水50ml ，振摇，使其尽量溶解，加酚酞指示液2滴，用NaOH 滴定液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。

每1ml NaOH 滴定液相对于的邻苯二甲酸氢钾。

据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度即得。

⑷盐酸滴定液(1mol/L)：①取盐酸90ml ，加水适量使成1000ml ，摇匀，即得；②用NaOH 滴定液滴定，处理使其F 值由～变为～(滴定液要澄清，置玻璃瓶中贮存)；③标定：a 、无水Na 2CO 3干燥前应用乳钵研细，分别置于3个称量瓶中，每个称量瓶中称入样品，厚度；b 、置高温炉内，分开排列，在270～300℃下干燥2h ，闭塞，置装有硅胶的干燥器中，冷却30min(夏天温度高时，可放置40min)，称供试品与称量瓶合重，准确至，记录数值；c 、继续在270～300℃下干燥1h ，取出，在干燥器中放置30min ，称量，记录数值，若两次差值在以上，则重复c 操作，直至差值在以下；d 、将供试品迅速倾入锥形瓶中，再称量空称量瓶重量；e 、加水50ml 使溶解，加甲基红－溴甲酚绿混合指示液10滴，用盐酸滴定液(1mol/L)滴定至溶液由绿色转变为紫红色，置电炉上煮沸2min ，冷却至室温，继续滴定溶液由绿色变成暗紫色。

每1mlHcl 滴定液相当于 mg 无水Na 2CO 3。

计算公式为：F=W/(V ×T)×100％ 〔W 为Na 2CO 3用量，mg ；V 为Hcl 滴定液用量；T=〕
Na
2CO
3
+ 2HCl = 2NaCl + H
2
O +CO
2
⑸(酸性)高锰酸钾滴定液L)：①取置1000ml水中，煮沸15分钟，密塞，静置2日以上，用垂熔玻璃滤器或滤膜（µm）滤过，摇匀，即得；②标定：取在105℃干燥至恒重的基准草酸钠约，精密称定，加新沸过的冷水250ml与硫酸10ml，搅拌使溶解，自滴定管中迅速加入本液约25ml，待褪色后，水浴加热至65℃，继续滴定至溶液显微红色并保持30秒钟不褪；当滴定终了时，溶液温度应不低于55℃，每1ml高锰酸钾滴定液L)相当于的草酸钠。

根据本液的消耗量与草酸钠的取用量，算出本液的浓度，即得；③贮藏：置玻璃塞的棕色玻瓶中，密闭保存。

2MnO4－ + 5C
2O
4
2－ + 16H＋ = 2Mn2＋ + 10CO
2
↑+ 8H
2
O
要点：①温度：>90 ℃草酸分解（分解反应受酸、热催化）。

<60 ℃反应速度缓慢。

②酸度：[H+]=～，酸度低则生成MnO
2
沉淀；酸度高则草酸分解。

③滴定速度：开始要慢，第一滴褪色后加第二滴，以后可以逐渐加快Mn2+催化。

⑹稀硫酸：取硫酸57ml，加水稀释至1000ml，即得。

本液含H
2SO
4
应为％～％。

⑺H
2O
2
试液：①取浓H
2
O
2
溶液加水稀释成3％的溶液；②H
2
O
2
溶液(AR)(含量30％)含量测定：精
密量取本品1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，加稀硫酸20ml，用
高锰酸钾滴定液L) 滴定，只要颜色发生变化即为终点。

每1ml的K
2MnO
4
滴定液L)相当于的H
2
O
2。

要点：在稀硫酸溶液中，在室温条件下用高锰酸钾法测定过氧化氢的含量，其反应式为：
5H
2O
2
+ 2MnO4- + 6H+＝2Mn2+ + 5O
2
+ 8H
2
O
⑻溴麝香草酚篮指示液：取溴麝香草酚篮，加LNaOH溶液，使溶解，再加水稀释至200ml，即
得。

⑼20％吐温80乙醇溶液：取吐温80 20ml，加乙醇使成100ml，即得。

⑽醋酸－醋酸铵缓冲液（P H=）：①醋酸（AR）加水至100ml，即得醋酸液。

②醋酸铵（AR），加水至100ml，使溶解，即得醋酸铵液。

③醋酸液40ml与醋酸铵液1000ml混合，置冷暗处保存。

⑾乙酰丙酮试液：乙酰丙酮（AR）7ml，加乙醇14ml混合，置冷暗处保存。

四、甲醛溶液（40％、AR）含量的测定：
⑴将3份甲醛溶液置于3个小滴瓶中，精密称定滴瓶加甲醛的重量，向锥形瓶中滴入约38～40滴（相当于≈）甲醛，再精密称取滴瓶加甲醛的重量；
⑵加水10ml，加过氧化氢试液25ml与溴麝香草酚篮指示液2滴，滴加NaOH滴定液(1mol/L)至溶液显蓝色；
⑶再精密加入NaOH滴定液(1mol/L)25ml，瓶口置一玻璃小漏斗，置水浴（98～100℃）上加热
15min ，不时振荡；
⑷冷却，用水洗涤漏斗，加溴麝香草酚篮指示液2滴，用盐酸滴定液滴定至溶液显黄色； ⑸空白试验（2份）：
①、精密量取NaOH 滴定液(1mol/L)25ml ，置锥形瓶中，加水10ml ，过氧化氢试液25ml 与溴麝香草酚篮指示液2滴；
②、用盐酸滴定液滴定至溶液显黄色；
×100％（V 空为两次空白溶液消耗盐酸滴定液ml 数的平均值；V
为供试品溶液消耗盐酸滴定液的毫升数；F 为校正因子；T=；
W 为样品重） ⑺ 相对偏差： ×100% 相对偏差不得超过％。

五、对照品溶液的制备：取甲醛溶液精密称定（ g ），置100ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml 含甲醛的溶液；精密量取上述溶液5ml ，置50ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，若被测样品为油乳剂疫苗，则精密量取上述每1ml 含甲醛的溶液5ml ，置50ml 量瓶中，加20％吐温80乙醇溶液10ml ，再加水至刻度，摇匀，即得。

精密称定甲醛的量： W=（ ×100）mg
六、供试品溶液的制备：
⑴油乳剂疫苗：用5ml 刻度吸管量取被测样品5ml ，置50ml 量瓶中，用20％吐温80乙醇溶液10ml ，分数次洗涤吸管，洗液并入50ml 量瓶中，加水稀释至刻度，强烈振摇，静置，分取下层清液备用，如下层不澄清，需经过滤弃去初滤液，取续滤液，即得。

⑵其他疫苗：用5ml 刻度吸管量取被测样品5ml ，置50ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，如不澄清（同上）。

七、不同品种灭活所用甲醛的数量各不相同，细菌加甲醛％，病毒加甲醛％，若为细菌毒液则将对照品溶液和供试品溶液各稀释7倍；若为病毒毒液则将对照品溶液和供试品溶液各稀释3倍。

八、检查法：用刻度吸管量取对照品溶液和供试品溶液各，分别加醋酸－醋酸铵缓冲液10ml ，乙酰丙酮试液10ml ，摇匀，置60℃水浴15min （此时溶液呈黄色），冷水冷却5min ，放置20min ，照
∣A －B ∣
A ＋B
分光光度计，在410nm 波长处测定吸收度。

计算：
甲醛溶液(40％)含量％(g ／ml)=×
注意：A 对需折算，方法为要求取（含量为％），若实际称取量为，置100ml 量瓶中，则该对照液浓
度为
×
，吸收度为，需折算为 =
八、注意：
⑴在精密称取邻苯二甲酸氢钾时应多称点，否则干燥后会低于所需要的质量，精确到小数点后四位；
⑵邻苯二甲酸氢钾应在105℃干烤箱中打开称量瓶盖（斜放在称量瓶口）干烤2～3h 之后，戴上手套取出放在装有变色硅胶的干燥器中，冷却30～40min ，至室温称重；再放回干烤箱中干烤～1h 后，再放到干燥器中冷却30～40min 至室温，再称重，两次差值小于，即为合格；
⑶在做平行样中需做4～6个平行样，以备最后标定时有误差。

⑷高温炉的使用方法：称量瓶分开放置并开盖，温度调至低于所需最小温度30℃左右，高温炉自动升温，至红灯亮开始计时，2h 之后，用钳子把称量瓶取出，立即放在干燥器中，冷却30至40min ，精密称量，再次放在高温炉中，同上，干燥1h ，同上，再称重，使差值小于为止。

记得称量瓶应该与放在高温炉第一次干燥时的位置相同，免得有差异。