动物肝脏中DNA的提取汇总
动物肝脏dna的提取实验报告
动物肝脏dna的提取实验报告动物肝脏DNA的提取实验报告摘要：DNA提取是生物学研究中的一项基本实验技术，本实验旨在通过提取动物肝脏中的DNA，探究DNA提取的原理和方法。
实验结果表明，通过适当的操作步骤和试剂，可以成功地从动物肝脏中提取到高质量的DNA。
引言：DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它为我们了解生物的遗传信息提供了基础。
而动物肝脏作为一个重要的代谢器官，其中的DNA含量丰富，因此成为DNA提取的理想来源之一。
本实验旨在通过提取动物肝脏中的DNA，探究DNA提取的原理和方法。
材料与方法：1. 实验材料：动物肝脏样本、细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、异丙醇、氯仿、等温酒精、TE缓冲液等。
2. 实验步骤：a. 取一定量的动物肝脏样本，用细胞裂解缓冲液将其均匀悬浮。
b. 加入适量的蛋白酶K，使其在适宜的温度和时间下进行消化。
c. 加入异丙醇和氯仿，进行DNA的沉淀和分离。
d. 用等温酒精洗涤DNA，去除杂质。
e. 用TE缓冲液溶解DNA，获得高质量的DNA溶液。
结果与讨论：通过实验操作，我们成功地从动物肝脏中提取到了DNA。
观察DNA溶液的外观，呈现出透明且黏稠的特点，符合DNA的理化性质。
进一步通过紫外光谱检测，发现DNA溶液在260nm处有明显的吸收峰，而在280nm处几乎没有吸收，表明DNA溶液中没有蛋白质的污染。
此外，通过琼脂糖凝胶电泳分析，我们可以看到明显的DNA条带，进一步证明了提取到的DNA的完整性和纯度。
DNA提取的关键步骤是细胞裂解和DNA分离。
细胞裂解缓冲液中的离子和蛋白酶K的作用可以破坏细胞膜和核膜，使DNA释放到溶液中。
异丙醇和氯仿的加入可以通过沉淀和分离的方式将DNA从溶液中提取出来。
等温酒精的洗涤可以去除DNA溶液中的杂质，如蛋白质和盐类。
最后，用TE缓冲液溶解DNA，可以得到高质量的DNA溶液。
结论：本实验通过提取动物肝脏中的DNA，探究了DNA提取的原理和方法。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟年代后期，查加夫（E.Chargaff）发现不同物种DNA的碱基组成不同，但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数（A=T），鸟嘌呤数等于胞嘧啶数（G=C），因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，一般用几个层次描绘DNA的结构。
浓盐法从动物组织中提取DNA核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）的形式存在，其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在0.14 M的盐溶液中溶解度很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的NaCl 溶液将其从样品中分别抽提出来。
将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清，加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。
动物肝dna提取实验报告
动物肝dna提取实验报告
动物肝DNA提取实验报告
实验目的：
本实验旨在通过提取动物肝组织中的DNA，探究DNA提取的方法和步骤，以及观察提取得到的DNA的质量和纯度。
实验材料：
1. 动物肝组织样本
2. 细胞裂解缓冲液
3. 蛋白酶K
4. 乙醇
5. 离心管
6. 离心机
7. 紫外可见分光光度计
实验步骤：
1. 将动物肝组织样本切碎并加入细胞裂解缓冲液，用搅拌器搅拌均匀。
2. 加入蛋白酶K，使细胞裂解，释放DNA。
3. 将混合液转移至离心管中，进行离心分离。
4. 用乙醇沉淀DNA，将DNA沉淀物洗涤并溶解。
5. 利用紫外可见分光光度计检测DNA的质量和纯度。
实验结果：
经过实验操作，成功提取到了动物肝组织中的DNA。
通过紫外可见分光光度计检测，得到的DNA样本纯度较高，质量较好。
实验结论：
本实验通过提取动物肝组织中的DNA，验证了DNA提取的方法和步骤，并观察到了提取得到的DNA的质量和纯度。
实验结果表明，所采用的提取方法能够有效地获取到高质量、高纯度的DNA样本，为后续的分子生物学实验和研究提供了可靠的基础。
通过本次实验，我们对动物肝DNA提取的方法有了更深入的了解，也为今后的实验研究提供了重要的参考和借鉴。
希望本次实验结果能够对相关领域的研究工作提供一定的帮助和指导。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸DNA,为英文Deoxyribonucleicacid的缩写,又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料;有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播;DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色;DNA对紫外线260nm有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定;当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应；当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平;较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋;在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组;对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体;染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S 期-DNA合成期、G2-DNA合成后期;对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内;染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录;脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平;DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸dAMP 脱氧腺苷、胸腺嘧啶脱氧核苷酸dTMP 脱氧胸苷、胞嘧啶脱氧核苷酸dCMP 脱氧胞苷、鸟嘌呤脱氧核苷酸dGMP 脱氧鸟苷;而脱氧核糖五碳糖与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧;每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成;读取密码的过程称为转录,是以DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称为mRNA信使RNA的核酸分子;DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3’, 5’-磷酸二酯键相连构成的长链;大多数DNA含有两条这样的长链,也有的DNA为单链,如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等;DNA有环形DNA和链状DNA之分;在某些类型的DNA中,5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶,其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富;在某些噬菌体中,5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶;40年代后期,查加夫发现不同物种DNA的碱基组成不同,但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数A=T,鸟嘌呤数等于胞嘧啶数G=C,因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和,一般用几个层次描绘DNA的结构;浓盐法从动物组织中提取DNA核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白DNP/RNP的形式存在,其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液,但在 M的盐溶液中溶解度很低,而RNP则可溶于低盐溶液,因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来;将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质,用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清,加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出;肝脏细胞肝脏是由肝细胞组成,肝细胞极小,肉眼看不到,必须通过显微镜才能看到;人肝约有25亿个肝细胞,5000个肝细胞组成一个肝小叶,因此人肝的肝小叶总数约有50万个;肝细胞为多角形,直径约为20-30/加微米,有6-8个面,不同的生理条件下大小有差异,如饥饿时肝细胞体积变大;每个肝细胞表面可分为窦状隙面、肝细胞面和胆小管面三种;肝细胞里面含有许许多多复杂的细微结构:如肝细胞核、肝细胞质、线粒体、内质网、溶酶体、高尔基氏体、微粒体及饮液泡等组成;二、实验目的1.掌握浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术三、实验原理核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白DNP/RNP的形式存在,其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液,但在 M的盐溶液中溶解度很低,而RNP则可溶于低盐溶液,因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来;将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质,用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清,加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出;四、实验器材和材料试剂实验器材：①匀浆器②量筒③离心机④离心管⑤试管⑥吸管⑦恒温水浴锅实验材料：①猪肝实验试剂：①L L 柠檬酸钠溶液②95%乙醇.③NaCl固体.④5%SDS溶液5g SDS 定容至100ml⑤V氯仿：V异戊醇20：1的混合液五、实验操作1.称量①称取一定质量的猪肝,加入2倍肝重的L L柠檬酸钠缓冲液并用匀浆器磨碎已完成;2.提取DNA①量取肝糜4 ml 于10毫升离心管,在4000r/min下离心10min ,沉淀中再加入8 ml缓冲液于4000r/min离心5 min；②弃上清,取沉淀；③将沉淀用10 ml柠檬酸钠缓冲液完全洗入干净的小烧杯、加入5 ml 氯仿-异戊醇混合液、1 ml SDS,振荡30min保鲜膜封口；④缓慢加入固体NaCl约,使其最终浓度为1mol/L；⑤将溶液分装到2个10毫升离心管中,在4000r/min离心5 min,取上清水相；⑥在上述水相溶液中分别加等体积冷95%乙醇,边加边用玻棒慢慢朝一个方向搅动,将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇,即得DNA粗品；⑦用8ml蒸馏水溶解DNA粗品于10ml离心管中;3.标准曲线的绘制按下表加入各种试剂,混匀,于60℃恒温水浴锅45min,冷却后,在595nm波长下于分光光度计比色测定,以吸光度对DNA浓度作图,制作标准曲线;4.样品的测定将DNA粗品定容至25ml容量瓶,再取DNA样液,加入蒸馏水,混匀;然后准确加入二苯胺试剂,混匀,于60℃恒温水浴锅45min,冷却后,595nm波长下于分光光度计比色测定,根据所测的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量ug;5.计算100g猪肝中DNA含量w=m1/m2×100%w：DNA的质量分数%m1：样液中测得的DNA的质量ugm2：样液中所含样品的质量ug六、实验数据处理1.标准曲线2.实验结果处理猪肝质量为DNA提取液体积为根据公式w=m1/m2×100%得：w=％则100g猪肝中DNA含量为：w×100=七、思考题1.实验中的乙醇、SDS、氯仿-异戊醇、NaCl、柠檬酸钠分别有什么作用答：①柠檬酸的钠盐在实验中既充当DNA酶的抑制剂,也是pH缓冲溶液；②SDS是表面活性剂,可以让蛋白质与DNA分开；③氯仿是有机溶剂,可以使蛋白质聚集沉淀,便于分离出去；④异戊醇是消泡剂,可以减少泡沫的发生；⑤氯仿-异戊醇的作用是使蛋白质变性、膜溶解；⑥NaCl固体溶解使得试液成为高浓度的盐溶液,在这样的环境中DNA核蛋白能溶解,RNA核蛋白则溶解度很低,可以利用这一性质分离两种核酸;八、实验注意事项主要集中在细胞核中,因此,通常选用细胞核含量比例大的生活组织作为提取制备DNA的材料,小牛胸腺组织中细胞核比例较大,因而DNA含量丰富,同时其脱氧核苷酸酶活性较低,制备过程中DNA被降解的可能性相对较低,所以是制备DNA的良好材料,但其来源较困难,脾脏或肝脏易获得,也是实验室制备DNA常用的材料,本实验用新鲜肝脏作为实验材料;2.为了防止大分子核酸在提取过程中被降解,须采取以下措施：整个过程必须在低温下进行,可加入某些物质抑制核酸酶的活性,如柠檬酸钠、EDTA、SDS等,EDTA是抑制核酸酶的活性最好的抑制剂;3.从核蛋白中脱去蛋白质的方法很多,经常采用的有：氯仿-异丙醇法、苯酚法、去垢剂法等,他们均能使蛋白质变性和核蛋白解聚,并释放出核酸;4.使用离心机时,对称放置的离心管必须用天平调平衡;5.避免剧烈振荡,如研磨过程、搅拌过程等;九、实验结果误差分析及讨论经过对本次实验结果进行分析,得出100g猪肝中DNA含量大约为的结论,在上网查阅相关资料后发现：猪肝中DNA含量与本次试验实际操作测量得出的结果大致相互吻合;由此可知,本次试验结果是相对比较成功的,较为粗略地测量出猪肝中DNA的含量,并且较为熟练地掌握了浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术,基本达到了本次实验的目的;但是本次实验结果只是粗略测量,并未达到精确测量猪肝中DNA的含量,且实验数据较理论值偏低,这是由于某些误差导致,在实验过程中些许因素可能会导致实验结果数据有偏差,经分析得出以下几点：①在称取猪肝后加入柠檬酸钠缓冲液进行研磨的过程中,由于猪肝组织表面较滑不易磨碎,且研磨至最后依旧有小部分猪肝组织块残留,因此可能导致猪肝中DNA提取不充分,致使实验数据较理论值偏低；②研磨过程中,可能由于操作不当,导致部分液体溅出,因此可能使得提取液中部分DNA损失,导致实验数据偏低；③在粗提取DNA操作中,频繁地将DNA提取液转移至各个仪器内,可能有极小部分DNA提取液未倒净,残留在仪器壁上损耗掉,导致实验误差；④在使用移液枪的过程中,可能因为操作不当或移液枪经常错误使用,出现仪器误差,导致吸取的DNA样液不精确,出现实验误差；⑤在水相中加入乙醇析出DNA时,不是所有DNA均析出,有小部分依旧融在溶液,导致提取出的DNA含量偏低；⑥标准曲线制作过程中出现些许误差；总的来讲,本次试验结果是相对比较成功的,较为粗略地测量出猪肝中DNA的含量,并且较为熟练地掌握了浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术,基本达到了本次实验的目的;在今后的实验中会着重注意实验操作的严谨性,严格按照实验前拟定完全的实验步骤进行,保证将实验操作过程中可能出现的误差概率降到最低,尽可能达到预期的实验效果,完成自我的学习及锻炼过程;。
动物肝脏中DNA的提取和鉴定
动物肝脏中DNA的提取和鉴定动物肝脏中DNA的提取和鉴定一、实验目的1.学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。
2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。
3.学习核酸染色的方法。
二、实验原理为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA。
由于DNA分子在生物体内的分布及浓度不同，要选择适当的材料提取DNA。
动植物中小牛胸腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。
微生物中，谷氨酸菌体含7%～10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠杆菌9%～10%。
从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。
对于低等生物，如从病毒中提取DNA比较容易，多数病毒DNA相对分子量较小，提取时易保持其结构完整性。
从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。
细菌DNA相对分子质量较大，一般达2×109Da。
因此易被机械张力剪短。
细菌DNA，除核DNA外，还有质粒DNA 等。
1.DNA的基本功能生物遗传信息复制的模板和基因转入的模板，是生命遗传繁殖的物质基础，也是个体生命活动的基础；作为DNA分子中的某一区段，有复制、转录和翻译等主要功能称为基因。
2.核酸的结构与功能核酸（nucleic acid)是以核苷酸为基本组成的生物大分子。
天然存在的核酸有两类，一类为脱氧核苷酸（deoxyribonucleic acid,DNA)，另一类为核糖核酸（ribonucleic acid,RNA)。
DNA存在于细胞核和线粒体中，携带遗传信息。
RNA存在于细胞质和细胞核内，参与细胞内DNA遗传信息的表达。
3.DNA的存在形式天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白（DNP）形式存在于细胞核中。
要从细胞核中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖、RNA及无机离子等，从中分离DNA。
DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。
DNP在低浓度盐溶液中几乎不溶解，如在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中溶解度很大，比纯水高2倍。
动物肝脏中DNA的提取与检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
实验一 动物肝脏组织中基因组DNA提取和鉴定-精
4
核酸提取的主要步骤
• 破碎细胞：研磨、组织匀浆、超声、冻融；异硫氰酸胍、 碱裂解；酶解（溶菌酶）
• 除去与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子： 酚/氯仿抽提、蛋白变性剂（SDS、异硫氰酸胍等）、蛋白 酶处理、高盐洗涤 • 除去其它不需要的核酸分子
• 沉淀核酸RNA。
2
核酸的理化性质
在细胞内通常与蛋白质结合，以复合物形式存在。 溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。 在酸性溶液中容易降解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。 在强大离心力的作用下，可以从溶液中沉降下来。
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基因组DNA的提取方法
浓盐法：利用RNA和DNA在不同盐浓度溶液中的溶解度 不同将二者分离。
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四、实验步骤
1、DNA的提取 （7）将混合液转移至50mL刻度离心管中， 3500r/min离心 10min ，取上清至一个新的50mL刻度离心管。 （8）加入20mL95%乙醇溶液，上下颠倒混匀后，出现丝状 物，用枪头挑取丝状物，或者3500r/min离心5min 。 （9）弃去上清液（注意：缓慢倒去上清液），沉淀物质即 为DNA，空气干燥后即可加入适量的TE缓冲液。
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四、实验步骤
1、DNA的提取 （1）称取5g鸡肝，置于预冷的研钵中，在冰浴中剪碎，加 入10mL预冷的0.14mol/L NaCl-0.14mol/L EDTA溶液，研磨 成匀浆液。 （2）将匀浆液加入到15mL刻度离心管中，2000r/min离心 10min，弃去上清液。 （3）将沉淀转移至50mL离心管中，加入10mL预冷的 0.14mol/L NaCl-0.14mol/L EDTA溶液，充分摇匀后，于 4℃ 2000r/min离心10min，弃去上清液。
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动物肝脏DNA提取和鉴定
整个操作步骤应尽量简化，缩短实验过程，减少核酸变性、降解、机械切割的机会。
核酸提取过程中的注意事项：
01
加入RNA酶降解剩余的RNA，获得纯的DNA。
02
保存：将DNA于滤纸上干燥，溶于1mlTE中低温保存。
03
纯的DNA样品的获得
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理：
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖凝胶作为支持介质的一种电泳分离方法，是一种简便、快速分离鉴定核酸的方法，已成为分子生物学及基因工程研究中常用实验方法之一。 琼脂糖英文名agarose，是从琼脂中提取出来的，由半乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多糖。琼脂糖和琼脂都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶，电泳中具有分子筛效应。但琼脂糖含硫酸根比琼脂少，电渗作用降低，因而分离效果明显提高。
溴化乙啶检测DNA的灵敏度很高，可检出10ng甚至更少的DNA。
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琼脂糖凝胶电泳分离核酸的影响因素
（1）核酸大小与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 凝胶中，DNA片段迁移率与DNA分子大小(碱基对的对数)成反比(≤ 20kb) ，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。 （2）核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 不同构型DNA的移动速度次序为：闭环DNA>直线DNA>开环的双链环状DNA. （3）不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。 琼脂糖浓度/% 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 线状DNA大小/kb 60-5 20-1 10-0.8 7-0.5 6-0.4 3-0.2 2-0.1 注：DNA片段在5-500bp之间时，一般用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进行电泳分离。
动物肝脏中dna的提取实验报告
动物肝脏中dna的提取实验报告动物肝脏中 DNA 的提取实验报告一、实验目的1、学习从动物肝脏组织中提取 DNA 的原理和方法。
2、熟悉和掌握离心机、移液器等实验仪器的操作。
3、理解 DNA 提取过程中各种试剂的作用。
二、实验原理DNA 在生物体内通常与蛋白质结合形成复合物。
在提取 DNA 时，需要通过一系列的物理和化学方法，破坏蛋白质与 DNA 的结合，使DNA 得以释放和分离。
本实验采用的是盐析法和有机溶剂抽提法相结合的方式。
首先，使用细胞裂解液破碎细胞，释放出DNA 以及其他细胞成分。
然后，加入高浓度的盐溶液，使蛋白质变性沉淀，而 DNA 仍溶解在溶液中。
接着，用有机溶剂（如酚、氯仿）去除蛋白质和其他杂质。
最后，通过乙醇沉淀得到纯净的 DNA 。
三、实验材料和试剂1、实验材料新鲜的动物肝脏（如猪肝）2、实验试剂（1）细胞裂解液：含 SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶 K，用于裂解细胞和消化蛋白质。
（2）NaCl 溶液（5mol/L）：提供高盐环境，促进蛋白质沉淀。
（3）酚氯仿异戊醇混合液（25:24:1）：用于去除蛋白质等杂质。
（4）无水乙醇：用于沉淀 DNA 。
（5）70%乙醇：用于洗涤 DNA 沉淀，去除残留的盐和杂质。
（6）TE 缓冲液（10mmol/L TrisHCl，1mmol/L EDTA，pH 80）：溶解和保存 DNA 。
3、实验仪器（1）离心机（2）移液器（3）恒温水浴锅（4）冰箱（5）玻璃棒（6）离心管（7）微量移液器吸头四、实验步骤1、材料处理（1）称取约 5g 新鲜的动物肝脏，用生理盐水洗净，去除结缔组织和脂肪。
（2）将肝脏剪成小块，放入研钵中，加入适量的液氮，迅速研磨成粉末状。
2、细胞裂解（1）将研磨好的肝脏粉末转移至离心管中，加入10ml 细胞裂解液，充分混匀。
（2）置于 55℃恒温水浴锅中保温 1-2 小时，期间每隔 15-20 分钟轻轻颠倒离心管混匀一次，以促进细胞裂解和蛋白质消化。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA勺提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA为英文Deoxyribo nucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA勺一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA寸紫外线（260nm有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开一也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA勺结构：DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA 分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构：DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
动物肝脏中DNA地提取及检测实验报告材料
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
动物肝脏中dna的提取和鉴定
动物肝脏中DNA的提取和鉴定一、实验目的1.学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。
2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。
3.学习核酸染色的方法。
二、实验原理为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA。
由于DNA分子在生物体内的分布及浓度不同，要选择适当的材料提取DNA。
动植物中小牛胸腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。
微生物中，谷氨酸菌体含7%～10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠杆菌9%～10%。
从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。
对于低等生物，如从病毒中提取DNA比较容易，多数病毒DNA相对分子量较小，提取时易保持其结构完整性。
从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。
细菌DNA相对分子质量较大，一般达2×109Da。
因此易被机械张力剪短。
细菌DNA，除核DNA外，还有质粒DNA等。
1.DNA的基本功能生物遗传信息复制的模板和基因转入的模板，是生命遗传繁殖的物质基础，也是个体生命活动的基础；作为DNA分子中的某一区段，有复制、转录和翻译等主要功能称为基因。
2.核酸的结构与功能核酸（nucleic acid)是以核苷酸为基本组成的生物大分子。
天然存在的核酸有两类，一类为脱氧核苷酸（deoxyribonucleic acid,DNA)，另一类为核糖核酸（ribonucleic acid,RNA)。
DNA存在于细胞核和线粒体中，携带遗传信息。
RNA存在于细胞质和细胞核内，参与细胞内DNA遗传信息的表达。
3.DNA的存在形式天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白（DNP）形式存在于细胞核中。
要从细胞核中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖、RNA及无机离子等，从中分离DNA。
DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。
DNP在低浓度盐溶液中几乎不溶解，如在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中溶解度很大，比纯水高2倍。
动物肝脏dna的提取实验报告
动物肝脏dna的提取实验报告实验报告：动物肝脏DNA的提取一、实验目的本实验旨在提取动物肝脏中的DNA，了解和掌握动物组织中DNA提取的基本原理和方法，通过实验操作培养实验技能和加深对生物化学知识的理解。
二、实验原理DNA提取主要是根据DNA和蛋白质的理化性质，利用酶解、吸附和解吸附等步骤将DNA从动物组织中分离出来。
动物肝脏中含有丰富的核苷酸，因此成为DNA提取的理想材料。
本实验将采用试剂盒法提取动物肝脏DNA。
三、实验步骤1.准备所需试剂和器材，包括动物肝脏组织、DEPC水、DNA提取试剂盒、离心管、移液器等。
2.将动物肝脏组织放入研钵中，加入适量DEPC水研磨成匀浆。
3.将研磨后的匀浆转入离心管中，加入适量DNA提取试剂盒中的裂解液，轻轻混匀。
4.将混合液放入离心机中，以12000rpm的转速离心10分钟，分离出上清液。
5.将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的酚-氯仿混合液，轻轻混匀后离心10分钟，分离出上清液。
6.将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的氯仿-异戊醇混合液，轻轻混匀后离心10分钟，分离出上清液。
7.将上清液转移至新的离心管中，加入适量DNA沉淀剂，轻轻混匀后静置10分钟，使DNA充分沉淀。
8.将混合液倒入离心管中，以12000rpm的转速离心10分钟，分离出DNA沉淀。
9.用DEPC水溶解DNA沉淀，保存于-20℃冰箱中备用。
四、实验结果与分析1.通过观察和记录实验过程，我们成功地从动物肝脏组织中提取出了DNA。
在实验过程中，我们使用了DEPC水来消除组织中的RNase酶活性，确保了提取的DNA不会被降解。
同时，利用试剂盒中的裂解液和酚-氯仿、氯仿-异戊醇混合液等试剂将蛋白质和其他杂质去除，使DNA得到有效纯化。
2.通过比较实验前后的组织样品和提取的DNA溶液，我们可以看到组织样品的颜色为红色，而提取的DNA溶液呈现出透明无色，说明提取的DNA具有较高的纯度。
此外，通过观察和记录实验结果，我们可以看到在离心管中明显看到DNA沉淀，说明提取的DNA具有较高的浓度。
7 8 动物肝脏中DNA的提取和定量测定
• 1. 称取猪肝8g,用匀浆器(或研钵)磨碎(冰浴),加入相当两倍肝重的 0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液,研磨三次,然后倒出匀浆 物,4000r/min离心10min,沉淀中加入25 ml缓冲液,于4000r/min离心20min,取 沉淀。(电子天平称量和离心机的正确使用和注意事项的测试) • 2. 加入40ml0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液、20ml氯仿-异戊醇混 合液、4ml5%SDS溶液,振遥30min,然后缓慢加固体NaCl(约3.6g), 3500r/min 离心20min,取上清夜。（量筒和烧杯的正确使用和注意事项的测试）
实验八、DNA的定量测定（二苯胺法） 一、实验目的：
学习和掌握二苯胺法测定DNA的原理和方法。
二、实验原理：
DNA中的脱氧核糖在酸性溶液中与二苯胺试剂作用生成蓝色化合 物,在DNA浓度为20~200ug/ml范围内, 吸光度与浓度成正比, 在波长为 595nm下进行比色测定。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
实验八、DNA的定量测定（二苯胺法） 三、实验器材：
• 3. 加入等体积冷95%乙醇,边加边搅动,用滤纸吸去多于的乙醇,缠绕在玻棒 上的即为DNA粗品。（加液、搅拌、吸水等实验操作技术的测试）
• 4. 用蒸馏水溶解,并定容至50ml（容量瓶的正确使用和注意事项的测试）， 待测。
实验七、动物肝脏中DNA的提取
六、注意事项： 是提取实验，要想法提高得率： 1. 要充分研磨； 2. 要在冰浴条件下进行； 3. 要加保护剂
六、注意事项：
1. 是定量实验，称量、加液要准确； 2. 时间要控制好。
七、实验报告：按常规。
实验七、动物肝脏中DNA的提取
实验7 动物肝脏中DNA的提取
[实验目的及要求]• 学来自和掌握用浓盐法从动物肝脏中提取DNA 的原理和方法。
[实验原理]
• DNA的提取 核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形式存在，其 中DNA主要存在于细胞核中，RNA主要存在于核仁 及细胞质中。
制备过程应在低温下（4度）进行，防止过酸，过 碱及其他引起核降解的因素。必要时加入酶抑制剂 （柠檬酸、EDTA等可以抑制DNA酶活性，SDS或苯酚 等蛋白质变性剂可以使 核酸降解酶破坏） 动植物的DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液， 但在0.14mol/l的盐溶液中溶解度很低，而RNA核蛋 白则溶于0.14mol/l盐溶液，可利用不同浓度的氯化 钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中 分别抽提出来。
实验现象及数据处理
• 仔细观察所得到的DNA，记录其形状、颜色。
[实验仪器及用品]
• 实验器材：猪肝、匀浆器、离心机
• 实验试剂：0.1mol/l NaCL-0.05mol/l柠檬酸 钠溶液、95%乙醇、NaCl固体、5%SDS、氯 仿/异丙醇混合液（V:V = 20:1）、TE缓冲液
[实验内容及步骤]
• 动物肝脏中DNA的提取 • 1．取猪肝8g，用匀浆器磨碎，加入相当2倍肝重的 0.1mol/L NaCL-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液，研磨三次， 然后倒出匀浆物，用15ml离心管取匀浆物5ml在 4000r/min下离心10min；弃去上清，沉淀中再加入 6ml缓冲液，于4000r/min离心15min；弃去上清。 • 2．在上述沉淀中加入4.5ml0.1mol/L NaCL-0.05mol/L 柠檬酸钠缓冲液、3.5mlCHCl3-异戊醇混合液、 0.5mL5%SDS使其浓度为0.41%，手动振摇20min，然 后缓慢加固体NaCl，使其终浓度为1mol/L（0.47g）, 摇匀。将上述混合液在3500r/min离心15min，取上 清水相。 • 3．在上述水相溶液中加入等体积冷95%乙醇，边加 边用玻璃棒慢慢搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物 用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA粗制品。用TE缓 冲液1ml保存。
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1．猪肝。2．722型（或7220型）分光光度计。3．匀浆器4．量筒50ml（×1）、10ml（×1）。5．离心机（5000r/min）。6．离心管。7．试管及试管架。8．吸管0.50ml（×2）、1.0ml（×2）、2.0ml（×2）、5.0ml（×1）。
四、实验试剂
1．0.1mol/L NaCl－0.05mol/L柠檬酸钠（pH6.8）。2．0.015mol/L NaCl－0.0015mol/L柠檬酸三钠溶液：氯化钠0.828g及柠檬酸三钠0.341g溶于蒸馏水，稀释至1000ml。3．95％乙醇（A．Ｒ．）。4．NaCl固体（A．Ｒ．）。5．5％SDS溶液：5g SDS溶于100ml水中。6．氯仿（A．Ｒ．）。7．V（氯仿）：V（异戊醇）混合液20：1。
6.浓氨水
7. 5％AgN5％乙醇100ml (冰箱中可保存1个月)。
9. FeCl3的浓盐酸溶液
取10％FeCl32ml，与浓盐酸400ml混合。
10.定磷试剂
（1）17％H2SO4溶液
（2）2.5％钼酸铵溶液
（3）10％抗坏血酸溶液(贮存于棕色瓶中，溶液在冰箱放置可用1个月。溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄色或棕色则已失效。)
实验八动物肝脏中DNA的提取
一、目的
学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理和技术
二、原理
核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形式存在，其中DNA主要存在于细胞核中，应（4℃）进行，
动植物的DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液（如1mol/L NaCl），但在0.14mol/L的盐溶液中溶解度降低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/L盐溶液，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖蛋白和核糖蛋白从样品中分别抽提出来。将抽提得到的脱氧核糖蛋白用SDS（十二烷基硫酸钠）处理，DNA即与蛋白质分开，可用氯仿将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解于溶液中。向含有DNA的水相中加入冷乙醇，DNA即呈纤维状沉淀出来。
3.将上清液缓缓倾入95%乙醇30ml中，注意边搅拌边缓缓倾入,用冰乙酸调pH值至2.5。静置，待RNA沉淀完全后，3000rpm离心3min。
4.弃上清，以95％乙醇10ml洗涤沉淀，3000rpm离心3min。再用95％乙醇10ml洗涤沉淀，并移入布氏漏斗中抽滤。
5.用无水乙醚洗涤沉淀2次，每次20ml，于布氏漏斗中抽滤至沉淀干燥。
【器材与试剂、】
(一)器材
1. 150ml锥形瓶
2.沸水浴
3.量筒
4.移液管
5.吸管及滴管
6.布氏漏斗和抽滤装置
7.试管、试管夹及试管架
8.离心机
9.滤纸
10. pH试纸
11.烧杯
12.天平
13.酵母粉
(二)试剂
1. 0.2% NaOH溶液
2. 95％乙醇
3.冰乙酸
4.无水乙醚
5. 1.5mol/L H2SO4
RNA用H2SO4水解时，可以生成磷酸、戊糖和碱基，各种成分以下列反应鉴定：①磷酸：用强酸使RNA中的有机磷消化成无机磷，后者与定磷试剂中的钼酸铵结合成磷钼酸铵（黄色沉淀），当有还原剂存在时磷钼酸铵立即转变成蓝色的还原产物—钼蓝。②核糖：RNA与浓盐酸共热时，发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，后者与苔黑酚反应，在Fe3+或Cu2+催化下生成鲜绿色复合物。③嘌呤碱与AgNO3能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
五、操作
1．称取猪肝8g，用匀浆器磨碎（冰浴），加入相当于2倍肝重的0.1mol/L NaCl－0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液，研磨三次，然后倒出匀浆物，匀浆物在4000r/min下离心10min；沉淀中再加入25ml缓冲液，于4000r/min离心20min；取沉淀。
2．在上述沉淀中加入40ml 0.1mol/L NaCl－0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液、20mlCHCl3－异戊醇混合液、4ml 5％SDS使其终浓度为0.41％，振摇30min，然后缓慢加固体NaCl，使其浓度为1mol/L（约3.6g）。将上述混合液在3500r/min离心20min，取上清水相。
(二)水解RNA
将提取的RNA加入5ml 10% H2SO4中，沸水浴加热10min,使RNA水解。
(三) RNA组分鉴定
1.嘌呤碱：取试管1支，加入水解液1ml，浓氨水2ml，5％的AgNO31ml，观察是否产生白色絮状嘌呤银化物沉淀（放置后可能变为棕黑色）。
2.戊糖：取试管1支，加入水解液1ml，苔黑酚-FeCI3溶液1ml，在沸水浴中加热，观察试管中颜色变化。
四、实验结果
是否可见DNA？颜色如何？有无断裂现象？
实验九酵母RNA的提取和定性检测
【实验目的】
1．学习稀碱法提取RNA的原理和操作方法
2.掌握RNA组分的鉴定方法
【实验原理】
酵母中含有丰富的RNA(可达酵母干重的2.62％～10％)，是工业上大规模制备核酸和核苷酸的原料。稀碱法是工业上常用的RNA提取方法，是用稀碱溶液使细胞裂解，使RNA释放到碱液中，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA；或用酸调整pH至2.5，利用等电点沉淀RNA。
3．在上述水相溶液中加入等体积冷95％乙醇，边加边用玻璃棒慢慢搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA粗品。用蒸馏水溶解并定容至50ml，用二苯胺法测定DNA含量。
4．提纯将上述所得的DNA粗品置于20ml 0.015mol/L NaCl－0.0015mol/L柠檬酸三钠溶液中，加入1倍体积的氯仿－异戊醇混合液，振摇10min，离心（4000r/min，10min），倾出上层液（沉淀弃去），加入1.5倍体积95％乙醇，DNA即沉淀析出。离心，弃去上清液，沉淀（粗DNA）按本操作步骤重复一次。最后所得沉淀用无水乙醇洗涤2次，真空干燥。
临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合(限当天使用)：
17%H2SO4:2.5％钼酸铵:水:10％抗坏血酸=1:1:2:1（V:V）
【实验步骤】
（一）RNA的粗提取
1.取酵母粉5g，置于100ml烧杯中，加入0.2％NaOH溶液20ml，搅拌成悬浮液。
2.将悬浮液在沸水浴中加热30min，冷却至室温，分两管4000rpm离心10min。