淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测

三、固定化酶的方法 • • • • （一） 吸附法 （二） 结合法 （三） 交联法 （四） 包埋法
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固定化酶的模式图
（一）吸附法
定义；利用各种固体吸附剂将酶或含酶细胞
吸附在其表面上而使酶固定的方法称为物理吸 附法，简称吸附法。 常用的吸附剂：活性炭、氧化铝、硅藻土、 多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、羟基磷灰石等。 优点：操作简便、条件温和、不易变性失活、 载体廉价、可反复使用。 缺点：酶与载体结合不牢固，易脱落。
（四）交ຫໍສະໝຸດ Baidu法
利用双功能试剂，在酶分子间或酶与载体间，或酶 与惰性蛋白间进行交联反应，以制备固定化酶的方 法。 交联试剂：戊二醛、己二胺、顺丁烯二酸酐、双偶 氮苯等。
优点
结合牢固，酶不会脱落，可长时间使用。
缺点
交联反应条件激烈，酶的多个基团被交联， 致使酶的活力损失大。制备的固定化酶颗 粒较小，不便于使用。
优点
条件温和、操作简便、活力损失少。 酶与载体结合不牢固，使用时需严格控 制好pH值、离子强度、温度等操作条件。
缺点
2、共价键结合法
★通过共价键使酶与载 体结合的固定化方法。 载体主要有：纤维素、 琼脂糖凝胶、葡聚糖凝 胶、甲壳质、氨基酸共 聚物、甲基丙烯醇共聚 物等。 ※载体→活化→活化载 体基团＋酶分子基团
实验内容：1.制备固定化酶；2.淀粉水解的检测 1.直接使用酶和使用固定化酶有何不同？ 重点问题 2.固定化酶的方法？ 3.淀粉水解的过程及检测
4.如何区分固相和液相酶的作用？ •实验设备及用品、材料 （课本） •实验步骤：
尿糖试纸对葡萄糖酶与过氧化氢酶进行了固定
一、为什么要对酶进行固定化？
1、稳定性差 2、回收困难，一次使用 3、产物的分离纯化困难
• 固定化酶的优点
酶既能与反应物接触，又能与产物分离
固定在载体上的酶还可以被反复利用
• 固定化酶的缺点
一种酶只能催化一种化学反应 只能应用于可溶性底物
二、什么是固定化酶
固定化酶（Immobilized enzyme） ：固定在一 定载体上，在一定空间范围内起催化作用的酶。
水溶性酶
水不溶性载体
固定化技术 水不溶性酶 （固定化酶）
双重固定化
3.淀粉水解的过程及检测
4.如何区分固相和液相酶的作用？
（二）包埋法
定义：将酶或含酶菌体包埋在各种多孔载 体中，使酶固定化的方法称为包埋法。
根据包埋的材料和包埋方法的不同，可分 为：凝胶包埋法和半透膜包埋法两类。
（三）结合法
1、离子键结合法 通过离子键使酶与载体结合的固定化方法。 载体：DEAE-纤维素、TEAE-纤维素、 DEAE-葡聚糖凝胶、CM-纤维素。
高 考 真 题 聚 焦 核 心 考 点 整 合 易 错 易 混 归 纳
专题27 酶的应用-2
实验目的： 1. 制备固定化α-淀粉酶
2.进行淀粉水解的测定
枯草芽孢杆菌
广泛分布在土壤及腐败 的有机物中，易在枯草 浸汁中繁殖，故名。可 利用蛋白质、多种糖及 淀粉，分解色氨酸形成 吲哚。在遗传学研究中 应用广泛。