血清二氧化碳酶试剂法测定法

血清二氧化碳酶试剂法测定法

1. 实验原理

使用磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)和稳定的NADH类似物的酶检测终点法。

磷酸烯醇丙酮酸+ HCO3-PEPC→草酰乙酸+ H2PO4-

草酰乙酸+ NADH + H+MDH→苹果酸+ NAD+上述反应会破坏下列平衡：

CO2 + H2O ←→H2CO3←→H+ + HCO3-

促使CO2向HCO3-的转换，由此可以检测出血清或血浆中总CO2的浓度。

在340nm波长处检测吸光度的下降，反映还原型的辅因子NADH类似物的减少，和样品中的总二氧化碳浓度呈比例。

2. 标本：

2.1 病人准备：无特殊。

2.2 类型：血清、肝素血浆。

3. 标本存放：应尽快分离血清或血浆，并保存于2～8℃。不可将标本暴露于空气。分离的样品需密闭保存，防止二氧化碳的损失，并在收集后的最短时间内完成检测。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：超时送检的、细菌污染的标本。

6. 实验材料

6.1 试剂迪宝CO2测定试剂盒

6.1.1 试剂组成

Tris缓冲液(pH 7.5) 50 mmol/L 磷酸烯醇丙酮酸(PEP)

1.8mmol/L

磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC) ≥

300U/L

苹果酸脱氢酶(MDH) ≥

4100U/L

NADH

>0.3mmol/L

硫酸镁10 mmol/L 草氨酸钠 2.5 mmol/L

6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有

浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5注意事项：应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2 校准品：用HCO3-标准品对自动分析仪进行校准。校准稳定期：10天。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：

7. 仪器：日立7060生化分析仪

8. 操作步骤

8.1 项目基本参数：参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件

8.2仪器操作步骤：参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件

9. 检验结果的判断与分析

10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控（DR0061&62）做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以HCO3-标准品碳酸氢盐浓度校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。

12. 参考值范围：成年人：22～29mmol/L

13. 临床意义：二氧化碳检测用于血液酸-碱平衡的诊断。检测值的升高见于代谢性碱中毒、呼吸性酸中毒等；降低见于代谢性酸中毒、慢性呼吸性碱中毒。

14. 线性范围：4～50mmol/L。

15. 超出范围结果处理：本法对二氧化碳的检测范围为4～50 mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1：1稀释后，重新测定，结果乘以2。

16. 病危报警值的处理