临床实验室生物安全

实验室生物安全防护水平
• BSL-2主要用于处理中度危险的病原体，如 沙门菌属和乙型肝炎病毒等 • 这些病原体可能通过意外的经口摄入或经 皮肤、粘膜暴露而感染 • 在遵守标准操作程序的情况下，这些病原 体的处理可在开放实验台进行 • 但是，如预期有发生喷溅或可产生气溶胶 时应使用生物安全柜等
实验室生物安全防护水平
微生物危害评估
• 当建设使用传染性或有潜在传染性材料的 实验室前，必须进行微生物危害评估。 • 确定对象微生物应在那一级的生物安全防 护实验室中进行操作。 • 制定相应的操作规程，实验室管理制度和 紧急事故处理方法，必须形成书面文件并 严格遵守执行。
实验室生物安全防护水平
• 一级防护屏障 是指生物安全柜和个人防 护装备等构成的防护屏障 • 二级防护屏障 是指实验室的设施结构和 通风系统等构成的防护屏障
临床实验室岗位安全风险
细菌学标本接种、鉴定岗位 • 泄露和泼洒污染 容器破裂可造成标本泄露； 容器倾倒可造成标本泼洒；临床采集标本时可发 生容器外表面污染；接种时可造成标本滴落污染 台面等；在手工开盖时可发生标本污染手指或环 境；制备涂片时可污染手指或环境 • 气溶胶污染 取菌环接种可产生气溶胶粒子污 染；制备涂片和悬液可产生气溶胶粒子污染；标 本处理过程中的离心、重悬浮等可产生气溶胶粒 子污染
常用消毒方法
A.实验室内空气的消毒：
1.一般可加强开窗通风换气，条件许可时采用排 气扇人工机械通风，做到每小时换气10-15次。 2.紫外线灯管适用于室内空气，物体表面的消毒。 常用的室内悬吊式紫外线灯对室内空气消毒时安 装的数量为平均1.5W每立方米，照射时间不少于 30分钟。
常用消毒方法
B.实验室地面物体表面消毒：
实验室生物安全防护水平
• 不同级别的生物安全防护实验室都是基于 确保处理特定传染性病原体时的工作人员 和环境的安全而进行设计的
实验室生物安全防护水平
• BSL-1是围护屏障水平和生物安全级别最低 的生物实验室，在该级别实验室中进行的 操作都是在室内开放空间进行的 • 在其中活动所涉及的生物因子应是已知不 引起健康成人感染的微生物 • 但是应注意这些微生物也许有可能引起幼 儿、老人或免疫抑制患者的机会感染
• BSL-3是为应对主要通过气溶胶传播的病原 微生物如结核分枝杆菌等的实验室操作而 设计的 • BSL-3有严格的操作规程和程序ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ使用一级 和二级防护屏障，同时对于诸如通风系统 都有特殊的要求
实验室生物安全防护水平
• BSL-4用于可引起致命疾病的病原体的处理和实验 操作 • 这些病原体（如出血热病毒）可能通过气溶胶传 播的或者没有有效的疫苗预防或没有有效的治疗 方法 • BSL-4实验室的实验操作一般地应在Ⅲ级生物安全 柜内进行，或由身着正压防护服的工作人员进行 操作处理 • BSL-4实验室应是完全独立的实验室，其通风系统 和废弃物处理亦应完全独立
经血传播
• 被经血传播的病原体感染的患者血液、或有可见 的血污染的体液；以及精液、阴道分泌物、 关节 液、内脏器官周围液体等可传播血传病原体 • 经血传播而致的感染主要发生在 针刺意外时 锐器刺伤时 蚊虫、动物叮咬时 破损的皮肤或粘膜污染时 ……
临床实验室内小气候
• 临床实验室由于其规模、建筑布局、周围 环境、内部分隔、设备、人员拥挤程度及 通风条件等的不同而有不同的室内小气候， 并可能导致实验室内病原体的浓度增加,使 实验室内感染机会明显大于室外
皮肤粘膜被污染
• 感染性液体外溢到皮肤 （1）立即停止工作，脱掉手套 （2）用75%的酒精进行皮肤消毒 （3）再用大量水冲洗 • 感染性液体溅入眼睛 （1）立即停止工作，脱掉手套 (2 ) 迅速到缓冲区用洗眼器冲洗 （3）用生理盐水冲洗 • 两种情况都应做适当的预防治疗和医学观察，并报告实验 室安全员进行事故记录
呼吸道传播
微生物气溶胶
• • • • 粒子直径＞10μm，一般被阻留在鼻腔内 粒子直径5-10μm，可到达支气管 粒子直径＜5μm，可进入细支气管和肺泡 粒子直径越小，其到达的部位越深，小于 1μm的粒子在肺泡内沉积率最高 • 粒子直径＜0.4μm可自由进出肺泡
呼吸道传播
• 气溶胶可在实验室内长时间漂浮并随气流 在室内流动 • 工作人员在实验室内工作，甚或逗留期间 通过吸入含有致病微生物的气溶胶颗粒发 生暴露并可致感染
临床实验室岗位安全风险
酶联免疫吸附试验、胶体金免疫试验、免疫 凝集试验检测岗位 • 气溶胶污染 使用加样枪或滴管加样时 可产生气溶胶粒子，特别在吹出最后一滴 液体时；手工洗涤时可产生气溶胶粒子 • 泄露和泼洒污染 手工加样可发生样本 滴落污染台面等；加样时可发生反应板表 面污染；洗板时可发生洗液污染反应板表 面；标本管破裂、倾倒可产生血液外泄
• • •
微生物实验室的消毒要求
• 实验室如果发现微生物污染了实验环境应立即停 下实验，用实验前备好的消毒剂进行消毒处理。 • 如实验室被空气和气溶胶传播的微生物污染，应 立即关闭实验室进行消毒处理。 • 盛装污染微生物实验耗材的容器应有足量的消毒 剂，用过的耗材立即侵泡在消毒剂中。 • 实验结束后应立即对实验环境进行消毒处理，擦 洗、消毒工作台面、地面，开启紫外线灯等照射1 小时以上。
穿工作服（衣、裤）
BSL-2实验室个体防护
穿 戴 防 护 用 品 流 程
穿工作鞋
必要时洗手 戴（防护）口罩 戴帽子 必要时戴防护眼镜、面罩 戴第一层手套 穿隔离衣 戴第二层手套
摘外层手套
摘 脱 防 护 用 品 流 程
脱隔离衣
摘帽子 摘（防护）口罩 脱工作服、鞋 摘里层手套 规范洗手
必要时消毒手套 若有摘防护眼镜、面罩
2.玻璃器材使用过的玻璃吸管、试管、离心管、玻片、玻 璃棒、三角瓶和平皿等应立即浸入有效氯为2.0g/L的含氯 消毒剂中1小时以上，消毒后用超声波清洗的方法洗净沥 干，使用前再进行高压灭菌处理。
离心机内有感染性物质破裂的处理
• 离心机正在运行时发生破裂或怀疑发生破裂，应关闭电 源， 密闭30分钟使气溶胶沉淀，离心机停止后发生破裂， 应立即盖上盖子密闭30分钟。 带结实的手套或口罩（避免吸入气溶胶） 使用镊子清理玻璃碎片，或用镊子夹着的棉花来清理。 破碎的离心管及离心筒、转轴或转子都应放在无腐蚀性 的、对相关微生物具有杀灭作用的消毒剂内浸泡60分钟以 上。
呼吸道传播
• 气溶胶（aerosol)是指固体或液体微粒 稳定地悬浮于气体介质中形成的胶溶状 态分散体系 • 其中的气体介质为连续相，通常为空气 • 其中的微粒为分散相，成份复杂，大小 不一
呼吸道传播
• 按微粒的大小 粒径＜10μm的称为可吸入颗粒，又因 其重量轻，在空气中漂浮的时间长而称 为飘尘 粒径＞10μm的因重力作用而迅速下沉 而成为降尘
临床实验室 生物安全培训
郭 洁
职业暴露与感染
• 实验室工作 可能发生职 业暴露 • 职业暴露可 能发生感染
实验室职业暴露感染的途径
• 实验室职业暴露可发生在实验室工作或逗 留的任何时间 • 呼吸道吸入 • 经口摄入 • 针刺或锐器刺伤 • 皮肤、粘膜污染 • 叮咬
呼吸道传播
• 呼吸道传播的微生物主要存在于气溶胶中 并可引起人类感染 举例：结核分枝杆菌 炭疽杆菌 SARS冠状病毒 ……
消化道摄入传播
• 经消化道摄入传播的微生物主要存在于粪 便、食物等中，可引起人类消化道感染 举例：志贺菌属细菌 沙门菌属细菌 葡萄球菌属细菌
消化道摄入传播
• 经消化道摄入传播的胃肠道感染可发生在 无意识的手-口途径污染时 传染性液体喷溅入口时 在实验室进食、饮水时 ……
经血传播
• 经血传播的微生物是存在于血液中并可引 起人类疾病的生物病原体 举例：HBV HCV HIV 疟原虫 梅毒螺旋体 ……
实验室、办公室等场所地面要湿式拖扫， 禁止 干拖干扫。可用0.1%过氧乙酸拖地或0.2%0.5% 过氧乙酸喷洒或拖地消毒剂的用量不少于 100ml每立方米，拖把应专用，污染区和清洁区不 得混用。
常用消毒方法
C.物体表面的消毒：
1.实验台面、桌子、椅子、凳子、床头柜、门把手、 实 验记录夹等可用0.2%-0.5%的过氧乙酸喷洒或有效氯 为 1.0g/L-2.0mg/L的含氯消毒剂喷洒、擦拭，消毒作用 10-15min。
临床实验室内小气候
• 临床实验室在工作过程中可能造成实验室 环境的污染，如离心、混匀、接种、制片、 移液、加样等均可产生气溶胶污染，标本 喷溅等可直接污染皮肤粘膜及实验台面和 地面等 • 另外，啮齿动物、昆虫等也都可携带并传 播微生物病原体，给实验室工作人员健康 带来威胁
临床实验室内小气候
• 临床实验室的标本或生物材料中可能携带 的潜在病原微生物往往是未知而多样的 • 根据处理和检测的标本不同、检测目的和 方法不同，临床实验室藏匿的具有潜在感 染能力的微生物的种类、数量和存在形式 亦不同
实验室生物安全防护水平
• 根据使用的一级和二级防护屏障的不同， 实验室生物安全防护水平（biosafety level,BSL）分为四级。 • 按防护水平由低到高排列即： 一级生物安全水平（BSL-1） 二级生物安全水平（BSL-2） 三级生物安全水平（BSL-3） 四级生物安全水平（BSL-4）
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如果溢洒的量不足1ml时，可直接用消毒剂浸湿的纸巾擦 拭。
如溢洒量大或容器破碎，按操作规程消毒。 如果溢洒物流入生物安全柜内部，则视情况，如需要可 对生物安全柜进行熏蒸。
衣物污染
• • • • • • 尽快脱掉最外层防护衣，并注意防止感染物质进一步扩 散。 将已污染的防护服放入黄色垃圾袋内，待高压灭菌 脱掉手套，到污染区出口洗手 更换防护服和手套 必要时对发生污染及脱防护服的地方进行消毒处理 如果内衣被污染，应立即脱掉易污染的衣物，消毒处理
实验室生物安全防护水平
• 实验室生物安全防护可粗略的分为 • 呼吸道传播微生物的防护（主要指对气溶 胶的防护） • 其他途径传播微生物的防护（主要指经血 液、经消化道或经啮齿动物等途径传播的 微生物的防护）
个体防护装备
• 鞋套、帽子、合适的口罩、手套、护目镜、 常规实验服、背开式隔离衣、连体防护服 等
临床实验室岗位安全风险
• 采血岗位:针刺、喷溅、气溶胶污染污染 • 呼吸道标本采集岗位：飞沫和气溶胶污染 • 标本运送、接收岗位：容器表面污染、标 本泄露和泼洒污染 • 标本离心岗位：离心管破碎或盛装过满造 成标本泄漏、、离心结束前的制动过程中、 可产生大量具有潜在感染性的气溶胶颗粒 • 其他岗位：标本污染、泄露、气溶胶污染
2.若实验室台面等明显被传染性标本污染，应立即用 0.2%-0.5%的过氧乙酸喷洒或有效氯为1.0g/L-2.0g/L的含 氯消毒剂喷洒于污染表面，保持30-60min。
常用消毒方法
D.一般实验器材的消毒：
1.凡直接或间接接触临床标本或实验微生物的器材均应视 为有传染性，均应作消毒处理。金属器材、玻璃器皿可用 压力蒸汽和干燥灭菌的方法使用于耐高温、高湿的医用器 械和物品的灭菌。
微生物实验室的消毒要求
• 实验废弃物应立即进行灭菌或消毒灯无害化处理。 • 实验人员在实验结束后应立即清洗消毒双手，必 要时应洗澡，更衣。 • 对需消毒的物品应采取彻底的消毒措施，不留死 角。 • 用消毒剂浸泡消毒时要保证消毒物品全部浸没在 消毒剂中。 • 用消毒剂擦拭消毒时要 保证所有需要消毒的表面 都被均匀的擦拭到 • 所有消毒方法均应保证消毒时间
•
保持镇静，立即停止实验，脱掉手套。
用清水或肥皂水清洗伤口。 尽量挤出伤口处的血液，取出急救箱，用碘酒或75%的酒 精擦洗伤口适当的包扎。 及时就医，告知医生受伤原因及可能的微生物污染，必 要时要进行医学处理。 向实验室安全员报告，进行事故记录。
• • • •
生物安全柜内溢出处理
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处理溢洒物时不要将头伸入安全柜内，也不要将脸直接 面对前操作口，而应处于前视面板的后方。 选择消毒剂时需要考虑消毒剂对生物安全柜的腐蚀性。
各类紧急情况处理
手部清洗消毒
• 推荐使用肘动式或者自动式洗手开关 • 流动水冲洗手部多次，然后用液体皂滴在手上，反复撮手， 在用水彻底冲洗 • 清洗完毕再用干净的纸巾或手巾擦干 • 可用75%的酒精擦手来清除双手的轻度污染
• 在没有洗手池的地方，可以使用含酒精的“免洗”手部清 洁产品代替
刺伤、切割伤或擦伤应急处理