01油镜的使用和细菌的简单染色法
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实验一 油镜的使用和细菌的简单染色方法
目的
1、了解油镜的基本原理，掌握油镜的使用方法 2、掌握细菌的简单染色方法及相关无菌操作技术
1.油镜的使用与保护
油镜原理示意图
光线从标本玻片经空气 进入镜头时，由于介质 密度不同而发生折射现 象，因此进入物镜中的 光线很少，结果视野很 暗，物像不清晰。如在 玻片上加上折光率和玻 片(n=1.52)相近的香 柏油(n＝1.515)，就可 避免光线的分散，加强 视野的亮度，获得清晰 的物像
率。
：Байду номын сангаас
镜口角（即入射角）。
普通光学显微镜Ⅲ
油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。当光 线由反光镜通过玻片与镜头 之间的空气时，由于空气与 玻片的密度不同，使光线受 到曲折，发生散射，降低了 视野的照明度。若中间的介 质是一层油（其折射率与玻 片的相近），则几乎不发生 折射，增加了视野的进光量， 从而使物象更加清晰。
油镜的使用方法
1.用油镜时，勿将镜臂弯曲倾斜，以免油滴或 菌液流淌外溢，影响观察造成污染。
2.用低倍镜对光，同时调节集光器和光圈以获 得最适亮度。染色标本油镜检查时，应将光 圈完全打开，集光器上升至载物台相平，使 光亮度很强。
3.标本片放在载物台上，用压片夹固定。
4.低倍镜找出标本的范围，然后在待检部位上 加一滴香柏油，转动镜头转换器，将油镜头置 于工作位置，从侧面观察并缓慢转动粗调节器， 使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻 片时停止转动，然后眼睛移至目镜，缓慢向上 移动粗调节器,待看到模糊物象时，再用细调 节器转动至物象完全清晰为止;
普通光学显微镜Ⅱ
显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目 镜放大倍数
2. 显微镜的分辨率 是表示显微镜
辨析物体（两端）两点之间距离的
能力，可用公式表示为：
D=λ/2n·sin(α/2 )
式中D：物镜分辨出物体两点间的
最短距离。
：可见光的波长（平均0.55m)
n: 物镜和被检标本间介质的折射
常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、石炭酸复红等。
实验材料
菌种 产气杆菌营养琼脂斜面培养物； 金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面培养物
试剂 结晶紫染液、石炭酸复红染液、香柏油、二甲苯、无菌 水
仪器及其它 显微镜、酒精灯，载玻片，接种环，擦镜纸等。
实验流程
制备细菌染色装片
油镜观察
实验步骤
1、 用简单染色法制备细菌染色装片 涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥
5.观察完毕，取下标本片，立即用擦镜纸顺一 个方向旋转擦拭镜头上的油。若油已干，应 先用二甲苯滴在擦镜纸上擦净镜头，再用另 一干净擦镜纸拭去镜头上沾有的二甲苯;
6.显微镜擦净后，降低物镜并将其转成八字形， 集光器下降，光圈关上，关闭电源，罩上显 微镜罩
油镜使用注意事项
油镜的识别：油镜头上都有标记；标有100×；镜头 前端有黑、白或红色的圆圈；刻有“III”或Oil等，其 入光孔径也较其他物镜小；
油镜头使用后应立即用擦镜纸擦净镜头上的油。注意 在擦拭时，要求顺一个方向旋转擦，不能两个方向来 回擦；
取送显微镜时，应右手持镜臂，左手托镜座，平端于 胸前。
不用时，将接物镜转开呈“八”字状，集光器下降， 罩上镜罩。对号归位。
原理
细菌简单染色法的原理
细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对 它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与 背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操 作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
2 使用油镜观察细菌染色装片 低倍镜 高倍镜 油镜
实验结果
绘图
问题与思考 油镜的使用就注意哪些问题？
普通光学显微镜Ⅰ
显微镜的构造
1.光学部分:接目镜 、 接
物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等). 它使 检视物放大,造成物象.
2.机械部分:镜座、镜臂、
镜筒、物镜转换器、载物台、 载物台转移器、粗调节器、细 调节器等部件.它起着支持 调 节 固定等作用.
目的
1、了解油镜的基本原理，掌握油镜的使用方法 2、掌握细菌的简单染色方法及相关无菌操作技术
1.油镜的使用与保护
油镜原理示意图
光线从标本玻片经空气 进入镜头时，由于介质 密度不同而发生折射现 象，因此进入物镜中的 光线很少，结果视野很 暗，物像不清晰。如在 玻片上加上折光率和玻 片(n=1.52)相近的香 柏油(n＝1.515)，就可 避免光线的分散，加强 视野的亮度，获得清晰 的物像
率。
：Байду номын сангаас
镜口角（即入射角）。
普通光学显微镜Ⅲ
油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。当光 线由反光镜通过玻片与镜头 之间的空气时，由于空气与 玻片的密度不同，使光线受 到曲折，发生散射，降低了 视野的照明度。若中间的介 质是一层油（其折射率与玻 片的相近），则几乎不发生 折射，增加了视野的进光量， 从而使物象更加清晰。
油镜的使用方法
1.用油镜时，勿将镜臂弯曲倾斜，以免油滴或 菌液流淌外溢，影响观察造成污染。
2.用低倍镜对光，同时调节集光器和光圈以获 得最适亮度。染色标本油镜检查时，应将光 圈完全打开，集光器上升至载物台相平，使 光亮度很强。
3.标本片放在载物台上，用压片夹固定。
4.低倍镜找出标本的范围，然后在待检部位上 加一滴香柏油，转动镜头转换器，将油镜头置 于工作位置，从侧面观察并缓慢转动粗调节器， 使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻 片时停止转动，然后眼睛移至目镜，缓慢向上 移动粗调节器,待看到模糊物象时，再用细调 节器转动至物象完全清晰为止;
普通光学显微镜Ⅱ
显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目 镜放大倍数
2. 显微镜的分辨率 是表示显微镜
辨析物体（两端）两点之间距离的
能力，可用公式表示为：
D=λ/2n·sin(α/2 )
式中D：物镜分辨出物体两点间的
最短距离。
：可见光的波长（平均0.55m)
n: 物镜和被检标本间介质的折射
常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、石炭酸复红等。
实验材料
菌种 产气杆菌营养琼脂斜面培养物； 金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面培养物
试剂 结晶紫染液、石炭酸复红染液、香柏油、二甲苯、无菌 水
仪器及其它 显微镜、酒精灯，载玻片，接种环，擦镜纸等。
实验流程
制备细菌染色装片
油镜观察
实验步骤
1、 用简单染色法制备细菌染色装片 涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥
5.观察完毕，取下标本片，立即用擦镜纸顺一 个方向旋转擦拭镜头上的油。若油已干，应 先用二甲苯滴在擦镜纸上擦净镜头，再用另 一干净擦镜纸拭去镜头上沾有的二甲苯;
6.显微镜擦净后，降低物镜并将其转成八字形， 集光器下降，光圈关上，关闭电源，罩上显 微镜罩
油镜使用注意事项
油镜的识别：油镜头上都有标记；标有100×；镜头 前端有黑、白或红色的圆圈；刻有“III”或Oil等，其 入光孔径也较其他物镜小；
油镜头使用后应立即用擦镜纸擦净镜头上的油。注意 在擦拭时，要求顺一个方向旋转擦，不能两个方向来 回擦；
取送显微镜时，应右手持镜臂，左手托镜座，平端于 胸前。
不用时，将接物镜转开呈“八”字状，集光器下降， 罩上镜罩。对号归位。
原理
细菌简单染色法的原理
细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对 它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与 背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操 作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
2 使用油镜观察细菌染色装片 低倍镜 高倍镜 油镜
实验结果
绘图
问题与思考 油镜的使用就注意哪些问题？
普通光学显微镜Ⅰ
显微镜的构造
1.光学部分:接目镜 、 接
物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等). 它使 检视物放大,造成物象.
2.机械部分:镜座、镜臂、
镜筒、物镜转换器、载物台、 载物台转移器、粗调节器、细 调节器等部件.它起着支持 调 节 固定等作用.