细胞转染
细胞转染实验实验报告
细胞转染是基因工程、分子生物学研究等领域中常用的一种技术，用于将外源基因或RNA导入细胞内，研究基因表达、基因调控等功能。
本实验旨在利用脂质体介导的方法将目的基因转染入HEK293细胞，并观察转染效率及目的基因的表达情况。
二、实验材料1. 细胞：HEK293细胞2. 载体：pEGFP-C1（绿色荧光蛋白基因）3. 试剂：胎牛血清、DMEM培养基、转染试剂（如Lipofectamine 3000）、Trizol 试剂、PCR试剂盒、DNA marker等三、实验方法1. 细胞培养：将HEK293细胞接种于6孔板，培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养至对数生长期。
2. 转染：按照Lipofectamine 3000说明书进行操作，将pEGFP-C1质粒与转染试剂混合，室温孵育5分钟，然后加入细胞培养液中，将细胞培养板放入培养箱中继续培养。
3. 检测转染效率：转染后24小时，观察细胞绿色荧光表达情况，以判断转染效率。
4. RT-PCR检测目的基因表达：收集转染后的细胞，使用Trizol试剂提取细胞总RNA，进行RT-PCR扩增目的基因，以判断目的基因的表达情况。
5. Western blot检测目的蛋白表达：收集转染后的细胞，提取细胞总蛋白，进行SDS-PAGE电泳，转膜，加入一抗和二抗，进行Western blot检测目的蛋白表达。
四、实验结果1. 转染效率：转染后24小时，显微镜下观察细胞绿色荧光表达情况，结果显示大部分细胞呈现出绿色荧光，说明转染效率较高。
2. RT-PCR结果：RT-PCR扩增目的基因，结果显示目的基因扩增条带清晰，说明目的基因已成功转染入细胞。
3. Western blot结果：Western blot检测目的蛋白表达，结果显示目的蛋白条带清晰，说明目的蛋白已成功表达。
1. 脂质体介导的转染方法具有操作简单、转染效率高、安全性好等优点，适用于多种细胞类型的转染。
细胞转染实验总结
细胞转染实验总结引言细胞转染是生物学研究中常用的实验技术，用于将外源DNA、RNA或蛋白质引入到目标细胞中。
通过细胞转染，可以实现基因表达、基因敲除、蛋白质定位等多种研究目的。
本文总结了细胞转染实验的基本原理、常用方法和注意事项。
基本原理细胞转染实验的基本原理是通过物理或化学方法将外源DNA、RNA或蛋白质传递到目标细胞内。
细胞内的转染物质可以在细胞内进行表达、干扰或定位，从而实现对目标细胞功能的研究。
常见的细胞转染方法包括：1.电穿孔法：通过应用电流使细胞膜发生临时孔洞，从而使转染物质进入细胞内。
2.化学转染法：利用聚合物、脂质体等化学物质，将目标物质载体化，并与细胞膜结合，实现内源化学转染。
3.病毒载体介导转染法：利用病毒（如腺病毒、逆转录病毒等）作为载体，传递目标物质到细胞内。
常用方法1. 电穿孔法电穿孔法是细胞转染中常用的物理方法之一。
通过应用高电压或脉冲电场，可以使细胞膜发生临时性孔洞，从而使外源DNA、RNA或蛋白质进入细胞内。
常用的电穿孔方法包括：•电转染：将转染物质与细胞悬浮液混合后施加电脉冲，使细胞膜发生孔洞并吸收转染物质。
•静电转染：将转染物质与带正电荷的载体（如聚乙烯亚胺）混合后，与带负电荷的细胞膜相互吸引，从而将转染物质导入细胞内。
2. 化学转染法化学转染法是一种通过化学物质介导的细胞转染方法。
常用的化学转染法有：•使用聚合物：聚合物（如聚乙烯亚胺、聚合丙烯酸等）能与转染物质结合成复合物，使其稳定且易于细胞摄取。
•脂质体转染：脂质体是由磷脂、胆固醇等成分构成的脂质双层结构，可以包裹转染物质形成脂质体-转染物复合物，通过与细胞膜融合实现内源转染。
3. 病毒载体介导转染法病毒载体介导转染法是细胞转染中较常用的方法之一。
常见的病毒载体包括：•腺病毒：腺病毒是一种双链DNA病毒，可以携带大片段的外源DNA，并有效地传递到目标细胞内。
•逆转录病毒：逆转录病毒（如 lentivirus、retrovirus等）可以将外源RNA逆转录成DNA，然后整合到宿主细胞基因组中。
细胞转染的原理操作步骤以及小技巧
细胞转染的原理操作步骤以及小技巧细胞转染是一种将外源DNA、RNA、蛋白质等分子导入到细胞内的实验技术。
这种技术可以用来研究基因功能、发现新的信号通路和治疗基因疾病等。
下面将介绍细胞转染的原理、操作步骤以及一些小技巧。
一、细胞转染的原理：细胞转染主要通过三种方法实现：物理法、化学法和生物学法。
1.物理法：通过高压、电穿孔、微射流等方式，使细胞膜发生瞬时破裂，从而使DNA、RNA等外源分子进入细胞。
常用的物理法有电穿孔法和基因枪法。
2.化学法：通过化学物质，如聚吡咯、脂质体等，使外源分子与细胞膜结合，从而实现转染。
常用的化学法有聚乙烯亚胺（PEI）法、磷酸钙共沉淀法等。
3.生物学法：通过利用病毒载体将外源基因导入目标细胞，实现基因的转移。
常用的生物学法有腺相关病毒（AAV）转染、逆转录病毒（RETRO）转染等。
二、细胞转染的操作步骤：1.细胞的预处理：根据细胞类型和实验要求，将细胞培养至合适的状态。
通常细胞应处于快速生长期，但还未达到接触抑制的阶段。
对于一些特定的细胞，如悬浮细胞，可能需要将其转接至适当的培养基中。
2.外源分子的准备：将外源DNA、RNA等转染载体制备好。
如将DNA克隆并纯化至高质量的质粒DNA，或将RNA合成或纯化。
根据实验要求选择合适的转染载体。
3.转染方法的选择：根据实验要求选择合适的转染方法，如物理法、化学法或生物学法。
一般情况下，物理法适用于悬浮细胞，化学法适用于贴壁细胞，而生物学法适用于大多数细胞类型。
4.细胞转染操作：a.物理法：i.电穿孔法：将细胞悬浮于含有外源分子的缓冲液中，然后通过电穿孔仪的电极或电穿孔板进行电穿孔。
ii. 基因枪法：使用基因枪将外源分子直接“枪”入目标细胞中。
b.化学法：i.PEI法：将PEI与外源DNA或RNA按一定比例混合，在适当条件下形成复合物，然后添加至目标细胞中。
ii. 磷酸钙共沉淀法：将外源DNA与磷酸钙按比例混合，并静置形成磷酸钙- DNA沉淀，然后加入至目标细胞中。
细胞转染步骤
细胞转染步骤细胞转染是一种将外来脱氧核糖核酸（DNA）或核苷酸序列引入细胞内的技术。
这个过程可以用于研究基因功能、病毒感染和基因治疗。
在细胞转染过程中，有几个重要步骤需要注意。
下面是一个关于细胞转染步骤的简要介绍。
第1步：提取DNA或RNA在细胞转染前，需要先准备好DNA或RNA。
其中，DNA可通过PCR扩增、酵母合成，或从细胞中提取。
RNA则可通过反转录酶聚合酶链式反应（RT-PCR）反转录，然后进行DNA扩增。
第2步：选择转染方法目前有很多种不同的细胞转染方法，包括电穿孔、热休克、化学转染等。
要选择适合的转染方法，需要考虑许多因素，如细胞类型、转染效率和毒性等。
常用的转染剂有聚乙烯醇、脂质体、钙磷酸盐等。
第3步：制备转染复合物转染复合物是转染时添加的液体溶液，用于将DNA或RNA引入细胞。
制备复合物通常需要将DNA或RNA与转染剂混合，然后使其与乙醇或其他化学物质形成稳定的颗粒，最终形成复合物。
转染时需要将制备好的转染复合物直接加入培养基中，让细胞与其接触。
接触后，DNA或RNA会被吸附到细胞表面并被内吞到细胞内部。
转染过程通常需要一定程度的时间，具体时间取决于细胞类型和转染复合物的选用。
第5步：培养和维护转染成功后需要对细胞进行培养和维护。
这通常需要注意以下几个因素：1）细胞浸润度：细胞密度应该适合，以便观察细胞形态和产物的表达量。
2）培养基成分：为了保持细胞生长，需要选择适当的培养基成分。
3）药物筛选：转染后可能需要添加药物对细胞进行筛选，以便筛选出目标基因。
4）稳定性维护：为了保证目标基因稳定的表达，需要适当地维护和稳定细胞系。
以上是细胞转染过程中的几个关键步骤。
在进行细胞转染时，需要注意步骤的顺序和方法的选择，以便提高转染效率和成功率。
细胞转染的技巧
细胞转染的技巧细胞转染是研究细胞分子生物学的关键技术之一，广泛应用于基因表达、基因敲除和功能分析等领域。
本文将详细介绍细胞转染的原理、方法和优化技巧。
细胞转染的原理主要基于外源DNA的纳入细胞内，并表达目的基因。
目前常用的转染方法包括化学法、电穿孔法、病毒介导法和基因枪法等。
一、化学法化学法是最常用的细胞转染方法之一，其基本原理是通过化学试剂破坏细胞膜屏障，使外源DNA能够进入细胞内。
常用的转染试剂包括聚乙烯亚胺（Polyethylenimine, PEI）、脂质体和阳离子聚合物等。
在化学转染过程中，需要注意以下几个关键环节：1. 细胞密度：化学转染对细胞密度有一定的要求，通常细胞密度应保持在80%~90%的对数生长期，以保证转染效果。
2. 转染试剂的浓度和比例：不同的转染试剂适用于不同的细胞系，需要根据实验需求进行优化。
一般情况下，转染试剂的浓度和DNA的比例为1:3~6。
3. 转染时间和转染条件：化学转染的时间和条件也需要进行优化。
过短的转染时间会导致转染效率低，而过长的转染时间可能会对细胞造成毒性影响。
二、电穿孔法电穿孔法通过电场脉冲的作用使细胞膜发生短暂的孔洞形成，从而实现外源DNA的转染。
电穿孔法具有转染效率高、转染速度快等优点，但对细胞需求较高，且操作较为繁琐。
在电穿孔转染过程中，需要注意以下几个环节：1. 电脉冲的参数：电脉冲参数包括电压、脉冲宽度和脉冲数等，需要根据细胞类型和实验需求进行优化。
2. 转染缓冲液的配方：转染缓冲液通常包含含有机磷盐的缓冲液或无机盐溶液，可用于增加细胞的导电性和缓解电穿孔过程中对细胞的损伤。
3. 转染后的细胞培养：电穿孔转染后，应及时将细胞转移到无血清培养基中，以减少电穿孔对细胞的影响。
三、病毒介导法病毒介导法是一种高效、稳定的转染方法，常用于长期表达和基因敲除实验。
病毒载体（如腺病毒、逆转录病毒等）可携带外源DNA进入细胞并整合到基因组中，从而实现目的基因的表达。
细胞转染操作方法
细胞转染操作方法一、细胞转染简介细胞转染是指将外源性DNA、RNA、蛋白质等分子通过物理或化学手段导入到细胞内，从而改变细胞的基因表达或功能。
常见的细胞转染方法包括病毒载体介导转染、电穿孔法、钙磷共沉淀法和化学转染法等。
其中，化学转染法是最为常用的方法之一，因为它具有操作简便、成本低廉和适用于多种类型的细胞等优点。
二、实验前准备1. 细胞培养：选择适当的培养基和培养条件，使得细胞处于生长状态。
2. 转染试剂：选择合适的化学转染试剂，如Lipofectamine 2000、PolyJet等。
3. 质粒DNA：准备所需的质粒DNA，并进行纯化和测定浓度。
4. 培养皿：准备适当大小和形状的培养皿，以满足实验需要。
5. 显微镜：准备显微镜以观察细胞转染效果。
三、实验步骤1. 细胞接种：将需要转染的细胞接种到培养皿中，使其达到适当的生长状态。
2. 质粒DNA和化学转染试剂混合：根据试剂说明书的建议，将质粒DNA和化学转染试剂混合，形成转染复合物。
3. 转染复合物与细胞接触：将转染复合物滴加到培养皿中，让其与细胞接触。
4. 培养：将培养皿放入恰当的培养箱中，并按照所选细胞类型的要求进行培养。
5. 观察效果：经过适当时间后，使用显微镜观察细胞转染效果。
若需要，可以通过Western blot、PCR等方法进行进一步验证。
四、注意事项1. 选择适当的化学转染试剂，并按照说明书建议操作。
2. 转染前需要保证质粒DNA纯度和浓度足够，并进行必要的测定。
3. 细胞密度和培养时间应根据所选细胞类型进行调整。
4. 转染复合物与细胞接触时间不宜过长或过短，一般在4-6小时左右。
5. 培养过程中需要注意细胞状态的变化，并根据需要进行适当的处理。
五、实验结果解读通过细胞转染操作，可以实现外源性DNA、RNA、蛋白质等分子的导入，从而改变细胞的基因表达或功能。
实验结果可以通过Western blot、PCR等方法进行进一步验证。
细胞转染
• •
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尽管转染效率因细胞类型的不同而异，在104个转染 细胞中只有大约一个细胞可以稳定整合DNA (不论使用 的是线性还是环状DNA)。 没有一种方法可以适用于所有细胞和所有实验。必须 根据您的细胞类型和实验要求选择理想的方法，必须具 有高转染效率、低血细胞毒性、对正常生理学的影响最 小，且使用简单、可重复。
选择转染策略？
定因素是实验的时间范围和最终目标。
瞬时转染细胞一般在转染后24–96小时收集，常用于研 究基因或基因产物的短期表达效应，执行RNA干扰(RNAi)介可以更快速地提供结果；因为mRNA在胞浆中表达，无需 转移到细胞核，无需转录，转染数分钟后即可在部分系统 中表达转染mRNA。
• 使用选择性培养基培养时，未转染的细胞或瞬时转染 细胞都将会死亡，而表达一定水平的抗生素抗性基因 或可以补偿必需基因缺陷的细胞则可以存活。选择标 记物可保护生物体不受选择性试剂影响，这些选择性 试剂通常会杀死生物体或干扰其生长。 • 亦可利用报告基因来筛选成功转染的细胞。用于转染 子筛选的报告基因则可以轻松鉴别出包含报告基因的 细胞。
相比之下，当需要长期基因表达或转染细胞需要在多个 实验中使用时，则更多地选择稳定转染。由于将DNA载体整 合至染色体中的概率较低，因此细胞的稳定转染更麻烦、 更具挑战性，需要选择性筛选和克隆分离。因此，稳定转 染通常用于大规模的蛋白质生产、长期药理学研究、基因 治疗或长期基因调控机制研究。
三、转染的技术
2.转染的应用 • 基因表达
转染最常通过使用质粒载体在培养细胞(或动物 模型)中表达目的蛋白。另外，将带有可检测的标 记物及其他修饰的蛋白质导入细胞，可用于启动子 和增强子序列或蛋白间相互作用的研究。
• 基因抑制
转染的另一个常用用途是通过RNA干扰(RNAi)抑 制特定蛋白质的表达。
细胞转染的原理
细胞转染的原理一、细胞转染的基本概念细胞转染是指将外源性DNA或RNA等物质导入到细胞内，以达到改变细胞基因表达或功能的目的。
它是生物学研究中常用的技术手段之一，广泛应用于基因治疗、药物筛选和基因功能研究等领域。
二、细胞转染的方法1. 化学法：通过化学试剂（如聚乙烯醇、离子脂质体等）将DNA或RNA导入到细胞内。
这种方法简单易行，但毒性较大且效率不高。
2. 物理法：通过机械冲击（如电穿孔）、高压注射、微注射等方式将DNA或RNA直接注入到细胞内。
这种方法效率较高，但操作复杂且对细胞有一定伤害。
3. 病毒载体法：利用病毒作为载体将DNA或RNA导入到细胞内。
这种方法效率高，但存在安全隐患和限制性较大。
三、化学法转染原理1. 离子脂质体介导转染离子脂质体是由阳离子表面活性剂和阴离子脂质组成的复合物，具有良好的生物相容性和可生物降解性。
在转染过程中，DNA或RNA与离子脂质体形成复合物，通过静电作用与细胞膜结合并进入细胞内。
此外，离子脂质体还能促进细胞内吞作用和溶酶体逃逸，提高转染效率。
2. 聚乙烯醇介导转染聚乙烯醇（PEI）是一种阳离子聚合物，在水中能形成稳定的颗粒。
在转染过程中，PEI与DNA或RNA形成复合物，通过静电作用与细胞膜结合并进入细胞内。
PEI不仅能促进细胞内吞作用和溶酶体逃逸，还能与核糖体结合并促进基因表达。
四、化学法转染优缺点1. 优点：简单易行、操作方便、不需要专门设备。
2. 缺点：毒性较大、效率低、对不同类型的细胞有一定限制。
五、物理法转染原理1. 电穿孔法电穿孔法利用电场作用使细胞膜通透，形成微小孔道，从而将DNA或RNA导入到细胞内。
电穿孔法的优点是操作简单、效率高，但缺点是对细胞有一定伤害。
2. 高压注射法高压注射法是通过高压气流将DNA或RNA直接注入到细胞内。
这种方法效率高，但对细胞有较大的伤害。
3. 微注射法微注射法是在显微镜下使用微针将DNA或RNA直接注入到单个细胞内。
细胞转染
磷酸钙法
即磷酸钙共沉淀转染法，先将DNA和氯化钙混合， 然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，最 后把含有沉沉淀的混悬液加到培养的细胞上， 通过细胞胞膜的内吞作用摄入DNA。磷酸钙似乎 还通过抑制血清中和细胞内的核酸酶活性而保 护外源DNA免受降解。
磷酸钙法
核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可 使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通 过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内， 进入细胞的DNA仅有1%～5%可以进入细胞核中， 其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在 细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为 10-4，这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物 进行暂时性表达或长期转化的研究。此方法对 于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法。
脂质体转染法
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸 根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成 DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附， 再通过融合或细胞内吞进入细胞。
脂质体转染法
脂质体转染法
1. 脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养 细胞，可用于瞬时转染和稳定转染。 2. 转染效率高，比磷酸钙法高5-100倍。 3. 能够把DNA和RNA转染到各种细胞。 4. 转染的稳定性好，可重复性高。 5. 转染时最好不加血清和抗生素。 6. 阳离子脂质体细胞毒性相对较高，对部分细胞可 能会干扰细胞的代谢。由于脂质体对细胞有一定 的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。 7. 常用细胞类型：cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
理想的细胞转染
转染效率高，不影响细胞正常生理活动 细胞毒性 重复性好 安全 方法简单 省时、经济
报告基因
细胞转染Cell Transfection
细胞培养
• HeLa， HepG-2， NIH /3T3 细胞培养于含 10% 新生小牛血清的 DMEM 高糖培养液， 37 C ， 5% CO2， 90% 相对湿度培养箱中 . 在解冻小鼠 ES 细胞前， 先培养饲养层细胞 C57BL， 待长满后， 用 含 10 ug /mL 的mitomycin C处理 2 ~ 2. 51h， 用 37 C 预热的 PBS 漂洗两次， 加普通培养液过夜培养 . 第二天， 解冻小鼠 ES 细胞， 在含 10% 胎牛血清7 . 175 X 109 pmoI /L LIF饲养层上培养 .
•
转染试剂
细胞状态 转染方法
载体构建
•
细胞培养物 细胞密度 血清
抗生素
氮磷比 DNA质量
1． 转染试剂
• 不同细胞系转染效率通常不同， 但细胞系的选择通常是根据实验 的需要， 因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合 的转染试剂。 每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株 列表和文献， 通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。 当然， 最适合的是高效、 低毒、 方便、 廉价的转染试剂。
• 小鼠 ES 细胞， 用 冰预冷的 PBS 将处于对数生长期的细胞重悬为 1 X 107 个 /mL， 取 0. 8 mL 细胞悬液与 25 ug 线性化的 Target Vector 混合， 加到 4 mm 电击池， 冰上放置 5 min (对照组室温放置） • 用 电压 240 V,电阻 ,电容 500 uF 和 950 uF 分别进行电穿孔转染， 电击 后冰上放置 5 mi n (对照组室温放置） • 将细胞转移到装有预热培养液的 15 mL 离心管中 ， 轻轻吸打均匀后， 将 细胞悬液平均分到 6 个装有预热培养液（ 含 7 . 175 X109 pmoI /L LIF）铺 好饲养层的 10 cm 培养皿中 ， 摇匀， 常规条件培养 • 24 h后换新鲜培养液， 电击后 48 h,加250ug /mL G418 及 2 umoI /L gancycIovir 进行选择， 每天更换选择培养液
细胞转染知识点总结
细胞转染知识点总结一、细胞转染的基本原理1.细胞膜的通透性细胞膜是生物细胞的保护屏障，对大多数物质具有选择性通透性。
它具有疏水性，对水溶性分子和带电离子有较高的抵抗力。
因此，要将外源DNA/RNA或蛋白质引入细胞内，就需要突破细胞膜的屏障。
2.转染技术的原理细胞转染的原理是通过物理方法或化学方法破坏细胞膜的结构，使得外源基因或蛋白可以穿过细胞膜，进入细胞内。
外源基因或蛋白进入细胞后，可以在细胞内表达并产生相应的生物学效应。
3.转染方法的选择根据转染的实验目的和特定的细胞类型，可以选择不同的转染方法。
常用的转染方法包括化学转染、电穿孔法、超声转染、直接微注射等。
不同的转染方法有各自的优缺点，可以根据实验需要进行选择。
二、常用的细胞转染方法1. 化学转染化学转染是利用化学物质破坏细胞膜结构，引入外源DNA或蛋白质的一种转染方法。
常用的化学转染试剂包括有机阴离子试剂如聚乙烯亚胺（PEI），阳离子表面活性剂如脂质体和脂质体样微粒等。
这些试剂可以与DNA或蛋白发生静电相互作用，形成复合物，穿过细胞膜进入细胞内。
2. 电穿孔法电穿孔法是利用电场作用引导外源DNA或蛋白进入细胞内的转染方法。
通过施加电脉冲，使细胞膜通透性增加，从而实现外源基因或蛋白质的引入。
电穿孔法转染简单、高效，适用于各种细胞类型。
3. 超声转染超声转染是利用超声波破坏细胞膜结构，引入外源DNA或蛋白质的转染方法。
超声波作用在细胞膜上会形成微小孔道，从而促进外源基因或蛋白的穿过。
超声转染操作简单，对细胞损伤小，适用于多种细胞类型。
4. 直接微注射直接微注射是指利用显微注射器将外源DNA或蛋白质直接注射进入细胞内的转染方法。
这种方法不受细胞膜的限制，能够确保外源基因或蛋白的输入量和准确性。
但微注射操作技术要求高，效率较低。
5. 基因枪法基因枪法是利用高压气枪射击金属微粒和DNA复合物，使复合物穿过细胞膜进入细胞内的转染方法。
基因枪法操作简单，转染效率高，适用于植物细胞和哺乳动物细胞。
细胞转染实验
细胞转染实验简介细胞转染是一种将外源基因或荧光探针引入细胞的技术，用于研究基因功能、蛋白质表达以及信号通路等。
本文将为您介绍细胞转染实验的基本原理、实验步骤以及常见注意事项。
基本原理细胞转染是一种通过改变细胞外液环境，使细胞吸收外源基因或荧光探针的技术。
转染可采用多种方式实现，包括化学转染、电转染、病毒转染等。
不同的转染方法适用于不同类型的细胞和研究目的。
在化学转染中，常用的转染试剂有脂质体和阳离子聚合物。
脂质体是由磷脂和胆固醇组成的小囊泡，可以包裹外源基因形成脂质体-基因复合物。
阳离子聚合物是带正电荷的聚合物，可以和DNA形成复合体进入细胞。
电转染是利用高压脉冲将DNA导入细胞。
通常使用电穿孔仪产生的短暂高压电场，使细胞膜通透性增加，从而使DNA进入细胞。
病毒转染是将外源基因植入病毒载体中，通过感染细胞，使外源基因整合到细胞染色体中。
实验步骤1. 准备细胞选择合适的细胞系进行转染实验。
不同细胞系对转染方法和试剂的适应性有所差异。
常见细胞系如293T、HeLa、CHO 等。
2. 培养细胞将选定的细胞系按照相应的培养条件在细胞培养皿中培养至达到合适的密度，一般为70-90%的密度。
细胞应确保处于快速生长期，以提高转染效率。
3. 转染试剂的选择根据实验的需要选择合适的转染试剂。
常见的转染试剂有脂质体试剂（如Lipofectamine™）和阳离子聚合物试剂（如PolyJet™）。
4. 转染实验操作将所需的转染试剂加入适量的培养基中，并充分混合。
注意避免产生气泡，以免影响转染效率。
将转染试剂溶液缓慢滴加到含有细胞的培养皿中。
5. 恢复培养条件将含有转染试剂的培养皿置于恢复培养条件下，通常为37℃、5% CO2的培养箱中。
细胞需要一定时间来恢复并表达外源基因。
6. 分析转染效率通过荧光显微镜观察细胞是否发出荧光信号。
如果转染的是荧光探针，则直接观察细胞是否发出特定颜色的荧光。
如果转染的是外源基因，则需要进一步通过PCR或Western blot 等技术来验证外源基因是否成功表达。
细胞转染 Protocol
细胞转染是一种常用的生物技术，用于将外源基因或药物引入细胞中。
下面是细胞转染的实验原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。
一、实验原理细胞转染是利用细胞膜的通透性，将带有特定基因或药物的载体分子导入细胞内。
常用的载体分子包括病毒载体和非病毒载体。
病毒载体如腺病毒、逆转录病毒等，能将外源基因高效地导入细胞中，但可能对细胞产生一定毒性。
非病毒载体如脂质体、阳离子聚合物等，相对安全，但导入效率较低。
通过细胞转染，可以实现对基因的表达调控，探索基因功能和药物筛选等研究。
二、所需试剂和耗材1.试剂：o培养基：如DMEM、F12等，用于细胞培养。
o血清：如胎牛血清，提供细胞生长所需的营养物质。
o抗生素：如青霉素、链霉素等，用于防止细胞污染。
o转染试剂：如Lipofectamine、Effectene等，用于细胞转染。
o DNA或RNA：携带目的基因的质粒或寡核苷酸。
2.耗材：o细胞培养瓶、板：用于细胞培养。
o离心管：用于细胞转染后洗涤和离心。
o移液器及枪头：用于精确加样。
o过滤器：用于过滤溶液中的杂质。
o无菌水：用于稀释和配制溶液。
三、实验仪器1.实验室搅拌器：用于混合溶液。
2.高速冷冻离心机：用于离心和分离细胞。
3.水浴锅：用于加热溶液。
4.无菌工作台或超净工作台：用于进行无菌操作。
5.分光光度计：用于测量细胞生长状况和转染效率。
6.荧光显微镜：用于观察细胞转染后荧光蛋白的表达情况。
7.CO2培养箱：提供细胞培养所需的气体环境。
四、准备工作1.仔细阅读实验步骤和注意事项，了解所需的试剂和耗材及其使用方法。
2.准备好所需的试剂和耗材，并确保它们处于保质期内。
3.检查实验室内是否具备上述实验仪器，并确保其正常运行。
4.用70%乙醇擦拭实验台面，以确保无菌环境。
5.用高压蒸汽灭菌法灭菌所有的实验器具，包括离心管、移液器等，需在适当的压力和温度下进行灭菌处理，以消除所有潜在的污染源。
细胞转染原理
细胞转染原理细胞转染是指将外源DNA或RNA导入到细胞内的过程，以实现对细胞进行基因表达或功能调控的研究。
在细胞转染中，常用的方法包括转染剂介导转染、电穿孔转染和病毒载体介导转染等。
转染剂介导转染是最常用的细胞转染方法之一。
转染剂可以与外源DNA或RNA形成复合物，通过与细胞膜结合，将外源DNA或RNA送入细胞内。
转染剂通常为阳离子型表面活性剂，例如聚乳酸-聚赖氨酸共聚物（PLL-PLA）、聚乳酸-聚乙二醇共聚物（PLL-PEG）等。
这些阳离子型表面活性剂可以与带负电的DNA或RNA结合，形成带正电的复合物，利用细胞膜上负电荷的磷脂头基与阳离子复合物结合，实现DNA或RNA 的转染。
电穿孔转染是通过短暂应用高压电脉冲来创建细胞膜上的微小孔道，以便外源DNA或RNA能够进入细胞内。
这种方法利用电场脉冲造成细胞膜的破裂和微小孔道的形成，称为电穿孔。
电穿孔方法可以有效地将外源DNA或RNA导入细胞质，但由于电穿孔对细胞的生存性有一定的损伤，因此应注意控制电场强度和脉冲长度，以及适当的电穿孔时间。
病毒载体介导转染是一种专门利用改造后的病毒作为载体将外源DNA或RNA导入细胞内的方法。
常用的病毒载体包括腺病毒（Adenovirus）、衣藻病毒（Chlorella virus）和慢病毒（Lentivirus）等。
这些病毒载体经过改造可以将外源DNA或RNA插入其基因组中，并通过感染细胞实现外源基因的表达。
病毒载体介导转染的优点是高效、特异性强，但也存在着生物安全性和病毒免疫应答的问题。
除了上述方法外，还存在其他一些基于特殊原理的转染方法，如快速制备亲和复合物介导转染、脂质体介导转染、基因枪介导转染等。
这些方法在特定的实验条件下使用，并根据不同的研究需要选择适合的转染方法。
细胞转染技术的发展为基因治疗、基因表达研究和细胞功能研究等领域提供了重要的实验手段。
不同的转染方法适用于不同类型的细胞和外源DNA或RNA的特性，研究人员可以根据实际需求选择适合的细胞转染方法，以实现理想的转染效果。
详细描述细胞转染步骤
详细描述细胞转染步骤细胞转染是指将外源DNA或RNA引入细胞内，使其表达或干扰靶基因的过程。
该技术在基因工程、药物筛选和疾病研究中发挥着重要作用。
下面将详细介绍细胞转染的步骤。
1. 细胞培养准备在进行细胞转染之前，首先需要准备好细胞培养基和细胞。
常用的细胞包括哺乳动物细胞（如HEK293细胞、HeLa细胞等）和昆虫细胞（如Sf9细胞、S2细胞等）。
细胞应保持在良好的生长状态，通常需要在无菌条件下培养，并在适当的培养基中维持其生长。
2. DNA/RNA准备在进行细胞转染之前，需要准备好要转染的DNA或RNA。
DNA可以是质粒DNA、线性DNA或合成DNA，而RNA可以是mRNA或siRNA。
这些外源DNA/RNA应在实验室中进行合成或提取，并经过纯化、测序等步骤进行质检。
3. 转染试剂选择根据实验需要和细胞类型的特点，选择合适的转染试剂。
常用的转染试剂包括离子脂质体、阳离子聚合物和电穿孔等。
离子脂质体适用于多种细胞类型，而阳离子聚合物则更适用于特定细胞类型。
电穿孔则可用于绝大多数细胞类型。
4. 转染操作将细胞用适当的细胞培养基进行洗涤，以去除残留的培养基和细胞代谢物。
然后将细胞转移到新的培养基中，并使其适应新的培养条件。
接下来，将转染试剂与DNA/RNA混合，并在室温下孵育一段时间，以使其形成复合物。
然后将复合物加入到细胞培养基中，与细胞进行共培养。
5. 转染后处理转染后，细胞需要在适当的培养条件下继续培养，以使其表达或干扰靶基因。
在此期间，可以根据实验需要添加适当的选择抗生素或标记物，以筛选或鉴定转染细胞。
同时，还可以通过荧光显微镜观察转染效率，并进行定量分析。
6. 细胞检测和分析在转染后的一段时间内，可以通过PCR、RT-PCR、Western blot等方法，检测和分析靶基因的表达或干扰效果。
此外，还可以通过细胞增殖、凋亡、迁移等实验，研究转染对细胞生物学行为的影响。
7. 数据分析和结果解读根据实验结果，进行数据分析和结果解读。
细胞转染原理
细胞转染原理细胞转染是一种常用的实验技术，用于将外源DNA、RNA或蛋白质等分子引入细胞内，以实现基因敲除、过表达、信号转导研究等目的。
细胞转染技术的原理是利用化学、物理或生物学方法，使外源分子穿过细胞膜，进入细胞内部。
本文将介绍细胞转染的原理及常用的转染方法。
细胞转染的原理主要包括细胞膜渗透性增加、内吞作用和融合作用。
首先，细胞膜渗透性增加是指通过物理或化学手段使细胞膜通透性增加，使外源分子能够穿过细胞膜进入细胞内。
其次，内吞作用是指细胞通过吞噬囊泡将外源分子包裹起来，形成内吞泡，然后将其输送到细胞内部。
最后，融合作用是指外源分子与细胞膜融合，直接进入细胞内。
常用的细胞转染方法包括化学转染、电穿孔法、基因枪法和病毒载体法。
化学转染是利用化学试剂（如聚乙烯亚胺、脂质体等）破坏细胞膜，使外源分子进入细胞内。
电穿孔法是利用电场作用使细胞膜通透性增加，使外源分子进入细胞内。
基因枪法是将外源分子包裹在微粒上，通过高速射击使其穿过细胞膜进入细胞内。
病毒载体法是利用病毒载体将外源分子转染入细胞内。
细胞转染技术在基因工程、细胞治疗、药物筛选等领域具有广泛的应用。
通过转染技术，可以实现基因敲除、外源基因表达、蛋白质功能研究等多种实验目的。
在细胞治疗领域，细胞转染技术可以用于将修饰后的细胞注入患者体内，治疗一些遗传性疾病或癌症。
在药物筛选领域，细胞转染技术可以用于快速筛选药物的活性和毒性，加快新药研发的速度。
总之，细胞转染技术是一种重要的实验手段，可以帮助科研人员进行基因功能研究、新药筛选和细胞治疗等工作。
通过深入了解细胞转染的原理和常用方法，可以更好地应用这一技术，推动科学研究和医学进步。
细胞转染sop
细胞转染步骤细胞转染是将外源分子如DNA，RNA导入真核细胞的技术。
它已成为一种研究基因表达调控，基因突变分析，蛋白质生产的常规方法，其应用范围越来越广。
细胞转染可分为瞬时转染和稳定转染两大类：瞬时转染，外源基因进入受体细胞后，存在于游离载体上，不整合在细胞的染色体上。
此时，外源DNA仍然以附加的形式存在于细胞内，因此，mRNA或蛋白质产物必须在短时间（1-3天）内进行测定或分析，而且质粒的人工构想和拷贝数可能会导致特异性调控元件失活或具有特异功能。
其优点是快捷、简单，易于对结果进行分析，因此成为启动子功能分析的首选方法。
稳定转染，外源DNA整合到宿主细胞的染色体上。
由于外源基因被整合到细胞的染色体中，使得调控区能更精确的模拟正常功能，对随后的转录分析没有时间限制。
缺点是需要进行药物筛选和细胞扩增，因此操作难度大，需要的周期较长。
转染的常见方法有：（一）物理介导法：电击法、显微注射法、基因枪法（二）化学介导法：DEAE-葡聚糖法、磷酸钙法、脂质体法（三）病毒介导法：腺病毒法、逆转录病毒法现在对于很多普通细胞系，常用的是瞬时转染方法中的脂质体法。
下面介绍下细胞转染的具体步骤：1.转染前准备：转染前一天，取生长状况良好的细胞，经胰酶消化成单个细胞后，计数。
根据实验需要，铺合适细胞量在板中，使第二天转染时的细胞密度达到80-90%。
2、细胞转染（1）在做转染实验前一般给细胞更换新鲜的完全培养基，并置于培养箱中继续培养。
最好是加入加血清但不含抗生素的培养基。
（2）准备几个无菌的1.5ml EP管，并做好标记。
一支EP管上标记DNA（即质粒的名字），一支EP管上标记lipofectamine2000。
（3）分别在两支EP管加入50微升的opti-MEM。
（4）在标记质粒的EP管里加入质粒，另一支EP管里加入脂质体。
（5）分别轻轻混匀，室温静置5min。
（6）再将含有质粒的opti-MEM培养基加入到含有脂质体的opti-MEM的培养基中。
细胞转染技术
细胞转染细胞转染转染，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。
随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。
转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。
电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
理想的细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。
病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。
但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。
其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。
需要指出的一点是，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。
影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染方法的操作细节，都需要考虑。
常用转染方法一、脂质体转染法阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA-脂质体复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。
脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。
由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。
二、电穿孔转染法电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔转染法。
当遇到某些脂质体转染效率很低或儿乎无法转入时建议使用电穿孔法转染。
一般情况下，高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。
现在针对电穿孔转染会引起大量细胞死亡而开发出了一种电转保护剂，可以大大的降低细胞的死亡率，同时提高电穿孔转染效率。
三、病毒感染对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染，此法可以快速100%感染，检测成功率高。
细胞转染的方法和基本原理
细胞转染的方法和基本原理细胞转染是生物学研究中常用的实验技术，用于将外源DNA、RNA或蛋白质引入到靶细胞中。
本文将介绍细胞转染的方法和基本原理。
一、细胞转染的方法1. 化学法转染：化学法转染是最常用的细胞转染方法之一。
通过利用化学物质如聚乙烯亚胺（PEI）或脂质体等，将外源DNA或RNA 包裹成复合物，与细胞膜结合后进入细胞。
这种方法操作简单、成本低廉，适用于多种细胞类型。
但转染效率较低，对细胞有一定毒性。
2. 病毒载体转染：病毒载体转染是一种高效的细胞转染方法。
病毒载体可以将外源基因嵌入病毒基因组中，然后通过感染细胞的方式将基因导入细胞内。
常用的病毒载体有腺病毒、逆转录病毒等。
这种方法转染效率高，适用于多种细胞类型，但需要特殊设备和技术，同时也有一定的生物安全风险。
3. 电穿孔法转染：电穿孔法利用高压脉冲作用于细胞膜，破坏细胞膜结构，从而使外源DNA或RNA进入细胞。
这种方法操作简单，转染效率较高，但对细胞有一定的毒性，并且只适用于某些特定的细胞类型。
4. 基因枪法转染：基因枪法是一种生理穿孔法，通过利用高压气体或火药驱动基因枪，将外源DNA或RNA以微粒形式直接射入细胞。
这种方法适用于多种细胞类型，转染效率较高，但需要特殊设备和技术，并且对细胞有一定的毒性。
二、细胞转染的基本原理细胞转染的基本原理是通过一定的方法将外源DNA、RNA或蛋白质引入靶细胞，使其在细胞内表达或功能发挥。
转染后的细胞可以用于研究基因功能、蛋白质表达及相互作用等。
细胞转染的基本原理可以分为三个步骤：吸附、内化和表达。
1. 吸附：在化学法转染中，外源DNA或RNA会与载体相结合形成复合物，通过静电作用与细胞膜结合。
在病毒载体转染中，病毒载体会与细胞膜表面的受体结合。
吸附是转染的第一步，直接影响转染效率。
2. 内化：吸附后，外源DNA、RNA或蛋白质需要进入细胞内部。
在化学法转染中，复合物通过细胞膜的内吞作用或直接渗透进入细胞质。
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细胞转染
转染技术是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。
常规的转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。
前者外源DNA/RNA不整合到宿主的染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其他调控元件的分析。
一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24—72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。
后者也称稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体存在。
尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。
外源DNA整合到染色体中的概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH：新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。
转染技术的选择对转染结果影响也很大，许多转染方法需要优化DNA与转染试剂的比例、细胞数量、培基及检测时间等。
转染效率受多种因素影响，主要因素有下面几个：
1、转染试剂
不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。
每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最合适实验设计的转染试剂。
当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。
2、细胞状态
一般低的细胞代数（<50代）能确保基因型不变。
最适合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞，细胞生长旺盛，最容易转染。
细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。
这会导致和转染相关的细胞行为的变化。
也就是说同一种系的细胞株，在各实验室不同培养条件下，其生物学性状发生不同程度的改变，导致其转染特性也发生变化。
因此，如果发现转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复最佳结果。
3、转染方法
不同转染试剂有不同的转染方法，但大多大同小异、转染时应根据具体转染试剂推荐的方法，但也要注意，因不同实验室培养的细胞性质不同，质粒定量差异，操作手法上的差异等，其转染效果可能不同，应根据实验室的具体条件来确定最佳转染条件。
（1）细胞培养物
健康的细胞培养物是成功转染的基础。
不同细胞有不同的培养基，血清和添加物。
高的转染效率需要一定的细胞密度，一般的转染试剂都会有专门的说明。
推荐在转染前24小时分细胞，这将提供正常细胞代数，增加对外源DNA摄入的可能。
一定要避免细菌，支原体或真菌污染。
（2）细胞密度
细胞密度对转染效率有一定的影响。
不同的转染试剂，需求转染时的最适细胞密度各不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。
转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。
因此如果选用新的细胞系或者新的转染试剂，最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定方法，包括适当的接种量和培养时间等。
阳离子脂质体具有微量的细胞毒性而往往需要更高的铺板密度或者更多的悬浮细胞数，总之是尽量在细胞最适的生理状态下转染，以求最佳的转染效果。
不同的实验目的也会影响转染时的铺板密度，比如研究细胞周期相关基因等表达周期长的基因，就需要较低的铺板密度，所以需要选择能够在较低铺板密度下进行转染的试剂。
一般转染时贴壁细胞密度为50%~90%，但这个需要参考所选转染试剂的说明书。
（3）血清
血清一度曾被认为会降低转染效率，老一代的转染方法往往要求转染前后洗细胞或者在无血清培养基条件下转染，但有些对此敏感的细胞如原代细胞会受到损伤，甚至死亡导致转染效率极低。
不过转染产品配方几经革新后，对于主流的转染试剂来说，血清的存在已经不会影响转染效率，甚至还有助于提高转染效率，如阳离子聚合物等，血清的存在会影响DNA-转染复合物的形成，但只要在DNA-转染复合物形成时用无血清培养基或PBS来稀释DNA
和转染试剂就可以了，在转染过程中是可以使用血清的。
不过要特别注意：对于RNA转染，如何消除血清中潜在的RNase污染是值得关注的。
通常的，血清是一种包含生长因子及其它辅助因子的不确切成分的添加物，对不同细胞的生长作用有很大的差别。
血清质量的变化直接影响细胞生长，因此也会影响转染效率。
新加培养基的预热对细胞转染很有帮助。
（4）抗生素
细胞培养过程中往往会添加抗生素来防止污染，但是这些添加剂可能对转染造成麻烦。
比如青霉素和链霉素，就是影响转染的培养基添加物。
这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但有些转染试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。
这可能间接导致细胞死亡，造成转染效率低。
（5）氮磷比
N/P比是转染效率的关键（为了换算方便，一般以DNA/转染试剂质量比表示），在一定比例范围内转染效率随N/P比成比例增高，之后达到平值，但毒性也随之而增加，因此在实验之前应根据推荐比例，确定本实验的最佳转染比例。
（6）DNA质量
DNA质量对转染效率影响非常大。
一般的转染技术（如脂质体等）基于电荷吸引原理，如果DNA不纯，如带少量的盐离子，蛋白，代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成及转染的进度，但对GenEscort系列转染试剂影响不大。
4、载体构建
转染载体的构建（病毒载体，质粒DNA，RNA，PCR产物，寡核苷酸等）也影响转染结构。
病毒载体对特定宿主细胞感染效率较高，但不同病毒载体有其特定的宿主，有的还要求特定的细胞周期，如逆转录病毒需侵染分裂期的宿主细胞，此外还需要考虑一些安全问题（如基因污染）。
除载体构建外，载体的形态及大小对转染效率也有不同的影响，如前面提到的超螺旋及线性DNA对瞬时和稳定转染的影响。
如果基因产物对细胞有毒性作用，转染也很难进行，因此选择组成或可调控，强度合适的启动子也很重要，同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。
转染后的筛选
转染常用的报告基因
报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。
把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。
作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：(1)已被克隆和全序列已测定；(2)表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物；(3)其表达产物能进行定量测定。
在植物基因工程研究领域，已使用的报告基因主要有以下几种：
1、胭脂碱合成酶基因(nos)、章鱼碱合成酶基因(ocs)
2、新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)、氯霉素乙酰转移酶基因(cat)
3、荧光素酶基因（luciferase Gene）
4、β-D-葡萄糖苷酶基因
5、绿色荧光蛋白（gfp）基因等。
转染和筛选：
1. 使用含编码抗生素抗性基因表达序列的质粒（如pSV2neo）转染细胞。
2. 转染后第二天，将细胞传代，给细胞分裂的空间（根据细胞生长的速度，一般1:10到1:40可以达到效果）。
3. 转染后2-3天，开始使用抗生素。
将转染的细胞在含抗生素的培养基中培养，抗生素的浓度由剂量-反应分析确定。
含抗生素的培养基每周更换两次。
4. 10到14天后，可以观察到抗性克隆，未转染的对照应该没有细胞生长。
可以根据需要固定，染色，传代或克隆抗性细胞。
转染细胞的稳定筛选
1．确定抗生素作用的最佳浓度：不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性,因此在筛选前要做预试验,确定抗生素对所选择细胞的最低作用浓度.
①提前24 小时在96 孔板或24 孔板中接种细胞8 孔,接种量以第二天长成25%单层为宜,置CO2 孵箱中37℃培养过夜.
②将培养液换成含抗生素的培养基, 抗生素浓度按梯度递增0,（50, 100, 200, 400, 600, 800 和1000μg/ml）.
③培养10-14 天以绝大部分细胞死亡浓度为准,一般为400-800μg/ml,筛选稳定表达克隆时可比该浓度适当提高一个级别维持时使用筛选浓度的一半.
2．转染按前面的步骤进行.
3．转染72 小时后按1: 10 的比例将转染细胞在6 孔板中传代,换为含预试验中确定的抗生素浓度的选择培养基.在 6 孔板内可见单个细胞,继续培养可见单个细胞分裂繁殖形成单个抗性集落,此时可用两种方法挑选单克隆.
①滤纸片法：用消毒的5x5mm 滤纸片浸过胰酶,将滤纸片贴在单细胞集落上10-15 秒,取出粘附有细胞的滤纸片放于24 孔板中继续加压培养. 细胞在24 孔板中长满后转入25cm2 培养瓶中,长满后再转入75cm2 培养瓶中培养.
②有限稀释法：将细胞消化下来后做连续的10 倍稀释（10-2-10-10）,将每一稀释度的细胞滴加到96孔板中培养,7- 10天后,选择单个克隆生长的孔再一次进行克隆.
4. ELISA或Westernblot检测单克隆细胞中外源蛋白的表达情况由于不同克隆的表达水平存在差异因此可同时挑选多个克隆选择表达量最高的克隆传代并保种.。