奈立膦酸钠原料药有关物质方法学研究

奈立膦酸钠原料药有关物质方法学研究

摘要：目的本文采用了薄层色谱法，容量法以及高效液相色谱法对奈立膦酸钠

的原料药中的有关物质进行了测定。方法采用薄层色谱法对奈立膦酸钠的起始原

料6-氨基己酸以及磷酸盐杂质的含量进行测定，采用容量法对亚磷酸盐杂质进行

研究，原料药中的未知杂质则通过高效液相色谱法进行测定。结果本实验设计的

薄层色谱法检测6-氨基己酸以及磷酸盐含量能够准确分离奈立膦酸钠和杂质，专

属性很好，原料药样品中未检出6-氨基己酸以及磷酸盐杂质。容量法检测原料药

的亚磷酸盐含量结果显示，该方法专属性、线性、精密度和准确度均满足要求。

未知杂质通过高效液相色谱法进行检测，报告显示未有未知杂质检出。

关键词：奈立膦酸钠有关物质薄层色谱法容量法

Methodology study of related substances of Sodium Niledronate active pharmaceutical ingredient

Abstract：Objective The purpose of this study was to determine the related substances in the drug substance of Nasirisodium phosphate with thin layer chromatography, volume method and high performance liquid chromatography. Methods The contents of 6-aminocaproic acid and phosphate were determined by

thin-layer chromatography. The impurity of phosphite was determined by volume method. The unknown impurities in the drug substance were determined by high performance liquid chromatography. Results The determination methods of 6-aminocaproic acid and the phosphate substances were proved feasible, and no 6-aminocaproic acid and phosphate impurities were detected in the active pharmaceutical ingredient samples. The results of the determination of the subphosphate content of the active pharmaceutical ingredient by the capacity method show that the method is specific, linear, precise and accurate. The unknown impurities are detected by high performance liquid chromatography and the result shows that no unknown impurities are detected.

Keywords：Sodium Niledronate；related substances；thin layer chromatography; volumetry?

0 前言

奈立膦酸钠（Neridronate Sodium）化学名为6-氨基-1-羟基亚己基-1,1-二膦酸

一钠盐，结构式见图一，是一种抑制甲羟戊酸生物合成途径的关键酶（FPP合成酶），能够干扰破骨细胞的骨吸收和成活所必要的一系列细胞功能，[1-4]具有抑

制破骨细胞活性，减少骨量流失的作用[5-7]。奈立膦酸钠是由意大利Abiogen Pharma S.P.A.开发一种含氮的双膦酸盐，剂型为注射液，规格为1）2ml：25mg，2）8ml：100mg（按奈立膦酸计），商品名为NERIXIA [8-9]，以复杂性区域疼痛

综合征Ⅰ（CRPS-Ⅰ）和成骨不全症（OI）为适应症于2002年在意大利上市[10]，但是各国的药典都没有收载奈立膦酸钠的原料药和制剂的质量标准。

本实验基于对奈立膦酸钠的工艺研究，对其原料药中可能出现的杂质进行监测，包括起始原料6-氨基己酸、磷酸盐、亚磷酸盐以及未知杂质。本文中简要阐

述了6-氨基己酸的薄层色谱检测法，磷酸盐的薄层色谱检测法，亚磷酸盐的容量

检测法以及检测未知杂质的HPLC法，并对各个检测方法进行方法学验证，期望

能为后续的奈立膦酸钠原料药及制剂的杂质检测提供依据。

图1.奈立膦酸钠结构式

Fig1. Chemical structure of Neridronate Sodium

1 仪器与试药

Perkin Elmer 200系列高效液相色谱仪，Perkin Elmer Totalchrom工作站，恒温

干燥箱，薄层涂板（20*20cm，0.1mm，无荧光指示剂纤维素）

奈立膦酸钠对照品（），奈立膦酸钠原料药（批号78821,78819），甲醇，乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 6-氨基己酸

精密称取12.5mg的6-氨基己酸，置于100mL量瓶中，然后用水稀释至刻度

作为对照品母液，随后从母液中取出1ml到10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为6-氨基己酸对照品溶液。精密称取50mg供试品，在10mL量瓶中溶解，用水稀释至刻度，作为供试品溶液。精密称取50mg奈立膦酸钠，取1mL的对照

品母液，转移至10mL量瓶中，用水定容到刻度作为混合溶液。

2.1.1薄层色谱条件

通过TLC法进行检测，采用的试验条件见下表。

表1. TLC法试验条件

分别将上述的溶液于板上点样：40μL溶液对照品溶液，40μL供试品溶液，

40μL混合溶液；展开之后，薄层板置于空气中晾干，喷以含0.2%茚三酮的乙醇

溶液，置于100℃中干燥5分钟。6-氨基己酸的对应斑点为紫色，其Rf值约为

0.81；奈立膦酸钠的对应斑点为粉红色，其Rf值约为0.38。在供试品溶液色谱图

中的6-氨基己酸的对应斑点不得比其在对照品溶液色谱图中更深。混合溶液色谱

图显示的6-氨基己酸和奈立膦酸钠的斑点应显示清晰分离。

2.1.2方法验证

2.1.2.1专属性实验

分别按2.1项下供试品溶液配制方法制备不同批次的奈立膦酸钠的水溶液

（批号78821,78819）作为供试品溶液，分别将40μL的溶液6-氨基己酸对照品、78821批奈立膦酸钠水溶液、78819批奈立膦酸钠水溶液和混合溶液分别点在薄

层板上，保温45℃。让溶剂展开大约15cm，干燥薄层板。对照品溶液和混合溶

液点样两次。向薄层板喷以显色剂，并在100℃的通风烘箱中干燥5分钟。实验

结果见图2。奈立膦酸钠对照品和样品的Rf值在0.35左右，6-氨基己酸的Rf值

在0.72左右，结果显示TLC法能够突出杂质，并能准确分离奈立膦酸钠和杂质，

不存在对检测的干扰。样品中未出现可检测到的6-氨基己酸。

图2. 6-氨基己酸TLC检测方法专属性图谱

Fig2. Specificity chromatograms in the TLC detected 6-aminocaproic acid

2.1.2.2 检测限

用从40μL到5μL逐渐减量的对照品溶液，同时加40μL供试品溶液点样，喷

以显色剂，并在100℃的通风烘箱中干燥5分钟。结果显示，TLC法显示6-氨基

己酸的检测限为120ng。

2.2 磷酸盐

精密称取50mg奈立膦酸钠原料药及对照品，置于10mL量瓶中，然后用水稀