高效液相色谱法测定鸡蛋中胆固醇研究(一)

高效液相色谱法测定鸡蛋中胆固醇研究(一)

【关键词】色谱

近年来，随着人们生活水平的不断提高，人们对膳食组成中胆固醇的含量越来越引起重视。胆固醇可在胆道中沉积形成胆石，在血管中的沉积是动脉粥样硬化的重要原因之一。鉴于胆固醇对人体的影响，人们不断地采取各种各样的措施来减少食物中的胆固醇含量，这就要求分析工作者建立一种快速、简便而又重现性好的测定胆固醇的方法。鸡蛋是自然界中营养最为丰富的食品之一，但是蛋黄中的高胆固醇也引起人们的高度关注。目前胆固醇的测定一般都要求萃取总脂质、移去溶剂、在碱性介质中热皂化、萃取出非皂化物质、洗涤及浓缩等〔1，2〕，这些步骤费时、费力又费材料，并因其繁琐的操作预处理，大大增加了实验结果的可变性，本文采用 2.0mol/L的KOH-乙醇溶液直接皂化，石油醚萃取，以乙腈-甲醇-异丙醇（10∶80∶10）作流动相、C18反相色谱柱分离，UV208nm检测，高效液相色谱法测定，简化了操作步骤，降低了操作强度，减少了试剂使用，并且大大节约了分析时间，整个分析过程仅需1.5h。本方法用于实际样品的测定，结果满意。

1材料与方法

1.1仪器与试剂Agilent1100高效液相色谱仪，紫外检测器G1314A，Agilent1100化学工作站，甲醇、乙腈、异丙醇（均为HPLC级），胆固醇（进口分装），石油醚（重蒸馏，30℃～60℃），无水乙醇、氢氧化钾、氯化钠（均为AR）。胆固醇标准溶液（1.0mg/ml）:准确称取胆固醇100mg于100ml容量瓶中，用少量甲醇溶解后，用甲醇稀至刻度。

1.2色谱条件分析柱为μBondapakC18TM（30cm×3.9mm），流动相为乙腈-甲醇-异丙醇（10∶80∶10），流速为1.0ml/min，柱温为30℃，紫外检测波长208nm。

1.3样品处理及测定准确称取充分混匀的鸡蛋约0.20g于50ml具塞比色管中，加入

2.0mol/L 的KOH-乙醇液5.0ml，振荡混匀，置65℃水浴中皂化30min（每隔5min振摇1次）后取出，经流水冷却，加入饱和氯化钠溶液2.0ml后再加入石油醚20.0ml，旋涡混匀后离心分离，吸取上清液10.0ml于10ml刻度比色管中，通氮气吹干，再用1.0ml甲醇溶解残渣，过0.45μm 滤膜后，吸取10.0μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，外标法定量。

1.4标准曲线绘制用胆固醇标准贮备液配成0.050、0.010、0.200、0.400、0.600mg/ml的胆固醇标准使用液，分别取10.0μl进行色谱测定，以峰面积（A）为纵坐标，胆固醇浓度为横坐标（C，mg/ml）绘制标准曲线，得线性方程为A=556.13C+8.003，r=0.9993。

2结果与讨论

2.1皂化条件试验与萃取条件的选择见马建明等报道〔3〕。

2.2分析波长的选择选择较高灵敏度的检测波长可以提高分析数据的精密度，同时也可以降低检出限。笔者对以流动相为溶剂的胆固醇标准液进行了扫描，结果发现胆固醇在205nm 处具有最大吸收峰，考虑到紫外区的影响，本方法选用208nm为检测波长。